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Articles by Guang Hu in JoVE
JoVE General
Oct4GiP Reporter Assay per studiare i geni che regolano il mouse sulle cellule staminali embrionali di manutenzione e di auto-rinnovamento
Laboratory of Molecular Carcinogenesis, National Institute of Environmental Health Sciences
Descriviamo un saggio di fluorescenza giornalista per identificare rapidamente e caratterizzare i geni che regolano il mouse sulle cellule staminali embrionali di manutenzione e di auto-rinnovamento.
Other articles by Guang Hu on PubMed
[La Distribuzione E L'origine Degli Elementi P in Ceppi Melanogaster Della Drosofila Dalla Cina Nord-orientale]
Elementi trasponibili eucariotici, soprattutto elementi trasponibili P di Drosophla, sono molto importanti per studiare l'evoluzione della biologia. Abbiamo raccolto 130 single - linee femminile di d. melanogaster da 13 posti nella Cina nordorientale e 3 posti nelle vicinanze che sono Beijing(BC), Yantai (YT), Huhehaote(HHT) nel 1999 e nel 2000. Abbiamo amplificato i frammenti da ORF2 a ORF3 di P elementi mediante PCR e calcolato le frequenze difettose e parametri difettosi di P elementi da luoghi diversi. Basandosi sulla distribuzione degli elementi P difettosi, abbiamo suggerito il percorso di invasione di P elementi di d. melanogaster nella Cina nordorientale. I risultati indicano che le frequenze difettose diminuiscono dalla frontiera per l'entroterra, e in luoghi isolati, le frequenze sono inferiori. Si propone che gli elementi P di d. melanogaster nella Cina nordorientale provengono da Corea e Russia per le frontiere della Repubblica popolare cinese, quindi espandono nell'interno.
Un Ruolo Critico Per Calponin 2 in Sviluppo Vascolare
Calponin 2 (h2 calponin, CNN2) è una proteina actina-implicata nell'organizzazione del citoscheletro. Abbiamo trovato che l'espressione di calponin 2 è relativamente limitato al sistema vascolare da 16 a post-fertilization h 30 durante lo sviluppo di zebrafish (Danio rerio). Quarantotto ore dopo iniettare i oligos del antisense oligonucleotides contro calponin 2 embrioni in fase 1-4-cella, zebrafish hanno dimostrato vari difetti cardiovascolari, tra cui lenta circolazione assiale e testa, assenza di circolazione nei vasi intersegmentaria e nel vaso anastomotico longitudinale dorsale, ventricoli cerebrali allargate ed edema pericardico, oltre a un eccesso di flessione, coda a spirale e torsione della pinna caudale. Atterramento di calponin 2 nella linea di zebrafish Tg(fli1:EGFP)(y1) (in cui un promotore fli1 unità espressione vascolari specifiche avanzate green fluorescent protein) indicato che diminuita calponin 2 espressione bloccato la corretta migrazione delle cellule endoteliali durante la formazione di vasi intersegmentaria. Studi in vitro hanno mostrato che migrazione di cellule endoteliali vena ombelicale umana indotta dal fattore di crescita dei fibroblasti base era giù-regolato da atterramento di calponin 2 espressione utilizzando un adenovirus antisenso e migrazione sovraespressione di calponin 2 potenziato e accelerato wound healing. Questi eventi sono stati correlati con l'attivazione della chinasi di proteina mitogene-attivata; Inoltre, l'inibizione di questo percorso bloccato l'effetto promigratory di calponin 2. Collettivamente, questi dati suggeriscono che calponin 2 Gioca un ruolo importante nella migrazione delle cellule endoteliali sia in vivo e in vitro e che la sua espressione è fondamentale per il corretto sviluppo vascolare.
Di Zebrafish Sviluppo Sia Le Funzioni Endoteliali in Vitro è Necessaria Una Proteina Shock Romanzo Calore Specifico Endoteliali HspA12B
Una trascrizione di zebrafish soprannominata GA2692 inizialmente è stata identificata tramite uno schermo intero-monta l'ibridazione in situ per le trascrizioni specifica nave. L'espressione del mRNA durante lo sviluppo embrionale è stato rilevato nel mesoderma ventrale ematopoietica e vasculogenic e successivamente in tutto il sistema vascolare fino a 48 ore post fecondazione. Atterramento oligonucleotides-mediata del GA2692 in embrioni ha portato in molteplici difetti nel sistema vascolare, in particolare, presso siti in fase di germinazione capillare attivo: i vasi intersegmentaria, vasi sub-intestinal e germogli capillari della nave delle pinne pettorali. Nel corso di questi studi, una ricerca di omologia indicato che GA2692 è il orthologue zebrafish di mammiferi HspA12B, un membro lontano del calore shock 70 famiglia (Hsp70) della proteina. Da una combinazione di northern blot e analisi PCR in tempo reale, abbiamo mostrato che HspA12B è altamente espresso in cellule endoteliali umane in vitro. Atterramento di HspA12B da piccolo RNAs d'interferenza (siRNAs) nelle cellule endoteliali di vena ombelicale umana bloccata la guarigione della ferita, la migrazione e la formazione del tubo, considerando che la sovraespressione della migrazione HspA12B enhanced e guarigione delle ferite accelerata - dati sono coerenti con il fenotipo in vivo pesce ottenuti negli studi oligonucleotides-atterramento. Fosforilazione di Akt è stata costantemente ridotta da siRNAs contro HspA12B. Sovraespressione della forma costitutivamente attiva di Akt salvato gli effetti inibitori di atterramento di HspA12B sulla migrazione delle cellule endoteliali di vena ombelicale umana. Collettivamente, i nostri dati suggeriscono che HspA12B è membro della famiglia Hsp70 lontano altamente endoteliale-cellula-specifico e gioca un ruolo significativo nelle cellule endoteliali durante lo sviluppo e l'angiogenesi in vitro, parzialmente imputabile alla modulazione della fosforilazione di Akt.
Avanti Schermi RNAi in Cellule Staminali/progenitrici Ematopoietiche Umana Primario
I meccanismi che regolano le decisioni chiave destino come auto-rinnovamento e differenziazione in cellule progenitrici (HSPC) e staminali ematopoietiche rimangono scarsamente comprensibili. Riportiamo qui una strategia di screening sviluppati per valutare modulatori dell'emopoiesi umano utilizzando una lentivirali short hairpin RNA (shRNA) libreria transduced in cellule staminali/progenitrici derivate da sangue cordone. Per lo schermo per modificatori di auto-rinnovamento/differenziazione, abbiamo utilizzato la limitata persistenza di HSPCs sotto ex vivo condizioni di coltura come base per la selezione funzionale di shRNAs che conferisce una maggiore manutenzione o espansione del potenziale formativa/progenitore. Questo approccio consente complessi, pool schermi in un gran numero di cellule. Selezione funzionale identificato romanzo gene specifici obiettivi (esostosi 1) o shRNA costruisce in grado di alterare espansione differenziazione o cellule staminali progenitrici ematopoietiche umane, rispettivamente, quindi dimostrando le potenzialità di questo approccio di screening avanti nelle popolazioni di cellule staminali umane primarie.
