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Articles by Hagop S. Atamian in JoVE

 JoVE Immunology and Infection

Écrans à haut débit et faible avec Les nématodes à galles Meloidogyne spp.


JoVE 3629 3/12/2012

Department of Nematology, University of California, Riverside

Deux méthodes distinctes pour les plantes d'écran avec les nématodes à galles sont décrits. Les approches décrites comprennent à haut débit écrans avec les nématodes d'une manière non destructive de faciliter l'utilisation de ces plantes dans les programmes de sélection.

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Facteurs De Transcription De Type WRKY72 Contribuer à L'immunité Basale Dans La Tomate Et Arabidopsis Comme Bien Comme Gene-pour-gène Résistance à Médiation Par La Tomate R Gene Mi-1

Facteurs de transcription WRKY jouer un rôle central dans la reprogrammation transcriptionnelle associée à des réponses immunitaires des plantes. Toutefois, en raison de la redondance fonctionnelle, généralement la contribution de chacun des membres de cette famille à l'immunité n'est que subtile. Utilisation de l'analyse des microréseaux, nous avons constaté que la tomate paralogues WRKY gènes SlWRKY72a et b sont transcriptionnellement régulé à la hausse au cours la résistance aux maladies médiées par le gène R Mi-1. Induite par le virus gene silencing de ces deux gènes de la tomate a entraîné une nette réduction de la Mi-1 médiée par la résistance ainsi que la défense contre basale des nématodes à galles (RKN) et les pucerons de pommes de terre. Utilisation de mutants d'insertion d'Arabidopsis d'ADN-T, nous avons constaté que leur orthologue chez Arabidopsis, AtWRKY72, est également nécessaire pour la défense de base complète contre RKN ainsi que de la arabidopsidis oomycète Hyaloperonospora. En dépit de leurs rôles similaires dans la défense contre les RKN basale chez les deux espèces végétales testées, des facteurs de transcription de type WRKY72 à la tomate, mais pas chez Arabidopsis, ont clairement contribué à la défense de base contre la bactérie Pseudomonas syringae pathogène. Parmi les cinq gènes R que nous avons testés dans la tomate et Arabidopsis, que Mi-1 semble être dépendante de facteurs de transcription de type WRKY72. Fait intéressant, AtWRKY72 gènes cibles, identifiées par l'analyse des microréseaux de H. arabidopsidis déclenchés par des changements de transcription, semblent être en grande partie non-réponse aux analogues de l'acide hormone de la défense salicylique (SA). Ainsi, même à Mi-1, qui, dans le cadre agit indépendamment de la SA, AtWRKY72 apparaît à recourir aux mécanismes de défense SA-indépendants. Nous proposons que les facteurs de transcription de type WRKY72 jouer un rôle dans la défense partiellement conservée basale dans la tomate et Arabidopsis, une fonction qui a été recruté pour servir Mi-1-dépendante de l'immunité.

Le Récepteur-like Kinase SlSERK1 Est Requis Pour Mi-1-médiation Résistance Aux Pucerons De Pommes De Terre à La Tomate

Le récepteur-kinase comme plante somatique kinase du récepteur de l'embryogenèse 3 (SERK3) / brassinostéroïde insensibles 1-kinase associée au 1 (BAK1) est nécessaire pour agent pathogène associé à motif moléculaire (PAMP) déclenchée par l'immunité (PTI). Nous montrons ici que pour un élément distinct de la famille SERK, SERK1, est nécessaire pour le plein fonctionnement de la Mi-1, une liaison nucléotidique répétitions riches en leucine (NB-LRR) protéine de résistance. Mi-1 confère une résistance à Meloidogyne spp. (Nématodes à galles, les RKNs) et trois du phloème d'alimentation des insectes, y compris Macrosiphum euphorbiae (puceron). SERK1 a été identifié dans un virus de tabac hochet (VRT) basé induite par le virus gene silencing (VIGS) écran dans Nicotiana benthamiana. L'écran a été fondée sur la suppression d'une réponse aux parasites indépendante hypersensible déclenchée par une forme constitutivement active de Mi-1, Mi-DS4. Pour évaluer le rôle des SERK1 dans Mi-1 médiée par la résistance, Solanum lycopersicum (tomate) gènes ont été clonés SlSERK. Trois membres ont été identifiés avec SlSERK homologies à AtSERK1 Arabidopsis ou AtSERK3/BAK1, et ont été nommés SlSERK1, SlSERK3A et SlSERK3B. SlSERK1 est exprimé de façon ubiquitaire chez la tomate. Réduire les niveaux de transcription de SlSERK1 plantes résistantes, à l'aide spécifiques du gène VRT-SERK1 VIGS, révélé par un rôle dans Mi SlSERK1-1-résistance à médiation les pucerons, mais pas à RKNs. En outre, Mi-1-dépendante SlWRKY72 la régulation des gènes a été compromise dans les SlSERK1 silencieux plantes, plaçant SlSERK1 dans la voie de signalisation Mi-1. Taire SlSERK1 dans un fond de tomate sensible n'a pas réduit la sensibilité aux pucerons, ce qui indique que SlSERK1 est peu probable d'être une cible de virulence essentiel. SlSERK1 est une kinase active, principalement localisée à la membrane plasmique. Ce travail identifie un composant critique au début de la Mi-1 de signalisation, et démontre un rôle à jouer dans SlSERK1 NB-LRR l'immunité à médiation.

SlWRKY70 Est Requise Pour La Résistance Mi-1-médiation Aux Pucerons Et Les Nématodes Chez La Tomate

La résistance des plantes (R) les réactions de défense du gène à médiation contre le stress biotiques incluent vaste reprogrammation transcriptionnelle. Dans plusieurs systèmes plante-pathogène, les membres de la famille WRKY de facteurs de transcription ont été mis en évidence à agir en tant que régulateurs positifs et négatifs de réseaux de défense des plantes de la transcription. Pour identifier les rôles possibles de tomate (Solanum lycopersicum) des facteurs de transcription dans la médiation de la défense WRKY par le gène Mi-1 R contre puceron, Macrosiphum euphorbiae et nématodes à galles (RKN), Meloidogyne javanica, nous avons utilisé le virus du rattle (VRT )-based induite par le virus gene silencing transcriptionnel et supprimé SlWRKY70, un orthologue de tomate de l'Arabidopsis thaliana WRKY70 gène. Taire SlWRKY70 atténué Mi-1-résistance médiée par contre le puceron de pommes de terre à la fois et RKN montrant que SlWRKY70 est nécessaire pour Mi-1 fonction. En outre, nous avons trouvé SlWRKY70 transcriptions d'être inductible en réponse à infestation de pucerons et d'inoculation RKN. Mi-1 médiée par la reconnaissance de ces ravageurs module cette réponse transcriptionnelle. Comme décrit précédemment pour AtWRKY70, nous avons trouvé SlWRKY70 niveaux de transcription d'être régulée à la hausse par l'acide salicylique et réprimée par le jasmonate de méthyle. Ceci indique que certains aspects de la réglementation WRKY70 sont conservées chez les eudicots loin liés.

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