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Articles by Irina V. Getun in JoVE
JoVE General
Durchflusszytometrie Reinigung der Maus meiotischen Zellen
1Genome Plasticity Laboratory, Department of Cancer Biology, The Scripps Research Institute, 2Flow Cytometry Core, The Scripps Research Institute
Eine effiziente Methode, um hochreine lebensfähig meiotischen Fraktionen aus Maus Hoden zu erhalten, ist beschrieben, die vereint ein raffiniertes Zelle Dissoziation Protokoll mit fluoreszierenden activated cell sorting (FACS). Diese Methode nutzt die Unterschiede in der DNA-Gehalt und nukleare Dichte der diskreten meiotischen Fraktionen.
Other articles by Irina V. Getun on PubMed
Nativ-ähnliche Konformationen Werden Durch Teilweise Gefalteten Und Gestörten Varianten Von Rinder-Trypsin-Inhibitor Abgetastet
Teilweise Gefalteten Bovine Pancreatic Trypsin Inhibitor Analoga Erreichen Voll Native Strukturen Bei Co-crystallized Mit S195A Ratte Trypsin
Kristallstrukturen, bei 1,7 A Auflösung, wurden für komplexe zwischen jedem der zwei chemisch synthetisierte teilweise gefalteten Analoga bovine pancreatic Trypsin Inhibitor (BPTI) mit der Mutant Trypsin spaltet inaktive Ratte S195A gelöst. BPTI analogen genannt [14-38](Abu) behält nur die Disulfidbindung zwischen Cys14 und Cys38, Cys5, Cys30, Cys51, und Cys55 Fassung Isosteric Alpha-amino-n-Buttersäure saure Rückstände. Die analogen K26P,A27D[14-38](Abu) enthält zwei weitere Ersetzungen, statistisch bevorzugten Rückstände in den Typ, den ich, den Beta-Zuges, der behauptet wird, eine Haupt-Website für Einleitung BPTI faltbar sein. Als Steuerelement wurde auch die Struktur des Komplexes zwischen S195A Trypsin und Wildtyp BPTI gelöst. Trotz signifikante Unterschiede im Grad der Struktur, die bei diesen drei BPTIs in Lösung durch verschiedene biophysikalische Techniken festgestellt sind ihre tertiären Falten, die einmal an S195A Trypsin in ein Kristallgitter gebunden im wesentlichen superimposable.
Anatomie Der Maus Rekombination Hot Spots
Genomweiter Analysen haben Tausende von Hotspots meiotischen Rekombination über Säugetier-Genome vorgeschlagen. Allerdings wurden nur sehr wenige Hotspots direkt in einem Sub-kb-Maßstab für die Frequenzweiche (CO) Aktivität analysiert. Rekombinante Inzucht Stämme als eine CO-Bibliothek verwenden, Berichten hier wir die Identifizierung und detaillierte Charakterisierung von sieben neuen meiotischen Hotspots auf Maus-Chromosom 19, mehr als verdoppelt die Anzahl der derzeit verfügbaren Maus Hot Spots. Zwar eine gemeinsame Funktion der schmalen 1.5-2.5-kb-Breite dieser Recombinogenic-Sites, ergab diese Analysen, dass Hot-Spots diverse Sequenz Attribute und verschiedene symmetrische und asymmetrische CO-Profile haben. Interessanterweise sind CO-Moleküle mit diskontinuierlichen Konvertierung Abhandlungen allgemein beobachtet, im Gegensatz zu denen in Menschen. Außerdem im Gegensatz zu menschlichen Hot-Spots, die Anwesenden in der Maus müssen nicht unbedingt eine Kriegsparteien CO-Verteilung aber Hafen CO Abstoßung Zonen innerhalb Recombinogenic Kerne. Wir schlagen ein Modell, wo lokale Chromatin Landschaft diese Abstoßung-Zonen leitet.
Nukleosom Belegung Landschaft Und Dynamik an Maus Rekombination Hotspots
Während der Meiose rekombinieren väterliche und mütterliche homologe Chromosomen an bestimmten Rekombination Standorten namens Hotspots. Es ist weitgehend unbekannt, was 2 % der Säugetier-Genome zu meiotischen Rekombination permissive macht dadurch, dass Spo11 Endonuklease, Doppel-Strang Pausen zu initiieren. Arbeit in der Hefe ergab, dass Chromatin Barrierefreiheit scheint wichtig für diese Tätigkeit zu sein. Hier definieren wir Nukleosom-Profile und Dynamik an vier Maus Rekombination Hotspots durch Filtrieren hochangereichertes Brüche meiotischen Zellen. Wir fanden, dass Nukleosom Belegung während der Meiose Fortschreiten insgesamt stabil ist. Interessant ist, die Kerne der Rekombination Hotspots haben weitgehend offen Chromatin-Struktur, und die Sprachunterstützung für das Paar in dieser Kerne vorhanden Nucleosomes korreliert genau mit den Crossover-freie Zonen in Recombinogenic Domänen. Zusammenfassend deutet diese hochauflösenden Untersuchungen Nukleosom Belegung direkt, zumindest teilweise, wie meiotischen Rekombination scheint die Ereignisse verarbeitet werden.
