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Articles by Irma Sanchez-Vargas in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Alphavirus Transducing 시스템 : 모기 벡터의 감염을 떠올리을위한 도구
Microbiology, Immunology, and Pathology, Colorado State University
체외에서 성인 모기에 형광 기자를 표현하는 alphavirus transducing 시스템을 사용 방법이 설명되어 있습니다. 이 기술은 대신 또는 기자 이외에 관심있는 단백질을 표현하는 적응 수 있습니다.
Other articles by Irma Sanchez-Vargas on PubMed
모기에 Arbovirus 저항을 개발 합니다
Arthropod 매개로 바이러스에 의해 발생 하는 질병은 점점 중요 한 공중 보건 문제, 그리고 병원 체 전송 제어 하는 데 필요한 새로운 방법. 여기에서 설명 하는 연구를 기본 가설은 Aedes aegypti 모기의 유전자 조작 줄일 수 있다는 깊이 영구적으로 인간의 호스트에 뎅기열 바이러스를 전송 하기 위해 그들의 능력. 최근 주요 연구 결과 지금 우리 유전자 제어 가설 테스트를 수 있습니다. 우리가 바이러스 성 게놈 파생 된 RNA 세그먼트 모기 midguts 및 동종 바이러스 복제 및 전송 절제에 침 샘에 표현할 수 있는 발견 했다. 우리는 바이러스 파생 된 이펙터 RNAs 교양된 모기 세포에서의 변이 및 상속 식 수 침묵 바이러스 복제 및 RNA 중재 저항 하는 메커니즘을 특징 있다 증명 하고있다. 우리는 지금 모기 액티브 발기인에서 이펙터 RNAs 익스프레스 transposable 요소와 함께 변환에 의해 바이러스 내성 모기 라인을 개발 하 고.
뎅기열 바이러스에 변환 된 C6/36 모기 셀 베 끼고 거꾸로 반복 RNA 복제 유형 2의 RNA 침묵 바이러스 게놈에서 파생 된
이중 가닥 RNA (dsRNA) 하 라고 하는 RNA 침묵 다양 한 식물, 과일 파리, 선 충, 등 다른 유기 체 세포 posttranscriptional 응답을 시작 합니다. 식물, RNA 침묵 바이러스 감염 으로부터 보호와 관련 된 있다. 이 연구에서는 dsRNA 중재 간섭 모기 세포에서 바이러스 성 방어 메커니즘으로도 작동할 수 있습니다 보여 줍니다. C6/36 (Aedes albopictus) 셀 거꾸로 반복 RNA (irRNA)의 뎅기열 바이러스 타입 2 (덴-2) Dsrna를 형성 수 있는 게놈에서 파생 된 녹음 하도록 설계 된 플라스 미드와 계속적 변모 했다. 클론 셀 라인 항생제 저항 마커를 사용 하 여 선택한 되었고 덴 2 도전. 셀 라인으로 취약 하거나 내성 바이러스 복제, 덴 2 봉투 (E) 항 원 도전 후 7 일을 표현 하는 세포의 백분율을 기준으로 분류 했다. 18 (44%) 셀 라인 익스프레스 irRNA 하도록 설계 된 8 개의 덴 2 도전, 덴 2 항 원 축적 없습니다 보여주는 셀의 95% 이상의 저항 했다. 하나 덴 2 방지 셀 라인, FB 9.1 특징 추가 했다. 덴 2 게놈 RNA 도전 후 FB 9.1 세포에 축적 하지 못했습니다. 북부 오 점 교 잡의 의미와 antisense 극성, 덴 2 특정 Dsrna는 셀에 제안 transgene 시퀀스를 포함 하는 성적 증명서 검색. 또한, 클래스 명확 하 게 레이블이 지정 된 감각에 hybridized 작은 RNAs 21 25 길이 뉴클레오티드 감지 또는 센스 덴 2 RNA 게놈의 대상 지역에서 파생 된. 이러한 관측 RNA 변형 된 모기 셀에서 덴-2에 대 한 저항 메커니즘으로 침묵으로 일관 했다.
RNA 간섭, Arthropod 부담 바이러스 및 모기
RNA 간섭 (RNAi)는 아마 대부분의 진 핵 유기 체에서 항 바이러스 메커니즘으로 작동합니다. 일부를, 왜 일부 모기는 의학적으로 중요 한, arthropod 부담 바이러스 (arboviruses)의 유능한 벡터와 다른 모기에 항 바이러스 통로가이 활동에 유사 설명할 수 있습니다. Arboviruses 전송 하는 Aedes 종에 있는 RNAi 통로 보여 주는 증거의 세 줄이 있습니다. 첫 번째는 재조합 Sindbis 바이러스 유전자 관련 없는 뎅기열 2 바이러스 (DENV-2)에서 RNA 단편을 표현 방해 DENV 2 복제 Aedes aegypti 모기 바이러스 유도 유전자 침묵 식물에서 설명 비슷한 메커니즘에 의해 이다. 두 번째는 어느 이중 가닥 RNA와 C6/36 (Aedes albopictus) 세포의 transfection는 또는 arbovirus 게놈에서 파생 된 합성 작은 방해 RNAs 동종 바이러스의 복제를 방해. 세 번째는 머리 핀 DENV 2 특정 RNA는 플라스 미드에서 복사할 바이러스 방지 C6/36 세포를 생성할 수 있습니다. 우리는 유전자 변형된 모기 발생할 수 있다는 flavivirus 특정 Dsrna를 속기 하는 혈액 식사의 섭취 후 곧 RNAi 응답 트리거링 가설. 이 바이러스 감염의 설립 전에 midgut RNAi 통로 유도 하 고 뿌리깊은 벡터 역량을 변경 수 있습니다. 이 목표를 향해 우리는 DENV 내 화 RNAi 통로 이용 하 여 유전자 변형 A. aegypti 라인을 개발 하고있다.
RNA 간섭 역할 O'nyong 특히 바이러스 (Alphavirus; 천연 항 바이러스 응답을 Anopheles Gambiae의 Togaviridae) 감염입니다
RNA 간섭 (RNAi) 이중 가닥 RNA (dsRNA) 하 여 진 핵 유기 체에서 시작 하 고 dsRNA 트리거 시퀀스 id가 있는 Mrna를 파괴. Anopheles gambiae에서 RNAi 통로 dsRNA exon 시퀀스 A. gambiae Argonaute2 (AgAgo2)에서 파생 된 transfecting 셀에 의해 입을 유전자. 우리는 가설 RNA 바이러스 복제 하는 동안 Dsrna를 형성 하기 때문에 A. gambiae에서 alphavirus 복제를 길 항 제로 RNAi 행동 또한 수 있습니다. AgAgo2 식 입을 A. gambiae 모기를 바이러스 감염에 더 관대 할 것 이다. RNAi A. gambiae O'nyong 특히 바이러스 (ONNV)에 대 한 벡터 능력 조건 여부를 확인 하려면 우리는 향상 된 GFP를 마커로 (eGFP)을 표현 하 고 유전자 변형된 ONNV 설계. Intrathoracic 주입 후 ONNV eGFP 천천히 걸쳐 다른 A. gambiae 조직에 9 일간의 잠복기. 모기 다음 바이러스 컨트롤 베타-galactosidase dsRNA (dsbetagal; "ds"를 통해 주어진된 유전자에서 파생 된 Dsrna를 나타내는 접두사로 사용 됩니다 참고) 또는 ONNV dsnsP3 coinjected 했다. DsnsP3 치료는 크게 eGFP 식 패턴에 의해 결정 바이러스 확산 저해. 모기 Dsnsp3와 coinjected에서 ONNV eGFP titers 모기 dsbetagal와 coinjected에서 보다 주사 후 3 ~ 6 일에 훨씬 낮은 했다. 모기 다음 ONNV eGFP 및 dsAgAgo2 coinjected 했다. 모기 바이러스와 AgAgo2 dsRNA coinjected 주사 후 3 ~ 6 일 후 광범위 하 게 eGFP 표현과 바이러스 titers 16-fold dsbetagal 컨트롤 보다 높은 표시 됩니다. 이러한 관측 Rnai은 A. gambiae에서 ONNV 복제의 길 항 제와 그들이 제안 하는 타고 난 면역 반응 조건 능력 벡터 직접적인 증거를 제공 합니다.
공학 RNA 간섭 기반 저항 뎅기열 바이러스를 유전자 변형된 Aedes Aegypti에 2를 입력 합니다
모기 (Aedes aegypti) 장애인된 벡터 역량 뎅기열 2 형 바이러스 (DENV-2)에 대 한 전시를 유전자 변형 했다. 우리 DENV 2 RNA 게놈의 지역 코딩 premembrane 단백질에서 파생 된 거꾸로 반복 (IR) RNA를 표현 하는 이펙터 유전자를 구성 하 여 모기 midgut에서 천연 항 바이러스 RNA 간섭 (RNAi) 통로 악용. A. aegypti carboxypeptidase A 발기인을 bloodmeal의 섭취 후 midgut 상피 세포에 IR RNA를 표현 하는 사용 되었다. 발기인 및 이펙터 유전자 nonautonomous 마리너 MosI 변환 시스템을 사용 하 여 동박새과 푸에 르 토 리코 Rexville D (Higgs' 흰 눈) 스트레인의 게놈에 삽입 되었습니다. Carb77, 유전자 변형 가족은 midgut는 bloodmeal 후 IR RNA 표현. DENV-2를 포함 하는 인공 bloodmeal 복용 Carb77 모기 감염 후 바이러스 성 봉투 항 원 midguts 및 침 샘의 표시 된 감소 전시. DENV-2 적정 개별 모기의 대부분의 Carb77 모기 저조한 바이러스 복제를 지원 했다. Carb77 라인에서 바이러스의 전송 체 외는 모기를 제어에 비해 현저 하 게 감소 됩니다. RNA에 DENV 2 파생 Sirnas의 존재 carb77의 midguts에서 추출 하 고 RNAi 통로 중단 될 때 저항 형의 손실을 증명 DENV 2 저항 RNAi 응답에 의해 발생 했다. 높은 수준의 DENV-2에 대 한 저항을 나타내는 유전자 변형 A. aegypti 공학 뎅기열 바이러스의 전송 제어 하려면 인구 대체 전략을 개발 하기 위한 강력한 도구를 제공 합니다.
뎅기열 바이러스 타입 2: 복제 및 Tropisms에 구두로 Aedes Aegypti 모기 감염
모기 벡터에 의해 전송 될 뎅기열 바이러스 (DENV) midgut 상피 세포를 감염, 복제 및 유포를 hemocoel으로 하며 마지막으로 전송을 위해 필수적인 침 샘 감염. 외부 잠복기 (EIP) epidemiologically 매우 적절 하다 고 척추 호스트에 전송 될 때까지 바이러스의 섭취에서 필요한 시간 이다. EIP는 속도 론에서 벡터 바이러스 복제의 tropisms에 의해 조건입니다. 여기 우리는 뎅기열 전송에서 벡터 바이러스 상호 작용의 효과 더 잘 이해 하기 위해서는 체 투 말, 멕시코에서 Aedes aegypti 모기 새로 식민지에서 DENV 2 virogenesis 문서.
라 라크로스 Bunyavirus Nonstructural 단백질 NSs 역할 유형 표시 하지 않으려면 나 포유류 호스트의 인터페론 시스템
라 라크로스 바이러스 (LACV) Bunyaviridae 가족 아이 들에 있는 심각한 뇌염을 일으키는 모기 전송 회원입니다. LACV nonstructural 단백질 NSs, 포유류 세포와 이전 overexpression 연구 즉 apoptosis 유도 및 억제 RNA 간섭 (RNAi)의 두 가지 서로 다른 기능을 제안 했다. 여기, 우리가 지속적으로 LACV에 감염 모기 세포 apoptosis를 받 다 및 특정 RNAi 응답을 탑재 하지 않는 보여 줍니다. 재조합 바이러스 (rLACV) 또는 유사 하 게 (rLACVdelNSs)는 NSs 유전자 결여를 유지 하 고 superinfection에 RNAi 중재 저항 하는 경향이 있었다. 또한, 모기 셀에 overexpressed LACV NSs RNAi Semliki 숲 바이러스에 대 한 억제 수 없었다. 그러나 포유류 세포에서 rLACVdelNSs 돌연변이 바이러스 강력 하 게 활성화 된 항 바이러스 유형 I 인터페론 (IFN) 시스템, Rlacv로 overexpressed NSs 억제 IFN 유도 하는 반면. 결과적으로, Rlacvdelnss는 감쇠 IFN 유능한 마우스 배아 섬유 아 세포 및 동물 종류 부족 한 시스템에만 나 IFN 수용 체. 마우스 두뇌의 분석은 현장에서 야생 형 및 돌연변이 LACV 주로 신경 세포 감염 그리고 NSs IFN 유도 중앙 신 경계에서를 억제 할 수 증명. 따라서, 우리의 데이터 NSs 유도 apoptosis 또는 성장 위한 RNAi 저해의 작은 관련성 또는 포유류 호스트에서 LACV의 pathogenesis 제안 하 고 NSs 곤충 벡터에 있는 기능을 갖추고 나타냅니다. 바이러스 성 NSs 유전자의 삭제는 호스트의 IFN 시스템의 비활성화에 의해 완벽 하 게 보완 될 수 있습니다 이후 Nss의 주요 생물학적 기능은 포유류 타고 난 면역 반응의 억제는 제안 한다.
뎅기열 바이러스 2 형 감염 Aedes Aegypti 모기의 RNA 방해 통로로 변조 됩니다
타고 난 및 적응형 면역 방어 메커니즘 인간의 뎅기열 바이러스 (DENV) 감염의 과정에 크게 영향을 미칠 하지만 약간은 알려진 모기 벡터의 타고 난 면역 반응에 대해 Aedes aegypti arbovirus 감염 연구 수가 나타났습니다. 타고 난 면역 응답 모기, RNA 간섭 (RNAi)의 주요 구성 요소는 모기 감염의 중요 한 변조기 증거 여기 소개 합니다. RNAi 응답 이중 가닥 RNA (dsRNA) 포지티브 센스 RNA 바이러스 감염으로 인해 세포질에서 발생 하는 작은 방해 RNAs (siRNAs)의 생산을 선도 의해 트리거됩니다. 이러한 siRNAs 시퀀스 homology dsRNA 트리거 및 그로 인하여 함께 바이러스 성 Mrna의 저하에는 바이러스 복제의 저해. 비록 뎅기열 바이러스 2 (DENV2) 감염 Ae의 입력 표시 하는. aegypti 배양 세포 및 성인 모기 생성 된 Dsrna의 구강 감염 및 DENV2 관련 siRNAs, 바이러스 복제 및 전염 성 바이러스의 릴리스 생산 유지, 바이러스 우회 Rnai의 제안. 우리는 또한 DENV2 입을 RNAi 통로 단백질 센서와 이펙터 벡터에 바이러스 복제 증가 하 고 감소 외부 잠복기 바이러스 전송에 필요한 중요 한 인코딩 dcr2, r2d2, 또는 ago2, 유전자의 표현에 의해 통로 방해 이후 RNAi을 완전히 회피 하지 않습니다 보여. 우리의 연구 결과 DENV 전송 애에 의해 결정으로 Rnai를 위한 중요 한 역할을 나타냅니다. aegypti입니다.
웨스트 나 일 모기 벡터 Culex Tarsalis의 Sialotranscriptome에 대 한 통찰력
성인 여성의 모기가 도움말 설탕과 혈액 효소와 설탕 소화 해 주는 polypeptides를 제공 하 여 먹이의 타 액 미생물 성장 제어 및 그들의 척추 호스트 hemostasis과 염증을 중화. 모기 타 액은 또한 arboviruses를 포함 하 여 병원 체를 매개로 하는 벡터의 전송 potentiates. Culex tarsalis 새가 최근 지금까지 설명 된 그것의 sialotranscriptome는 인간, Culex 속의 유일한 모기에 먹이 맞게 먹이 밀접 하 게 관련 C. quinquefasciatus, 모기를 상대적으로 웨스트 나 일 바이러스 모기 벡터.
RNA 방해 통로 Midgut 감염-고 Aedes Aegypti에서 Sindbis 바이러스에 대 한 장벽 탈출에 영향을 줍니다
RNA 간섭 (RNAi) 통로 역할 Aedes aegypti, arbovirus 감염 모기의 변조에서 타고 난 항 바이러스 면역 응답을 합니다. Sindbis 바이러스 (SINV; 가족: Togaviridae, 속: Alphavirus) Ae 감염 arbovirus 이다. aegypti 실험실에서. SINV 스트레인 TR339 Ae의 감염 시 midgut 탈출 장벽 (MEB)에서 발생. aegypti입니다. 이 방 벽의 본질은 잘 이해 되지 않는다. Arboviruses에 대 한 중앙 기관 결정 벡터 역량으로는 midgut의 역할 조사, bloodfed 여성 midgut 조직에 RNAi 통로 장애는 유전자 변형 모기를 생성 했습니다. 이러한 모기 SINV 복제, midgut 감염 및 보급의 효율성, 그리고 모기 장 수는 midgut RNAi 장애의 효과 나타내기 위해 사용 했습니다.
Ochlerotatus Triseriatus 동부 나무 구멍 모기의 침 샘 Transcriptome
피를 빠는 arthropods의 타 액 그들의 호스트 hemostasis, 염증과 면역에 영향을 주는 펩 티 드의 복잡 한 혼합물을 포함 합니다. 이러한 활동 또한 병원 체 배달 사이트를 수정 하 고 질병 전송 증가 수 있습니다. 타 액에는 호스트 antisaliva 면역 반응을 피부 알레르기 또는 알레르기도 이어질 수 있는 마운트를 유도 한다. 이 따라 한 침 레 퍼 토리, 또는 sialome, 모기의 소설 약리학 활동, 벡터 매개로 질환에 대 한 새로운 백신 목표를 개발 하 고 벡터 노출과 후보 둔감 백신의 역학 마커 개발에 대 한 내 지식 플랫폼을 제공 하기 유용 합니다. Ochlerotatus triseriatus 모기 라크로스 바이러스 벡터 이며 인체에 알레르기를 생산. 이 작품에서 총 1575 클론 오 triseriatus 성인 여성 침 샘 cDNA 라이브러리에서 임의로 선택 된 시퀀스 되었고 굴복 하는 560 했다 singleton 관련된 시퀀스의 731 클러스터 데이터베이스를 조립 하는 데 사용. 뇌관 연장 실험 159 단백질 시퀀스, 식별할 수 있도록 시퀀스 범위 확장을 선택 된 클론에서 수행 된 상 비 단백질에 대 한 코드의 66. 이러한 데이터를 포함 하는 보충 스프레드시트 http://exon.niaid.nih.gov/transcriptome/ochlerotatus_triseriatus/s1/ot-s1.xls와 http://exon.niaid에서 사용할 수 있습니다. Nih.gov/transcriptome/ochlerotatus_triseriatus/s2/ot-s2.xls입니다.
