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Articles by Jason S. Kerr in JoVE

 JoVE General

Avidität-basierte extrazelluläre Wechselwirkung Screening (AVEXIS) für die Erkennung von Scalable Low-Affinität extrazellulären Rezeptor-Ligand-Wechselwirkungen


JoVE 3881 3/05/2012

Cell Surface Signalling Laboratory, Wellcome Trust Sanger Institute

AVEXIS ist ein Hochdurchsatz-Protein-Interaktion Assay entwickelt, um systematisch Bildschirm für neue extrazelluläre Rezeptor-Ligand-Paare in der Zellerkennung Prozessen beteiligt sind. Es ist speziell entwickelt, um transienten Protein-Interaktionen, die schwer zu identifizieren, die mit anderen hohen Durchsatz Ansätze sind zu erkennen.

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CCR5 Internalisierung Und Signalisierung Haben Unterschiedliche Abhängigkeit Von Membran-Lipid-Raft-Integrität

Der Chemokin-Rezeptor CCR5, fungiert als ein Co-receptor für Human-Immunodeficiency-Virus Eintritt in Zellen. CCR5 wurde gezeigt, um Cholesterin Sphingolipid-reichen und Membrane Microdomains genannt Lipid Rafts oder Caveolae ausgerichtet sein. Cholesterin ist wichtig für die CCL4 Bindung an CCR5 und für die Führung der Konformationsänderungen Integrität des Rezeptors. Filipin Behandlung führt zu einem Verlust von Caveolin-1 aus der Membran und damit zu einem Zusammenbruch der Caveolae. Wir haben hier festgestellt, dass die Beschlagnahme von Membran-Cholesterin mit Filipin nicht beeinflussten Rezeptor Signalgebung, jedoch ein Verlust von Ligand-induzierte Internalisierung der CCR5 beobachtet wurde. Cholesterin Extraktion mit Methyl-Beta-Cyclodextrin (MCD) reduziert Signalisierung durch CCR5 Freigabe der intrazellulären Ca(2+) gemessen und die Hemmung der Forskolin stimuliert cAMP Kumulation mit keinen Einfluss auf die Internalisierung abgeschafft. Pertussis-Toxin (PTX)-Behandlung gehemmt die intrazelluläre Freisetzung von Kalzium, die über Galphai G-Proteinen ausgestrahlt wird. Abbau von Cholesterin in der Membrane Microdomains zerstört und CCR5/G-Protein-Kupplung auf ein G-Protein-PTX-unabhängige umgestellt. Wir schließen, dass Cholesterin in der Membran unverzichtbar für CCR5 Signalisierung über die Galphai G-Protein-Untereinheit, und die Integrität von Lipid Rafts ist nicht notwendig für effektive CCR5 Internalisierung ist es jedoch entscheidend für die richtige CCR5-Signaltransduktion über Galphai G-Proteinen.

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