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 JoVE General

Isolement et culture de cellules endothéliales pulmonaires des souris néonatales


JoVE 2316 12/14/2010

Blood Research Institute, BloodCenter of Wisconsin

Ici, nous décrivons un protocole pour l'isolement et la culture de cellules endothéliales murines pulmonaires. Cette méthode comprend mécanicien et dissociation enzymatique du tissu pulmonaire ainsi que d'un processus de purification en 2 étapes utilisant des anticorps anti-PECAM-1 et anti-ICAM-2 anticorps conjugués à des billes magnétiques, ce qui produit une population de cellules endothéliales pures d'origine essentiellement microvasculaires.

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Rap1 Favorise Activation Du VEGFR2 Et De L'angiogenèse Par Un Mécanisme Impliquant L'intégrine αvβ ₃

Facteur de croissance vasculaire endothéliale (VEGF) agissant par l'intermédiaire du récepteur VEGF 2 (VEGFR2) sur les cellules endothéliales (CE) est un régulateur clé de l'angiogenèse, un processus essentiel pour la guérison des plaies et des métastases tumorales. Rap1a et Rap1b, 2 hautement homologue petites protéines G, sont tous deux nécessaires pour l'angiogenèse in vivo et des réponses communautaires normales à VEGF. Ici nous avons cherché à déterminer le mécanisme par lequel Rap1 favorise VEGF-angiogenèse induite. Utilisation de la lignée restreints Rap1-souris déficientes en protéine, nous montrons que Rap1 carence dans l'endothélium conduit à un défaut de l'angiogenèse in vivo, d'une manière dose-dépendante. Reposant sur ECS obtenu à partir de Rap1-souris déficientes en nous démontrant que Rap1b favorise activation de la kinase du VEGF-VEGFR2 et régule l'activation de l'intégrine. Important, l'Rap1b-dépendante du VEGF VEGFR2-activation est en partie médiée par l'intégrine α (v) β (3). En outre, dans un modèle in vivo de l'angiogenèse poisson zèbre, nous démontrons que Rap1b est essentielle pour la germination des navires intersomitic, un processus connu pour être dépendant de signalisation du VEGF. Utilisation de 2 distinctes pharmacologiques VEGFR2 inhibiteurs nous montrons que Rap1b et VEGFR2 agissent additivement pour contrôler l'angiogenèse in vivo. Nous concluons que Rap1b favorise VEGF-angiogenèse induite par la promotion activation du VEGFR2 dans ECS par l'intermédiaire de l'intégrine α (v) β (3). Ces résultats donnent un aperçu roman dans le rôle de Rap1 dans signalisation du VEGF dans ECS.

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