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Articles by Joel C. Glover in JoVE
JoVE General
치킨의 배아에 인간 줄기 세포의 Xenotransplantation
1Department of Physiology, University of Oslo, 2Norwegian Center for Stem Cell Research, University of Oslo
본 논문에서 우리는 닭 배아의 중추 신경계의 여러 지역으로 인간의 줄기 세포를 이식하는 방법을 제시. 이것은을 제공합니다
Other articles by Joel C. Glover on PubMed
Vestibular 핵 복잡 하 고 관련 된 신경 인구 Hodological 조직 비교 측면
최근 몇 년 동안, axonal 추적 및 조류 배아의 운명 매핑 연구 vestibular 핵 복잡 하 고 관련 핵 내에서 정의 된 hodologically 신경 그룹의 모자이크 패턴을 밝혀졌다. 특정 vestibular 뉴런 클러스터를 다른 대상 (척추, oculomotor, 소 뇌) 예상 크게 차별된 neuroepithelial 도메인에 상주 합니다. 이 패턴은 hindbrain neuromeric 조직 사이 긴밀 한 관계를 특정 개발 패턴화 유전자 (Hox 및 Pax 유전자) 등의 표현 및 개별 뉴런 그룹의 사양 사이 강한 연결을 제안합니다. 포유류에서 이전 추적 연구와 anamniote 종 다른 노동자에 의해 수행의 최근 추적 연구 avians에서 hodological 기능을 많이 높은 척추 라인에 보존을 나타냅니다. 여기, 우리가 비교 하 고 대비 hodological vestibular 연결에 대 한 진화 bauplan 나타낼 수 있는 공통 분모를 명료 하 게 하 시도 조류와 다른 척추 동물 클래스에 패턴.
신생아 쥐의 요 추 척수에 Commissural 수의 프로젝션 패턴
우리 신생아 쥐 척수에서 commissural 수 (CINs)의 axonal 투영 패턴을 공부 했다. 일부 CINs 운전 활동을 생성 하는 척추 척수의 신경 네트워크의 중요 한 구성 요소입니다. 형광 dextran 아민과 차동 퇴행 성 라벨 프로토콜을 사용 하 여 축 삭 (CINs, 또는 aCINs 오름차순) 오름차순으로 CINs 및 CINs (CINs, 또는 dCINs 내림차순) 축 삭을 내림차순으로 크게 다른 인구 구성을 보여줍니다. 우리는 aCINs 및 dCINs 차지 가로 평면에서 부분적으로 중복 도메인을 보여줍니다. 반면 주로 복 부와 중앙 Acins와 등 쪽 뿔 내 작은 숫자에 위치 하 고 있는 Dcins는 Acins는 중간 영역 내에 중앙에서 하 고 복 부 나 팔의 중간 영역에 등 쪽 뿔 내 등 쪽 여백에 위치. 레이블이 지정 된 aCINs 및 dCINs rostrally 또는 caudally 하나 적어도 30 세그먼트에 대 한 프로젝트 및 대략 동일한 숫자에. 우리는 또한 제 3의 존재, 그 축 삭 하나 적어도 30 rostrally와 caudally 모두 세그먼트에 대 한 프로젝트를 분기 하는 Cins의 작은 인구 입증 (adCINs). Adcins는 Acins과 Dcins의 중앙과 복 부 그룹 가운데 주로 있습니다. 마지막으로, 우리 어느 방향으로 세그먼트 미만의 1 반에 대 한 투영 축 삭과 Cins의 존재를 보여 줍니다. 이러한 "단거리 CINs" aCINs, dCINs, 및 Adcins과 혼합 된 있습니다. 우리의 결과 추가 electrophysiological 연구 겨냥 한 포유류 운전 중앙 패턴 발생기에 참여 하는 Cins를 식별 해 부 프레임 워크를 제공 합니다.
11 일 닭 배아의 Vestibular 복잡 한 Hodological 및 Cytoarchitectonic 조직 간의 관계
구조와 특정 뇌 영역의 기능 사이의 관계를 이해 하려면 그것은 순수 관련 있는 해 부 기능을 확인 하는 데 필요한. 뇌 기능의 생리 연구 전통적으로 cytoarchitectonics와 myeloarchitectonics를 기반으로 해 부 기능 컨텍스트에서 설정 된 하지만 구조와이 컨텍스트에서 함수 간의 관계는 복잡 한 수 있습니다. Hodology (프로젝션 매핑)에 기반 해 부 조직의 대체 제도 더 큰 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기, 우리가 만들고는 hodological의 직접 비교 vestibular 복잡 한 cytoarchitectonic 조직 중간 닭 배아에서 퇴행 성 추적 및 3 차원 재구성을 사용 하 여. 실험의 한 세트, vestibulospinal 및 vestibulo 안구 신경 그룹 했다 선택적으로 biotin dextran 아민으로 표시 하 고 번갈아 intercalated 3 차원 모델에 그때 결합 했다 섹션에 정의 된 cytoarchitectonically vestibular 핵 정렬. Cytoarchitectonic 핵 가운데 개별 hodological 그룹의 apportionment의 semiquantitative 분석을 허용 합니다. 실험의 또 다른 세트에서 vestibulospinal 및 vestibulo 안구 신경 그룹 차동 형광 dextran 아민으로 분류, 3 차원으로 재구성 되었고 공간 겹침의 정량 분석 대상. 우리의 결과 첫 번째 3 차원 표현 및 vestibular 단지 ("hodological 모자이크")의 hodological 구획의 정량 분석을 제공합니다. 그들은 또한 직접 hodologically 정의 된 뉴런 그룹 각 관계를 기존의 vestibular 핵은 hodological 모자이크 단위 부담 하지 않습니다는 cytoarchitectonic에 대 한 일대일 대응 핵 분열 사실을 강조 표시 합니다. 반면에 다른 여러 핵 겹치는 일부 정의 된 hodologically 그룹은 핵의 제한 된 부분에 지역화 됩니다. 따라서, hodology 및 cytoarchitectonic 기능 위치 지정 메커니즘의 다른 세트를 통해 가능 하 게 닭 배아의 vestibular 복잡 한 규제가 별도로 될 듯하다. 여기에 나오는 3 차원 표현 vestibular 시스템의 해 부, 생리, 발달, 및 진화 연구를 통합 하기 위한 기반을 제공 합니다.
닭 배아에서 Vestibulo 안구 회로의 개발
이 문서에서는 조직의 연구 및 개발 vestibulo-안구 반사 아크 닭 배아의 검토. 그것은이 회로 기능적으로 증명할 수 있는 motoneuron 풀에 oculomotor 핵에서 motoneurons의 점진적 클러스터링을 포함 하 여를 패턴화 vestibular 프로젝션 뉴런의 특정 axonal 궤도와 oculomotor motoneuron 풀에 종단 일관 된 클러스터로 개발 (근육, 다음 vestibular 프로젝션 뉴런 motoneuron motoneuron) 하는 동안 시 냅 스 형성의 역순의 개발 특성화 주요 기능 들을 요약합니다모두 반사 아크 내에서 궁극적인 penultimate 릴레이에서 초기 시 냅 스의 선택도 하 고. 다른 척추 동물의 연구에 대 한 참조는 비교 컨텍스트를 제공 하 고 잠재적인 메커니즘에 대해서는 설명 하는이 회로의 기본 시 냅 스 특이성에 기여할 수 있습니다.
프로젝션 특정 수 및 배아 마우스와 쥐 척수에서 프로젝션 뉴런의 개발
수 및 마우스와 쥐 태아의 요 추 척수의 뉴런 프로젝션 기원 [허리 세그먼트 (L) 2]의 세그먼트에서 한 세그먼트의 거리에서 형광 dextran 아민 retrogradely 표시 했다. 특정 axonal 예측 (동측 오름차순, 내림차순, 및 bifurcating, 및 commissural 오름차순, 내림차순, 및 bifurcating)와 6 개 클래스 두 종에서 차동 라벨로 식별 되었고 배아 날 (E) 12 마우스의 탄생부터 따 랐 다. 짧은 프로젝션 (intrasegmental 수)와 뉴런을 공부 하지 했다. 우리는 4 개의 nonbifurcating 신경 클래스 차지 특성, 가로 평면에서 부분적으로 중복 도메인 마이그레이션 및 정착 축 삭을 궤도에 관련 된 체계적인 패턴을 나타내는 보여줍니다. 개발 하는 동안 꾸준히 증가 하는 nonbifurcating 클래스의 각 뉴런의 수입니다. Bifurcating 신경 세포 개발을 통해 총의 작은 분수를 표현 하 고 상대적으로 동측 및 commissural 신경 도메인 내의 위치에 흩어져 했다. 퇴행 성 추적 및 억제 신경 전달 물질 감마-aminobutyric 산 (GABA)에 대 한 기술 조합 6 프로젝션 특정 클래스에서 척수 신경 중 GABA 양수, 이전에 포함 하 여 모든 GABA 양성 척추 신경 GABA 양성 commissural 신경 세포를 설명, 어느 방향에서 하나 또는 두 개의 세그먼트를 초과 하는 계획을가지고 있을 가능성이 있습니다 제안 보였다.
인간 조 혈 줄기 세포 신경 세포 재생 닭 배아 척수에서 효율적으로 생산
조 혈 줄기 세포 (HSCs) 신경 세포의 잠재적인 근원으로 뇌 병 변, 수리에서 사용 하기 위해 제안 되었습니다 하지만 이전 연구 신경 분화의 낮은 비율을 나타내는 신경 표현 형의 확실 한 증거를 제공 하지 않았습니다. 인간의 HSCs neurogenic 잠재력을 테스트 하려면 닭 배아에서 개발 척수의 병 변으로 성인 인간의 골 수에서 CD34 + HSCs 이식 하 고 기술, 퇴행 성 라벨 및 전기 생리학을 사용 하 여 그들의 차별화를 따 랐 다. 우리는 인간의 세포가 이전에 보고 된 것 보다 상당히 높은 속도에서 신경 마커 NeuN 및 MAP2 이식된 인구 표현에서 파생 된 찾을. 우리 또한 찾을 이러한 세포 신경 cytoarchitecture 전시, 腹 뿌리 또는 척추 백색 질 내의 길이에서 여러 세그먼트에 축 삭을 확장, synaptotagmin +와 GABA + 시 냅 스 터미널, 장식 활성 막 속성 및 기능적으로 통합 된 뉴런의 자발적 시 냅 스 전위 특성. 신경 분화 CD34 식의 손실에 의해 동반 됩니다. Confocal 현미경 검사 법으로 조심 검사 heterokaryons의 흔적을 보여준다 그리고 인간의 세포는 절대 호스트 치킨 셀과 융합 가능성이 제안 치킨 특정 항 원 표현. 우리는 닭 배아의 재생 척수에서 microenvironment 본격적인 신경 세포로 분화 하는 성인 인간의 Hscs의 상당한 비율을 자극 한다는 결론. 이 환자 자신의 골 수에서 뉴런의 높은 수율 생산에 대 한 새로운 가능성을 열 수 있습니다.
호르몬 수용 체 1 Thyrotrophin 출시 및 중앙 신 경계에서 호르몬 MRNA 식 Prothyrotrophin 방출 유아 젖 쥐에 의해 규제 됩니다
Hypothalamic 펩 티 드 thyrotrophin 방출 호르몬 (TRH) 허용된 기능은 뇌 하 수 체에서 thyrotrophin (TSH)의 출시를 시작 하는 것입니다. 젖이 쥐에서 TRH에 대 한 생리 적 역할 아직 설립 되지 않았습니다.
Appendicularian Urochordate Oikopleura Dioica 상 GABAergic 뉴런의 개발
Urochordates의 개발 두뇌 공부 척 혈통에 뇌 진화에 대 한 우리의 이해를 높일 수 있습니다. Appendicularian urochordates 신경 분화의 지역 패턴을 해결 하려면 우리가 상 GABAergic 신경 Oikopleura dioica 사용 하 여 GABA 합성 효소 갓의 GABA 기술와 제자리 교 잡에에서의 개발 조사. 첫째, 우리는 신경 수와 대뇌와 꼬리 신경에 조직의 발달 역학 평가. 다음 확인 하 고 매핑된 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 상 GABAergic 신경의 위치. 첫 번째 뇌 신경 및 대뇌와 꼬리 신경 꼬리 신경 코드에만 우리는 갓 mRNA 양수와 GABA immunopositive 신경 세포 발견. 두 ganglia 갓 mRNA 양수와 GABA immunopositive 신경 같은 특성 intraganglionic 위치에서 발견 됩니다. 이러한 GABAergic 마커의 차별화 먼저 첫 번째 뇌 신경 및 대뇌 신경 절에 그리고 꼬리 신경 절에 몇 시간 지연 발생. 모든 3 개의 구조 식이 나타나는 GABA 식 전에 2-3 시간 하는 mRNA 갓. 일반적으로, GABA 익스프레스 갓 같은 수의 신경 세포에 의해 표현 됩니다. 그러나 여러 불일치 다른 뉴런에 GABAergic 형의 차등 규제를 제안. 우리의 결과 GABAergic 형 CNS의 anteroposterior 축 식의 진부한 패턴은 보여 줍니다. 이 종에서 최근 게놈 시퀀싱 및 유전자 연구 개발 패턴화를 감안할 때, 오 dioica GABAergic 뉴런 평가, 무척추동물 척추 전이, GABAergic 형을 지정 하는 분자 메커니즘에 대 한 좋은 모델을 제공 합니다.
Retinoic 산 및 Hindbrain 패턴화 합니다
Retinoid 신호는 hindbrain 개발 패턴화에 중요 한 역할을 한다. Retinoids 않았음 효과의 연구 초기에 hindbrain 패턴화 결함 retinoid 과잉 또는 결핍의 경우에는 고통을 보였다. 동물 모델에 이러한 효과의 가까이 시험 retinoids는 hindbrain antero 후부 축을 지정 하 생리 적 역할을 할 수도 있습니다 제안 했다. 이 아이디어 retinoid 합성 degradative 효소, 바인딩 단백질과 수용 체는 hindbrain에 지역화 및는 neuroepithelium와는 mesoderm 인접 영역에 의해 지원 되었다. 병렬로, hindbrain Hox 유전자와 다른 발달 규제 유전자의 지역적인된 표현 측면에서 분자 패턴화 할 뿌리깊은 retinoid 신호에 의해 영향을 취소 되었습니다.
기능 시 냅 스 연결 광 기록 된 시각 청각 시스템의 개발: 성의 갖는 활동은 초기 단계부터 존재
전압에 민감한 염료 기록을 사용 하 여 닭 배아의 뇌 간 청각 네트워크 형성의 포괄적인 조사 수행 했습니다. 연결 된 8 신경의 청각 분기와 손상 모/뇌 줄기 준비 5.5-8 일 닭 배아에서 해 부 했다 고 응답 신경 자극에 의해 갖는 광학 기록 했다. 7-8 일 배아의 모 수에 우리 해당 동측 핵 magnocellularis (NM) 및 핵 하 angularis (NA)는 청각 afferents ipsi-그리고 contralateral 핵 laminaris (내셔널 리그), 뉴 멕시코에서 계획을 수신 하는 수신 하는 4 개의 응답 영역 식별. 광 응답 빠른 spikelike 신호 뒤에 나트륨 종속 액션 잠재력과 glutamatergic 흥분 성의 postsynaptic 잠재력 (EPSP)를 각각 반영 오랫동안 느린 신호를 이루어져 있었다. NM 나, 내셔널 리그에서 느린 광학 신호 EPSP 관련 일부 6 일간 기능 시 냅 스 연결이이 핵 7 일 무대에 의해 발생을 나타내는 모든 7-8 일간 준비에서 발견 되었습니다. 7-8 일 배아의 폰 스 래 요에 분명히 ipsi-및 contralateral 핵 lemnisci lateralis (NLL) 청각 통로의 고차 핵에 해당 하는 두 개의 추가 응답 영역 식별. 또한, 우리는 embryogenesis 동안에 관찰 과도 예측에 해당 하는 가능 하 게 하는 광 응답 contralateral 소 뇌에서 감지. 현재의 연구는 기능성 청각 회로 설립 닭 배아 단계에서 이전에 보고 된 것 보다 이전 하는 방법을 보여 줍니다. 우리는 청각 신경망 형성에 관하여 성의 갖는 활동의 가능한 역할을 논의.
Phox2 Homeodomain 녹음 방송 요인의 강제 식 Branchio Visceromotor Axonal 형을 유도합니다
모터 뉴런 프로젝트 주변으로 원인은 잘 이해 되지 않습니다. 우리는 여기 homeodomain 단백질 Phox2b, 이전에 필요 하 고 branchio visceromotor 신경 개발을 위한 충분 한 것으로 표시 하 고 그것의 paralogue phox2a의 식을 강요 하는 척수에 branchiomotor 같은 axonal 표현 형을 부과 보여줍니다. 많은 Phox2 페 뉴런, 누구의 axons 지금 주변에 프로젝트, 일반적으로 신경 튜브의 경계 내에 머물 것 이다. 한번 신경 튜브 외부 소성 축 삭의 분수는 여기에서 보이는 것과 같이 phox2b의 부재에 개발 하지 않습니다 branchiomotor 신경 척추 액세서리 신경이 가입. Explant 연구 쇼 Phox2 페 뉴런의 축 삭 신경 튜브를 떠나 매력적인 신호 필요 하 고 그들의 결과 branchio visceromotor 섬유 조직에 의해 일반적으로 승진은 성장. 따라서, Phox2 식은 주변 axonal 형 및 따라서 신경 튜브 내에서 또는 그것을 밖으로 프로젝트를 결정 결정에 있는 중요 한 단계입니다.
꼬리 신경 코드, Motoneurons, Appendicularian Urochordate Oikopleura Dioica에서 근육 Innervation의 개발
Appendicularian Oikopleura dioica에 꼬리 신경 코드와 근육 innervation 개발 차동 간섭 콘트라스트와 confocal 현미경 검사 법, phalloidin 말라의 신경 마커 tubulin와 콜린 acetyltransferase (채팅)에 대 한 제자리 교 잡에 얼룩을 사용 하 여 평가 했다. 꼬리 신경 코드는 먼저 꼬리에 꼬리 신경 절에서 확장 된 tubulin mRNA 양성 신경의 흐름으로 나타납니다. 이 단계에서 몇 가지 말라 풍부한 신경 섬유 longitudinally 코드를 따라 코스. 꼬리 길게 하 고, 꼬리 신경 코드를 확장 하 고 더 fasciculated 되 고, 신경 세포에서 클러스터 진부 경도 위치. 신경 코드에 있는 신경 세포의 수는 약 29의 상대적으로 안정적인 최대값에 도달. 꼬리 신경 절 및 꼬리 신경 코드에 있는 신경 세포의 일부 채팅 Mrna를 표현합니다. 이러한 상 motoneurons 숫자 각 꼬리 근육 세포의 독립적인 innervation 일치에 꼬리의 거의 전체 범위 함께 배포 됩니다. 경도 상 motoneurons 시리즈 근육 세포와 함께 정렬 되지 않습니다 하지만 주변 신경 섬유 근육 세포를 확장 하는 모터 축 삭 따라 성장 코드를 종료 하기 전에 자신의 주변 대상에 인접 한 나타내는. 근육 innervation 채팅 mRNA 식의 발병의 제목의 발생합니다. 우리의 결과 motoneurons의 첫 분자 식별 및 개발 패턴화 척 중앙 신경 시스템의이 부분에서의 진화를 이해 겨냥 한 진 식 연구 무대 appendicularian 및 도움말 설정에서 모터 시스템의 첫 번째 발달 특성을 제공 합니다.
운명-매핑 포유류 Hindbrain: 마우스 배아에서 Rhombomere 관련 Hoxa2 증강 요소를 사용 하 여 평가 하는 Vestibular 프로젝션 뉴런의 Segmental 기원
포유류 hindbrain에 확인 된 신경 인구의 운명 지도 생성 단계로, 우리는 vestibular 핵 복잡 한 전체 rhombencephalon에 걸쳐 주요 sensorimotor 지역 개별 rhombomeres 기여 평가. 유전자 변형 생쥐는 lacZ 또는 rhombomere 특정 Hoxa2 증강 요소 transcriptional 통제 향상 된 녹색 형광 단백질 리포터 유전자를 품고 rhombomere 파생 도메인 시각화 사용 했다. 우리가 연속 배아 단계에서 기능적으로 식별 vestibular 프로젝션 뉴런 그룹 활용된 dextran 아민을 retrogradely 라는 고 얻은 동일한 배아에 rhombomere 파생 된 도메인과 직접적인 비교를 통해 발달 운명 지도. 운명 지도 vestibular 뉴런 그룹 각 발달, anteroposterior 마이그레이션 vestibular 시스템의 rostrocaudal 패턴화에 큰 기여 아니다 제안 상대적으로 안정 되어 독특한 rostrocaudal 도메인에서 파생. 그룹의 대부분에, multisegmental 및 각 rhombomere 두 vestibular 프로젝션 뉴런에서에서 여러 종류, segmentally 반복 하지 복잡 한 패턴을 야기할 운명입니다. 닭 배아의 연구와 비교 확인 된 vestibular 프로젝션 뉴런 그룹의 rostrocaudal 패턴화는 avians와 mammalians 사이 잘 보존 일반적으로 나타나지만 중요 한 종의 차이가 특정 그룹의 rostrocaudal 한계에 존재 합니다. 이 포유류 hindbrain 운명 지도 유전자 조작 vestibular 프로젝션 뉴런의 특정 부분을 타겟팅에 대 한 기준으로 사용할 수 있습니다.
Appendicularian Oikopleura Dioica에 성체의 Spatiotemporal 패턴
티 미 딘 아날로그 bromodeoxyuridine (BrdU)의 appendicularian Oikopleura dioica의 중앙 신경 시스템 (CNS)에서 cytogenesis를 평가 하기 위해 사용 되었다. 시간 초과 누적 labelings 시리즈 실시 45 분 (최소)에서 8 시간 (h) 때 뉴런 9h CNS 내의 특정 사이트에 있는 지원 셀 되었다 postmitotic 표기 패턴을 제공 하는 수정 후. 대뇌 신경 절, 꼬리 신경 절 및 꼬리 신경 코드를 포함 하는 CNS에 걸쳐 신생 지원 셀의 창세기 보다 이전 시간대 발생 합니다. 뉴런 대뇌 신경 절에서 시작 하는 모든 3 CNS 지역에서 수정 후 1 시간 45 분 정도 먼저 생성 됩니다. 지원 세포는 수정 후 약 2 시간에서 시작 생성 됩니다. 대뇌 신경 절 및 꼬리 신경 절에서 다른 시간 epochs 중에 태어난 신경 세포는 꼬리 꼬리 신경 절의 rostral 그라데이션 및 대뇌 신경 절에서 좀 더 복잡 한 패턴을 따라 특정 공간 패턴에 정착. 이러한 지역 패턴 다른 epochs 중에 태어난 신경 코드의 길이 따라 균등 하 게 분산 된 꼬리 신경 코드에 보였다. 대뇌 신경 절에서 셀의 작은 subpopulation 8 h에서 적어도 15 h Brdu를 통합 하기 위해 계속 하 고 줄기 세포 또는 성인에 본 추가 셀을 생성 하는 조상 세포의 보유를 나타낼 수 있습니다. 결과이 간단한 urochordate CNS cytogenesis, 성체와 gliogenesis (지원 셀 Oikopleura glial 세포에 대 한 가능성이 후보 되 고), 생년월일에 따르면 신경 위치의 그라디언트 및 배아와 애벌레 단계 넘어 신경 세포 전조의 유지 보수의 다른 타이밍 등의 여러 가지 척추 기능 전시 보여.
Appendicularian Oikopleura Dioica Notochord에서 성장 및 성인으로 세포 증식을 계속 했다
Appendicularian urochordate Oikopleura dioica 고착 성인 형태로 그 변 태 포함 notochord 등 쪽 신경 코드 등의 척 구조 손실 ascidian urochordates는 달리 인생을 통해 free-swimming 척 몸 계획을 유지 합니다. Oikopleura 성인 단계 개발 꼬리와 notochord와 꼬리의 움직임의 레 퍼 토리의 정교 길어 포함 됩니다. 이 길어 세포 기초 조사, 우리 confocal 현미경 검사 법 및 해칭 성인 단계에서 Oikopleura notochord의 개발 조사 라벨 Brdu을 이용 했다. 우리는 notochord 관 구조에 누적된 행의 셀에서 전형적인 urochordate 전환을 겪 습로 셀 숫자 증가 하기 시작 보여줍니다. 새로운 notochord 셀의 추가 성인,으로 곱한 애벌레 보완 하 여 20 셀의 약 8-fold 생활 3 일째 계속. 동시에는 notochord로 약 4-fold 길어집니다. BrdU 법인 및 세포 주기 마커 notochord 셀 성인으로 잘 증식을 계속 확인 합니다. 그들의 4 원주 분산된 경도 행에 배열 함께 notochord 세포의 광범위 한 postlarval 확산 아마도 성인 단계에서 전시 하 고 복잡 한 움직임에 대 한 기계적 지원에 필요한 Oikopleura 꼬리를 제공 합니다.
척추 동물 배아에서 신경 회로의 기능 개발의 이미지를 기록 하는 전압에 민감한 염료를 사용 하 여
최근 개발 디자인에 전압에 민감한 염료와 같은 염료의 광학 특성에 전압 종속 변화를 탐지 하기 위한 기구를 녹음의 두뇌 및 척수에 있는 신경 회로의 기능 개발을 평가 하기 위한 중요 한 기술로 기록 하는 전압에 민감한 염료를 설립 했다. 여기에 우리가 일반 기술 논의 전압에 민감한 기록에 관한 문제 신호를 염색 하 고 미 발달 뇌 줄기에서 감각 및 sensorimotor 회로의 개발에 따라이 방법을 활용 하는 연구에 설명 합니다. 기능적 영상 전압에 민감한 염료 녹음을 통해 널리 분산 된 회로에 submillisecond 시간적 해상도 시 냅 스 개발 및 기능에 대 한 비 침 투 적인 분석을 허용합니다. 이러한 이점은 특히 때 신경 세포는 작은 시 냅 스는 약 sensorimotor 회로 개발 초기 단계에 평가에 중요 한입니다.
트렁크와 Hindlimb Innervating Motoneurons Reticulospinal 드라이브의 차동 기원 광 기록에 의해 계시 마우스에 근육
광 기록 brainstem reticular 형성 제어 하 고 트렁크 및 hindlimb 근육의 활동을 조정 하는 방법을 더 나은 이해를 사용 하 골 수 reticulospinal 신경 세포와 신생아 마우스에 L2 세그먼트의 요 추 motoneurons 사이의 기능적 연결의 특성을. 격리 된 brainstem 척수 준비에서 synaptically 유도 칼슘 과도 동측과 열의 contralateral 중간과 측면 모터 (MMC, LMC) 개별 MNs 시각 했다 골 수 reticular 형성 (MRF)의 초점 전기 자극에 따라. MRF 자극 특정 공간 조직에 따라 MMC와 대마젤란은 하, 차동 답변을 elicited. 중간 MRF 자극 측면 MRF 자극 elicited 응답 MMC에서 우세한 반면는 대마젤란은 하에 주로 반응 elicited. 이 상호 반응 패턴 척수의 동측 및 contralateral 양쪽 모두에서 관찰 되었다. Reticulospinal 신경 자극된 영역에 포함 된 여부를 확인 하려면 우리 retrogradely MRF 신경 세포와 axons 다른 척추 funiculi에 전기가 셔 서 하 고 자극 사이트로 이라는 뉴런의 배포판을 비교. 우리 gigantocellularis 망상 핵 (갈 거 예요 ventralis 및 알파 포함)의 영역 내에서 retrogradely 이라는 뉴런의 다 수 발견 대부분의 자극 위치 했다. MRF, 내 입장 조직 존재 reticulospinal 신경 세포의 고유한 인구는 주로 내측 또는 측면 motoneurons 영향가 면 트렁크와 hindlimb 근육의 차동 제어에 대 한 해 부 기질을 제공 합니다. 이러한 조직 개시와 많은 포유류에서 postural 및 비 postural 모터 제어 하는 동안 발생 하는 기능적 요구 사항에 맞는 것이 근육의 두 세트에서 활동을 조정에 유연성을 소개 합니다.
붉은 귀 거북의 척수에 투영 특정 수의 조직
차동 역행 axonal 추적을 사용 하 여 motoneurons (MNs) 및 성인 붉은 귀 거북이 척수의 요 추 세그먼트 D9 프로젝션 특정 interneuron (IN) 클래스 식별. 우리는 가로 평면에서 이러한 신경의 분포를 특징 하 고 그들의 숫자와 비율을 추정. 다른 commissural 기능 (CINs)에서 동측 기능 (IINs)을 구별 하 고 어느 오름차순 내림차순 (d) 축 삭 (a) 축 삭 IINs 및 CINs 식별 하 허용 패러다임 라벨 또는 모두 분기 axons 승천 하 고 (광고)를 내려가 다. 1 세그먼트 길이 보다 짧은 축 삭과 로컬 수 공부 하지 했다. 우리가 보여 가장 retrogradely 레이블된 기능 있는 등 복 부 경적, 중간 영역 및 등 쪽 뿔에 Mns를. IINs 등 쪽 뿔에 predominate. Cins는 평균 보다는 IINs medially 복 부 경적 및 중간 영역에 있습니다. IIN 및 CIN 인구 내에서 주요한 까지는 고 dINs 겹칩니다 광범위 하 게. AdIINs 및 adCINs 기능 총 수의 극히 일부에 차지 하 고 각 IIN 및 CIN 도메인의 대부분에 걸쳐 흩어져 있습니다. DIINs 대 aIINs, dCINs, 대 aCINs 및 adIINs adCINs 대 비율이 있습니다 Iins와 Cins의 비율 평등에 대해 있다. 결과 요 추 척추 기능 다른 척추 동물의 조직에 비교 됩니다.
프로젝션 뉴런의 차동 참여 개발 조류 Hindbrain에 자발적인 활동의 출현 하는 동안
더 나은 개발 hindbrain에 자발적인 신경 활동의 출현의 특성, 자발적인 활동은 닭 배아의 뇌 줄기의 고립 된 준비에 정의 된 프로젝션 뉴런 인구에서 광학 기록 했다. Ipsilaterally reticulospinal (RS) 신경 세포와 여러 개의 그룹을 예상 vestibuloocular (VO)의 뉴런은 retrogradely으로 표시 칼슘 그린 1 dextran 아민 및 자발적인 칼슘 과도 형광 현미경에 장착 된 충전 결합 장치 카메라를 사용 하 여 기록 했다. 활동의 자발적인 동기 파열 발생 등록 trigeminal 모터 신경 (nV)에서 세포 외 동시 녹음 되었다. 두 가지 종류의 자발적인 활동을 관찰 했다: 동기 이벤트 (SEs)는 네바다에서 자연 파열 레지스터에서 몇 분 마다 한 번씩 발생 했다 테트로도톡신 (TTX) 종속, 및 비동기 이벤트 (AEs), SEs 사이의 간격에서 발생 한 고 TTX 저항 했다. AEs SEs 전에 발달 일어났고 일반적으로 작고 SEs 보다 진폭에 더 많은 변수를 했다. NV 파열 초기에 배아 하루 4, RS 뉴런에서 먼저 한 다음 VO 뉴런에서 SEs 같은 무대에 등장 합니다. 모든 RS 뉴런 참가 똑같이 SEs 처음부터, 반면 VO 뉴런의 서로 다른 부분 참가 차동, 모두 전시 SEs, 개별 뉴런에 SEs 따라 nV 버스트 충실도 및 발달 단계는 SEs 등장 하 고 성숙 하 고 신경 세포의 비율의 용어. 결과 자발적인 활동 제안 하는 다른 기능 신경 회로의 형성에 차동 개입 hindbrain 프로젝션 신경 인구 가운데 heterogeneously 표현 됩니다 보여.
갓 태어난 생쥐의 요 추 척수에 Commissural 수의 송신기 고기
그들은 왼쪽 및 오른쪽 근육 활동의 조정 중재 하기 때문에 commissural 수 (CINs) 중앙 패턴 발생기 (cpgs 내 겠) 운동에 대 한 필요한 구성 요소는. 프로젝션 패턴 및 설치류 요 추 코드 ventromedial 부분에서 Cins의 다른 클래스의 상대 위치를 설명 한 된 (Eide 외. [1999] J Comp Neurol 403:332-345; 스토 케 외. [2002] J Neurol 446:349 Comp-359. Nissen 외. [2005 년] J Neurol 483:30 Comp-47). 그러나, 배포 및 다른 CIN 신경 전달 물질 고기 운전 포장 소비재 지역화 된 포유류 척수의 복 부 지역에서의 상대 유행 알 수 있다. 이 연구에서 우리가 상대적 비율 및 신생아 쥐의 요 추 척수에 상 억제 및 흥분 성의 Cins의 해 부 학적 위치에 설명합니다. 잠재적인 신경 전달 물질 고기를 직접 시각화 하 글리신 운송업 자, GlyT2, 또는 기공을 조미료 운송업 자, vGluT2, wildtype 마우스 및 글루탐산 decarboxylase (갓) 65의 발기인, GAD67, 또는 GlyT2 Egfp을 표현 하는 유전자 변형 쥐에 대해 제자리 교 잡으로 Cins의 역행 라벨을 결합. 우리의 연구는 GABAergic, 그리고 glutamatergic CINs CINs coexpressing Glyt2와 GAD67::eGFP, glycinergic/GABAergic 형을 결합 한 상 나타내는의 작은 비율을 거의 동등한 숫자 단위로 그 상 glycinergic를 보여줍니다. 이러한 다른 혓바닥 고기 laminas 7 세 및 8 세에에서 혼합 된 했다. 우리의 결과 glycinergic, GABAergic, 및 glutamatergic CINs 신생아 마우스에 요 추 척수의 포장 소비재 영역의 주 CIN 고기는 것이 좋습니다. 우리는 다른 척추 동물의 신경 전달 물질 고기 CIN의 설명에 이러한 결과 비교 합니다.
인간 줄기 세포 생물학에서 Chimeric 동물 모델입니다
재생 의학을 위한 줄기 세포의 임상 사용 동물 모델에서 전 임상 연구에 비판적으로 종속 됩니다. 이 리뷰에서 우리는 일부 핵심 문제 및 인간 줄기 세포 생물학 실험 표준화, 신체 크기, 면역 장벽, 세포 생존 요인, 호스트 및 기증자 세포 그리고 vivo에서 이미징 및 추적의 융합 연구를 동물 모델의 사용에도 전에 검사. 우리는 다양 한 이미징 살아있는 동물의 셀 추적을 사용할 수 있는 형식, 그들의 강점과 약점 비교 및 줄기 세포 행동 vivo에서의 동적 평가 대 한 새로운 기회를 이어질 가능성이 높은 기술 개발을 설명 하는 특정 주의 집중. 우리는 다음 가장 개요는 일반적으로 설치류, ungulates, nonhuman 영장류, 그리고 닭 배아 모형의 별도 리뷰와 함께 인간 줄기 세포의 xenotypic 이식 동물 모델, 그들의 장점 및 단점, 그리고 그들의 사용의 예를 사용을 제공 합니다. 인간의 체세포, 배아, 그리고 유도 만능의 사용으로 줄기 그래서 증가, 세포도 이러한 동물 모델에 대 한 응용 프로그램의 범위를 것입니다. 인간/동물 chimeric 모델을 사용 하는 점점 더 정교한 유전자 조작, 세포 전달 및 생체 조건 화상 진 찰을 통해 개발 될 가능성이 높습니다.
Vestibular 중재의 시 냅 스 Segmental 패턴을 축 입력 및 신생아 마우스 광 기록에 의해 평가에서 Motoneurons 분수령
운동과 자세의 적절 한 제어 vestibular 핵에서 척수 모터 회로 계획을 내림차순을 통해 부분적으로 발생 합니다. 일 설치류에서 출생, 전 vestibulospinal 신경 척수에 확장 axonal 계획 개발. 어떻게 기능 이러한 예측은 출생 직후 알 수 있다. 우리의 목표는 vestibulospinal 입력이 brainstem 척수 준비 신생아 마우스의 척추 motoneurons의 전반적인 기능 조직 평가 (출생 후 하루 (P) 0-5). 우리 중간과 측면 모터 열 응답 척수 (C2, C6, T7, L2 및 L5 세그먼트)를 통해 동시에 많은 motoneurons의 VIIIth 신경의 전기 자극에 의해 evoked 기록 칼슘 이미징 사용 하 여. Brainstem 또는 척수에 선택적 병 변의 구별 어떤 책자 응답에 기여: 측면 vestibulospinal로;에서 상당한 기여를 하지만 중간 vestibulospinal 책자에서 주로 유래 자 궁 경부 코드에 그 측면 vestibulospinal 지역에서 독점적으로 유래 thoracolumbar 코드에서. Thoracolumbar만 아니라 자 궁 경부 코드, 흥분 성의 commissural 연결 contralateral motoneurons vestibular 응답 중재. 응답 흥분 성의 억제의 융합 관련 보였다 GABA(A) 수용 체의 약리학 봉쇄 segmental 서로 대 한 특정 생산 조합 임시 응답 패턴에는 입력이 있습니다. 우리의 결과 출생 하 여 설치류 vestibulospinal 예측 기능 냅 이미 설립 및 차동 성인 포유류와 비슷한 관 및 세그먼트 특정 패턴에 목과 다리를 motoneurons에서 활동을 규제 하는 구성 된 보여 줍니다. 따라서,이 특정 집합이 예측 내림차순 태아 단계에서 연결의 몇 가지 주요 기능 적절 하 게 개발 합니다. 우리는 또한 현재 축 motoneurons의 vestibulospinal 입력에 대 한 새로운 정보 포유류, vestibulospinal 입력 및 자세 안정성 통제에 있는 그들의 역할에 대 한 전반적인 조직으로 미래 연구를 위한 포괄적인 플랫폼을 제공 하.
골 수 Reticulospinal 뉴런 사이의 신생아 마우스 Commissural 수를 내림차순으로 요 추 기능 시 냅 스 연결의 조직
신생아 마우스의 골 수 reticular 형성 (MRF) 중간과 측면 MRF 차동 우위와 hindlimb 트렁크 motoneurons (MNs) 활성화 되도록 구성 됩니다. 현재의 연구의 목표는이 활성화 polysynaptic 이며 요 추 척수의 축 삭 (dCINs)를 내림차순으로 commissural 수에 의해 중재 여부를 조사 했다. 이 위해 우리는 MNs ~ MRF 입력 polysynapticity 테스트 하 고 중간과 측면 MRF의 선택적 입력 574 개별 dCINs 신생아 마우스의 L2 세그먼트의 존재에 대 한 테스트. Mns의 postsynaptic Ca(2+) 응답 Reticulospinal 중재 mephenesin 존재 하 고 반응을 중재에 Dcins의 참여 제안 중간 선 병 변 후 감소 했다. 이 일관성, 중간 또는 측면 MRF reticulospinal 뉴런의 자극 활성화 51%와 동측 dCINs 검사의 57% (255 및 352 dCINs 각각) 및 52%와 contralateral dCINs 검사의 46% (166 및 133 dCINs 각각). 특히 내측 또는 측면 MRF의 자극에 응답 하는 Dcins의 비율이 두 MRF 영역 또는 둘 다에 응답 Dcins의 비율 비슷 했다. 3 응답 dCIN 인구 크게 겹치는 공간 분포 했다. DCIN 집단간 중재 중간과 측면 MRF에서 발생 하는 reticulospinal 경로에서 요 추 motoneurons에 응답 하기에 충분 한 있는지 보여 줍니다. 골 수 reticulospinal 시스템으로 트렁크와 hindlimb 근육의 차동 제어 식별 dCIN 인구 부분에 따라서 중재 수 있습니다.
[Ca2 +] 개발 효과 나 Petrosal 신경 절 신경 세포에서 ATP에 과도: 광 기록 사용 하 여 약리학 접근
ATP, P2X(2)/P2X(3) 수용 체 채널 단지를 통해 연기 쥐에서 자연적인 자극에 대 한 응답으로 경 동맥 바디 chemoexcitation에서 중요 한 역할을 한다. ATP에 의해 P2X 활성화 세포내 칼슘 ([ca(2+)](i))의에서 변화를 유도 해야 채널 칼슘 투과성 이기 때문에. 여기, 우리 소설 ex vivo 접근 형광 [쥐 petrosal 신경 절에 retrogradely 레이블된 chemoafferent 뉴런의 심사를 허용 하는 Ca(2+)](i) 이미징을 사용 하 여 설명. ATP 유도 [Ca(2+)] (i)-산 후 일 (P) 5-8 및 P19-25 응답 특징 했다. 모든 레이블이 지정 된 셀에서 활발 하 게 증가 하는 동안 [높은 KCl (60mm)만 subpopulation 여 depolarization에 대 한 응답에서 Ca(2+)](i) 전시 [Ca(2+)] (i)-ATP에 대 한 응답. ATP (250-1000 μ) elicited 3 시간 반응 패턴 중 하나: (R1)을 빠르고 느리게 (R2) 중급 (R3). P5-8 R2 predominated 및 그것의 크기는 P2X(1) 길 항 제, nf449에 의해 감쇠 44% (10μM), 그리고 P2X(1)/P2X(3)/P2X(2/3) 길 항 제, TNP ATP (10μM)에 의해 95%. P19-25, r 1과 R3 predominated 및 감쇠 nf449에 의해 15%, 66% TNP ATP에 의해 그리고 suramin (100μM)가 아닌 특정 P2 purinergic 수용 체 적으로 100% 그들의 크기 했다. P2X3 단백질 수준을 크게 변경 하지 않은 반면 petrosal 신경 절에서 P2X(1) 및 P2X(2) 단백질 수준 개발, 감소. 우리는 결론 ATP 유도 P2X 중재 [Ca(2+)] (i)의 프로필-응답 변화 산 후 기간에 변화 수용 체 isoform 식에 해당 합니다. 우리는 이러한 변경 내용은 chemosensitivity의 산 후 완성에 참여할 수 있습니다 추측 하고있다.
