Ektopische Expression Einer Phytase Bei Der Entwicklung Von Sojabohnen-Samen Von Glycine Max an Phosphor Verfügbarkeit Zu Verbessern

Plant Molecular Biology. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15821988

Isolierung Von Zwei Hochaktive Sojabohnen (Glycine Max (L.) Merr.)-Veranstalter Und Ihre Charakterisierung Mit Einem Neues Automatisierten Bild Sammlung Und Analyse-System

Plant Cell Reports. Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17503049

Ein Roman automatisiert Bildersammlung und Analyse-System wurde verwendet, um zwei neue Sojabohnen (Glycine max (L.) Merr.) Projektträger mit dem Blumenkohl-Mosaik-Virus 35S (CaMV35S) vergleichen Projektträger, die als Norm Ausdruck verwendet wurde. Für Ausdruck Vergleiche, verschiedenen Permutationen der Sojabohne Polyubiquitin (Gmubi) Förderer, ein Soja heat Shock Protein 90-wie (GmHSP90L) Projektträger und der CaMV35S-Projektträger waren upstream eines Gens grün fluoreszierendes Protein (Gfp) platziert. DNA-Konstrukte wurden eingeführt, durch Teilchen-Bombardement in excised Keimblätter von Keimen Limabohne (Phaseolus Lunatus L.)-Samen, die in Petrischalen für automatisierte Bilderfassung und Bildanalyse angeordnet waren. Das automatisierte System erlaubt die Überwachung und die Quantifizierung der Gfp-Genexpression in dem gleichen Stück Gewebe im Laufe der Zeit. Die Gmubi-Veranstalter, mit seinen verband intronic Region intakt, zeigte den höchsten Ausdruck, der mehr als fünf Mal als der CaMV35S-Promoter stärker. Wenn eine verband intronic Region war entfernt vom Projektträger Gmubi, GFP-Expression wurde reduziert, aber war noch mehr als zwei Mal größer als mit dem CaMV35S-Projektträger. In Sojabohnen GmHSP90L Initiator war vier Mal stärker als der CaMV35S-Promoter. Abschneiden des Projektträgers GmHSP90L führten schrittweise Rückgang Projektträger Stärke, die angezeigt werden, um Abbau von regulatorischen Elementen entsprechen. Automatisierte Erfassung und Analyse erlaubt die schnelle und effiziente Bewertung der diese neue Förderer.

Quantifizierung Und Erweiterung Der Transienten GFP-Expression Durch Die Co-introduction Von Einem Schalldämpfer Des Zum Schweigen

Transgenic Research. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18548328

Mit Teilchen-Bombardement, wurde ein DNA-Ausdruck-Vektor, der das grün fluoreszierende Protein (GFP) Reporter-gen in Pflanzenzellen eingeführt. Expression des Gens GFP war vorübergehend; was zu Spitze GFP-Expression etwa 24 h Abstieg Post-Einführung und eine rasche danach. Diese bekannten Rückgang der Genexpression hat zuvor pre-integrative DNA-Ereignisse zugeschrieben, die den Verlust der eingeführten DNA oder Zelle Tod beteiligt. Hier zeigen wir, dass Posttranskriptionale gen silencing (PTGS) auch beteiligt ist. Einführung der GFP Ausdruck Vektor allein führte zu eine schnelle Abnahme in vorübergehender Ausdruck nach 30 h. Jedoch wenn GFP zum Ausdruck kam, wie eine translatorische Fusion zu den RNA-silencing-Tumorsuppressor-Protein HCPro aus Tabak etch Potyvirus Transgenexpression verlängerte, die weit über 100 h. Mutant Analysen der HCPro zeigte, dass eine funktionale HCPro Protein für diese Erweiterung der transienten Ausdruck erforderlich war. Verschiedene Löschung und translational Verschmelzung Analysen bestätigt, dass die C-terminalen Region des Proteins für Schutzbeschaltung Aktivität wichtig sei das gesamte Protein für optimale Unterdrückung von Host Unterdrückender erforderlich war. Die vorübergehende Natur der Genexpression während Teilchen-Bombardement erscheint das Ergebnis Induktion von PTGS, die durch das Vorhandensein von einem Schalldämpfer des Unterdrückender begrenzt werden können. Die RNA silencing Tumorsuppressor-Proteine kann Teilchens Bombardierung-vermittelte transient Ausdruck Proben nützlicher für die Bewertung von Faktoren dieser Wirkung-Genexpression nutzen.

Quantitative Bewertung Von Sechs Verschiedenen Viralen Dämpfer Der Zum Schweigen Mit Bildauswertung Von Transienten GFP-Expression

Plant Cell Reports. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19198843

Die Auswirkungen von sechs verschiedenen Pflanzen virale Dämpfer der Gen-silencing wurden verglichen mit einem automatisierten Bild Sammlung und Analyse-System, die für die kontinuierliche Überwachung der GFP-Expression entwickelt. Entstörer in Lima Bean cotyledonary Gewebe 3'-GFP translationale Fusionen oder als Co-introductions mit der GFP-gen auf einem separaten Plasmid eingeführt. Die resultierende vorübergehende Ausdruck-Profile für jedes Suppressor hing davon ab, ob die Suppressor eingeführt als eine Fusion oder co-introduced auf separaten Plasmide wurden. Als Co-introductions, die silencing Entstörer HCPro (aus Tabak etch Virus) auf p19 (aus Tomaten buschigen Stunt Virus), Gammab (aus Gerste Streifen-Mosaik-Virus) und p21 (aus Zuckerrüben Gelbtöne Virus) führte zu einem fast doppelten Anstieg GFP Ausdruck Ausgangsniveaus, gefolgt von einem raschen Rückgang. Im Gegensatz dazu führte zu Verschmelzungen von HCPro, p19 und Gammab am 3'-Ende der GFP etwas niedriger, aber längeren GFP-Expression. Verglichen mit den Co-introductions, gab alle GFP::Suppressor translationale Fusionen reduzierte GFP-Fluoreszenz-Ebenen, vorschlagen Einmischung des Partners Verschmelzung mit GFP-Fluoreszenz. Unabhängig von der Konfiguration führte Einführungen der silencing Entstörer AL2 (aus Tomaten golden Mosaic Virus) und 126-kDa-Protein (aus Tabak-Mosaik-Virus) sehr geringe GFP-Fluoreszenz. Dies ist der erste Bericht, der die Auswirkungen einer großen Anzahl von viralen Dämpfer der zum Schweigen auf Transienten Transgenexpression mit translationale Fusionen und Co-introductions direkt vergleicht.