Translate this page to:
Spanish
In JoVE (1)
Other Publications (4)
Automatic Translation
This translation into Spanish was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Joseph M. Chiera in JoVE
JoVE General
Robótica y Análisis de Imagen Dinámica de Estudios de la expresión génica en los tejidos vegetales
1Department of Horticulture and Crop Science, The Ohio State University, 2Department of Plant Pathology, North Carolina State University
Se presenta un método para la introducción, el seguimiento y el análisis cuantitativo de la expresión de GFP en las células vegetales. Este método utiliza un sistema diseñado a la robótica para la colección de imágenes semi-permanente de un gran número de muestras, con el tiempo. También demostrar el uso de ImageJ e ImageReady para el análisis de series de imágenes.
Other articles by Joseph M. Chiera on PubMed
La Expresión Ectópica De Una Fitasa De Soja En El Desarrollo De Semillas De Glycine Max Para Mejorar La Disponibilidad De Fósforo
Un enfoque transgénico se utiliza para modificar la semilla de soja contenido en fitato expresando un gen de la fitasa de soja (GmPhy) durante el desarrollo de la semilla para degradar la acumulación de ácido fítico (IP6). Un vector de expresión que contiene la fitasa de soja ADNc controlada por la semilla específica beta-conglicinina promotor (alfa'-subunidad) se utilizó para transformar cultivos embriogénicos de soja. Las plantas de cuatro líneas transgénicas independientes se analizaron para la integración del transgén y la semilla IP6 niveles. La reducción en los niveles en IP6 semillas transgénicas en comparación con la soja "Jack control varió desde 12,6 hasta 24,8, determinado por HPLC. Una copia de baja transformante se propagó a la generación de T4 y se examina con más detalle para la expresión de la fitasa y la actividad enzimática durante el desarrollo de la semilla. La expresión de mRNA y la actividad fitasa fitasa aumentó durante el desarrollo de semillas, de acuerdo con el uso de un promotor específico del embrión. Expresión de fitasa ectópico durante el desarrollo de semillas ofrece potencial como una estrategia efectiva para reducir el contenido de fitatos en las semillas de soja.
El Aislamiento De Dos Cultivares De Soya De Alta Potencia (Glycine Max (L.) Merr.) Los Promotores Y Su Caracterización Mediante Una Nueva Colección De Imágenes Automático Y Sistema De Análisis
Una colección de imágenes automatizado y novedoso sistema de análisis se utiliza para comparar dos soja nueva (Glycine max (L.) Merr.) Promotores con el virus del mosaico de la coliflor 35S (CaMV35S) promotor, que se usó como un estándar expresión. Para las comparaciones de expresión, varias permutaciones de una soja poliubiquitina (Gmubi), el promotor, un calor de soja proteínas de choque de 90 como (GmHSP90L) y el promotor CaMV35S se colocaron arriba de una proteína verde fluorescente (GFP) de genes. Construcciones de ADN fueron introducidas a través de bombardeo de partículas en los cotiledones extirpados de la germinación de plantas de frijol (Phaseolus lunatus L.), que fueron colocados en placas de Petri para la captura automática de imágenes y análisis de imágenes. El sistema automatizado permite el seguimiento y la cuantificación de la expresión del gen GFP en la misma pieza de tejido en el tiempo. El promotor Gmubi, con su región intrónica intacta, mostró la mayor expresión que era más de cinco veces más fuerte que el promotor CaMV35S. Cuando una región intrónica se eliminó a partir del promotor Gmubi, la expresión de GFP se redujo, pero era todavía más de dos veces mayor que con el promotor CaMV35S. El promotor de soja de longitud completa GmHSP90L era cuatro veces más fuerte que el promotor CaMV35S. El truncamiento del promotor GmHSP90L tradujo en una reducción gradual en la fuerza promotora, que parecen corresponder a la eliminación de elementos reguladores. Captura de imágenes y análisis automatizado permite la evaluación rápida y eficiente de estos nuevos promotores.
La Cuantificación Y La Extensión De Buenas Prácticas Agrarias Expresión Transitoria Por La Co-creación De Un Supresor De Silenciamiento
Uso de bombardeo de partículas, un vector de expresión de ADN que contiene la proteína verde fluorescente (GFP) de genes reportero se introdujo en las células vegetales. La expresión del gen GFP fue transitoria, dando como resultado la expresión de GFP pico de alrededor de 24 horas después de la introducción y una rápida disminución a partir de entonces. Esta disminución bien conocidos en la expresión génica ha sido previamente atribuidos a los eventos de ADN de pre-integradores que participan la pérdida de ADN introducido o la muerte celular. Aquí, mostramos que el silenciamiento post-transcripcional de genes (PTGS) también está involucrado. La introducción de un vector de expresión de GFP sola resultó en un rápido descenso en la expresión transitoria después de 30 horas. Sin embargo, si las buenas prácticas agrarias se expresó como una fusión de traducción a la HCPro silenciamiento de ARN proteína supresora del potyvirus del grabado del tabaco, expresión de los transgenes se extendió a más de 100 h. Los análisis de mutantes HCPro mostró que una proteína funcional HCPro se requiere para esta extensión de la expresión transitoria. Varios supresión y análisis de traslación de fusión confirmó que la región C-terminal de la proteína era importante para la actividad supresora y la proteína entera fue requerido para supresión óptima de silenciamiento huésped. La naturaleza transitoria de la expresión génica durante el bombardeo de partículas parece resultar de la inducción de PTGS, que puede ser mitigado por la presencia de un supresor de silenciamiento. El uso de silenciamiento de ARN proteínas supresoras puede hacer de partículas mediada por bombardeo-ensayos de expresión transitoria más útil para evaluar los factores que la expresión de genes efecto.
Evaluación Cuantitativa De Los Seis Diferentes Supresores Virales De Silenciamiento Mediante Análisis De Imágenes De La Expresión Transitoria De GFP
Los efectos supresores de seis plantas diferentes virales de silenciamiento de los genes se compararon mediante una colección de imágenes automático y sistema de análisis desarrollado para la vigilancia continua de la expresión de GFP. Supresores se introdujeron en lima tejidos de frijol cotiledonares ya sea como 3'-GFP fusiones traduccionales o como co-introducciones con el gen GFP en un plásmido separado. Los perfiles resultantes de expresión transitoria para cada supresor dependía de si el supresor se introdujo como una fusión o co-introducido en plásmidos separados. Como co-introducciones, el silenciamiento de los supresores de HCPro (a partir de virus del grabado del tabaco), p19 (del virus del enanismo arbustivo del tomate), gammab (del virus del mosaico de cebada de banda) y p21 (a partir de remolacha virus amarillos) condujo a un aumento de casi el doble en las buenas prácticas agrarias inicial los niveles de expresión, seguido por una rápida disminución. En contraste, fusiones de HCPro, p19, y gammab al extremo 3 'de GFP como resultado la expresión de GFP ligeramente menor, pero más prolongado. En comparación con los compañeros de las presentaciones, todas las buenas prácticas agrarias :: supresor de fusiones traduccionales dio redujo los niveles de fluorescencia de GFP, lo que sugiere la interferencia de la pareja de fusión con la fluorescencia de GFP. Independientemente de la configuración, la introducción de los supresores de silenciamiento AL2 (del virus del mosaico dorado del tomate) y 126-kDa (a partir de virus del mosaico del tabaco) como resultado de la fluorescencia de GFP muy bajo. Este es el primer informe que compara directamente los efectos de un gran número de supresores virales de silenciar en la expresión del transgén transitoria utilizando ambas fusiones traduccionales y co introducciones.
