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Un In Vitro Test di Irritazione (SIT) con l'epidermide umana ricostituita epidermica (RHE) Modello
In questo video, dimostriamo il test di irritazione cutanea EpiDerm (EpiDerm SIT) sviluppato e validato per
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Modello Di Tessuto Umano Vaginale Esocervicali Organotypic Per Gli Studi Di Irritazione Di Spermicidi, Microbicidi E Prodotti Per La Cura Femminile
Un modello di tessuto tridimensionale organotypic vaginale-esocervicali (VEC) è stato sviluppato per testare l'irritazione di spermicidi per uso topico, microbicidi e prodotti per la cura vaginale. Il modello di tessuti in vitro è stato ricostruito utilizzando normali cellule epiteliali VEC ed è ben stratificato, contenenti soprabasale basale, differenziato, cellule intermedie e superficiali strati di tessuto simile a in vivo. Gli strati di cellule intermedie e superficiali contengono glicogeno, e l'espressione di citocheratine 13 e 14 del tessuto anche parallela a quella del tessuto nativo. L'analisi di redditività MTT e valutazione istologica sono stati utilizzati per testare inter-lot e intra-sacco riproducibilità. Il coefficiente medio intra-sacco MTT di variazione (CV) era inferiore al 10% e il tempo necessario per ridurre la vitalità dei tessuti del 50% (ET-50) a seguito di applicazione di 1% Triton X-100 media 1.25+/-0.24h (n = 23) al termine del periodo di cultura di 11 giorni e 1.30 h + 0,19 per i tessuti stessi memorizzati durante la notte a 4 gradi C su gel di agarosio. L'utilità del modello VEC per studi sull'irritazione è stato esaminato dai test disponibili in commercio prodotti utilizzando il saggio MTT e valutazione istologica. I valori medi di 50 ET variavano tra 1,8 e 2,7 h per lavaggi femminile, 3.9-6,7 h per gli spermicidi, 6,8-18 h per creme anti-prurite, e > h 18 per lavande, lubrificanti e creme anti-fungine. Studi di citochine rilasciate da culture VEC dopo applicazione del prodotto hanno dimostrato che elevate concentrazioni di IL-1alpha e IL-1beta sono state associate con la tossicità dei materiali di prova. In conclusione, il modello di tessuto VEC è un mezzo altamente riproducibile, non animale per valutare l'irritazione di contraccettivi, microbicidi e prodotti per la cura vaginale.
Modelli Di Tessuto Umano Orale Organotypic Per Studi Tossicologici
I modelli tridimensionali dell'epitelio orale umano sono stati sviluppati per testare l'irritazione dei prodotti di igiene orale e per fornire sistemi per lo studio della patologia della cavità orale. I modelli di tessuti in vitro, coltivati utilizzando normali cellule epiteliali orali e siero gratis medium, adottano un fenotipo gengivale o buccale. Il tessuto buccale (designato ORL-200) è di 8-12 strati cellulari spessi e non-cornified; il tessuto gengivale (designato GIN-100) è 9-13 strati spessi e cornified alla superficie apicale. I tessuti esprimono citocheratine 13 e 14 simili ai loro corrispondenti tessuti orali nativi. L'analisi di redditività MTT è stato utilizzato per valutare la riproducibilità inter-lot e intra-lotto. Il coefficiente medio intra-sacco MTT di variazione (CV) era inferiore al 10% per entrambi i tessuti e il tempo necessario per ridurre la vitalità dei tessuti del 50% (ET-50) a seguito di applicazione di 1% Triton X 100 media 1.02+/-0.33 h (n = 26) e 7.97+/-0.80 h (n = 14) per i tessuti buccali e gengivali, rispettivamente. L'utilità del tessuto buccale per studi sull'irritazione è stato esaminato dal test prototipo dentifricio formulazioni e prodotti commercialmente disponibili tra cui colluttori, dentifrici e detergenti per via orale. Uso della MTT ET-50 test e cytokine release chiaramente differenziato tra i prodotti per la cura orale e le formulazioni. In conclusione, i modelli di tessuti orali rappresentano un mezzo altamente riproducibile, non animale a schermo il potenziale di irritazione di recente sviluppato cura del cavo orale e dovrebbero essere utili per studiare l'immunità innata, biologia e patologia della mucosa orale.
Test Di Irritazione Della Pelle in Vitro: Migliorare La Sensibilità Del Protocollo Di Test Di Irritazione Della Pelle EpiDerm
Un test di irritazione cutanea (SIT) utilizzando un protocollo comune per due in vitro ricostruito epidermici (RhE) modelli umani, EPISKIN ed EpiDerm, è stato sviluppato, ottimizzato e valutato come una sostituzione per il test di irritazione della pelle coniglio in vivo in uno studio di validazione ECVAM-sponsorizzato. Nel 2007, entrambi i modelli RhE erano riconosciuti da un panel indipendente di peer-review e Comitato consultivo scientifico ECVAM (ESAC) come convalidato per l'uso con il protocollo comune SIT. L'EPISKIN SIT è stato approvato come una sostituzione completa del test in vivo, coniglio. Poiché l'EpiDerm SIT ha dimostrato di essere meno sensibile il test in vivo e l'EPISKIN SIT, la prova è stata riconosciuta come componente di una strategia di test a più livelli, in cui sono accettati risultati positivi e risultati negativi richiedono ulteriore conferma convalidata. ESAC, nella sua dichiarazione di aprile 2007, consigliato anche aumentando la sensibilità di sedersi il EpiDerm, al fine di ottenere la piena accettazione. Analisi dei dati EpiDerm ed EPISKIN dallo studio di convalida ECVAM ha indicato che la bassa sensibilità dell'EpiDerm SIT potrebbe essere legata alle proprietà barriera più robusta del modello EpiDerm. Questa ipotesi è stata anche in linea con i risultati pubblicati in precedenza. Per superare la relativamente bassa sensibilità del protocollo EpiDerm come un ostacolo all'accettazione piena regolamentazione, una modifica delle condizioni di esposizione è stato introdotto nel protocollo per ottenere il migliore accordo con i dati in vivo, coniglio. Nel protocollo modificato EpiDerm SIT, il tempo di esposizione chimica di prova è stato aumentato da 15 minuti a 60 minuti. Inoltre, parte dell'esposizione è stata eseguita a 37 gradi C. Quando l'endpoint del dosaggio di vitalità 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromuro (MTT) è stato utilizzato per la classificazione, un significativo aumento di sensibilità è stato ottenuto (86.1%), pur mantenendo l'elevata specificità del metodo (76,3%). Con la modifica per il sistema di classificazione UE, che ora utilizza superiore cut-off per la classificazione delle sostanze irritanti, la sensibilità del modificato EpiDerm SIT aumentato a oltre il 90%. La misurazione dell'interleuchina (IL)-1alpha rilascio non ha ulteriormente contribuito al miglioramento del metodo. I risultati dimostrano che il protocollo modificato EpiDerm SIT ha la necessaria sensibilità e specificità per essere accettato come metodo stand-alone per la sostituzione completa del coniglio in vivo di prova.
Sviluppo Del Test Di Irritazione Degli Occhi EpiOcular(TM) Per Identificazione Del Pericolo E L'etichettatura Dell'occhio Irritanti Chimici in Risposta Ai Requisiti Della Direttiva Cosmetici Comunitaria E Normativa REACH
Recentemente implementato settimo emendamento alla direttiva UE cosmetici e la legislazione EU REACH hanno accresciuta la necessità di metodi in vitro test oculare. Per rispondere a questa esigenza, il test di irritazione degli occhi EpiOcular(TM) (EpiOcular-IET), che utilizza il normale (non trasformato) cell-based EpiOcular tessuto modello umano, è stato sviluppato. Il modello di previsione EpiOcular-EIT è basato su un set di formazione iniziale di 39 sostanze liquide e 21 prova solida e utilizza un periodo di esposizione singola e un cut-off singolo nella vitalità dei tessuti, come determinato mediante il saggio MTT. Una sostanza chimica è classificata come irritante (GHS categoria 1 o 2), se la vitalità del tessuto è ≤ 60% e come un non-irritante (GHS non classificati), se la redditività è > 60%. EpiOcular-EIT risultati per set di training, insieme ai risultati per un 52 sostanze supplementari, che includeva una serie di alcoli, idrocarburi, ammine, esteri e chetoni, discriminate tra oculari irritanti e non irritanti 98,1% sensibilità, specificità 72,9% e 84,8% di accuratezza. Per garantire la redditività a lungo termine commerciale del dosaggio, tessuti di EpiOcular prodotti utilizzando tre inserti di cultura alternativa delle cellule sono stati valutati in EpiOcular-IET con 94 prodotti chimici. I risultati di analisi ottengono con l'inserimento iniziale e gli tre inserti alternativi erano molto simili, a giudicare dai coefficienti di correlazione (r²) che variava da 0,82 a 0,96. EpiOcular-IET era pre-validated nel 2007/2008 ed è attualmente coinvolta in uno studio di convalida formale, multi-laboratory sponsorizzato da European Cosmetics Association (COLIPA) sotto l'egida del centro europeo per la convalida dei metodi alternativi (ECVAM). EpiOcular-IET, insieme alla lunga storia di EpiOcular di riproducibilità e di provata utilità per il test di ultra-mildness, fare EpiOcular un modello utile per affrontare l'attuale legislazione correlati all'uso di animali nella sperimentazione delle potenziali irritanti oculari.
