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Articles by Judy Wong in JoVE

 JoVE General

Mess-Zellzyklus-Progression Kinetics mit Metabolische Markierung und Durchflusszytometrie


JoVE 4045 5/22/2012

Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of British Columbia

Tracking-feine Veränderungen in der Progression und die Kinetik der Zellzyklusstadien kann durch Verwendung einer Kombination von metabolische Markierung von Nukleinsäuren mit BrdU und genomischer Gesamt-DNA-Färbung über Propidiumiodid durchgeführt werden. Dieses Verfahren vermeidet die Notwendigkeit von chemischen Synchronisation der Rad-Zellen, wodurch die Einführung von nicht-spezifischen DNA-Schäden, die sich wiederum auf den Ablauf des Zellzyklus.

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Elektrophysiologische Eigenschaften Des Heteromeren TRPV4-C1-Kanäle

Zuvor berichteten wir, dass TRPV4 und TRPC1 Form heteromeren TRPV4-C1 Kanäle [12] co-assemble können. In der vorliegenden Studie charakterisiert wir einige grundlegenden elektrophysiologischen Eigenschaften des heteromeren TRPV4-C1-Kanäle. 4Α-Phorbol 12,13-Didecanoate (4α-PDD, ein TRPV4-Agonist) aktiviert einen einzigen Kanal aktuelle in HEK293 Zellen, co-expressing, TRPV4 und TRPC1. Die Aktivität der Kanäle wurde durch ein TRPC1-Zielgruppenadressierung blockierende Antikörper T1E3 aufgehoben. Leitwert der Kanäle war ~ 95pS für nach außen Ströme und ~ 83pS für innere Strömungen. Die Kanäle mit ähnlichen Leitwert verzeichneten auch in Zellen, die TRPV4-C1 Concatamers, in denen montierten Kanäle voraussichtlich waren meist 2V4:2 C 1 zum Ausdruck zu bringen. Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer (FRET) Experimente bestätigt die Bildung eines Proteins Komplex mit 2V4:2 C 1 Stöchiometrie zwar vorgeschlagen, eine Unlikeliness der 3V4:1 C 1 oder 1V4:3 C 1 Stöchiometrie. Monovalenten kation Durchlässigkeit Profile wurden zwischen heteromeren TRPV4-C1 und Homomeric TRPV4 Kanäle verglichen. Für heteromeren TRPV4-C1-Kanäle fand ihre Permeation-Profil passen zu Eisenman Sequenz VI, bezeichnend für ein starkes Feld-Stärke-kation, Website, verbindlich, während für Homomeric TRPV4 Kanäle, ihr Profil Permeation Eisenman Sequenz IV für ein schwaches Feld-Stärke-Bindungsstelle entsprach. Im Vergleich zu Homomeric TRPV4 Kanäle, heteromeren TRPV4-C1-Kanäle waren etwas durchlässiger zu Ca2 + und eine geringere Empfindlichkeit gegenüber extrazelluläre Ca2 + Hemmung. Zusammenfassend lässt sich sagen fanden wir, dass ich bei TRPV4 und TRPC1 co-expressed in HEK293 Zellen waren die Montageart Gregorianische 2V4:2 C 1. Die heteromeren TRPV4-C1-Kanäle zeigen verschiedene elektrophysiologische Eigenschaften von denen des Homomeric TRPV4 Kanäle.

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