Determinação de estruturas moleculares de glicoproteínas do envelope HIV usando Cryo-Electron Tomografia e Média Sub-tomogram Automated

JoVE 2770 12/01/2011

Joel R. Meyerson^1,2, Tommi A. White¹, Donald Bliss³, Amy Moran³, Alberto Bartesaghi¹, Mario J. Borgnia¹, M. Jason V. de la Cruz¹, David Schauder¹, Lisa M. Hartnell¹, Rachna Nandwani^1,4, Moez Dawood⁵, Brianna Kim⁶, Jun Hong Kim⁷, John Sununu⁸, Lisa Yang⁹, Siddhant Bhatia¹⁰, Carolyn Subramaniam¹, Darrell E. Hurt¹¹, Laurent Gaudreault¹², Sriram Subramaniam¹

¹Laboratory of Cell Biology, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health, ²The Medical Research Council Mitochondrial Biology Unit, University of Cambridge, ³National Library of Medicine, National Institutes of Health, ⁴Massachusetts Institute of Technology, ⁵William Fremd High School, ⁶University of Virginia, ⁷Duke University, ⁸Yale University, ⁹University of Notre Dame, ¹⁰Washington University in St. Louis, ¹¹Bioinformatics and Computational Biosciences Branch, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, ¹²Thomas Jefferson High School for Science and Technology

O protocolo descreve uma abordagem de alto rendimento para determinação de estruturas de proteínas de membrana usando tomografia crio-eletrônica e processamento de imagens 3D. Abrange os detalhes da preparação da amostra, coleta de dados, processamento e interpretação dos dados, e conclui com a produção de um alvo representante para a abordagem, o HIV-1 glicoproteína do envelope. Estes procedimentos computacionais são projetados de uma forma que permite aos pesquisadores e estudantes para trabalhar remotamente e contribuir para processamento de dados e análise estrutural.