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라이브 해부 Drosophila 태아 : 항체 스테 이닝에 의해 돌연변이 컬렉션을 검사 늘씬한 방법


JoVE 1647 12/29/2009

Division of Biology, California Institute of Technology

우리는 특정 genotypes의 Drosophila의 배아의 "등심"준비 창출을위한 능률적인 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 유전자 화면의 다양한 효율적인 실행을 허용합니다. 또한 후반 배아의 구조 우수 시각화 수 있습니다.

Other articles by Kai Zinn on PubMed

조합 RNAi: 초파리의 유전자 가족의 기능을 평가 하기 위한 방법

유전자 가족의 개별 구성원이 종종 부분적으로 중복 기능 신 시스템 개발 하는 동안 만들고 있다 기존의 유전자 분석 문제가. 여기 여러 유전자가 야생-타입 초파리 배아로 더블-좌초 Rnas의 주입에 의해 함께 입을 수 보여주는 실험 검토 합니다. 염료 라벨 삽입 된 배아에서 단일 neuroblasts,으로 multigene 개별 CNS 축 삭 경로에 침묵의 효과 검사 이제 수 있습니다.

로터리 2 트랜스에서 신호에 의해 감각 신경 세포의 마이그레이션을 규제 한다

로터리 (로 보) 수용 체와 그들의 리간드 슬릿은 축 삭 지침과 세포 이동의 중요 한 레 귤 레이 터. 초파리 배아 감각 기관을 개발 신경 마이그레이션 패러다임을 제공 합니다 어디에 슬릿과로 보의 in vivo 역할은 유전학으로 분석 수 있습니다.

수지상 바둑판식 배열; 유전학에서 새로운 통찰력입니다

신경 (고 스 및 Bargmann) 및 셀 (Emoto 그 외 여러분)의 현재 문제에서 두 개의 논문 식별 보존된 키, 색소폰-1/Trc, Trc 활동에 필요한 큰 단백질, 수지상 분기와 C. elegans와 초파리에 기와의 컨트롤의 색소폰-2/프라이, 필수 요소. Trc 돌연변이의 타일링과 소성 분기 고기 독립적으로 생성 될 듯하다. 따라서,이 니 기와와 특별히 관련 된 첫 번째 신호 단백질 이다.

변환 진압 Pumilio Presynaptic 형태학 및 번역 요소 EIF 4E 컨트롤 Postsynaptic 축적을 조절

Drosophila Pumilio (Pum) 단백질 컨트롤 후부 배아 개발 패턴화 하 여 변환 억압. 여기, 우리 말은 시 냅 스 성장 및 신경 근육 학 교차로 (NMJ)에서 소성의 중요 한 중재자 보여줍니다. Pum 3 탈피 애벌레에 NMJ postsynaptic 쪽을 지역화와 애벌레 뉴런에도 표시 됩니다. 신경 말을 시 냅 스 성장을 조절 합니다. 그것의 부재에서 NMJ boutons는 큰 고 번호 Pum overexpression bouton 증가 하는 동안에 적은 번호과 bouton 크기를 줄입니다. Postsynaptic Pum 부정적인 표현의 번역 요소 eIF-4e는 NMJ에서 규제 하 고 선택적으로 하는 3'UTR eIF 4E Mrna의 Pum 바인딩합니다. GluRIIa glutamate 수용 체 pum 돌연변이에 upregulated입니다. 이러한 결과 유전 epistasis 연구와 함께 postsynaptic Pum eIF 4E 식의 직접적인 제어를 통해 시 냅 스 기능을 변환한 것이 좋습니다.

Drosophila Spastin 시 냅 스 Microtubule 네트워크 규제 및 일반 모터 기능에 대 한 필요 합니다

인간의 상 염색체 지배적인 유전 경련 적인 하반신 (광고-HSP)의 가장 일반적인 형태는 spg4에 돌연변이 의해 발생 (spastin) 유전자는 AAA ATPase microtubule severing 단백질 Katanin 시퀀스에 관련 된 밀접 하 게 인코딩하는. 광고 HSP 환자 척수에서 가장 긴 축 삭의 원심 영역의 변성을 전시 한다. 기능 손실 돌연변이 초파리 spastin 유전자에 애벌레 신경 근육 학 교차로 (NMJ) 고기를 생산. NMJ 시 냅 스 boutons spastin 돌연변이에 더 다양 하 고 야생 형 및 송신기 릴리스 클러스터 보다 더 많은 장애인입니다. spastin null 성인 파리는 심한 운동 결함. 그들은 비행 하지 않거나 점프, 그들은 상승, 그리고 그들은 짧은 수명을. spastin hypomorphs는 약한 행동 고기. Spastin의 overexpression 근육 microtubule 네트워크를 지웁니다. 이 함수 이득 형 가설 Spastin microtubule severing 활동이 및 spastin 기능 손실 돌연변이 microtubules 수가 증가 해야 의미와 일치 하는. 그러나 놀랍게도,, 반대 형 관찰: spastin null 돌연변이는 원심의 boutons에서 특히 NMJ 내 적은 microtubule 번들. Drosophila NMJ은 spastin 돌연변이 관찰 조직된 presynaptic microtubules 감소 척수에서 축 삭 단말기의 유지 보수에 인간 Spastin의 역할에 대 한 이해에 관련 된 수 있습니다 그래서 포유류 척수에 흥분 성의 냅 유사한 glutamatergic 냅.

Heparan 황산 Proteoglycan Syndecan Drosophila LAR 수용 체 티로신 인산 가수분해 효소에 대 한 Vivo에서 리간드 이다

수용 체 티로신 가수분해 (RPTPs)는 축 삭 지도 초파리에 synaptogenesis에 대 한 필수적입니다. 각 지침 결정에 의해 배아 모터 축 삭 파생물 동안 그들의 근육 대상 5 신경 Rptps의 특정 하위 집합을 필요로 합니다. 그러나 이러한 요구 사항은 기본 논리은 아직 불분명, 부분적으로 성장 원뿔 선택 지점에서 Rptps에 의해 인식 ligands 발견 되지 때문에. RPTPs 일반적으로 여전히 "고아 수용 체" 때문에 그들의 생체 조건 ligands 알려져 있습니다 그들은 발견 되었습니다 상호 작용 하는 많은 다른 단백질 생체 외에서, 하는 동안.

Dscam와 신경 특이 사항입니다

과일 파리 초파리 유전자 세포 접착 인코딩에서 Dscam 생성 또는 분자 배선 mRNAs 수천 개의 다른 단백질 isoforms 변환할 수 있습니다. 3 최근 논문 상호 작용 Dscam homophilic isoform 특정 원인이 서로 (휴즈 외., 2007;을 피하기 위해 같은 신경 세포의 수지상 지점 표시 메 밀 국수 외., 2007; 매튜 스 외., 2007)입니다. 이 프로세스를 통해 말 초 신 경계에서 dendrites의 올바른 패턴화 합니다.

비 세포 신호 다소 곳 Gastrulation 초파리의 교 Morphogenesis 및 축 삭 지침을 통제 한다

초파리에 gastrulation, 하는 동안 복 부 셀 모양, 복 부 명씩 (VF)를 만드는 동기 꼭대기 수축 진행 변경. 이 프로세스는 돌연변이 배아 부족 상 비 단백질 인코딩하는 접힌된 gastrulation (안개) 유전자의 zygotic 함수에에서 영향을. Invaginating VF 셀 cytoskeletal 변화를 유도 하는 필수적인 autocrine 신호입니다. 여기 우리가 안개는 신 시스템 개발에 필요한 또한 보여줍니다. 안개 종 명과 중앙 신경 시스템 (CNS)에 의해 표현 되 고 명과의 식을 감소 하면 프로세스 확장 및 축 삭 ensheathment의 결함. 교 안개 overexpression 비 조직된 교 격자를 생성합니다. 안개는 중추 신경에 있는 함수 고유한 집합이 있습니다. 우리의 데이터 감소 또는 이러한 신경에 있는 안개 overexpression 축 삭 지도 고기 생산을 보여준다. 흥미롭게도,이 고기는 밀접 하 게 그 수용 체 티로신 인산 가수분해 효소 ptp52f의 변경 된 표현과 배아에서 본 유사 합니다. 우리 epistasis 안개와 PTP52F, 간의 유전적 관계를 정의 하는 실험을 실시 하 고 결과 PTP52F 안개 신호 중추 신경에 있는 통로의 다운스트림 구성 요소는 것이 좋습니다. 우리는 또한 Ptp52F 돌연변이 안개 돌연변이에서 본 것과 같은 초기 VF 고기 발견.

중복 및 축 삭 지침에 보상: 초파리 Ptp10D/Ptp4E 수용 체 티로신 인산 가수분해 효소 아의 유전자 분석

초파리는 5 신경 세포에서 주로 표현 되는 6 개의 수용 체 단백질 티로신 가수분해 (RPTPs) 있다. 5 모든 돌연변이 단독으로 또는 조합 축 삭 지도를 영향을 줍니다. 둘 이상의 Rptps의 특정 조합이 됩니다 제거 하는 경우에 매우 침투 중앙 신경 시스템 (CNS) 그리고 모터 축 삭 지침 변경 일반적으로 관찰 했다. 여기, 우리는 여섯 번째 RPTP, Ptp4E, 광범위 하 게 표현 하는 검사.

수용 체 티로신 가수분해 출생 순서 Axonal Fasciculation 및 초파리 버섯 신체의 개발 하는 동안 중간 선 반발 규제

수용 체 티로신 가수분해 (RPTPs)는 초파리 배아 개발 하는 동안 축 삭 지도 필요 합니다. 여기에 우리가 애벌레 버섯 몸 (MB)의 개발 하는 동안 4 개의 Rptps의 역할 조사. MB 뉴런 돌출부와 peduncle로 알려진 병렬 책자에 축 삭을 확장 합니다. 신경 출생의 시간적 순서는이 일대에서 축 삭의 조직에 반영 됩니다. 오래 된 신경 세포의 바깥 레이어 작성 하는 동안 코어 파이버로 알려진 최 연소 신경 세포의 축 삭 센터 단일 번들 내에서 확장. Rptps는 선택적으로 MB의 핵심 섬유에 표시 됩니다. Ptp10D 및 Ptp69D 단일 코어 번들으로 젊은 축 삭의 분리를 조절 합니다. Ptp69D 신호는 peduncle 넘어 axonal 확장 필요 하다. Lar와 ptp69d는 돌출부를 만드는 axonal 분기 의사 결정에 필요한. 내측 두 엽 축 삭을 확장 하 여 뇌 중간의 회피 Lar을 통해 신호를 포함 한다.

세포 표면 분자의 화면 시 냅 스 대상 선택의 주요 중재자로 신 풍부한 반복 단백질을 식별합니다

초파리 배아와 애벌레, 확인 된 모터 신경 세포 수가 적은 매우 진부한 패턴에 신체의 벽 근육 innervate. 유전 스크린 axon 지침과 synaptogenesis에 필요한이 시스템에는 많은 단백질 확인, 비록 약간은 알려진 메커니즘에 대 한 어떤 근육 섬유에 의해 특정 모터 축 삭의 대상으로 정의 됩니다. 잠재적인 대상 레이블을 식별 하 우리는 모든 근육 섬유에 누구의 overexpression 대상 지정 오류 수 있도록 모터 축 삭 하면 그에 대 한 검색 410 유전자 세포 표면 및 비 단백질 인코딩 상영. 30 같은 유전자 발견 했다, 그리고 이들의 숫자 인코딩 단백질 단백질 상호 작용 모듈을 신 풍부한 반복 (LRR) 시퀀스를 포함 하는 세포 외 도메인 누구의 큰 유전자 가족의 일원 했다. 12 근육에 유전자 발현 조작 하 여 우리 4 LRR 단백질이이 근육 RP5 모터 신경에 대 한 적절 한 시 냅 스 대상 선정에 참여 했다.

세포 표면 수용 체 타탄 수용 체 티로신 인산 가수분해 효소 Ptp52f에 대 한 잠재적인 Vivo에서 기판 이다

수용 체에 연결 된 단백질 티로신 가수분해 (RPTPs) 축 삭 지도 초파리에 synaptogenesis의 필수 레 귤 레이 터는 하지만 신호 경로 작동 하는 제대로 정의 된. 식별 세포 표면 수용 체 타탄 (Trn) 후보 기판으로 한 신경 RPTP Ptp52F "미끼"로 ptp52f의 기판 트래핑 돌연변이와 수정된 2 하이브리드 화면을 사용 하 여 Trn phosphorylates v Src 키도 표현 하는 경우 Trn transfected 초파리 S2 세포에서 Ptp52F 기판 트래핑 돌연변이 바인딩할 수 있습니다. 야생-타입 Ptp52F coexpression dephosphorylation v Src phosphorylated Trn의 원인. 생체 외에서 상호 작용의 특이성을 검사할 우리 incubated Ptp52F glutathione S-전이 (GST) 퓨전 단백질 S2 셀 lysates pervanadate 처리와 함께. 야생-타입 Ptp52F dephosphorylated Trn, 뿐만 아니라 다른 대부분의 밴드는 lysate에. Gst가 "풀 다운" 실험 시연 Ptp52F 기판 트래핑 돌연변이 인 Trn. 와일드 타입 Ptp52F 기판 dephosphorylation 후 유지 되는 안정적인 Ptp52F Trn 복잡 한 형성 제안 dephosphorylated Trn 다운을 독점적으로 바인딩합니다. Trn과 Ptp52F vivo에서 동일한 경로의 일부인 여부를 평가, 돌연변이 체 배아에 모터 축 삭 지도 검사 하 고. trn과 Ptp52F 돌연변이 SNa 모터 신경에 영향을 미치는 동일한 고기를 생산. 유전자 Ptp52F Trn SNa 모터 뉴런의 신호 조절 제안 복용량 의존 상호 작용을 표시할 수도 있습니다.

적은로 선택 하 여 여행: 초파리 모터 축 삭에 의해 대상 인식 제어 하는 리간드-수용 체 시스템

이 문제의 유전자 & 개발 Siebert 및 동료 (페이지 1052-1062) 초파리 배아의 모터 축 삭 지침과 대상 인식 기능을 제어 하는 리간드-수용 체 시스템을 정의 합니다. 패배 경로 (비트) 및 회피 (측면) 유전자 모터 축 삭 지침의 중요 한 레 귤 레이 터로 알려져 있었다. Siebert와 동료 지금 비트와 측면은 물리적으로 서로 상호 작용 하는 세포 표면 단백질 및 모터 축 색 성장을 콘 비트 표현 측면을 표현 통로의 인식을 통해 그들의 목표 도달을 보여줍니다.

나노 및 Pumilio 변환 Repressors 분기 효과 Presynaptic 터미널 성장과 Postsynaptic Glutamate 수용 체 소 단위 구성에 있다

Pumilio (Pum)은 선택적으로 대상 Mrnas을 바인딩하고 신병 나노 (Nos)는 corepressor로는 변환 진압. 애벌레 신경 근육 학 시스템에서 말 번역 요소 eIF 4e와 glutamate 수용 체 소 단위 GluRIIA 누르는. 여기, 우리가 개, 말, 같은 보여 신경 근육 학 교차로 (NMJ) 및 신경 세포의 시체에서 표현 된다. 그러나 놀랍게도,, Nos Pum 분기 함수는 NMJ의 presynaptic과 postsynaptic 양쪽 모두에 있다. Nos 돌연변이와 nos RNA 간섭 애벌레, NMJ boutons 수 증가 말의 손실 bouton 수 감소 하는 반면. Postsynaptic 편이 Nos Pum 반대 glutamate 수용 체의 소 단위 구성을 조절에 역할. NMJ 활성 영역 GluRIIA 및 GluRIIB 포함 된 수용 체 클러스터와 관련 된. Nos의 손실 downregulation Gluriia의 원인과 GluRIIB 레벨을 증가 시킵니다. 이 발견과 일치, NMJs 부족 postsynaptic Nos electrophysiological 속성 주로 포함 하는 GluRIIB 수용 체를 사용 하는 제안. Nos는 GluRIIA, GluRIIB 수준에 Nos의 효과 적어도 부분적으로 Gluriia와 GluRIIB 사이의 시 냅 스 경쟁의 독립적인 제안 없이 Gluriib를 조절할 수 있습니다. Nos Pum 억압과 nos 및 GluRIIA Mrnas의 3' untranslated 영역을 선택적으로 바인딩 말에 대 한 대상입니다. 말, 개, GluRIIA 중 어느 규정 상호 작용 모델을 제안 하는 우리의 결과 및 Gluriib을 Gluriia와 GluRIIB 냅 사이의 균형에 큰 변화를 증폭 Pum 활동에 작은 변화를 일으킬 수 있습니다.

수용 체 티로신 가수분해 Tracheal 튜브 형상 Egfr 신호의 부정적인 레 귤 레이 션을 통해 제어합니다

정의 된 모양과 크기와 상피 튜브 형성 장기 개발을 위해 필수적 이다. 우리 모두 Drosophila 유형 III 수용 체 티로신 가수분해 (RPTPs) ptp4e의 손실로 인 한 독특한 tracheal tubulogenesis 표현 형을 설명 이며 Ptp10D. Ptp4E 유일한 널리 Drosophila RPTP 표현 6 플라이 유전자 특징을 Rptps의 마지막. 최근에 Ptp4E에서 돌연변이 절연 하 고, 비록 Ptp4E null 돌연변이 감지할 수 없는 고기, 이중 돌연변이 ptp4e와 Ptp10D 부족 표시 합성 치 사 율 해칭 호흡 때문에 발견. 이러한 이중 돌연변이에서 단 세포와 터미널 tracheal 분기 꼭대기 세포 표면 마커를 선택적으로 통합 하는 큰 거품 같은 cysts 개발. 단 세포 지점에 cysts cysts 터미널 분기에 있는 세포질 vacuoles 반면 adherens 접합에 의해 봉인 루멘의 확대는. 낭종의 크기와 수는 활성화 된 Egfr 티로신 키 니 아 tracheal 식으로 증가 하 고 Egfr 수준을 줄임으로써 감소. Ptp10D Egfr transfected 세포에서 복잡 한 형태. Egfr Downregulation는 Rptps에 의해 신호는 관 루멘, 건설에 필요한 세포 외 또는 세포내, 셀 분기 morphogenesis 동안 개조 수술을 하 여. Ptp4E Ptp10D 형 상피 장기 개발에 Rptps에 대 한 필수적인 역할의 첫 번째 증거를 나타냅니다. PTPRJ (DEP-1) Ptp4E/ptp10d의 ortholog hepatocyte 성장 인자 수용 체 티로신 키 니 아 제와 상호 작용 하기 때문에 이러한 연구 결과 기관 개발 및 포유류, 질병에 관련 된 수 있습니다. Murine scc1에 해당 하는 PTPRJ (대 장 암 억제) 진.

비만 차단 초파리에서 신경 세포입니다

포유류, 지방 저장소 수준 leptin 및 인슐린 음식 섭취와 신진 대사를 조절 하는 두뇌 센터에 신호에 의해 전달 됩니다. 신경 활동의 유전자 변형 조작을 사용 하 여 우리는 두 가지 신경 인구 비슷한 기능, c673a Gal4, gal4이 보람 뉴런을 수행 하는 파리에서의 격리 보고서. 이러한 신경 그룹 중 하나를 입을 때 지방 저장 레벨 증가. 이 변화는 음식 섭취 량의 증가 통해 중재와 보람 Gal4 뉴런 침묵 하는 동안 파리 c673a Gal4 침묵에 변경 된 대사 변경 유일한 대사. Hyperactivation 신경 두 그룹의 지방산 합성을 감소 하 고 신진 대사 속도 증가 하 여 지방 점포의 소모를 발생 합니다. 알려진 지방 사용률을 조절 하는 유전자의 표정에 변화를 일으키는 이러한 신경 세포의 활동을 변경 합니다. 우리의 결과 플라이 뇌 지방 저장소 수준을 측정 하 고 음식 섭취 량과 정상 범위 내에서 유지 하기 위해 대사에 변화를 일으킬 수 있다.

지침 수용 체 Axonal 순서에 그들의 장소를 찾으십시오

신경의이 문제에 가쓰와 동료 셀 자율 메커니즘 근 위 및 원심 구획으로 초파리 축 삭을 나누어 보여 줍니다. 축 삭 지침 수용 체 선택적으로 하나의 구획에 지역화. 그것은 포유류 뉴런의 축 삭 초기 세그먼트의 그 같은 속성을가지고 있습니다 제안 구획 경계 근처 확산 장애물이 존재 합니다.

신이 풍부한 막 횡단 단백질 지시 후 각 맵의 개별 Dendrite 대상으로 반복 합니다

후 각 시스템 활용 개별 신경 경로 odorant 정보를 통합 하 고 처리 합니다. 초파리, 처음 주문 후 각 수용 체 뉴런 (ORNs)의 축 삭과 dendrites 약 50 glomeruli에서 2 차 프로젝션 뉴런 (PNs) form 클래스 특정 시 냅 스 연결의. PN dendrite 3 차원 이산 신경 지도에 고유한 glomeruli를 대상으로 기본 메커니즘이 명확 하지 않습니다. 신 풍부한 반복 (LRR) 막 횡단 단백질 Capricious (모자)는 서로 다른 클래스의 PNs. 손실-의-기능 차동 표현 되 고 함수 이득 연구 표시 캡 모자-긍정의 분리 및 개별 사 대상 모자 음수가 PN dendrites 지시를 찾았습니다. 또한, 모자 중재 PN dendrite 타겟팅 presynaptic Orns의 독립과 homophilic 상호 작용을 포함 하지 않았다. 밀접 하 게 관련된 단백질 타탄 모자와 부분적으로 중복 되었습니다. LRR 단백질이 아마 이산 후 각 맵 형성을 지시 하는 조합 세포 표면 코드의 일부입니다.

시 냅 스 Pumilio 기능에 의해 집계 하기 쉬운 도메인의 규제

Pumilio (Pum) 누구의 활동 어셈블리 정렬 된 집계에 의해 규제 있습니다 metazoan 단백질에 대 한 전산 검색에서 초파리 변환 진압 파악. 검색 알고리즘은 패턴을 기반으로 진화 순서 보존 집계 경향이 글루타민/아스파라긴 (Q/N)를 포함 하는 효 모 프리온 단백질에 대 한 관찰-풍부한 도메인 정상적인 아미노산 구성의 기능 도메인에 연결 합니다. 우리 말과 식 효 모에 의해 선 충 류 ortholog PUF 9 집계를 조사 했다. Pum Q/N 풍부한 시퀀스가 포함 된 도메인은 전체 Pum N 말단 및 완전 PUF 9 단백질 지역화 거시적인 집계 (foci) 효 모에 NQ1로 표시 됩니다. NQ1 및 PUF 9 효 모 핀 + 특성 상속 집계 하 여 전송 하는 생성할 수 있습니다. Nq1는 또한 녹말 체 소 체 외에 조립. 초파리, 말 신경 근육 학 접합 (NMJs)에서 postsynaptic 번역을 조절. NQ1 영향을 시 냅 스 말 활동 생체 조건 여부 평가, 우리가 근육에서 그것을 표현. 그것은 부정적인 생 말, 진 복용량 의존 pum 기능 손실 NMJ 고기 생산 규제를 찾았습니다. NQ1 coexpression는 또한 치 사 율 및 NMJ 고기 overexpression 말의 근육에 의해 발생 하지 않습니다. NQ1 Q/N 블록은 이러한 phenotypic 효과 필요 합니다. Nq1에 의해 말의 부정적인 레 귤 레이 션 비활성 집계의 형성에 의해 설명 될 수 있습니다 하지만 우리 NQ1 초파리에서 집계를 보여줄 수 있다. NQ1 수 또한 어떤 Q/N 중재의 상호 작용 Pum 자체 또는 변환 억제에 필요한 공동 인자를 차단 그것은 "지배-부정적" 효과 의해 말을 조절 하 고 있다.

Leucokinin 통로 그 뉴런 초파리에서 식사 크기 조절

총 식품 섭취 량은 식사 크기와 식사 주파수의 함수 및 이러한 매개 변수를 조정할 수 있도록 환경 조건 변화에 안정적인 에너지 균형을 유지 하는 동물. 식사 크기를 조절 하는 생리 적 메커니즘 blowflies에서 공부 하지만 초파리에서 이전에 검사 하지 있다.

트리 글리세라이드의 색채 측정 저장된 지방 콘텐츠 초파리의 정확한 측정을 제공할 수 없습니다

Drosophila melanogaster 지방 스토리지의 규제의 유전 기초 공부에 유용한 모델 시스템으로 최근에 나왔다. 파리에서 저장된 지방 (트리 글리세라이드)의 수준을 평가 하는 데 가장 자주 사용 하는 방법 중 하나는 결합 된 색도계 분석 결과 여러 제조 업체에서 키트로 제공. 이것은 일반적으로 수용 성 단백 복합물에 있는 포유류 혈 청 트리 글리세라이드의 측정에 사용 되는 수성 기반 효소 분석 이다. 이 짧은 통신에서 우리는 결합 된 색도계 분석 결과 키트 초파리에 저장 된 중성 지방 측정 정확 하 게 수 없습니다 보여줍니다. 첫째, 그들은 지방이 저장된 또는 유기 용 매와 파리에서 추출 된 지방에 그런 작곡과 불용 성 triglyceride 혼합물에서 테스트 하면 정확한 수치를 제공 하지. 이 문제 때문에 불용 성 샘플에서 지방 분자에서 글리세롤 머리 그룹에서 효율적으로 쪼개 다 키트에 사용 된 lipase의 무 능력. 둘째, 키트의 측정 된 최종 제품 quinoneimines, 초파리 눈 안료와 같은 파장 범위에서 가시광선을 흡수 하는 있다. 따라서, 짓 눌린된 파리에서 추출 되어 분석 될 때 많은 측정 된 신호는 눈 색소 때문 실제로. 마지막으로, 색채 분석 실험에서 사용 되는 단백 lipases은 지방 비 글 리세 라 이드 쪼개 다. 글 리세 라 이드의 모든 클래스에서 해방 글리세롤 등뼈 분석 결과에서 나머지 반응을 통해 측정 됩니다. 그 결과, 평가 조직 추출 물이 시험 장비를 사용 하는 경우 관찰 된 신호는 실제로 글 리세 라 이드의 모든 종류의 함께 무료 glycerols의 양을 나타냅니다. 이러한 이유로 주의 Drosophila 샘플에 결합 된 색도계 분석 실험의 사용을 통해 얻은 연구 결과 해석 해야 합니다. 우리 또한 여기는 이러한 문제를 모두 제거 파리에 저장 된 중성 지방 측정을 얇은 층 크로마토그래피를 사용 하 여 보여줍니다.

Drosophila 결핍 돌연변이 배아 고기 및 고아 수용 체 Ligands의 체계적인 심사

이 종이 배아 고기, 고아 수용 체 ligands, 및 유전자에 영향을 미치는 단백질 지역화에 대 한 체계적으로 상영 될 수 있는 초파리 삭제 돌연변이 (결함)의 컬렉션을 정의 합니다. 그것은 중앙 신 경계와 신경 근육 학 시스템에서 새로운 축 삭 지도 고기를 공개 하 고 잠재적인 유전자 특정 모터 축 삭 분 지의 지도 하에 조절에 관련 된 수의 정량적 평가 허용 하는 결핍 화면 우리가 실시 결과 보고. 결핍 "키트" 최소 줄 수 있는 게놈을 커버 하는 유전자 매핑을 촉진 하기 위하여 설립 되었습니다. 그러나이 키트 수 없는 체계적으로 분석 고기,, 때문에 배아 homozygous 많은 결함이이 키트에 대 한 결핍에서 인코딩된 키 유전자 제품의 손실로 인해 개발에 실패. 표현 형에 대 한 상영 될 수 있는 새로운 키트를 만들려고 homozygous 700 개 이상의 뚜렷한 결핍 돌연변이 대 한 배아에서 신경 시스템의 개발을 살펴보았다. 포함 하는 homozygotes가 인식할 수 있는 신 경계와 그대로 몸 벽 약 400 결핍 라인 키트 > 게놈의 80%. 여기 우리가 고아 수용 체 ligands 및 신경 항 원 식이이 키트의 스크린의 예를 보여. 패턴화, 표현과 얼룩이 지는 항 체에 의해 시각화할 수 있는 단백질 subcellular 지역화에 관련 유전자를 찾을 사용할 수도 있습니다. 일부 키트는 homozygotes 개발 상대적으로 일반적으로 늦은 단계로 16, 233 결핍 선의 게놈의 약 50%를 다루고 있습니다. 축 삭 지도 고기에 대 한 검사는 우리 고 우리 새 고기 우리가 확인의 예 제시. 하위 집합 키트를 사용할 수 있습니다 고기 모든 배아 장기에 영향을 미치는 대 한 화면으로. 미래에 이러한 결핍 키트 빠르게 초파리 연구를 허용 하 고 효율적으로 높은 배율로 개별 배아의 시험을 요구 하는 게놈 전체 해 부 화면을 실행.

Arf에 대 한 Garz Sec7 도메인 Guanine 염기 교환 비율 조절 초파리의 침 샘 개발

셀에 관여 하는 단백질의 표면 전달 하며이 경작된 한 포유류 세포에서 세포-매트릭스 상호 작용 GBF1 guanine 염기 교환 비율. 그러나, 그대로 동물에 organogenesis 동안 접착 단백질의 배달에 gbf1의 역할 특징 되었습니다 없습니다. 여기, 우리 플라이 GBF1 체, Drosophila melanogaster의 침 샘의 개발에서 Gartenzwerg (Garz)의 기능을 보고합니다. 선택적으로 침 샘 세포에서 Garz를 고갈 하 GAL4/UAS 시스템을 사용 했습니다. 우리 Garz의 고갈 Golgi 지역화 용암 램프 (Lva)의 붕괴 및 복잡 한 clathrin 어댑터 단백질 (AP 1) TGN 지역화 γ 소 단위에 의해 입증으로 분 통로 방해 보여 줍니다. 또한, Garz 소모 억제 세포 세포 접착 단백질 cadherin의 인신 매매 (DE-cad) 및 셀 표면에 플라밍고. 인신 매매의 disregulation 상피 극성 결정에 참여 하는 대형 디스크 종양 억제 단백질의 mistargeting와 연관 시킵니다. 침 셀 Garz 소진은 진행 되며 잘 정의 된 플라즈마 멤브레인 도메인 부족. Garz 고갈 정상 신장 및 잘 정의 된 luminal 덕트 부족 비 조직된 침 샘에 발생 하는 상피 세포의 위치에 또한 억제 한다. 우리의 결과 Garz 상피 구조의 설립을 위한 필수적 이며 Drosophila 개발 하는 동안 Garz에 대 한 절대적 요구 사항 설명 좋습니다.

유전학에서 지방 저장의 파리와 벌레: 무엇이 잘못 됐는지?

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