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Articles by Kamiar Moin in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Modèles de MAME pour 4D imagerie des cellules vivantes de la tumeur: Interactions microenvironnement Progression impact malin
1Department of Pharmacology, Wayne State University, 2Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Wayne State University
Nous avons développé des modèles 3D pour coculture imagerie des cellules vivantes en temps réel des interactions entre cellules tumorales mammaires et d'autres cellules dans leur microenvironnement que la progression d'impact à un phénotype invasif. Ces modèles peuvent servir d'écrans précliniques de médicaments afin de cibler paracrine induites par les voies protéolytiques, des chimiokines / cytokines et de la kinase impliqués dans envahissant.
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Interaction Des Fibroblastes Mammaires Humaines Avec Collagène I Augmente La Sécrétion De Procathepsin B
Interactions de cellules stromales et de la tumeur avec la matrice extracellulaire peut réguler l'expression des protéases dont l'lysosomale B protéases cathepsines et D. Dans la présente étude, nous avons déterminé si l'expression de ces deux protéases dans les fibroblastes mammaires humaines a été modulé par des interactions avec la matrice extracellulaire composante, les fibroblastes de collagène I. sein ont été isolées à partir du tissu du sein non malignes, ainsi que de tissu environnant tumeurs malignes du sein humain. La croissance de fibroblastes ces sur collagène I gélifie la morphologie des cellules affectées, mais pas la localisation intracellulaire de vésicules présentant une coloration pour la cathepsine B ou D. Cathepsines B et D niveaux (ARNm ou de protéine intracellulaire) n'ont pas été affectés dans les fibroblastes de culture sur des gels de collagène I ou de plastique, ni la cathepsine D a été sécrétée par ces cellules. En revanche, l'expression des protéines et la sécrétion de la cathepsine B, principalement procathepsin B, a été induite par la croissance de collagène I gels. La sécrétion induite semble être médiée par les intégrines liant au collagène I, que les anticorps inhibiteurs contre l'alpha (1), l'alpha (2), et le bêta (1) sous-unités d'intégrines empêché procathepsin B à partir de fibroblastes cultivés sécrétion de collagène. En outre, la sécrétion procathepsin B a été induite lorsque les cellules ont été étalées sur des anticorps intégrine bêta (1). À notre connaissance, c'est le premier examen de la cathepsine B et de l'expression D et la localisation dans les fibroblastes mammaires humaines et de leur régulation par une protéine de la matrice. La sécrétion de la cystéine protéase procathepsin B à partir de fibroblastes mammaires peuvent avoir des conséquences physiologiques et pathologiques, que les protéases sont nécessaires pour le développement normal et à la lactation de la glande mammaire, mais peut aussi initier et accélérer la progression du cancer du sein.
Péricellulaire Cathepsine B Et La Progression Maligne
La cathepsine B est une cystéine protéase lysosomale dans les cellules et tissus normaux. Dans les tumeurs malignes et les lésions précancéreuses, l'expression de la cathepsine B est très régulée à la hausse et l'enzyme est sécrétée et devient associé à la surface cellulaire. L'augmentation de l'expression sont médiés à de nombreux niveaux, allant de l'amplification génique pour une stabilité accrue de l'ARNm et de protéines. La cathepsine B est synthétisée sous forme préproenzyme et les principales voies de pénétration pour son trafic de la normale vers le lysosome utiliser le mannose-6-phosphate (récepteurs TPM). Inactif procathepsin B est traitée pour actifs formes simples et doubles de la chaîne de la cathepsine B dans les endosomes tardifs et les lysosomes, respectivement. Les cellules tumorales sécrètent procathepsin B et les deux formes actives de la cathepsine B. La sécrétion de procathepsin B se produit principalement en raison de l'expression accrue, tandis que la sécrétion de la cathepsine B actif semble impliquer des processus actifs qui peuvent être induits par une variété de mécanismes. Une fois sécrété procathepsin B se lie à la surface des cellules tumorales par l'intermédiaire d'p11, la chaîne légère de l'hétérotétramère annexine II. Cette liaison semble pour faciliter la conversion des procathepsin B à ses formes actives. La cathepsine B et l'annexine II hétérotétramère colocalisent dans les cavéoles (radeaux lipidiques) fractions isolées à partir de cellules tumorales. Les sérine-protéases et métalloprotéases matricielles ont également été trouvés à associer à cavéoles et certains avec le hétérotétramère annexine II. Notre hypothèse de travail est que la cathepsine B péricellulaire par le biais de sa proximité avec d'autres protéases dans les cavéoles participe, peut-être même initie, une cascade protéolytique sur la surface des cellules tumorales.
Imagerie Fonctionnelle De La Protéolyse: Cellules Stromales Et Inflammatoires Augmentent La Protéolyse Tumeur
La membrane basale sous-jacente est dégradée lors de la progression du cancer du sein et le cancer du côlon. Ainsi, nous imager la dégradation d'un dérivé fluorescent de sous-sol trempé de type membrane de collagène IV (DQ-collagène IV) en vivant maternel et sphéroïdes tumoraux du côlon. La protéolyse de la DQ-collagène IV par HCT 116 et HKH-2 humain sphéroïdes tumoraux du côlon était à la fois intracellulaire et péricellulaire. En revanche, la protéolyse de la DQ-collagène IV par BT20 homme sphéroïdes de tumeurs mammaires était péricellulaire. Comme éléments du stroma peuvent contribuer aux activités protéolytiques associés à des tumeurs, nous avons également examiné la dégradation de la DQ-collagène IV par les monocytes humains et des macrophages et des fibroblastes du côlon et du sein. Les fibroblastes se montrèrent un montant modeste de la dégradation des péricellulaire. La dégradation a été augmenté de 4 à 17 fois en cocultures de fibroblastes et les cellules tumorales par rapport à l'autre type de cellule seule. Des inhibiteurs de métalloprotéases de la matrice, la plasmine, et la protéase cystéine, de la cathepsine B, toute dégradation réduite dans le cocultures. Les monocytes ne se dégrade pas DQ-collagène IV, mais les macrophages dégradé DQ-collagène IV au niveau intracellulaire. En co-culture de cellules tumorales, les fibroblastes et les macrophages, la dégradation de la DQ-collagène IV a été augmenté. L'imagerie de cellules vivantes tumorales et les cellules stromales a, ainsi, nous a permis d'établir que la protéolyse tumeur survient pericellularly et intracellulaire et que la tumeur, du stroma et des cellules inflammatoires contribuent tous aux processus de dégradation.
La Cathepsine B Et La Protéolyse Tumeur: Contribution Du Microenvironnement Tumoral
Tumor-stromales interactions induire l'expression de métalloprotéases matricielles et sérines protéases et, comme le montre récemment, la cystéine protéase cathepsine B. Nous pensons que de telles interactions réguler à la hausse du facteur de transcription Ets1, résultant en une augmentation cathepsine B expression. Ce serait conforme à la régulation à la hausse observée concomitante de métalloprotéases matricielles et les sérine protéases, ainsi que la capacité des matrices extracellulaires et leurs partenaires de liaison de modifier la cathepsine B expression et la sécrétion. L'utilisation d'un test confocale à analyser la contribution de la tumeur-stroma interactions à la protéolyse, nous avons été en mesure de confirmer une dégradation accrue des matrices extracellulaires par les trois classes de protéases.
Imagerie Fonctionnelle De La Protéolyse Tumeur
Les rôles des protéases dans le cancer sont maintenant connus pour être beaucoup plus large que la simple dégradation de la matrice extracellulaire lors de l'invasion tumorale et les métastases. En outre, les protéases de cellules associés à des tumeurs (par exemple, des fibroblastes, des cellules inflammatoires, cellules endothéliales) ainsi que des cellules tumorales sont reconnus de contribuer à des chemins critiques pour la progression tumorale. Bien que l'expression élevée (transcriptions et des protéines) des protéases, et, dans certains cas des inhibiteurs de la protéase, a été documentée dans de nombreuses tumeurs, les techniques pour évaluer les rôles fonctionnels des protéases exigent que nous mesurons l'activité protéase et l'inhibition de cette activité plutôt que les niveaux de protéases, des activateurs et des inhibiteurs. De nouvelles techniques d'imagerie fonctionnelle de l'activité protéase, à la fois in vitro et in vivo, sont en cours d'élaboration comme le sont des traceurs d'imagerie qui nous permettront de déterminer l'activité protéase et, dans certains cas de discrimination entre les activités de la protéase. Ceux-ci devraient être cliniquement utiles comme critères de substitution pour les thérapies qui modifient les activités de la protéase.
Analyse Des Protéinases D'accueil Et D'origine Tumorale L'aide D'un Double Personnalisé Microarray Espèces Révèle Un Rôle Protecteur Pour Stromale Matrice Métalloprotéinase-12 En Non-small Cell Lung Cancer
Nous avons utilisé une mesure Affymetrix protéase puces à ADN (Hu / Mu puce Protin) conçu pour distinguer les gènes humains et de souris pour analyser l'expression des protéases et des inhibiteurs de la protéase dans le cancer du poumon. L'utilisation d'un modèle de poumon orthotopique du cancer, nous avons montré que murin métalloprotéinases matricielles (MMP) -12, MMP-13, et de la cathepsine K sont régulés à la hausse dans le tissu tumoral par rapport au cancer du poumon de la souris normale. Pour déterminer la pertinence de protéases du stroma détectées en utilisant ce système modèle, nous avons comparé les résultats à une analyse de l'homme spécimens d'adénocarcinome pulmonaire en utilisant le U133 Plus 2.0 Affymetrix puce. MMP-12, MMP-13, et de la cathepsine K ont montré une augmentation de l'expression dans les tumeurs humaines par rapport à un poumon normal similaire à celle observée dans le modèle orthotopique. L'analyse immunohistochimique a confirmé l'expression de MMP-12 dans le stroma de l'homme des échantillons de tumeurs pulmonaires. Pour déterminer la pertinence biologique de stromale la MMP-12, des cellules murines du carcinome pulmonaire de Lewis ont été injectés dans la veine caudale de syngéniques des souris de type sauvage (WT) et MMP-12-nulle. Souris MMP-12-nulles et WT développé des nombres équivalents de tumeurs du poumon, mais il y avait une augmentation de 2 fois dans le nombre de tumeurs qui ont atteint> 2 mm de diamètre de la MMP-12-souris nulles par rapport aux témoins WT. L'augmentation de la taille de la tumeur en corrélation avec une augmentation dans les vaisseaux sanguins CD31-positives et une diminution de niveaux de circulation de l'espèce K1-K4 de l'angiostatine. Ces résultats montrent un rôle protecteur pour la MMP-12 du stroma dans la croissance tumorale du poumon. L'utilisation de la puce Hu / Mu Protin nous permet de distinguer les protéases tumorales et l'hôte dérivé et guides de l'analyse plus approfondie de la signification de ces gènes dans la progression tumorale.
Expression Fonctionnelle Du Stefin Humain Recombinant A Dans Les Cellules Mammaliennes Et Bactériennes
Inhibiteur recombinant humain cystéine protéase, Stefin A, a été exprimé dans Escherichia coli et les deux BS-C-1 des cellules de rein de singe en utilisant le PET et les systèmes de virus de la vaccine recombinant, respectivement. La protéine exprimée a été purifié et analysé par SDS-PAGE et Western blot utilisant un anticorps polyclonal contre la cystatine alpha chez le rat. Dans les deux cas la protéine purifiée est apparu comme une seule bande correspondant au poids moléculaire de Stefin Un. (Environ 10 kDa) Viabilité de la Stefin exprimé A a été déterminée par l'inhibition de la cystéine protéase végétale, la papaïne. Recombinante humaine Stefin Une exprimé dans E. coli et les deux BS-C-1 des cellules, a été démontré que presque complètement inhiber la papaïne. L'expression d'un Stefin entièrement fonctionnel humaine recombinante dans le système bactérien est un outil hautement efficace pour la production de grandes quantités de la protéine. Cela peut être un outil important dans les études cinétiques ainsi que dans la production d'anticorps pour d'autres études analytiques (immunoblot, immunohistochimie, etc.) Expression dans les cellules de mammifères, d'autre part, peut fournir un outil de recherche important d'étudier les rôles fonctionnels de Stefin A dans les systèmes mammaliens tels que la régulation des protéases à cystéine.
Hu / Mu Protin Microarray Oligonucleotide: Double-espèces Array Pour Profilage Protéase Et L'expression Génique Dans Les Tumeurs Inhibiteur De La Protéase Et Leur Microenvironnement
La protéolyse est un mécanisme essentiel de régulation pour une grande variété de processus physiologiques et pathologiques. Pour aider à l'identification de protéases, de leurs inhibiteurs endogènes, et les protéines qui interagissent avec des protéases ou des voies protéolytiques dans les tissus biologiques, un microréseau oligonucléotide double-espèce a été développé en collaboration avec Affymetrix. La Hu / Mu Protin puce contient 516 et 456 ensembles de sondes que l'homme enquête et des gènes de souris d'intérêt (protéases, inhibiteurs de protéase, ou interacteurs), respectivement. Pour étudier la performance du réseau, les profils d'expression génique ont été analysés chez la souris pure et échantillons humains (référence ARN; normale et les lignées cellulaires tumorales et des tissus) et orthotopique implanté xénogreffes de l'homme A549 du poumon et les cancers du sein MDA-MB-231. L'expression des gènes et de relative «présent appel" les valeurs de P ont été déterminées pour chaque ensemble de sondes à l'aide dChip et MAS5 logiciel, respectivement. Malgré le niveau élevé d'identité de séquence de la souris et l'homme de protéase / inhibiteur de orthologues et le potentiel théorique d'hybridation croisée de certains des sondes,> 95% des "appels d'aujourd'hui" (P <0,01) résulte de même des espèces (hybridations par exemple, les transcriptions de l'homme à l'homme ensembles de sondes). Pour mieux évaluer la performance de la puce, expression différentielle des gènes et de fausses analyses du taux de découverte ont été menées sur des groupes d'échantillons humains ou de souris, et le traitement des données des méthodes pour optimiser les performances de la souris et ensembles de sondes de l'homme ont été identifiés. La Hu / Mu Protin puce est un outil précieux pour la découverte de l'identification des composants des voies protéolytiques humains et murins de la santé et la maladie et a une utilité particulière dans la détermination des origines cellulaires de protéases et les inhibiteurs de protéase dans des modèles de xénogreffe de cancer humain.
Visualiser L'activité Des Protéases Dans Les Cellules Vivantes: à Partir De Deux Dimensions à Quatre Dimensions
La dégradation protéolytique de la matrice extracellulaire (ECM) composantes par les cellules est une activité métabolique importante que les cellules se développent, remodeler, et migrent à travers l'ECM. La capacité à analyser dégradation de la MEC peut être utile dans l'étude des processus de développement ainsi que des pathologies comme le cancer. Dans cette unité, nous décrivons un essai in vitro de cellules vivantes méthode basée sur l'image et de mesurer quantitativement la dégradation des composants de l'ECM par des cellules vivantes. Les cellules sont cultivées en présence d'fluorescentes substrats protéiques de colorant trempée (DQ-gélatine, DQ-collagène I, et DQ-collagène IV) qui sont mélangés avec des matrices de protéines. Lors du clivage protéolytique, la fluorescence est libéré qui reflète directement le niveau de la protéolyse par les cellules. En utilisant la microscopie confocale et de logiciels d'imagerie de pointe, la fluorescence est détecté et des mesures précises de la dégradation protéolytique dans trois et quatre dimensions peuvent être évalués.
Imagerie Et Quantifier La Dynamique De La Tumeur Associée à La Protéolyse
Les rôles des protéases dans le cancer sont dynamiques. En outre, les rôles ou les fonctions de toute protéase on peut différer d'un stade de cancer à l'autre. Les protéases associées à la tumeur de cellules (par exemple, les fibroblastes, les cellules inflammatoires, les cellules endothéliales) ainsi que de cellules tumorales apporter d'importantes contributions à «la protéolyse tumeur». De nombreuses tumeurs présentent des augmentations de l'expression des protéases au niveau de la transcription et des protéines, mais, si ces protéases jouent un rôle causal dans la progression maligne est connu pour seulement une poignée de protéases. Ce que la critique ou substrat substrats qui sont clivés in vivo par une protéase donnée est également connu pour quelques protéases peu. Par conséquent, le développement récent de techniques et de réactifs pour imagerie des cellules vivantes d'activité de la protéase, en conjonction avec la connaissance éclairée des critiques substrats naturels, devrait aider à définir les fonctions de protéase. Nous décrivons ici des dosages de cellules vivantes pour la protéolyse d'imagerie, les protocoles de quantification protéolyse et l'utilisation de ces tests pour suivre la dynamique de la protéolyse par les cellules tumorales et les cellules tumorales elles seules l'interaction avec d'autres cellules trouvées dans le microenvironnement tumoral. En outre, nous décrivons un modèle in vitro qui récapitule l'architecture de la glande mammaire, un modèle conçu pour déterminer les effets des interactions dynamiques avec le microenvironnement qui entoure le «protéolyse tumeur» et les contributions respectives des différents types de cellules à «la protéolyse tumeur» . Les dosages et les modèles décrits ici pourraient servir de plates-formes de criblage pour l'identification des voies protéolytiques qui sont des cibles thérapeutiques potentielles et pour le perfectionnement des technologies et des sondes d'imagerie pour l'utilisation in vivo.
Microarrays Pour La Détection De Protéase Dans Les Tissus Et De Cellules
Expression d'une protéase donnée et des inhibiteurs endogènes qui régissent l'activité protéase peut être facilement déterminée au niveau de la transcription à l'aide de micropuces entières du génome. Dans le cas des protéases et des inhibiteurs de protéase, cependant, de déterminer quels sont les cellules les exprimant est souvent essentielle à la compréhension des rôles fonctionnels des protéases. Par exemple, dans le cancer du nombre des protéases sont dérivées de cellules qui se trouvent dans le microenvironnement autour de la tumeur, par exemple, les fibroblastes et les cellules inflammatoires. Les protéases des deux fibroblastes et les cellules inflammatoires ont été impliqués dans la progression maligne. Par conséquent, il est important de reconnaître l'origine de ces molécules si l'on veut développer des thérapies efficaces. À cet égard, de souris transgéniques modèles et des modèles de xénogreffes de cellules tumorales humaines qui sont implantées dans des souris sont des outils utiles. Pour profiler protéases de l'homme et la souris, inhibiteurs de protéase, et interacteurs protéase, nous avons développé en partenariat avec Affymetrix une coutume, plate-forme unique, à double puce espèces: la puce Hu / Mu Protin. La puce Hu / Mu Protin a été validée pour sa capacité à identifier les transcriptions de l'homme et de la souris dans les échantillons des espèces simples et d'identifier et de distinguer entre les transcriptions de l'homme et de la souris dans les échantillons des espèces telles que double xénogreffes. Dans les spécimens derniers, la puce Hu / Mu Protin nous a permis d'identifier d'accueil (la souris) protéases qui jouent un rôle protecteur dans le développement de tumeurs du poumon. Nous exposons ici un protocole pour l'utilisation de la puce Hu / Mu Protin aux protéases de profil, les inhibiteurs de protéase, et interacteurs protéase dans les tissus et les cellules.
Chirale Porphyrazine Proche-IR Agent D'imagerie Optique Exposer Accumulation Tumorale Préférentiel
Un porphyrazine chiral (pz), H (2) [pz (trans-A (2) B (2))] (247), a été préparé dans l'accumulation des expositions préférentiels in vivo dans les cellules de tumeurs. Pz 247 expositions dans le proche infrarouge (NIR) des émissions avec lambda> 700 nm dans la gamme de longueur d'onde nécessaire pour la pénétration tissulaire maximale. Lorsque des cellules tumorales MDA-MB-231 du sein sont traités avec 247, l'agent présente une forte fluorescence intracellulaire avec un maximum d'émission, 704 nm, ce qui indique qu'il localise dans un micro-environnement hydrophobe. Pz 247 est montré à associer avec le noyau lipophile de LDL et de subir l'entrée cellulaire principalement par endocytose s'accumulant dans les lysosomes. Préliminaire des études in vivo montrent que l'accumulation de 247 expositions préférentiel et la rétention dans les cellules de MDA-MB-231 tumeurs implantées chez des souris par voie sous cutanée, ce qui permet l'imagerie optique NIR avec un excellent contraste entre la tumeur et des tissus environnants. L'intensité de fluorescence à partir de 247 au sein de la tumeur augmente au fil du temps jusqu'à 48 h après l'injection sans doute en raison de la séquestration de circulation complexe 247/LDL par le tissu tumoral. Comme la nécessité pour le cholestérol, LDL et donc, est très élevée dans les cellules tumorales proliférantes sur les cellules non tumorigènes, 247 dispose d'applications potentielles pour toutes les tumeurs telles.
L'interleukine-6 augmente Expression Et La Sécrétion De La Cathepsine B Par Du Sein Associés à La Tumeur Monocytes
Dans le microenvironnement de la tumeur, les monocytes réagir à des stimuli paracrines à partir de cellules de cancer du sein par les molécules qui participent sécrétant de la croissance du cancer du sein, l'invasion, intravasation et les métastases. Ici nous avons examiné les effets de milieux conditionnés par des cellules MDA-MB-231 des cellules humaines de cancer du sein (231-CM) sur l'expression et la sécrétion de protéases et de la sécrétion de cytokines par les monocytes humains U937. Nous avons constaté que 231-CM augmenté U937: 1) la prolifération; 2) l'expression, l'activité et la sécrétion de la cystéine protéase cathepsine B (CSTB); la sécrétion 3) de métalloprotéases matricielles (MMP) -2 et -9 et 4) la sécrétion de l'interleukine-6 facteur de croissance (IL-6) et de l'insuline de type protéine-1 de liaison (IGFBP-1). Nous avons aussi démontré par des tests d'activité enzymatique Western blot et que les augmentations de la sécrétion et l'activité CTSB induites par 231-CM pourraient être réduits par des anticorps neutralisants contre l'IL-6. Nos données suggèrent un rôle pour l'IL-6 dans l'expression monocytaire accrue et la sécrétion de CTSB en réponse à des facteurs solubles sécrétés par les cellules du cancer du sein.
Imagerie Des Cellules Vivantes De La Protéolyse Tumeur: Impact Du Microenvironnement Cellulaire Et Non Cellulaire
Notre laboratoire a eu un intérêt de longue date dans la façon dont les interactions entre les tumeurs et leur microenvironnement affecter la progression maligne. Récemment, nous nous sommes concentrés sur la définition des voies protéolytiques qui fonctionnent dans la transition du cancer du sein à partir des lésions pré-invasives de carcinome canalaire in situ (CCIS) de carcinomes canalaires invasifs (IDC). Nous utilisons imagerie des cellules vivantes de visualiser, de localiser et de quantifier la protéolyse comme cela se produit en temps réel et, partant, ont établi les rôles de protéases à cystéine lysosomales fois pericellularly et intracellulaire dans la protéolyse tumeur. Pour faciliter ces études, nous avons développé et optimisé 3D organotypiques de co-culture des modèles qui récapitulent l'interactions in vivo de cellules épithéliales mammaires ou des cellules tumorales avec des cellules stromales et inflammatoires. Ici, nous allons discuter de l'arrière-plan qui a conduit à nos études actuelles ainsi que les techniques et les modèles que nous utilisons. Cet article fait partie d'un numéro spécial intitulé: La protéolyse de 50 ans après la découverte de lysosome.
L'identification Et L'Impact Fonctionnel D'Homo-oligomères Du Transporteur Humain Couplé Proton Acide Folique
Le transporteur de couplage proton acide folique (TPCF ; SLC46A1) est un symport de proton-acide folique qui est abondamment exprimé dans les tumeurs solides et des tissus normaux, tels que du duodénum. Acide pH optimum à TPCF est pertinente pour l'absorption intestinale de folates et pouvait se permettre un moyen de cibler sélectivement les tumeurs avec Roman antifolates cytotoxiques. TPCF est membre de la superfamille de facilitateur majeur des transporteurs. Parce que membres de la superfamille facilitateur majeur existent comme homo-oligomères, nous avons testé pour TPCF parce que de telles structures pourraient être importants au règlement et mécanisme de TPCF. En exprimant transitoirement TPCF en folate réduit transporteur et TPCF-null les cellules HeLa (R1-11) et la réticulation chimique avec 1,1-methanediyl bismethanethiosulfonate et Western Blot, espèce de TPCF avec des masses moléculaires se rapprochant celles du dimère TPCF et oligomères d'ordre plus élevés ont été détectés. Électrophorèse sur gel de polyacrylamide natifs bleu identifié TPCF dimère, trimère et tétramère formulaires. Monomères TPCF avec hémagglutinine et étiquettes d'épitope His(10) sont co-exprimés dans les cellules de R1-11, solubilisées et lié à des colonnes d'affinité, établissant leurs associations physiques de nickel. Co-expressing YPet et ECFP *-tag TPCF monomères activés transport et fluorescence resonance transfert d'énergie dans les membranes plasmiques des cellules R1-11. Combiné type sauvage (WT) et inactif mutant P425R PCFTs ont été ciblés pour les taches de biotinylation/Western en surface de cellule et de microscopie confocale et fonctionnellement présentaient un phénotype dominant « positif », ce qui implique une coopération positive entre monomères TPCF et sauvetage fonctionnelle du mutant par WT TPCF. Nos résultats démontrent l'existence de TPCF homo-oligomères et impliquent leurs incidences fonctionnelles et réglementaires. Meilleure compréhension de ces structures de TPCF ordre supérieurs peut conduire à des applications thérapeutiques liées à l'absorption d'acide folique malabsorption de folate héréditaire, et livraison de chimiothérapie ciblée TPCF médicaments pour le cancer.
La Cathepsine B Inhibition Limites Métastases Osseuses Dans Le Cancer Du Sein
Métastases osseuses est une cause majeure de morbidité chez les patients du cancer du sein, mettant l'accent sur l'importance d'identifier les conducteurs moléculaires de métastases osseuses de nouvelles cibles thérapeutiques. L'inhibiteur de cathepsine endogène cystéine Stefin A est un suppresseur de métastases du cancer du sein à l'os qui est co-exprimé avec de la cathepsine B dans les métastases osseuses. Dans cette étude, nous avons utilisé le modèle immunocompétent 4T1.2 du cancer du sein qui présente une métastase osseuse spontanée pour évaluer la fonction et thérapeutique potentiel de ciblage de la cathepsine B dans ce contexte de la maladie avancée. La cathepsine B dans le modèle abondance au imité la maladie humaine, tant au niveau des tumeurs primaires et métastases vertébrales appariés. ARNi à médiation knockdown de la cathepsine B dans les cellules tumorales réduit la dégradation du collagène I in vitro et in vivo les métastases osseuses. De même, l'administration intrapéritonéale de la très sélective inhibiteur de la cathepsine B CA-074 métastases réduite animaux porteurs de tumeurs, une réduction qui n'a pas été reproduit par le large spectre cystéine cathepsine inhibiteur de JPM-OEt. Notamment, la suppression des métastases par CA-074 a été maintenu dans un cadre de traitement tardif, pointant vers un rôle dans l'expansion de métastases. Ensemble, nos conclusions établi un rôle pro-métastatique de la cathepsine B dans les métastases à distance et illustré les bienfaits thérapeutiques de son inhibition sélective in vivo.
