Eine Langsame PH-abhängige Konformationsänderung Zugrunde Liegt, Eine Neue Art Der Aktivierung Des Epithelialen Na + / H + Austauscher-3-Isoform

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11792708

Osmotischen Stress-induzierte Umbau Des Kortikalen Zytoskeletts

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Sep, 2002  |  Pubmed ID: 12176742

Clathrin-vermittelte Endozytose Und Recycling Des Neuronen-spezifische Na + / H + Austauscher NHE5 Isoform. Verordnung Durch Phosphatidylinositol 3'-Kinase Und Dem Aktin-Zytoskelett

The Journal of Biological Chemistry. Nov, 2002  |  Pubmed ID: 12205089

Mehrere Arten Der Regulation Der Na + / H + Austauscher

Annals of the New York Academy of Sciences. Nov, 2002  |  Pubmed ID: 12502567

Hyperosmotischen Stress Aktiviert Rho: Differential Engagement in Rho-Kinase-abhängige MLC-Phosphorylierung Und Aktivierung NKCC

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12748065

Die Hemmung Und Der Umverteilung Von NHE3, Die Apikale Na + / H + Austauscher, Durch Clostridium Difficile Toxin B

The Journal of General Physiology. May, 2004  |  Pubmed ID: 15078917

Ist Myosin-leichte-Kette-Phosphorylierung Eine Regulatorische Signal Für Den Osmotischen Aktivierung Der Na +-K +-2Cl-Co-Transporter?

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Jul, 2005  |  Pubmed ID: 15728707

Glutathionmangel Hemmt Lipopolysaccharid-induzierte ICAM 1-Synthese

Free Radical Biology & Medicine. May, 2005  |  Pubmed ID: 15855051

Depolarisation Induziert Rho-Rho-Kinase-vermittelte Myosin-Leichtketten-Phosphorylierung in Nieren-Tubuluszellen

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 15857905

Rho GTPasen Diktieren Die Beweglichkeit Des Na / H-Exchanger NHE3 in Epithelien: Rolle in Apikalen Retention Und Targeting

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 16103375

Oxidativer Stress Erstellt Von Hämorrhagischem Schock Rekruten Toll-Like Receptor 4 an Der Plasmamembran in Makrophagen

The Journal of Experimental Medicine. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16847070

Oxidativer Stress durch Ischämie/Reperfusion generiert ist Prime Entzündungszellen für schnellere Reaktion auf nachfolgende Reize, wie Lipopolysaccharid (LPS) bekannt. Die Mechanismen, die hinter diesen Effekt bleibt schlecht Fallrecht. Diese Studien zeigen, dass die alveoläre Makrophagen erholte sich von Nagetieren ausgesetzt hämorrhagischem Schock/Reanimation ausgedrückt Oberfläche Toll-Like Receptor 4 (TLR4), einen Effekt, indem das Antioxidans N-Acetylcystein zu Reanimation Flüssigkeit gehemmt zugenommen. Mit eine Rolle für oxidativen Stress in dieser Effekt, in-vitro-verursachte H2O2-Behandlung von RAW 264.7 Makrophagen ebenso eine Steigerung in Oberfläche TLR4. Der H2O2-induzierten Anstieg der Oberfläche TLR4 wurde durch abbauende intrazelluläre Kalzium oder Unterbrechung des Zytoskeletts, was auf die Beteiligung der Rezeptor-Exozytose verhindert. Weitere, Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer zwischen TLR4 sowie das Floß Markierung GM1 und biochemische Analyse der Raft-Komponenten gezeigt, dass oxidativer Stress TLR4 zu Lipid Rafts in der Plasmamembran verteilt. Verhinderung der Oxidationsmittel-induzierte Bewegung des TLR4 auf Lipid Rafts mit Methyl-Beta-Cyclodextrin ausgeschlossen die Erhöhung der Reaktionsfähigkeit der Zellen zu LPS nach H2O2-Behandlung. Zusammenfassend deutet diese Untersuchungen einen neuen Mechanismus, bei dem oxidativer Stress die Reaktionsfähigkeit der Zellen des angeborenen Immunsystems prime könnte.

Kupplung Zwischen Apikaler Und Parazellulären Transport-Prozesse

Biochemistry and Cell Biology = Biochimie Et Biologie Cellulaire. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17215874

Transcellular Transport beeinflusst den parazellulären Flux durch 2 verschiedene Mechanismen: durch die Bestimmung der treibenden Kraft und durch die Veränderung der Durchlässigkeit der parazellulären Weg. Eine solche Koordinierung gewährleistet effiziente transepithelialen Transport verhindert den Aufbau von großen elektrischen und osmotischen Gradienten. Die Regulierung der parazellulären Durchlässigkeit wurde ursprünglich als erhöhter Parazellulärer Fluss des Wassers und der Analyten auf die Aktivierung der intestinalen Na + erkannt-Glukoseaufnahme gekoppelt. Trotz großer Fortschritte in der molekularen Charakterisierung von der tight Junctions, die die strukturelle Grundlage der epithelialen Barriere-Funktionen, die Mechanismen, die bei dem apikalen Transporter die parazellulare Wege verändern, bleibt ungelöst. Neuere Studien legen nahe, dass Myosin-basierte Kontraktilität diese Kopplung im Mittelpunkt steht. In diesem Minireview, fassen wir zusammen unsere aktuellen Kenntnisse der parazellulären Permeabilität, seine Verordnung durch Kontraktilität und die verschiedenen Signalling-Ereignisse, die apikale Na + link-Glucose-Cotransport für Myosin Phosphorylierung. Während die Rolle des Myosin-Phosphorylierung universal zu sein scheint, ist die Mechanismen, wobei endständige Verkehr dieser Prozess löst, wahrscheinlich bestimmte Zelle. Das aktuelle Modell zufolge in Darmzellen, ein Schlüsselfaktor einer p38 MAP Kinase-induzierte Na ist + / H +-Austauscher-vermittelte Alkalinization. Wir schlagen einen alternativen, nicht-exklusive Mechanismus in Niere tubulären Zellen, in denen das Schlüsselereignis möglicherweise ein Na +-Cotransport-Depolarisation der Plasmamembran, die wiederum zu Rho-vermittelte Myosin Phosphorylierung führt ausgelöst.

Kraft Aktiviert Glattmuskel Alpha-Actin Projektträger Aktivität Durch Signalisierung Stoffwechselweg Rho

Journal of Cell Science. May, 2007  |  Pubmed ID: 17456553

In Druck oder Volumen-Überladung ist Hypertrophe Wachstum des Myokard mit Myofibroblast Unterscheidung, ein Prozess, der in der kardiale Fibroblasten Glattmuskel Alpha-Actin (SMA) Ausdrücken. Die Signalisierungsmechanismen, die Kraft induziert Myofibroblast Unterscheidung und SMA Ausdruck zu vermitteln sind nicht definiert. Wir untersuchten die Rolle des Rho-Rho-Kinase Signalweges in Kraft-induzierte SMA-Ausdruck in Fibroblasten mit einem in-vitro-Modellsystem, die gilt statische Zugkräfte (0,65 pN/microm(2)) an Integrine über Kollagen beschichtete Magnetit-Perlen. Zwingen Sie 10 Minuten maximal induzierte RhoA-Aktivierung lokalisiert wurde, Kraft-Anwendung-Sites und erforderliche intakt Aktin-Filamente. Kraft verursachte Phosphorylierung von LIM-Kinase (5-10 Minuten) und eine frühe Dephosphorylierung von Cofilin (5 Minuten), die verlängerte Cofilin Phosphorylierung folgte. Diese Antworten wurden von Y27632, ein Rho-Kinase-Hemmer blockiert. Erzwingen Sie befördert Aktin Filamenten Versammlung bei Kraft-Anwendungssites (10-20 Minuten), ein Prozess, der Rho-Kinase und Cofilin erforderlich. Erzwingen Sie Anwendung verursachte nukleare Translokation von transkriptionelle Coaktivator MRTF-A aber nicht MRTF-B. Nukleare Translokation von MRTF-A benötigt, Rho-Kinase und intakten Aktin-Filamenten. Kraft 3.5-fold Anstieg der SMA-Promotor-Aktivität, die vollständig durch Transfektion von Zellen mit Dominant-negativen blockiert wurden hervorgerufen MRTF-A durch Hemmung der Rho-Kinase oder Demontage der Aktin-Filament. Diese Daten zeigen, dass die mechanischen Kräfte Aktin-Versammlung durch die Rho-Rho-Kinase-LIMK Cofilin Pathway vermitteln. Kraft-vermittelte Aktin-Filament-Versammlung fördert nukleare Translokation von MRTF und anschließende Aktivierung des Projektträgers SMA, SMA Ausdruck zu verbessern.

Phospholipase C, Kalzium Und Calmodulin Sind Entscheidend Für Alpha4beta1 Integrin Affinität Bis-Regulierung Und Monozyte Verhaftung Durch Attractanten Ausgelöst

Blood. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 16960156

Während der Entzündung roll Monozyten auf aktivierte Endothel und Verhaftung nach Stimulation von Proteoglycan gebundene Chemokine und andere Attractanten. Wir untersuchten Signalwege stromabwärts von G Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs), die alpha4beta1-Integrin-Affinität bis-Verordnung über Formyl Peptid-Rezeptor-transfected U937 Zellen stimuliert mit fMLP oder stromal abgeleiteten Faktor-1alpha und menschlichen entsprechen peripherem Blut Monozyten mit mehreren Chemokinen oder Attractanten stimuliert. Die bis-Verordnung der löslichen LDV-Peptid oder vaskuläre Zelle Adhäsion Molekül-1 (VCAM-1) Bindung durch diese Reize war kritisch abhängig von Aktivierung der Phospholipase C (PLC), Inosit 1,4,5-Triphosphat Rezeptoren, erhöhte intrazelluläre Kalzium, Zustrom von extrazellulären Calcium und Calmodulin, was darauf hindeutet, dass dieser Signalweg für alpha4 Integrine, eine hoher Affinität Konformation zu übernehmen ist. In der Tat war ein Anstieg der intrazellulären Kalzium nach Behandlung mit Thapsigargin oder Ionomycin ausreichen, um die Bindung des Liganden zu induzieren. Blockade der p44/42 und p38 Mitogen-aktivierte Protein (MAP)-Kinasen, Phosphoinositid-3-Kinase oder Protein Kinase C (PKC) Signalisierung Chemoattractant induziert LDV oder VCAM-1 Bindung nicht hemmen. Jedoch Aktivierung des PKC durch Phorbol Ester oben-geregelt alpha4beta1 Affinität mit Kinetik von den GPCR zu signalisieren. Eine entscheidende Rolle für SPS und Calmodulin entstand auch für Leukozyten Verhaftung und Adhäsion zu stärken.

Zelle Kontakt-abhängige Regulation Der Epithelialen Myofibroblast Übergang über Die Rho-Rho-Kinase-Phospho-Myosin-Bahn

Molecular Biology of the Cell. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17215519

Epitheliale-Mesenchymale-Myofibroblast Übergang (EMT), ein wichtiges Feature in Orgel Fibrose, wird durch den Zustand der interzellulären Kontakte geregelt. Unsere jüngsten Studien haben gezeigt, dass eine anfängliche Verletzung der Zell-Zell-Kreuzungen eine Voraussetzung für die Umwandlung von Wachstumsfaktor-beta1 (TGF-beta1) - induzierte Transdifferenzierung von Schlauchreifen Nierenzellen in Alpha-glatten Muskel Aktin (SMA) - Myofibroblasts zum Ausdruck zu bringen. Hier analysieren wir die zugrunde liegenden Kontakt-abhängige Mechanismen. Ca(2+) entfernen-induzierte Störung der interzellulären Kreuzungen provozierte Rho/Rho-Kinase (ROK)-vermittelte Phosphorylierung der Myosin-Leichtketten (MLC) und Rho/ROK-abhängige SMA Projektträger Aktivierung. Wichtig ist, spielte Myosin-basierte Kontraktilität selbst eine kausale Rolle, da die Myosin-ATPase-Inhibitor-Blebbistatin oder eine Nonphosphorylatable, dominante negative MLC (DN-MLC) die Kontakte Unterbrechung ausgelöste SMA Projektträger Aktivierung abgeschafft, die Synergie zwischen Kontakt Verletzungen und TGF-beta1 beseitigt und SMA Ausdruck unterdrückt. Zum verantwortlichen Mechanismen zu erforschen, untersuchten wir die Sprachunterstützung für die wichtigsten SMA-induzierende Transkriptionsfaktoren, Serum-Response-Faktor (SRF) und seine Myocardin-bezogenen Übertragungfaktor Coaktivator (MRTF). Kontakt Verletzungen verbesserte nuklearen Anreicherung von SRF und MRTF. Diese Prozesse wurden durch DN-Rho oder DN-MLC gehemmt. TGF-beta1 erleichtert stark nuklearen Anreicherung von MRTF in Zellen mit reduzierten Kontakte aber nicht in intakte Epithelien. DN-Myocardin geabschafft die Zertifizierungsstelle (2 +) - entfernen-+/-Projektträger TGF-beta1-induzierte Aktivierung. Diese Studien definieren einen neuen Mechanismus, wobei Zelle Kontakte epitheliale Myofibroblast Übergang über Rho-ROK-Phospho-MLC-abhängigen nuklearen Anreicherung von MRTF regulieren.

RAC, PAK Und P38 Regulieren Zelle Kontakt-abhängigen Nuklearen Translokation Des Myocardin-bezogenen Transkriptionsfaktor

FEBS Letters. Jan, 2008  |  Pubmed ID: 18154735

Wir untersuchten den Mechanismus, wobei Zelle Kontakt Schädigung den Alpha-glatten Muskel Aktin (SMA) Projektträger, ein Schlüsselprozess für epitheliale-Mesenchymale Transition (EMT) während Orgel Fibrose stimuliert. Kontakt Unterbrechung low-Ca(2+) Medium (LCM) aktiviert, Rac, PAK und p38 MAPK, und löste die nukleare Anhäufung von Myocardin im Zusammenhang mit Transkriptionsfaktor (MRTF), einem Induktor des Projektträgers SMA. Dominante negative (DN) Rac, DN-PAK, DN-p38 oder der p38-Inhibitor SB203580 unterdrückt die LCM-induzierte nukleare Anhäufung von MRTF und die Aktivierung des Projektträgers SMA. Diese Studien definieren neuartige Pathway(s) mit Rac, PAK und p38 in der Regulierung von MRTF und die Kontakt-abhängige Induktion von EMT.

Hyperosmotic Spannung Induziert Rho/Rho-Kinase/LIM-Kinase-vermittelte Cofilin-Phosphorylierung in Tubulären Zellen: Schlüsselrolle in Der Osmotisch Ausgelöste F-Actin-Antwort

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19109524

Hyperosmotic Spannung induziert Zytoskeletts Reorganisation und eine Nettozunahme der zellulären F-Actin, aber die zugrunde liegenden Mechanismen sind unvollständig verstanden. De Novo F-Actin Polymerisierung wahrscheinlich der Aktin-Antwort trägt, ist die Rolle des F-Actin trennte unbekannt. Um dieses Problem zu beheben, wurde wir untersucht, ob Hyperosmolarity Cofilin, ein wichtige Protein Aktin-Abbruch, regelt die Tätigkeit durch Phosphorylierung gehemmt wird. Da die kleinen GTPasen Rho und Rac empfindlich auf Zelle Volumen reagieren und Cofilin Phosphorylierung regulieren kann, wir auch gefragt, ob sie Osmostress mit Cofilin verknüpfen könnte. Hier zeigen wir, dass diese Hyperosmolarity schnell, nachhaltig und reversible Phosphorylierung von Cofilin in Nierenzellen tubuläre (LLC-PK1 und Madin Darby canine Kidney) induziert. Hyperosmolarity-Provoked Cofilin Phosphorylierung wurde vermittelt durch das Rho/Rho-Kinase (ROCK) / LIM-Kinase (LIMK) aber nicht bei der Rac/PAK/LIMK Weg, weil 1) dominierenden negativen (DN) Rho und DN-ROCK aber nicht DN-Rac und DN-PAK gehemmt Cofilin Phosphorylierung; 2) konstitutiv aktiven (CA)-Rho und CA-ROCK aber nicht CA-Rac und CA-PAK-induzierte Cofilin Phosphorylierung; 3) Hyperosmolarity induzierte Phosphorylierung LIMK-2 und 4) Hemmung der ROCK von Y-27632 unterdrückt die Hypertonicity ausgelöste LIMK-2 und Cofilin-Phosphorylierung.Wir Thenexamined ob Cofilin und seiner Phosphorylierung in der Hypertonicity ausgelöste F-Actin-Änderungen eine Rolle spielen. Heraufregulation von Cofilin von small interfering RNA erhöht die ruhelosigkeit F-Actin-Ebene und beseitigt alle weiteren Aufstieg bei hypertonen Behandlung. Hemmung der Cofilin Phosphorylierung von Y-27632 verhindert die Hyperosmolarity provozierte F-Actin-Erhöhung. Zusammengenommen Cofilin ist notwendig für die Aufrechterhaltung des osmotischen Reaktionsfähigkeit des Zytoskeletts in tubulären Zellen und der Rho/ROCK/LIMK-vermittelte Cofilin Phosphorylierung ist ein wichtiges Instrument in der Hyperosmotic Stress-induced F-Actin-Zunahme.

GEF-H1 Vermittelt, Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha-induzierte Rho Aktivierung Und Myosin Phosphorylierung: Rolle Bei Der Regulierung Der Tubulären Parazellulären Durchlässigkeit

The Journal of Biological Chemistry. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19261619

Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha (TNF-Alpha), eine entzündliche Cytokine, ist gezeigt worden, um kleine GTPase Rho zu aktivieren, aber die zugrunde liegenden Signalisierungsmechanismen blieb nicht definiert. Dieses allgemeine Problem ist besonders wichtig in der Niere, weil TNF-Alpha, wichtigen Vermittler von Verletzungen der Niere, bekannt ist, dass parazellulären Permeabilität in röhrenförmigen Epithelien zu erhöhen. Hier sollen wir bestimmen die Wirkung von TNF-Alpha auf die Rho-Pathway in tubulären Zellen (LLC-PK(1) und Madin Darby canine Kidney), definieren die upstream-Signalisierung und untersuchen die Rolle des Rho Biosyntheseweges in die TNF-Alpha-induzierte Veränderungen der parazellulären Durchlässigkeit. Wir zeigen, dass TNF-Alpha eine rasche und nachhaltige RhoA Aktivierung induziert, die zur Bildung von Stress-Faser und Rho-Kinase abhängige Myosin-Leichtketten (MLC)-Phosphorylierung geführt. Ermittlung neuer Regler verbinden den TNF-Rezeptor mit Rho signalisieren, wir eine Affinität-Niederschlag-Assay mit Rho Mutanten (RhoG17A) angewendet, die erfasst, aktiviert BIP-GTP Exchange Faktoren (GEFs). Massenspektrometrie-Analyse der Proteine RhoG17A-ausgefällt identifiziert GEF-H1 als ein TNF-Alpha aktivierten Rho GEF. In Übereinstimmung mit einer zentralen Rolle der GEF-H1, seine Herunterregulation von small interfering RNA verhindert die Aktivierung des Signalweges Rho. Außerdem sind GEF-H1 und Rho-Aktivierung nachgeschaltete ERK zu signalisieren, wie die MEK1/2-Hemmer PD98059 TNF-Alpha-induzierte Aktivierung dieser Proteine gemindert. TNF-Alpha verbessert vor allem die ERK Weg-abhängige Phosphorylierung von Thr-678 GEF-H1, die Schlüssel für die Aktivierung war. Schließlich die TNF-Alpha-induzierte parazellulären Permeabilität Erhöhung fehlte in den LLC-PK(1) Zellen stabil Ausdruck einer nicht-phosphorylatable, dominant negative MLC. Zusammenfassend lässt sich sagen haben wir die ERK/GEF-H1/Rho/Rho-Kinase/Phospho-MLC-Pathway identifiziert, als der Mechanismus, die Vermittlung von TNF-Alpha-induzierte Erhöhung von tubulären Epithelzellen Permeabilität, die wiederum zur Schädigung der Niere beitragen könnte.

Entfernte Ischämischen Vorkonditionierung Durch Hinterbeine Okklusion Leber Ischämische/Reperfusion Verletzungen Verhindert: Die Rolle Der High Mobility Group-Box 1

Annals of Surgery. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 19858701

Hepatozelluläre Schädigung durch Ischämie-Reperfusion der Leber tritt in einer Reihe von klinischen Situationen, einschließlich der großen Trauma, elektiven Chirurgie der Leber und Leber-Transplantation. Mehrere Strategien zur Verhinderung von Leber Schädigung nach Ischämie-Reperfusion (ich / R). Unter diesen hat ischämischen Vorkonditionierung Versprechen als ein präventives Konzept gezeigt. In diesem Manuskript, vermutete, dass wir diese Verwendung der Fernbedienung ischämischen Vorkonditionierung durch kurze Hinterbeine Ischemia Leber Funktionsstörung in einem Mausmodell der Leber verhindern könnte ich / R.

Schicksal Entscheidet Mechanismen Epitheliale Myofibroblast Übergang: Hemmenden Hauptrolle Für Smad3

The Journal of Cell Biology. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 20123992

Epitheliale-Myofibroblast (MF) Übergang (EMyT) ist ein kritischer Prozess bei Orgel-Fibrose, Alpha-glatten Muskel Aktin (SMA) Ausdruck in dem Epithel führt. Der Mechanismus die Aktivierung dieses myogener Programms zugrunde, ist unbekannt. Wir haben bereits gezeigt, dass sowohl Verletzungen der interzellulären Kontakte und transforming-Growth-Faktor-Beta (TGF-Beta) sind unentbehrlich für die SMA-Ausdruck (zweifache Modell) und dieser Kontakt Unterbrechung nukleare Translokation des Myocardin-bezogenen Transkriptionsfaktor (MRTF induziert). Da der SMA-Projektträger a/beide MRTF-responsive CC (t) birgt-reiche GG Element (CArG) Boxen und TGF-Beta-responsive Smad-Bindungselemente, wir die Hypothese, dass das myogener Programm durch eine Synergie zwischen MRTF und Smad3 mobilisiert wird. In dieser Studie zeigen wir, dass die Synergie zwischen Verletzung und TGF-Beta ausschließlich CArG Elemente erfordert. Überraschenderweise hemmt Smad3 MRTF-gesteuerten Aktivierung der SMA Projektträger und Smad3 silencing rendert Schädigung ausreicht, um die SMA Ausdruck zu induzieren. Darüber hinaus wird die Smad3 abgebaut unter zweifache Bedingungen, so befreiend myogener Programm. So Smad3 ist eine kritische Zeitgeber/Verzögerer MF Engagement in das Epithel, und EMyT in Smad3-Aufsteiger zerlegt werden kann (mesenchymal) und Smad3-gehemmt (myogener) Phasen.

Extrazelluläre Signal-regulierte Kinase Und GEF-H1 Vermitteln Induziert Durch Depolarisation Rho Aktivierung Und Parazellulare Durchlässigkeit Erhöhen

American Journal of Physiology. Cell Physiology. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20237148

Depolarisation der Plasmamembran der Rho/Rho-Kinase (ROK)-Signalweg aktiviert und damit Myosin-Leichtketten (MLC)-Phosphorylierung, die wiederum angenommen wird, ein wichtiger Regulator der parazellulären Durchlässigkeit verbessert. Die vorgelagerten Mechanismen, die paar Rho-Aktivierung und Durchlässigkeit Änderungen depolarization sind jedoch unbekannt. Hier zeigen wir, dass drei verschiedene depolarisierende Reize (extrazelluläre K(+) Hochkonzentration, lipophile kation Tetraphenylphosphonium oder l-Alanin, welche von elektrizitätserzeugende Na(+) Cotransport eingenommen wird) alle provozieren robuste Phosphorylierung von ERK in LLC-PK1 und Madin Darby canine Kidney (MDCK) Zellen. Hemmung der ERK verhindert vor allem die Depolarisierung-induzierte Aktivierung des Rho. Suche nach den zugrunde liegenden Mechanismus, haben wir den GTP/BIP-Austausch-Faktor GEF-H1 als die kritischen Austausch ERK-regulierten Faktor für die Depolarisierung induziert Rho-Aktivierung identifiziert. Diese Schlussfolgerung ist aufgrund unserer Erkenntnisse, dass 1) Depolarisierung GEF-H1 aber nicht p115RhoGEF aktiviert, 2) kurze interferierender RNA-vermittelte GEF-H1 Unterdrückender die Aktivierung des Rho-Signalweges eliminiert und 3) ERK Hemmung die Aktivierung der GEF-H1 verhindert. Darüber hinaus fanden wir, dass die Na(+)-K(+) Pumpe Inhibitor Strophanthin auch ERK, GEF-H1 und Rho-Aktivierung, teilweise bedingt durch die depolarisierende Wirkung verursacht. Zu den funktionellen folgen diesem neu identifizierte Weg, wir fanden, dass Depolarisation parazellulären Durchlässigkeit im LLC-PK1 erhöht und MDCK Zellen und, dass dieser Effekt durch die Hemmung der Myosin mit Blebbistatin oder eine dominante entschärft war negativ (Phosphorylierung inkompetent) MLC. Zusammengenommen, schlagen wir vor, dass der Stoffwechselweg ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC einen zentralen Mechanismus sein könnte, wobei elektrizitätserzeugende Transmembran Transportprozesse Myosin Phosphorylierung kontrollieren und regulieren parazellulären Transport in das tubuläre Epithel.

Veränderte Hemmenden κBα Ausdruck in LPS Stimuliert Alveolären Makrophagen Nach Wiederbelebte Hämorrhagischem Schock

Shock (Augusta, Ga.). Feb, 2011  |  Pubmed ID: 20661182

Patienten, die wieder zum Leben erweckt von hämorrhagischem Schock sind einem erhöhten Risiko für die Entwicklung der Orgel Dysfunktion, insbesondere akute Atemnot-Syndrom. Die "zweifache-Hypothese", worin Schock/Reanimation (S/R) das Immunsystem stärker auf die nachfolgende entzündliche Reize rendert, hat als einen Beitrag zur Orgel Schädigung Hauptmechanismus vorgeschlagen worden. Bisherigen Arbeit hat gezeigt, dass S/R alveoläre Makrophagen für erhöhte nukleare Faktor κB (NF-κB) Translokation in Reaktion auf LPS, Primzahlen, erhöhte Lunge Zytokine und Chemokine Produktion ihren Höhepunkt. Hemmenden κB (IκB) ist bekanntermaßen ein wichtiger Regulator der NF-κB-Aktivität. In diesem Artikel untersuchen wir die Wirkung der S/R auf Verordnung IκBα Ausdrucks als Reaktion auf LPS in vitro und in vivo. Zwei diskrete Auswirkungen auf IκB-Verordnung wurden nach S/R, beobachtet die Aktivität von NF-κB erweitern serviert. Erste, vorgängigen Gefährdung der alveolären Makrophagen S/R führte zu erhöhten LPS-induzierte IκBα Abbau durch Aktivierung upstream zu signalisieren, ein Effekt, der verstärkte NF-κB-Translokation und neutrophil Chemoattractant Zytokin-induzierte Genexpression geführt. Zweitens Zellen von Nagetieren erholt, nachdem S/R von IκB-mRNA als Reaktion auf LPS gegenüber Schein/LPS-Behandlung reduziert hatte. Dieser Effekt war in erster Linie auf die Fähigkeit der S/R, die Verlängerung der IκB mRNA Stabilität nach LPS-alone Behandlung beobachtet umzukehren. Gemeinsam können diese Effekte auf das wichtige regulatorische Molekül IκB in den Makrophagen zu die erhöhte entzündliche Reaktion, die nach S/R. beobachtet beitragen.

Der Epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor Vermittelt Die Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha-induzierte Aktivierung Des ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges in Tubuläre Epithel

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21212278

Tumor-Nekrose-Faktor (TNF)-α induziert, Zytoskelett und interzelluläre Junction Umbau tubuläre Epithelzellen; die zugrunde liegenden Mechanismen sind jedoch nicht vollständig erforscht. Wir haben bereits gezeigt, dass ERK-vermittelte Stimulation des Faktors Austausch RhoA BIP/GTP GEF-H1/Lfc kritisch für TNF-α induziert RhoA Stimulation ist. Hier untersuchten wir die vorgelagerten Mechanismen der ERK/GEF-H1-Aktivierung. Überraschenderweise wurden die TNF-α induziert ERK und RhoA Stimulation in tubulären Zellen durch Hemmung der epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) oder zum Schweigen verhindert. TNF-α erhöhte auch die Phosphorylierung des EGFR. EGF-Behandlung imitiert die Wirkung von TNF-α, wie es potente, ERK-abhängige GEF-H1 und RhoA Aktivierung entlockt. Darüber hinaus wurde RhoA EGF-induzierte Aktivierung von GEF-H1 zum Schweigen, verhindert, dass GEF-H1 eine wichtige nachgeschaltete Effektor des EGFR ist. Die TNF-α-entlockt EGFR, ERK und RhoA Stimulation wurden vermittelt, durch die TNF-α-Konvertase-Enzym (TACE), das EGFR-Liganden freisetzen kann. Darüber hinaus benötigt EGFR Transactivation auch die Tyrosinkinase Src, wie Src Hemmung TNF-α-induzierte Aktivierung des EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges verhindert. Wichtig ist, eine Bromdesoxyuridin (BrdU)-Aufnahme-Test und elektrische Zelle Substrate Impedance sensing, dass (ECIS) Messungen ergeben, dass TNF-α Zellwachstum EGFR-abhängigen Weise angeregt. TNF-α-induzierte NFκB-Aktivierung wurde hingegen nicht durch EGFR oder Src Hemmung, was darauf hindeutet, dass TNF-α EGFR-abhängige sowohl -unabhängige Effekte übt verhindert. Zusammenfassend lässt sich sagen zeigen wir in der vorliegenden Studie, dass die TNF-α-induzierte Aktivierung des ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges in tubulären Zellen durch Src - und TACE-abhängigen EGFR-Aktivierung vermittelt wird. Ein solcher Mechanismus könnte paar entzündliche und proliferative Reize und somit kann eine wichtige Rolle bei der Regulierung der Wundheilung und Fibrogenesis.

Pre-B-Zelle-Kolonie-Verbesserung-Faktor (PBEF/Nampt/Visfatin) Primzahlen Neutrophile Für Atemwege Platzen Aktivität Durch Teilweise Montage Von Der NADPH-Oxidase Ergänzt

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21518975

Pre-B Zellen Kolonie steigernde Faktor ([PBEF] auch Nampt/Visfatin) ist ein pleiotropen 52-kDa-Zytokin-ähnlichen-Molekül, deren Tätigkeit wurde, in mehreren Staaten der entzündliche Erkrankung verwickelt hat. PBEF fördert Neutrophilen neutrophil (PMN) Proinflammatory Funktion durch die Hemmung der konstitutiven PMN Apoptosis. Wir wurde untersucht, ob PBEF aktiviert oder für PMN Atemwege Platzen Primzahlen. Wir fanden, dass obwohl PBEF respiratorischen Burst allein nicht aktiviert haben, es auf die erhöhte reaktive Sauerstoff Spezies Generation durch die NADPH-Oxidase vorbereitet. PBEF gefördert Membran Translokation Zytosolische NADPH-Oxidase Untereinheiten p40 und p47, aber nicht p67, induzierte p40 Phosphorylierung auf Thr(154), und aktiviert die kleine GTPase Rac. Grundierung, Umsiedlung und Phosphorylierung waren auf Aktivierung der p38 und ERK-MAPKs, aber nicht von PI3K angewiesen. Grundierung von PBEF kam es unabhängig von seiner NAD erzeugenden Kapazität, weil weder Nicotinamid Mononucleotide oder NAD die Folgen und durch einen speziellen Inhibitor der PBEF rekapitulieren konnte, APO-866, könnte die Grundierung nicht hemmen. Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass PBEF für PMN respiratorischen Burst Tätigkeit vorbereiten kann, indem p40 und p47 Translokation an der Membran zu fördern und in diesem auf MAPK-abhängigen Weise Fall.

RhoA Und Rho-Kinase, Cyclosporin A Und Thrombin-induzierte Barriere Straffung in Renale Proximal Tubulären Zellen Zu Vermitteln

The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22062948

Die Verordnung und die Wartung von den parazellulären Transport in renalen tubulären Epithelien ist entscheidend für die Funktionen der Niere. Kombination aus dem Immunsuppressivum Drogen Cyclosporin A (CsA) und Sirolimus (SRL) übt starke Immunsuppression, sondern verursacht auch nephrotoxischer. Wir haben bereits gezeigt, dass CsA und SRL transepithelialen Widerstand (TER) in den Nieren röhrenförmige Zellen teilweise durch MEK/ERK1/2 erhöhen. In dieser Arbeit untersuchten wir die Hypothese, dass die RhoA Pathway auch Effekte der CsA und SRL vermittelt werden kann. Wir zeigen, dass CsA und die CsA/SRL-Kombination RhoA aktiviert, Cofilin Phosphorylierung induzierte und Spannung Faser Generierung gefördert. Die Rho-Kinase (ROK)-Inhibitor, Y27632, CsA und CsA/SRL-induzierte Cofilin Phosphorylierung und Aktin Umbau, reduziert die TER-Erhöhung und verhindert den Anstieg der Claudin-7-Ebenen, die durch die Medikamente verursacht. Ausdruck des Faktors Austausch kann GEF-H1/Lfc in Zellen angehoben wurde, die mit CsA und CsA/SRL behandelt werden. GEF-H1 Unterdrückender RhoA Aktivierung durch ≈50 % gehemmt und stark reduzierte Cofilin Phosphorylierung und Stress Faser-Bildung, induziert durch CsA und CsA/SRL. GEF-H1 Heraufregulation verhinderte jedoch nicht die TER-Änderung. Somit war die Rho/Rho-Kinase-Signalweg beteiligt, bei der Vermittlung von CsA und CsA/SRL-induzierte Zytoskelett-Umlagerung und TER Änderungen durch den Ausdruck der Claudin-7. Unsere Daten zeigen jedoch differenzielle Verordnung der Rho-Aktivierung zentraler Zytoskeletts Umbau, beteiligt, die GEF-H1-abhängigen und junktionale Durchlässigkeit ist, die keine GEF-H1 erfordert.