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Articles by Katherine D. Cygnar in JoVE
JoVE Neuroscience
Las respuestas de los análisis de las neuronas sensoriales olfativas ratón Utilizando la grabación Electroolfactogram Aire fase
Biology, Johns Hopkins University
El electroolfactogram (EOG) de grabación es una manera informativa, fácil de realizar, y fiable para evaluar la función olfatoria a nivel del epitelio olfativo. Este protocolo describe un sistema de grabación, preparación de los tejidos del ratón, la recopilación de datos y análisis de datos básicos.
Other articles by Katherine D. Cygnar on PubMed
Las Funciones Del Tap42 De Subunidad Fosfatasa Independientemente De Diana De La Rapamicina Para Regular La División Celular Y La Supervivencia En Drosophila
La proteína fosfatasa 2A (PP2A) subunidad reguladora Tap42 es esencial para la Diana de la rapamicina (TOR)-mediada de señalización en la levadura, pero no se ha establecido su papel en eucariotas superiores. Aquí mostramos que Tap42 no contribuyen significativamente a TOR señalización en Drosophila, como alteración del gen Tap42 no causa defectos en el crecimiento celular, metabolismo o actividad de la quinasa S6 característica de inactivación de TOR. Además, Tap42 no se requiere para el crecimiento de la creciente de la célula en respuesta a la activación de TOR de señalización. En cambio, nos encontramos que las mutaciones de Tap42 causar desorganización de los microtúbulos del huso en neuroblastos larvales, llevando a una detención mitótica preanaphase en estas células. Pérdida de Tap42 finalmente se traduce en mayor señalización de JNK, la activación de caspasas y muerte celular. Estos fenotipos se asocian a aumento de la acumulación y localización nuclear de PP2A en Tap42 las células mutantes. Nuestros resultados demuestran que el papel de Tap42 en TOR señalización no se ha conservado en eucariotas superiores, indicando diferencias fundamentales en los mecanismos de señalización entre la levadura y eucariotas superiores de TOR.
La Desensibilización Olfativa Canal GNC Por Ca2 + / CaM A Través De La Subunidad B1b Afecta a La Terminación De Respuesta, Pero No Sensibilidad a La Estimulación Recurrente
Ca2 + / calmodulina mediada por retroalimentación negativa es un mecanismo regulador de la prototípica Ca2 +-los canales iónicos permeables. En las neuronas sensoriales olfativas (OSN), la regulación como en la de nucleótidos cíclicos-cerrada (CNG) del canal es considerado como un importante mecanismo de adaptación OSN. Para determinar el papel del Ca2 + desensibilización / calmodulina del canal de GNC olfativa, se introdujo una mutación en el CNGB1b subunidad del canal en los ratones que hicieron que el canal de resistencia a la desensibilización rápida por Ca2 + / calmodulina. Contrariamente a lo esperado, OSN mutantes mostraron la adaptación del receptor de corriente normal a la estimulación repetida. Más bien, se muestra más lenta de terminación de respuesta y, en consecuencia, menor capacidad para transmitir la información olfativa al bulbo olfatorio. También muestra disminución de reducción de la respuesta durante la exposición al olor sostenido. Estos resultados sugieren que la desensibilización del canal de Ca2 + / calmodulina mediada por GNC rápida es menos importante en la regulación de la sensibilidad a la estimulación recurrente lo que se pensaba y en su lugar funciona principalmente para poner fin a las respuestas de OSN.
Fosfodiesterasa 1C Es Prescindible Para La Terminación De Respuesta Rápida De Las Neuronas Sensoriales Olfativas
En la nariz, olores se detectan en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas (OSN), en una vía de señalización mediada por AMPc transforma estimulación olor en respuestas eléctricas. Fosfodiesterasa (PDE) la actividad de los cilios en el OSN ha pensado de largo para dar cuenta de la terminación de respuesta rápida mediante la degradación inducida por el olor de cAMP. Dos ecuaciones en derivadas parciales con distinta localización celular se han encontrado en las OSN: PDE1C de los cilios y PDE4A en toda la célula, pero ausente de los cilios. Hemos interrumpido tanto de estos genes en ratones y llevado a cabo electro-olfactogram análisis. Inesperadamente, eliminando PDE1C no prolonga terminación respuesta. La terminación prolongada se produjo sólo en los ratones que carecían de ambas ecuaciones en derivadas parciales, lo que sugiere que la degradación de AMPc por PDE1C en los cilios no es un factor limitante para la terminación de la respuesta en ratones de tipo salvaje. Pde1c (- / -) OSN lugar mostraron una sensibilidad reducida y la adaptación atenuada a la estimulación repetida, lo que sugiere que PDE1C pueden estar involucrados en la regulación de la sensibilidad y la adaptación. Nuestras observaciones proporcionan nuevas perspectivas sobre la regulación de la transducción olfativa.
ANO2 Es El Cilial De Calcio Activados Por Los Canales De Cloro Que Pueden Mediar Amplificación Olfativo
Para la transducción de señales olfativas vertebrado, una conductancia de cloruro de calcio activado sirve como un paso de amplificación mayor. Sin embargo, la identidad molecular del canal de cloruro de calcio activados olfatorio (CACC) es desconocida. Aquí mostramos una pantalla de proteómica de proteínas de la membrana cilial de ratón las neuronas sensoriales olfativas (OSN) que identifican todos los componentes conocidos de transducción olfativa, así como Anoctamin 2 (ANO2). Ano2 transcripciones se expresa específicamente en las OSN en el epitelio olfatorio, y ANO2 :: proteína de fusión EGFP localiza en los cilios OSN cuando se expresa en vivo utilizando un vector adenoviral. Patch-clamp análisis reveló que ANO2, cuando se expresa en células HEK-293, forma un CACC y las propiedades de los canales de exposiciones muy parecido al CACC olfativa nativo. Teniendo en cuenta estas conclusiones, se propone que ANO2 constituye el olfato de calcio activados por los canales de cloro.
