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Articles by Katherine M. Kocan in JoVE

 JoVE Immunology and Infection

RNA interferenza nelle zecche


JoVE 2474 1/20/2011

1, 1, 1,2

1Department of Veterinary Pathobiology, Center for Veterinary Health Sciences, Oklahoma State University, 2(CSIC-UCLM-JCCM), Instituto de Investigación en Recursos Cinegéticos IREC

Un metodo per l'interferenza dell'RNA (RNAi) mediante iniezione di dsRNA in zecche digiuno è descritta. RNAi è il più utilizzato silenziamento genico tecnica zecche dove l'utilizzo di altri metodi di manipolazione genetica è stato limitato.

Other articles by Katherine M. Kocan on PubMed

Adattamenti Dell'agente Patogeno Da Zecche, Anaplasma Marginale, Per La Sopravvivenza Nei Bovini E Zecche

Experimental & Applied Acarology. 2002  |  Pubmed ID: 14570114

Il bestiame da zecche patogeno Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) moltiplica all'interno della membrana-limiti inclusioni nel citoplasma delle cellule ospite. Molti isolati geografici di a. marginale si verificano che variano nel genotipo, composizione antigenica, morfologia e l'infettività per le zecche. Un sistema di coltura cellulare tick per la propagazione di a. marginale ha dimostrato di essere un buon modello per lo studio delle interazioni patogeno tick. Sei proteine della superficie principale (MSPs) individuate su a. marginale dagli eritrociti bovini furono conservate su a. marginale derivati da cellule di tick. MSP1a e MSP1b erano adesine per eritrociti bovini, mentre solo MSP1a era destinata ad essere un adhesin per celle di tick. La porzione tandemly ripetuta di MSP1a è stata trovata per essere necessarie e sufficienti per l'adesione a cellule tick sia eritrociti bovini. Infettività degli isolati a. marginale per le zecche dipendeva la capacità adesiva del MSP1a isolato, che è stato trovato a coinvolgere le proprietà adesive e la sequenza dei peptidi ripetuti. Bovini vaccinati con a. marginale derivano dagli eritrociti bovini o cellule tick ha dimostrato una risposta anticorpale differenziale a MSP1a e MSP1b che hanno provocato dall'espressione differenziale di queste proteine in cellule di bestiame e le zecche. MSP2, derivato da una famiglia di multigene, è stato trovato a subire variazione antigenica nei bovini e zecche e possono contribuire all'instaurazione di infezioni persistenti a. marginale. MSP1a è stato usato come un marcatore genetico stabile per isolati geografici poiché il peso molecolare varia a causa di differenti numeri di tandem si ripete. Tuttavia, studi filogenetici di a. marginale isolati dal Nord America utilizzando MSP1a e MSP4 hanno dimostrato che il MSP4 era un buon marcatore biogeografico, mentre MSP1a variata notevolmente tra e all'interno di aree geografiche. Infezione e lo sviluppo di a. marginale nei bovini e spuntare le cellule appare differiscono e di essere mediata da diverse proteine di superficie codificate dal genoma del piccolo.

Conservazione Dei Geni Di Proteina Di Superficie Principali 1 Di Anaplasma Marginale Durante La Trasmissione Ciclica Tra Zecche E Bestiame

Gene. Jan, 2002  |  Pubmed ID: 11814681

Anaplasmosi bovina sono una malattia rickettsie di importanza economica mondiale causata da Anaplasma marginale. Diverse proteine di superficie principali con sequenze di geni conservati sono state esaminate come potenziali candidati per i vaccini e/o saggi diagnostici. Proteina di superficie principale 1 (MSP1) è composta da polipeptidi MSP1a e MSP1b. MSP1a è espresso da alpha msp1 gene singola copia e MSP1b è espresso dai membri della famiglia multigene msp1 beta. Al fine di determinare se i geni msp1 sono conservati, primer specifico per msp1 alfa, msp1 beta(1) e msp1 beta(2) geni sono stati sintetizzati e utilizzati per amplificare sequenze msp1 di a. marginale da colture di cellule di graduazione, dal bestiame durante le infezioni acute e croniche e dalle ghiandole salivari di Dermacentor variabilis. Sequenze della proteina di MSP1a, MSP1b(1) e MSP1b(2) sono state conservate durante il ciclo di vita del parassita. Nessun cambiamento dell'amminoacido sono stato osservato nel MSP1a. Tuttavia, sono state osservate piccole variazioni nelle sequenze di proteine MSP1b(1) e MSP1b(2), che potrebbero essere attribuite a ricombinazione, selezione per subpopolazioni di a. marginale nell'ospite vertebrato e/o errori PCR. Sono state osservate diverse sequenze specifiche isolato. Basato su informazioni ottenute in questo studio, la proteina MSP1 sembra essere abbastanza ben conservato e un potenziale candidato vaccino.

Infezione Delle Cellule Tick Ed Eritrociti Bovini Con Un Genotipo Dell'ehrlichia Intracellulare Anaplasma Marginale Esclude Infezione Con Altri Genotipi

Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. May, 2002  |  Pubmed ID: 11986275

Anaplasma marginale, un patogeno rickettsie da zecche del bestiame, è endemica in molte aree degli Stati Uniti. Molti isolati geografici di a. marginale che si verificano negli Stati Uniti sono caratterizzati da 1a la proteina di superficie maggiore, che varia in sequenza e peso molecolare a causa di diversi numeri del tandem ripete di 28 o 29 amino acidi. Studi recenti (Palmer H. G. F. R. Rurangirwa e T. F. McElwain, J. Clin. Microbiol. 39:631-635, 2001) di un A. marginale-infettati mandria di bovini in un'area di endemicità ha dimostrato che più msp1alpha genotipi erano presenti ma che solo un genotipo è stata trovata per individuo bovina. Queste scoperte ha suggerito che è stato escluso infezione del bestiame con altri genotipi. Il presente studio è stato intrapreso per confermare il fenomeno dell'esclusione di infezione di genotipi a. marginale in eritrociti bovini infetti e cellule coltivate tick. Due isolati tick-trasmissibili di a. marginale, uno da Virginia e Oklahoma, sono stati utilizzati per questi studi. In due prove distinte, bestiame inoculati con dosi uguali di due isolati sviluppati infezione con un solo genotipo. Colture cellulari Tick inoculate con dosi uguali dei due isolati è state contagiate con solo la Virginia isolato di a. marginale. Quando le culture sono state inoculate con differenti rapporti di l'Oklahoma e Virginia isolati di a. marginale, l'isolato inoculato nel rapporto superiore divenne stabilito ed escluso l'infezione con l'altro. Quando le culture con infezioni stabilite di un isolato successivamente sono state infettate con l'altro, è stato rilevato solo l'isolato stabilito. Abbiamo documentato esclusione di infezione durante l'infezione iniziale in coltura cellulare etichettando ogni isolato con un colorante fluorescente diverso. Dopo 2 giorni di cultura, solo un singolo isolato è stato rilevato per la cellula da microscopia di fluorescenza. Infine, quando Anaplasma ovis infezioni sono state stabilite in culture che successivamente sono state inoculate con la Virginia o isolare Oklahoma di a. marginale, è stato escluso a. marginale infezione. Questi studi confermano che la esclusione di infezione si verifica con a. marginale in eritrociti bovini e cellule delle graduazione, con conseguente creazione di un solo genotipo e sembra essere il primo rapporto di esclusione di infezione per le specie Anaplasma ed Ehrlichia.

Effetto Della Tetraciclina Sullo Sviluppo Di Anaplasma Marginale in Ixodes Scapularis Cellule Coltivate

Veterinary Parasitology. Jul, 2002  |  Pubmed ID: 12072219

Infezioni del patogeno da zecche ehrlichial, Anaplasma marginale, nei bovini controllate, in parte, con la somministrazione di basse dosi di tetracicline. Recentemente, è stato sviluppato un sistema di coltura cellulare per a. marginale utilizzando una linea cellulare di tick derivata da embrionali scapularis Ixodes. Questo studio è stato progettato per determinare l'effetto della tetraciclina su a. marginale propagate in un dosaggio di cultura cellulare tick. Varie concentrazioni di tetracicline (0, 0.01, 0.10, 1.0, 5, 10, 20 o 100 microg/ml) sono stati aggiunti in mezzo alle culture 48 h dopo monocellulari sono state inoculate con a. marginale. Crescita a. marginale nel farmaco trattati e colture di controllo è stata successivamente valutata da ELISA indiretta a post-infection 7 giorni (PI) e al giorno di luce e di microscopia elettronica (LM ed EM). Infettività del marginale a. cultura-derivato è stato determinato da inoculazione di bestiame sensibili con colture di controllo trattati e non trattati. Dosi di tetraciclina di 5, 10, 20 e 100 microg/ml ha provocato inibizione significativa della crescita marginale a. come determinato da ELISA. Alterazioni morfologiche di Anaplasma, come determinato da LM ed EM, avvenuta nelle colture trattate con le stesse concentrazioni di droga. Replica a. marginale, inibita nelle colture trattate nei giorni 2-6 PI con tetraciclina microg/ml 20, non era apparente 96 giorni dopo rimozione antibiotica. Infetti trattate con mezzo contenente 20 tetraciclina microg/ml ha dimostrato di essere non infettiva quando inoculati in vitelli splenectomized sensibili delle colture cellulari. Tutti i parametri studiati nel presente documento hanno dimostrato che la tetraciclina ucciso a. marginale nelle cellule coltivate tick. Il dosaggio di farmaco Anaplasma-tick cella cultura quindi, sarebbe utile per lo screening e valutazione di nuovi antibiotici per il controllo di anaplasmosi.

Phylogeography Di Nuovo Mondo Gli Isolati Di Anaplasma Marginale Basato Su Sequenze Di Proteina Di Superficie Principali

Veterinary Microbiology. Sep, 2002  |  Pubmed ID: 12151201

Gene e proteina sequenze di maggiore superficie 1a proteine (MSP) e 4 di Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) sono stati utilizzati per dedurre relazioni filogenetiche tra gli isolati del nuovo mondo da Argentina, Brasile, Messico e Stati Uniti. Diciassette isolati di a. marginale più due outgroup taxa (centrale a. e a. ovis) sono stati utilizzati per l'analisi di massima parsimonia di MSP4, mentre 20 isolati sono stati utilizzati per l'analisi filogenetica delle MSP1a. MSP4 analisi fornivano supporto bootstrap forte per un clade di latino-americano e, all'interno di questo clade, il supporto è stato rilevato per cladi messicano e sudamericano. Stati isolati di a. marginale dagli Stati Uniti anche raggruppati in due clades da sud (isolati dalla Florida, Mississippi e Virginia) e centro-occidentale (isolati dalla California, Idaho, Illinois, Oklahoma e Texas). Anche se poco phylogeographic risoluzione è stato rilevato all'interno di questi cladi superiori, msp4 sequenze sembrano essere un buon marcatore genetico per l'inferenza phylogeographic patterns di isolati a. marginale. In contrasto con la risoluzione di phylogeographic fornita da msp4, MSP1a DNA e sequenza della proteina sono stati abbastanza variabile e non ha fornito phylogeographic risoluzione. La maggior parte delle variazioni nelle sequenze MSP1a apparvero univoco per un dato isolato e variazione di sequenza del DNA simile a msp1alpha è stato rilevato all'interno degli isolati da Idaho e Florida e da Idaho e Argentina. I risultati di questi studi hanno dimostrato che msp4 ha fornito informazioni filogenetiche sull'evoluzione degli isolati a. marginale. Al contrario MSP1a sequenze sembravano essere in rapida evoluzione e queste sequenze possono fornire informazioni phylogeographic solo quando isolare MSP1a numerose sequenze vengono analizzati da un'area geografica.

Vaccinazione Del Bestiame Con Anaplasma Marginale Derivato Da Tick Cella Cultura E Bovina Eritrociti Seguiti Dalla Sfida-esposizione Con Le Zecche Infette

Veterinary Microbiology. Oct, 2002  |  Pubmed ID: 12243900

Anaplasmosi, una malattia emolitica del bestiame causata dall'agente patogeno da zecche Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) è stato controllato utilizzando vaccini uccisi effettuati con antigene raccolte dagli eritrociti bovini infetti. Recentemente abbiamo sviluppato un sistema di coltura cellulare per la propagazione di a. marginale in una linea cellulare continua tick. In questo studio, abbiamo effettuato una prova di bestiame per confrontare la risposta bovina alla vaccinazione con a. marginale raccolte da tick cella cultura o bovina eritrociti. Tutti immunizzati e controllo bestiame furono poi esposti sfida consentendo maschio Dermacentor variabilis infettati con a. marginale di feed e di trasmettere l'agente patogeno. Nove bovini yearling (tre per ogni gruppo) sono stati utilizzati per questo studio e sono stati immunizzati con cellule derivate da cultura a. marginale, derivati degli eritrociti a. marginale o adiuvante ricevuti solo per servire come controlli. Ogni dose di vaccino conteneva circa 2 x 10(10) A. marginale e tre vaccinazioni sono stati somministrati a settimane 1, 4 e 6. A settimana 8, bestiame erano esposti sfida consentendo D. 60 variabilis maschile che sono stati infettati con a. marginale come adulti per l'alimentazione del bestiame. Risposte anticorpali del bestiame contro proteine della superficie principale (MSP) 1a, 1b e 5, come determinato da ELISAs, raggiunse 2 settimane dopo l'ultima immunizzazione. Immunizzati con bovini infetti IDE8 antigeni cellule derivate avevano un riconoscimento preferenziale per MSP1b mentre immunizzati con antigeni derivati degli eritrociti bovini ha avuto un riconoscimento preferenziale per MSP1a. È stata valutata l'efficacia di protezione utilizzando la percentuale infetta eritrociti (PPE), l'ematocrito (PCV) e il periodo di prepatenza. A. bovini vaccinati marginale ha mostrato bassa PPE e valori più elevati di PCV quando rispetto agli animali di controllo e non ha visualizzato anaplasmosi clinico. La cellula derivata da cultura a. marginale Mostra la promessa per l'uso come antigene nello sviluppo di un nuovo vaccino ucciso per anaplasmosi.

Applicazioni Di Un Sistema Di Coltura Cellulare Per Studiare L'interazione Di Anaplasma Marginale Con Cellule Di Tick

Animal Health Research Reviews / Conference of Research Workers in Animal Diseases. Dec, 2002  |  Pubmed ID: 12665106

Un sistema di coltura cellulare per la rickettsia da zecche Anaplasma marginale offre nuove opportunità per la ricerca su questo agente patogeno economicamente importante del bestiame. A. marginale moltiplica in membrana-limiti inclusioni in cellule ospiti. Considerando che gli eritrociti sembrano essere l'unico sito di infezione nei bovini, a. marginale subisce un complesso ciclo dello sviluppo in segni di graduazione e la trasmissione avviene tramite le ghiandole salivari durante l'allattamento. Recentemente abbiamo sviluppato un sistema di coltura cellulare per a. marginale usando una linea di cellule derivata da embrioni di scapularis Ixodes. Qui esaminiamo l'uso di questo sistema di coltura cellulare per studiare l'interazione di a. marginale con cellule di tick. Diversi dosaggi sono stati sviluppati utilizzando il sistema di celle a. marginale/tick. Un test di adesione è stato sviluppato per l'identificazione di proteine necessaria da a. marginale per l'adesione alle cellule di tick. L'effetto degli anticorpi selezionati proteine della superficie maggiore nell'inibire l'infezione da a. marginale è stato testato in un'analisi che ha permesso ulteriore conferma del ruolo delle proteine della superficie l'infezione delle cellule di tick. Un saggio di a. marginale di screening di stupefacenti è stata sviluppata e fornisce un metodo di selezione iniziale di farmaco senza l'uso di capi di bestiame. Il sistema di coltura è stato utilizzato per testare per migliorare effetti di tick saliva e componenti saliva su a. marginale infezione. Il sistema di coltura cellulare tick ha dimostrato di essere un buon modello per studiare le interazioni a. marginale-tick. Informazioni acquisite da questi studi possono essere applicabili ad altri patogeni strettamente correlate da zecche che sono state propagate nella stessa linea cellulare tick.

Anaplasma Marginale Msp1alpha Genotipi Evoluto Sotto La Pressione Di Selezione Positiva, Ma Non Sono Marcatori Per Isolati Geografici

Journal of Clinical Microbiology. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12682152

Anaplasma marginale (ordine Rickettsiales, famiglia Anaplasmataceae), un agente patogeno da zecche del bestiame, è endemica nelle regioni tropicali e subtropicali del mondo. Molti isolati geografici di a. marginale si verificano negli Stati Uniti e sono stati identificati dalla proteina di superficie principali 1a (MSP1a), che varia in sequenza e peso molecolare a causa di diversi numeri del tandem 28 - a 29-amminoacido si ripete. Il presente studio è stato intrapreso per esaminare le variazioni genetiche tra gli isolati di a. marginale ottenuti nel corso del 2001 da bovini infetti da Oklahoma centro-orientale, dove è endemica a. marginale. Le sequenze del gene e della proteina di MSP1a e msp4 sequenze nucleotidiche sono stati utilizzati per dedurre le relazioni filogenetiche tra Oklahoma e nuovo mondo isolati da Argentina, Brasile, Messico e Stati Uniti. Tutti gli isolati a. marginale 11 raccolti da Oklahoma avevano diverse sequenze di MSP1a ma identiche sequenze MSP4. La filogenesi delle sequenze msp4 di 13 isolati da Oklahoma rispetto a quelle di 7 isolati di latino-americano e di 12 Stati Uniti isolati da massimo-parsimonia (MP) e la massima verosimiglianza (ML) analisi, con centrale a. e a. ovis sequenze utilizzate come outgroups, forniti un sostegno forte analisi bootstrap per un clade di latino-americano. Isolati di a. marginale dal sud degli Stati Uniti (Florida, Mississippi e Virginia) e gli Stati Uniti centro-occidentale (California, Idaho, Illinois, Missouri, Oregon e Texas) anche raggruppati in due clades. Entrambi cladi contenevano isolati dall'Oklahoma, suggerendo movimento vasto bestiame. ML analisi delle sequenze di isolati da Oklahoma fornito supporto analisi bootstrap per cladi centro-orientale e nord-centrale in Oklahoma ed entrambi isolati cladi inclusi da Stillwater, Oklahoma analisi delle modifiche codone e amminoacidi tra le sequenze di msp4 di isolati con prove diverse filogenesi forniti msp4 che msp4 non è sotto la pressione di selezione positiva. Al contrario, la filogenesi delle sequenze della proteina e DNA MSP1a di 13 isolati da Oklahoma rispetto a quelli dell'America latina 7 e 13 isolati dagli Stati Uniti di analisi MP e ML non dimostrato alcun cluster geografico e ha fornito prove che questo gene è sotto pressione di selezione positiva. I risultati indicano che msp1alpha è non un marker per la caratterizzazione di a. marginale isolati geografici e suggeriscono che l'eterogeneità genetica osservata tra gli isolati di a. marginale all'interno dell'Oklahoma potrebbe essere spiegato dal movimento del bestiame e la manutenzione di diversi genotipi da eventi di trasmissione indipendenti.

Caratterizzazione Di Anaplasma Marginale Isolato Dal North American Bison

Applied and Environmental Microbiology. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 12902301

Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), un agente patogeno da zecche del bestiame, è endemica nelle regioni tropicali e subtropicali del mondo. Anche se i test sierologici hanno identificato il bisonte americano, Bison bison, come essere infettati con a. marginale, il presente studio è stato intrapreso per confermare l'infezione da a. marginale e per caratterizzare isolati ottenuti da bisonte naturalmente infetti negli Stati Uniti e in Canada. Sequenze (MSP1a e MSP4) di proteina di superficie principali di bisonte isolati sono stati caratterizzati rispetto agli isolati di bestiame del nuovo mondo. Sangue da un bisonte americano è stato inoculato in un vitello di sensibile, splenectomized, che si è sviluppato anaplasmosi acuta, dimostrando l'infettività di questo bisonte marginale a. isolare per bestiame. I risultati di questo studio ha mostrato che questi isolati a. marginale ottenuti da bisonte erano simili a quelli di bovini infetti naturalmente.

Gli Antigeni E Le Alternative Per Il Controllo Di Anaplasma Marginale Infezione Nei Bovini

Clinical Microbiology Reviews. Oct, 2003  |  Pubmed ID: 14557295

Anaplasmosi, una malattia da zecche bestiami causata dalla rickettsia Anaplasma marginale, sono endemica nelle aree tropicali e subtropicali del mondo. La malattia causa una notevole perdita economica per il caseificio e il manzo industrie in tutto il mondo. Analisi del 16S rRNA, groESL e proteine della superficie hanno provocato la recente riclassificazione dell'ordine Rickettsiales. Il genere Anaplasma, di cui A. marginale è la specie tipo, ora comprende anche a. bovis, platys a. e a. phagocytophilum, che erano precedentemente conosciuti come Ehrlichia bovis, E. platys e il gruppo di E. phagocytophila (che causa l'Ehrlichiosi granulocitica umana), rispettivamente. Vaccini vivi e uccisi sono stati utilizzati per il controllo di anaplasmosi, ed entrambi i tipi di vaccini hanno vantaggi e svantaggi. Questi vaccini sono state efficaci nel prevenire il clinico anaplasmosi nei bovini, ma non hanno bloccato marginale a. infezione. Così, bovini infetti persistentemente servono come un serbatoio di sangue infettivi per entrambi di trasmissione meccanica e infezione delle zecche. Progressi nelle tecnologie biochimiche, immunologiche e molecolari durante l'ultimo decennio sono stati applicati alla ricerca di a. marginale e gli organismi correlati. Il recente sviluppo di un sistema di coltura cellulare per a. marginale fornisce una potenziale fonte di antigene per lo sviluppo di vaccini uccisi e vivo migliorati, e la disponibilità dell'antigene delle cellule derivate da cultura eliminerebbe l'uso del bestiame nella produzione di vaccini. Maggiore conoscenza dei repertori antigene a. marginale e una migliore comprensione della bovina risposte immunitarie umorali e cellulari di a. marginale, combinati con le nuove tecnologie, dovrebbe contribuire allo sviluppo di vaccini più efficaci per il controllo e prevenzione dell'anaplasmosi.

Caratterizzazione Del Dominio Funzionale Della Proteina Di Superficie Principali 1a Coinvolto Nell'adesione Della Rickettsia Anaplasma Marginale a Cellule Ospiti

Veterinary Microbiology. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12458174

La proteina di superficie principali (MSP) 1a della specie tipo genere Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) è stato indicato per mediare adesione, infezione e trasmissione dell'organismo, nonché di contribuire alla immunità protettiva nei bovini. MSP1a contiene un numero variabile di peptidi tandemly ripetuti della regione amino-terminale, mentre il resto della proteina è altamente conservato tra gli isolati. Il numero di ripetizioni varia tra isolati geografici di a. marginale, ma è costante all'interno di un isolato ed è stato usato come un marcatore genetico stabile dell'identità isolare. Perché la sequenza di ripetizioni il tandem è la parte più variabile della proteina tra gli isolati, questa regione della proteina è più probabilità di essere coinvolti in adesione alle cellule ospiti, un prerequisito per l'infezione. Lo scopo di questo studio era quello di caratterizzare l'organizzazione e funzione del tandem MSP1a ripete di a. marginale in adesione alle cellule ospiti. Abbiamo dimostrato di utilizzo di proteine ricombinanti mutante che la regione tandemly ripetuta di MSP1a era necessario e sufficiente per mediare l'adesione del MSP1a delle cellule tick e eritrociti bovini. Peptidi sintetici che rappresentano le sequenze predominante di ripetizioni individuali sono stati testati per la loro capacità adesiva per Estratto delle cellule tick (TCE). Peptidi contenenti acido amino acidi, D o E alla posizione 20 associati al TCE, mentre peptidi con una G come l'aminoacido XX non erano adesivi al TCE. Anticorpi prodotti in conigli contro un sintetico ripetono peptide neutralizzato marginale a. infezione delle cellule coltivate tick, e la neutralizzazione osservata era simile a quella effettuata da anticorpi prodotti contro l'intera proteina ricombinante MSP1a. Analisi di peptidi MSP1a tandemly ripetute di diversi isolati geografici di a. marginale ha rivelato un rapporto complesso tra msp1alpha genotipo e fenotipo tick-trasmissibile di isolare e suggerito che la sequenza e la conformazione dei peptidi ripetuti influenzato le proprietà adesive di MSP1a. Questi studi hanno dimostrato che la regione tandemly ripetuta della proteina da intermediario la funzione adesiva di MSP1a.

Esclusione Di Infezione Dell'agente Patogeno Rickettsie Anaplasma Marginale Nel Vettore Zecca Dermacentor Variabilis

Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. Jan, 2003  |  Pubmed ID: 12522060

Anaplasma marginale è un patogeno da zecche, rickettsie bestiame che è endemico in molte aree degli Stati Uniti. Recenti studi (J. de la Fuente, J. C. Garcia-Garcia, E. F. Blouin, J. T. Saliki e K. M. Kocan, Clin. Diagn. Lab Immunol. 9:658-668, 2002) hanno dimostrato che l'infezione delle cellule coltivate tick ed eritrociti bovini con un genotipo di a. marginale esclusa infezione con altri genotipi, un fenomeno indicato come esclusione di infezione. Il presente studio è stato intrapreso per confermare il fenomeno dell'esclusione di infezione di genotipi a. marginale in un vettore di tick, Dermacentor variabilis. Solo un genotipo di a. marginale (isolato Virginia) è stato rilevato mediante PCR in segni di graduazione che alimentato in primo luogo su un polpaccio infettato da un isolato di Virginia e la seconda su un polpaccio infettato da un isolato di Oklahoma. Questi studi dimostrano che anche esclusione di infezione di genotipi a. marginale si verifica nelle zecche naturalmente infette, così come nei bovini e cellule coltivate tick e si traduce in creazione di un solo genotipo per tick.

Anticorpi Anti-Anaplasma Marginale Principali Proteine Della Superficie 1a E 1b Inibire Infettività Per Le Cellule Coltivate Tick

Veterinary Parasitology. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12531299

Maggiore superficie della proteina 1 (MSP1) del bestiame patogeno Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) è un complesso di due proteine, MSP1a e MSP1b. Precedenti studi hanno dimostrato che MSP1a e MSP1b sono adesine per eritrociti bovini, mentre solo MSP1a ha dimostrato di essere un adhesin per celle di tick. In questo studio, è stato utilizzato un sistema di coltura cellulare tick per la propagazione di a. marginale per sviluppare un saggio di inibizione infezione per testare la capacità degli antisieri per bloccare l'infezione di a. marginale per le cellule coltivate tick. Marginale a. derivato dalla coltura cellulare è stato incubato con diversi antisieri prima dell'inoculazione su monocellulari. I monostrati sono state raccolte 7 giorni post-inoculation e a. marginale nelle culture è stato quantificato mediante un rilevamento dell'antigene ELISA. Antisieri testati nel saggio di inibizione di infezione sono derivati da bestiame persistentemente infetti, da animali immunizzati con a. marginale purificato da eritrociti bovini e da conigli e bovini che sono stati immunizzati con il ricombinante MSP1a, MSP1b e MSP1 complesso. Anticorpi da bestiame persistentemente infettate con a. marginale, bovini vaccinati con a. marginale da eritrociti bovini o bestiame immunizzati con il MSP1 ricombinante complesso non inibisce l'infettività di a. marginale per le celle di tick. Antisiero da conigli immunizzati con MSP1a e MSP1b (singolarmente o in combinazione) ridotto di infezione di entrambi la Virginia e Oklahoma isolati di a. marginale per le celle tick da 25-70%. Similarmente, antisieri da bovini vaccinati con ricombinante MSP1a o MSP1b inibito infezione delle cellule tick 26-37%. Ulteriormente questi risultati confermano il ruolo delle proteine complesse MSP1 nell'infezione delle cellule di tick. Mancanza di inibizione dell'infezione da antisieri da naturalmente infetti bestiame o bestiame immunizzati con organismi tutto suggerisce che la risposta immunitaria bovina non è diretto verso blocco infezione di a. marginale per le celle tick e può contribuire al continuo infettività dell'agente patogeno per le zecche.

Identificazione Di Antigeni Protettivi Per Il Controllo Delle Infestazioni Scapularis Ixodes Tramite Immunizzazione Libreria Di CDNA Espressione

Vaccine. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12615446

Identificazione di antigeni che inducono una risposta immunitaria contro le infestazioni di zecche è necessaria per lo sviluppo di vaccini contro questi ectoparassiti economicamente importanti. Al fine di identificare gli antigeni protettivi, abbiamo costruito una biblioteca di espressione del cDNA da un continuo Ixodes scapularis cell line (IDE8) che fu inizialmente derivate da embrioni di tick. cloni di cDNA sono stati sottoposti a diversi cicli di screening in cui topi sono stati immunizzati con vasche singole e poi sfida-esposti permettendo larve scapularis I. per nutrirsi di topi immunizzati e controllo. Immunità contro infestazione di zecche è stata determinata dalla riduzione nella capacità delle larve a sfamare a sazietà e muta per lo stadio ninfale. Singoli cloni in piscine che induce immunità alle infestazioni larvale parzialmente sono stati sequenziati e raggruppati secondo la loro funzione di proteina putativa rispetto alle banche dati di sequenza. Lo screening identificati diversi antigeni singoli che induce una risposta immunitaria protettiva contro le infestazioni scapularis I.. I nostri studi hanno dimostrato per la prima volta che il cDNA espressione libreria l'immunizzazione (ELI) combinato con l'analisi di sequenza è uno strumento potente ed efficace per l'identificazione degli antigeni di candidato per l'uso di vaccini contro le zecche.

Co-Feeding Studi Di Zecche Infettate Con Anaplasma Marginale

Veterinary Parasitology. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12623209

Le zecche spesso cluster a preferito alimentazione siti host, e il co-feeding di zecche presso il sito stesso ha dimostrato di aumentare alimentazione successo e la trasmissione di alcuni agenti patogeni. Mentre l'itinerario principale dell'infezione di zecche con agenti patogeni è via le farine di sangue durante l'allattamento in un host di parasitemic, non-sistemico trasmissione di virus e spirochete ha dimostrato di verificarsi da infetto di zecche non infette presso siti di alimentazione comune su host non infetti. In questa ricerca, sono stati fatti due studi separati usando il patogeno rickettsie da zecche del bestiame, Anaplasma marginale. In uno studio da che abbiamo testato se marginale a. potrebbe essere trasmesso non sistemica infezione a non infetti Dermacentor variabilis maschi mentre co-feeding su conigli. Infezione di zecche è stata determinata da consentendo loro di trasmissione di alimentazione su bovini suscettibili e da studi di microscopia e sonda DNA sulle ghiandole salivari. Nel secondo studio, abbiamo testato se il co-feeding di zecche maschile e femmine su parasitemic bestiame aumenterebbe l'acquisizione e lo sviluppo di a. marginale nei maschi. Marginale a. infezioni delle ghiandole salivari sono state determinate mediante PCR quantitativa dopo le zecche sono stati ammessi alla trasmissione di alimentazione su bovini suscettibili. Trasmissione non-sistemico di a. marginale non si è verificato da zecche infettate e non infette che alimentato nello stesso sito su conigli e, pertanto, non sembrano essere un mezzo di trasmissione a. marginale. Marginale a. infezioni in zecche maschile non erano aumentate mentre co-feeding con le femmine. Così, co-feeding di adulti Dermacentor spp non sembra influenzare le dinamiche di trasmissione a. marginale.

I Progressi Nella Identificazione E Caratterizzazione Di Antigeni Protettivi Per Vaccini Ricombinanti Contro Le Infestazioni Di Zecche

Expert Review of Vaccines. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 14711342

Le zecche sono economicamente importanti ectoparassiti degli animali domestici e selvatici e sono considerate come seconda in tutto il mondo per le zanzare come vettori di agenti patogeni umani. Attuali metodi di controllo per le zecche, basate principalmente sull'uso di acaricidi, hanno avevano limitata efficacia nella riduzione delle infestazioni di zecche e l'uso di acaricidi è spesso accompagnata da gravi inconvenienti, tra cui la selezione delle zecche acaricida-resistente e la contaminazione ambientale. Lo sviluppo di vaccini migliorati contro le infestazioni di zecche offre un conveniente e l'ambiente sonora Metodo di controllo. Vaccini commerciali attualmente commercializzati per il controllo delle zecche di bestiame sono stati efficaci in studi sul campo quando utilizzati in concerto con le strategie di controllo integrato. Tuttavia, sono necessari nuovi antigeni per aumentare l'efficacia dei vaccini tick. Anche se un numero limitato di antigeni protettivi contro le infestazioni di zecche è stato identificato e caratterizzato, scoperta di nuovi antigeni rimane il passo limito per migliorare l'efficacia dei vaccini tick. Recenti tecnologie sviluppate per la scoperta del gene, tra cui espressione libreria immunizzazione e valutazione di tag expressed sequence, mostrano la promessa per lo screening rapido, sistematica e globale dell'antigene e dovrebbe fornire un approccio globale alla selezione del candidato antigeni del vaccino. Progettazione di vaccini tick futuro dovrebbe più tick specie bersaglio, così come interferire con la trasmissione di agenti patogeni.

Mappatura Di Epitopi B-cellula Nel N-terminale Ripetuto Peptidi Di Anaplasma Marginale Proteina Di Superficie Principali 1a E Caratterizzazione Della Risposta Immunitaria Umorale Di Bovini Vaccinati Con Antigeni Ricombinanti E Intero Organismo

Veterinary Immunology and Immunopathology. Apr, 2004  |  Pubmed ID: 15010223

Proteina di superficie principali (MSP) 1a della specie tipo genere Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) insieme a MSP1b forma il complesso MSP1. MSP1a ha dimostrato di essere coinvolto nell'adesione, di infezione e trasmissione tick di a. marginale, nonché a contribuire alla immunità protettiva nei bovini. Una risposta anticorpale differenziale a MSP1a e MSP1b è stata osservata nei bovini vaccinati con a. marginale derivato dagli eritrociti bovini (risposta anti-MSP1a) o coltivate cellule tick (risposta anti-MSP1b). In questo studio, abbiamo caratterizzato ulteriormente la risposta anticorpale MSP1a di bestiame utilizzando diversi immunogeni, compreso MSP1a ricombinante proteina (rMSP1a), eritrociti - o tick cella derivata cultura marginale a., o una combinazione di tick cell derivato da coltura marginale a. e rMSP1a. La risposta anticorpale MSP1a a tutti questi immunogeni era diretto principalmente contro la regione N-terminale di MSP1a che contiene peptidi tandemly ripetute, considerando che sono stati rilevati livelli di bassa anticorpi contro la porzione C-terminale. Epitopi lineare B-cellula di MSP1a sono stati mappati utilizzando peptidi sintetici che rappresenta l'intera sequenza della proteina che sono stati preparati da tecnologia di sintesi SPOT. Solo due peptidi in ripetizioni del N-terminale sono stati riconosciuti da sieri di animali immunizzati. Questi peptidi condiviso la sequenza SSAGGQQQESS, che è probabile che contengono l'epitopo lineare B-cellula che è stata riconosciuta dai pool di sieri bovini. Il differenziale medio di anticorpali contro MSP1a meno quelli contro MSP1b correlata con bassa percentuale riduzioni in PCV. Una risposta anticorpale preferenziale di MSP1a è stata osservata nei bovini vaccinati con derivati degli eritrociti, cellule derivate da cultura plus rMSP1a o rMSP1a da solo, e la riduzione percentuale PCV era significativamente più bassa in questi bovini rispetto agli altri gruppi di immunizzazione. Questi risultati permettono di percepire la risposta anticorpale bovina contro a. marginale e il ruolo di MSP1a nella protezione del bestiame contro l'infezione da a. marginale.

Espressione Differenziale Del Gene Msp1alpha Di Anaplasma Marginale Si Verifica Negli Eritrociti Bovini E Cellule Di Tick

Veterinary Microbiology. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 15036535

Principali proteine della superficie (MSP) 1a e 1b dell'agente patogeno da zecche Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) sono conservate su marginale a. derivata da bovini eritrociti e cellule tick. MSP1a e MSP1b formano il complesso MSP1 e adesine coinvolti nell'infezione delle cellule ospiti. Mentre entrambi MSP1a e MSP1b sono adesine per eritrociti bovini, solo MSP1a è un adhesin per celle di graduazione colto e nativo. Questi studi sono stati avviati perché risposte anticorpali per MSP1a e MSP1b differiscono nel bestiame immunizzati con ucciso marginale a. derivata da eritrociti bovini o cellule coltivate tick. Una risposta anticorpale forte a MSP1a è stata osservata nei bovini vaccinati con derivati degli eritrociti a. marginale, considerando che i bovini vaccinati con tick cellule derivate da cultura a. marginale prodotto anticorpi preferenzialmente a MSP1b. Le basi molecolari di questa risposta anticorpale differenziale quindi è stata studiata mediante Western blot, microscopia confocale e reverse transcriptase (RT)-PCR. Considerando che l'espressione di MSP1b da a. marginale derivato da cellule ospiti sia bovina e barrare la casella era simile a livello di RNA e proteine, espressione di MSP1a da a. marginale in queste cellule hanno differito da. Bassi livelli di MSP1a sono stati osservati in cellule coltivate tick e ghiandole salivari tick, ma alta espressione della MSP1a si è verificato su a. marginale derivato dagli eritrociti bovini. L'analisi dell'espressione del gene msp1alpha mediante RT-PCR suggerisce che l'espressione differenziale di MSP1a è regolato a livello trascrizionale e può influenzare l'infettività di a. marginale per cellule ospiti. Variazione nell'espressione di MSP1a può anche contribuire ai cambiamenti fenotipici e antigenici in agente patogeno.

Adesione Delle Proteine Della Membrana Esterna Contenente Ripetizioni Tandem Di Specie Anaplasma Ed Ehrlichia (Rickettsiales: Anaplasmataceae) Alle Cellule Di Tick

Veterinary Microbiology. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 15036540

Infezione delle cellule da rickettsiae da zecche sembra essere mediato da proteine della membrana esterna che permettono gli agenti patogeni di aderire alle cellule ospiti. 1A proteina di superficie principali (MSP) di Anaplasma marginale, la specie tipo del genere Anaplasma, è stato illustrato in precedenza per essere un adhesin per celle di tick. Il marginale a. MSP1a ha un numero variabile di ripetizioni dell'amminoacido tandem 28 o 29 che si trova nella regione terminale amminico della proteina che contiene un dominio di adesione che è necessario e sufficiente per l'infezione delle cellule di tick. Gli studi MSP1a hanno dimostrato l'importanza di combinare le caratteristiche strutturali e funzionali per l'identificazione di proteine adesive. Nel presente studio ripetizioni in tandem contenente altre proteine della membrana esterna sono stati selezionati da organismi della famiglia Anaplasmataceae e studiati per le loro proprietà adesive a celle di tick. Le caratteristiche della proteina e le proprietà adesive sono stati poi analizzate al fine di fornire un predittore della funzione di adesione di proteine identificate da sequenze di genoma. Proteine selezionate includevano il marginale a. MSP1a, a. phagocytophilum 100 e 130 kDa, Ehrlichia chaffeensis 120 kDa, E. canis 140 kDa ed E. Cowdria "mucina", che erano tutti clonato ed espresso in Escherichia coli e poi testato come adesine per IDE8 cellule coltivate. Delle proteine studiate, il marginale a. MSP1a e il E. Cowdria "mucina" sono stati trovati per essere adesine per celle di tick. Anche se erano tutti di queste proteine della membrana esterna ricombinante glicosilata, marginale a. MSP1a ed E. Cowdria "mucina" adesine condiviso si ripete una caratteristica comune di avere un alto contenuto di Ser/Thr in tandem. I risultati riportati qui forniscono nuove informazioni sul ruolo di E. Cowdria "mucina" come un adhesin per tick celle e suggeriscono anche un ruolo di glicani in adhesin molecole.

Glycosylation Di Anaplasma Marginale Proteina Di Superficie Principali 1a E Del Suo Ruolo Putativo in Adesione Alle Cellule Di Tick

Infection and Immunity. May, 2004  |  Pubmed ID: 15102815

Anaplasma marginale, l'agente eziologico dell'anaplasmosi bovina, è un patogeno rickettsie da zecche del bestiame che moltiplica negli eritrociti e cellule di tick. Proteina di superficie principali 1a (MSP1a) e MSP1b formano il complesso MSP1 di a. marginale, che è coinvolto nell'adesione del patogeno in cellule ospiti. In questo studio abbiamo testato l'ipotesi che MSP1a e MSP1b sono state glicosilate, perché i pesi molecolari osservati di entrambe le proteine sono state maggiori di masse molecolari dedotta. Ulteriormente, abbiamo ipotizzato che la glicosilazione delle MSP1a svolge un ruolo nell'adesione di a. marginale a cellule tick. Nativo ed Escherichia coli-derivati MSP1a e MSP1b proteine ricombinanti sono state mostrate mediante gascromatografia per essere glicosilate e contengono zuccheri neutri. Glycosylation di MSP1a apparso essere principalmente O legato a residui di Ser/Thr nel N-terminale ripetuto peptidi. Glicosilazione può svolgere un ruolo nell'adesione di a. marginale a cellule tick perché deglycosylation chimica di MSP1a ha ridotto significativamente le proprietà adesive. Anche se la spina dorsale del polipeptide MSP1a da solo è stato aderente alla graduazione cell extract, glicani in ripetizioni del N-terminale sembravano migliorare associazione e possono interagire in modo cooperativo con uno o più molecole di superficie su ospitano celle. Questi risultati hanno dimostrato che MSP1a e MSP1b sono glicosilate e suggeriscono che la glicosilazione delle MSP1a svolge un ruolo nell'adesione di a. marginale alle cellule di tick.

Diversità Genetica E Filogenesi Molecolare Degli Isolati Di Anaplasma Marginale Da Minas Gerais, Brasile

Veterinary Parasitology. May, 2004  |  Pubmed ID: 15135871

Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), un agente patogeno da zecche del bestiame, è endemica nelle regioni tropicali e subtropicali del mondo, e molti degli isolati di a. marginale possono verificarsi in una data area geografica. Relazioni filogenetiche sono stati segnalati per a. marginale isolati dagli Stati Uniti utilizzando sequenze di gene e della proteina di MSP1a e msp4. Questi studi hanno dimostrato che sequenze di msp4, ma non MSP1a DNA o sequenze proteiche, forniscono informazioni phylogeographic e anche che le sequenze MSP1a sono altamente eterogenei tra popolazioni a. marginale. Tuttavia, poche informazioni sono disponibili sulla diversità genetica di a. marginale isolati da altre regioni del mondo. Il presente studio è stato intrapreso per esaminare la variazione genetica fra 10 isolati di a. marginale, ottenuti da bovini infetti in stato di Minas Gerais, in Brasile, dove a. marginale è endemica. Neighbor-adesione analisi delle sequenze msp4 del brasiliano e il nuovo mondo di isolati di a. marginale da Argentina, Messico e Stati Uniti fornivano supporto bootstrap per un clade di latino-americano. Le sequenze delle ripetizioni MSP1a di quattro isolati brasiliani di a. marginale sono state confrontate alle sequenze di isolati in America Latina e Stati Uniti. Il MSP1a ripetute sequenze di latino-americano isolati di a. marginale avevano nove forme ripetute alpha-phi, che non sono state segnalate precedentemente in North americani isolati di a. marginale. Inoltre, il tau forme ripetute, sigma e mu erano solo presenti negli isolati di brasiliani. I risultati hanno dimostrato che l'eterogeneità genetica osservata tra gli isolati di a. marginale è comune nelle aree endemiche, indipendente del vettore tick predominante ed è coerente con gli studi precedenti in cui msp4 fornito phylogeographic informazioni su a. marginale isolati, mentre MSP1a è stato trovato non deve per essere un utile marker per phylogeographic caratterizzazione degli isolati a. marginale.

Anaplasma Infezione in Stray Iberico Cervo Nella Regione Di Castilla-La Mancha, Spagna

Veterinary Microbiology. Jun, 2004  |  Pubmed ID: 15145495

Gli organismi del genere Anaplasma sono obligati patogeni intracellulari che si moltiplicano in ospiti vertebrati e invertebrati. La specie tipo, Anaplasma marginale, provoca anaplasmosi bovina e infetta eritrociti dell'ospite vertebrato e subisce un complesso ciclo dello sviluppo in segni di graduazione che fungono da vettori biologici. Bovini infetti, i ruminanti selvatici e zecche possono servire come serbatoi di a. marginale. In questo studio, cacciatore ucciso iberica cervo (Cervus elaphus hispanicus) della regione di Castiglia-La Mancia, nella Spagna sud-occidentale sono stati testati per Anaplasma infezione. Abbiamo scoperto che il 10% dei cervi esaminati erano sieropositivi per Anaplasma. Tre ceppi marginale a. successivamente sono stati ottenuti da salivary glands di Hyalomma marginatum che sono stati rimossi da questi cervi e la sequenza della proteina di superficie principale (msp) 4 gene è stato determinato per ogni ceppo e utilizzati per studi filogenetici. Analisi di massima parsimonia delle sequenze msp4 da zecche marginato H. rispetto al nuovo mondo bovini e bison isolati riportati in precedenza, suggeriti diverse origini per questi ceppi marginale A. spagnolo. I risultati di questo studio hanno dimostrato iberici i cervi rossi sono naturalmente infetti con Anaplasma che possono quindi servire come riserva della fauna selvatica dell'agente patogeno. Anche se non è stato stabilito il legame tra infezione da cervi e i ceppi di a. marginale identificato in segni di graduazione, H. marginato e Rhipicephalus bursa sono stati identificati come potenziali vettori biologici per a. marginale in questa regione e possono influenzare la trasmissione di a. marginale tra le popolazioni di cervi e bovini.

Concomitanti Infezioni Con Patogeni Vettoriale Associati Con L'anemia Emolitica Fatale in Una Mandria Di Bovini in Svizzera

Journal of Clinical Microbiology. Aug, 2004  |  Pubmed ID: 15297529

Anaplasmosi bovina sono una malattia vettoriali che si traduce in notevoli perdite economiche in altre parti del mondo, ma non così lontano nel nord Europa. Nell'agosto del 2002, un focolaio di malattia fatale è stato segnalato in una mandria lattiera grande nel cantone svizzero dei Grigioni. Animali malati sperimentato febbre, anoressia, agalassia e la depressione. Anemia, infestazione ectoparassita, e, occasionalmente, sono stati osservati emoglobinuria. Per determinare i ruoli del vettore di patogeni e di caratterizzare la malattia, i campioni di sangue sono stati raccolti da tutti gli 286 animali: il 50% delle mucche erano anemici. Dopo un esame microscopico dei globuli rossi, Anaplasma marginale inclusione corpi sono stati trovati nel 47% delle mucche. L'infezione è stata confermata sierologicamente e dai metodi molecolari. È interessante notare, abbiamo anche trovato prove di infezioni con Anaplasma phagocytophilum, grande Babesia e Theileria spp. e Mycoplasma wenyonii. Le ultime due specie non erano stato precedentemente descritte in Svizzera. L'anemia è stata significativamente associata con la presenza di agenti infettivi rilevato, con l'eccezione di a. phagocytophilum. Notevolmente, infezioni concomitanti con fino a cinque agenti infettivi vettoriali sono state rilevate nel 90% degli animali malati testati con PCR. Abbiamo concluso che marginale a. è stata la causa principale dell'anemia emolitica, mentre hepatitides con altri agenti aggravato la malattia. Questo è stato il primo focolaio di malattia grave associato alle infezioni concomitanti con vettore di patogeni in Svizzera alpina; esso fu presumibilmente ridotta dall'abbattimento dell'intera mandria. Rimane essere visto se simili focolai della malattia dovrà essere anticipato in Nord Europa nel futuro.

Identificazione Di Un Romanzo Anaplasma Marginale Appendice-associated Protein Che Localizza Con Filamenti Di Actina Durante L'infezione Intraerythrocytic

Infection and Immunity. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15557651

L'agente patogeno rickettsie Anaplasma marginale assembla un fascio di filamenti di actina durante l'infezione intracellulare. A differenza di altri agenti patogeni batterici che generano code di filamenti di actina, a. marginale infetta eritrociti maturi e le appendici di F-Actina sono montate sulla superficie citoplasmatica di un vacuolo contenente diversi organismi. Per identificare le molecole a. marginale associati a questi filamenti, sono stati utilizzati due approcci complementari: matrix-assisted laser desorption ionizzazione-tempo-di-volo spettrometria totale e spettrometria di massa tandem di a. marginale proteine identificate con un'appendice specifiche monoclonal Anticorpo espressione screening e di una libreria dei fagi a. marginale. Aminoacido e sequenze nucleotidiche sono stati mappati ad un gene full-length del genoma del ceppo St Maries di a. marginale; la corretta identificazione è stata confermata da espressione di proteine ricombinanti full-length e sua reattività con gli anticorpi specifici di appendice. È interessante notare, è contrassegnato variazione nelle capacità dei ceppi diversi a. marginale per assemblare le appendici di F-actina. Confronto dei ceppi di quattro ceppi, Florida, Illinois, St Maries e Virginia, ha rivelato notevole polimorfismo del gene che codifica per la proteina associata in appendice, con identità di sequenza dell'amminoacido del 34% tra i ceppi più basso. Tuttavia, questa variazione non sottostanno le differenze nell'espressione, come non non c'è nessun specifico polimorfismo associato con perdita della capacità di montare appendici di actina. Al contrario, la capacità di montare un fascio di filamenti di actina riflesso drammatiche ceppo-specifiche differenze nel livello di espressione delle proteine associate all'appendice. Capire come questa proteina influenza il ciclo di invasione, replica e l'uscita nella cellula ospite può fornire nuove intuizioni interazioni ospite-patogeno.

Recenti Studi Sulla Caratterizzazione Di Anaplasma Marginale Isolato Dal North American Bison

Annals of the New York Academy of Sciences. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15604478

Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), un agente patogeno da zecche del bestiame, è endemica nelle regioni tropicali e subtropicali del mondo. Molti isolati geografici di a. marginale si verificano in tutto il mondo, che sono stati identificati da 1a proteina di superficie principali (MSP), che varia in sequenza e peso molecolare a causa di diversi numeri di tandem 28-29 amino acido si ripete. Anche se i test sierologici hanno identificato il bisonte americano, Bison bison, come essere infettati con a. marginale, gli studi presenti sono stati intrapresi per confermare l'infezione a. marginale in bisonte, per caratterizzare il bisonte isolati e di confrontare la relazione filogenetica degli isolati di bisonte con altri isolati a. marginale dal Nord America. Nove isolati a. marginale derivati dalla canadese bisonte posseduto msp4 identiche sequenze con il cambiamento di un nucleotide silenzioso caratteristico. La sequenza di MSP1a è stata determinata per una canadese e due isolati di bisonte americano di a. marginale, e questi isolati contenevano ripetizioni tandem 4 e 5, rispettivamente. Un bisonte americano isolare testato per infettività si rivelò infettiva per i bovini e trasmessa da Dermacentor variabilis zecche. i risultati di questo studio hanno dimostrato che questi isolati a. marginale ottenuti da bisonte erano simili a quelli derivati da bestiame infetti naturalmente.

Caratterizzazione Della Diversità Genetica in Dermacentor Andersoni (Acari: Ixodidae) Con Polimorfismo Di Dimensione E Peso Di Corpo

Experimental Parasitology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15639135

Morfologiche e discrete differenze genetiche si trovano tra le popolazioni geograficamente isolate, allopatrico, barrare. Tuttavia, abbiamo trovato differenze nella graduazione simpatrica popolazioni. Le differenze notevoli sono state trovate nella dimensione corporea e peso di Dermacentor andersoni raccolti da una singola posizione in Montana, USA. Queste zecche sono state separate in gruppi costituiti da grandi (B) e piccoli (S) gli individui. Gli obiettivi di questo studio sono stati: (a) per caratterizzare la diversità genetica in individui andersoni B e D. S, (b) per valutare la trasmissibilità del carattere associato alla dimensione corporea e peso e (c) per correlare differenze morfologiche con biologici, fisiologici e le caratteristiche comportamentali. Abbiamo trovato ampia variazione genetica in 16S rDNA e ITS2 loci in B e S zecche e dimostrato differenziazione genetica tra individui B e S. Forniamo inoltre alcuni supporto per trasmissione mendeliana autosomica dominante di caratteri associati a peso e dimensioni del corpo di tick. I risultati riportati nel presente documento Visualizza che B le zecche hanno un migliore successo riproduttivo rispetto S zecche e suggeriscono parziale isolamento riproduttivo delle zecche S.

Confronto Dei Tre Regimi Di Ossitetraciclina Per Il Trattamento Di Infezioni Persistenti Anaplasma Marginale Bovini Da Carne

Veterinary Parasitology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15675047

Anaplasmosi, causata dalla rickettsia da zecche, Anaplasma marginale, sono una malattia economicamente importante del bestiame negli Stati Uniti e in tutto il mondo. Bestiame che recupero dall'infezione acuta diventano vettori cui al quale basso o microscopicamente rilevabili A. marginale rickettsemia persiste. Antibiotici tetraciclina sono attualmente l'unico farmaco utilizzato negli Stati Uniti per il trattamento dell'anaplasmosi acuta. Attualmente non esistono farmaci specificamente concesso in licenza per l'eliminazione delle infezioni persistenti. Questo studio ha testato l'efficacia di tre regimi di trattamento di ossitetraciclina per cancellare a. marginale da bovini che sono stati infettati con insistenza. Quaranta Angus x manzi Simmental, età 6-12 mesi sono stati infettati sperimentalmente con a. marginale. Dopo i manzi recuperato da infezione acuta sierologicamente e sono stati confermati infetti mediante nested PCR seguita da ibridazione DNA, lo status di elemento portante di ogni animale è stato accertato dal sub-inoculation di sangue in un vitello Holstein separato, splenectomized. I manzi sono stati poi bloccati dal peso corporeo e assegnati in modo casuale come segue a quattro gruppi di trattamento: trattamento A, 300 mg/ml di soluzione di ossitetraciclina (Tetradure LA-300, Merial Canada Inc) somministrato a 30 mg/kg, per iniezione intramuscolare (i.m.) il giorno 0; Trattamento B, la stessa soluzione di 300 mg/ml di ossitetraciclina somministrato a 30 mg/kg, i.m. giorno 0 e di nuovo il giorno 5; Trattamento C, 200 mg/ml di soluzione di ossitetraciclina (Liquamycin LA-200, Pfizer Animal Health) somministrato a 22 mg/kg, per via endovenosa (i.v.), q 24 h per 5 giorni (una dose di trattamento che corrisponde con le raccomandazioni correnti Ufficio internazionale delle epizoozie (UIE) per esportare prima del trattamento). Il quarto gruppo consisteva di bestiame di controllo non trattato infetti. Tutti i manzi erano ancora nested PCR e competitivo positivo a 60 giorni dopo il trattamento. Infezione è stata confermata da subinoculation di sangue in un vitello Holstein splenectomized. Questi risultati hanno dimostrato che i regimi di trattamento testato non è riuscito a cancellare marginale a. infezioni in cattle carrier.

Analisi Di Sequenza Del Gene Msp4 Di Anaplasma Phagocytophilum Ceppi

Journal of Clinical Microbiology. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15750101

L'agente eziologico dell'Ehrlichiosi granulocitica umana è stata recentemente riclassificata come Anaplasma phagocytophilum, unificando precedentemente descritti batteri che causano la malattia in esseri umani, cavalli, cani e ruminanti. Per la caratterizzazione di eterogeneità genetica di questa specie, è stato identificato l'omologo del gene di Anaplasma marginale maggiore superficie proteina 4 (msp4), e la regione codificante era PCR amplificati e sequenziato da una varietà di fonti, tra cui 50 campioni provenienti da Stati Uniti, Germania, Polonia, Norvegia, Italia e Svizzera e 4 campioni di a. phagocytophilum-come organismi ottenuti da cervo dalla coda bianca negli Stati Uniti. Variazione di sequenza tra ceppi di a. phagocytophilum (90-100% identità a livello del nucleotide) e la somiglianza di 92 al 100% a livello di proteine è stato superiore in a. marginale. Analisi filogenetiche delle sequenze di msp4 non hanno fornito informazioni phylogeographic ma differenziare ceppi di a. phagocytophilum ottenuti da ruminanti da quelli ottenuti da esseri umani, cani e cavalli. L'analisi di sequenza del gene scoperto recentemente a. phagocytophilum msp2 confermato questi risultati. I risultati qui riportati suggeriscono che sebbene a. phagocytophilum-come gli organismi da cervo dalla coda bianca possono essere strettamente correlati a. phagocytophilum, potrebbero essere più diversi. Questi risultati suggeriscono che i ceppi di a. phagocytophilum da ruminanti potrebbero condividere alcune caratteristiche comuni, tra cui serbatoi e patogenicità, che può essere diversa da ceppi che infettano gli esseri umani.

Profilo Di Espressione Genica Delle Cellule Promielocitica Umana in Risposta All'infezione Con Anaplasma Phagocytophilum

Cellular Microbiology. Apr, 2005  |  Pubmed ID: 15760455

Anaplasma phagocytophilum (Rickettsiales: Anaplasmataceae) provoca anaplasmosi granulocitica umana, equina e canino e febbre da zecche dei ruminanti. La rickettsia parassita granulociti e cellule progenitrici del midollo osseo e può essere propagato in promielocitica umana e linee cellulari di tick. In questo studio, microarrays di polynucleotides sintetici di 21.329 geni umani sono stati utilizzati per identificare geni differenzialmente espressi nelle cellule umane promielocitica HL-60 in risposta all'infezione con a. phagocytophilum. Semiquantitativa trascrizione d'inversione PCR (RT-PCR) dei geni selezionati hanno confermato i risultati dell'analisi di microarray. Sei geni nelle cellule a. phagocytophilum-infettati sono stati trovati per essere sovraregolati maggiore di 30-fold, mentre espressione di geni downregolata più spesso non cambia più di sixfold. Geni che sono stati trovati differenzialmente essere regolamentato cellule infette erano quelli essenziali per meccanismi cellulari tra cui la crescita e la differenziazione, cella trasporto, segnalazione e comunicazione e risposta protettiva contro le infezioni, alcune delle quali sono necessarie più probabile per l'infezione e moltiplicazione di a. phagocytophilum nelle cellule ospiti. I geni differenzialmente descritti forniscono nuove informazioni sul gene profili di espressione in a. phagocytophilum-HL-60 cellule infette, ampliando così in maniera globale le informazioni esistenti sulla risposta delle cellule di mammiferi di a. phagocytophilum infezione.

Sieroprevalenza Dell'anaplasmosi Tra Bovini in Svizzera Nel 1998 E Nel 2003: Nessuna Evidenza Di Una Malattia Emergente

Veterinary Microbiology. Apr, 2005  |  Pubmed ID: 15795079

Anaplasma marginale infezione in Europa è stato limitato ai paesi mediterranei e orientali, in Austria e in casi molto sporadici in Svizzera. Ci sono segnalazioni di sua presenza nei paesi a nord della Svizzera. Una grave epidemia di anaplasmosi nell'agosto del 2002 in un allevamento di bestiame nel canton Grigioni, in Svizzera, a nord delle Alpi, con più di 300 bovini che hanno dovuto essere abbattuti, giunse inaspettato e ha dato ragione a ipotizzare la presenza di un aumento ancora inosservato prevalenza di a. marginale in Svizzera. Campioni di siero bovino selezionato casualmente raccolti nel 1998 e nel 2003 sono stati testati utilizzando un competitivo ELISA inibitorio (competitivo) per testare l'ipotesi. Nostra convalida la sensibilità diagnostica e specificità di questo test, fatto nella mandria scoppio, ceduto 99,2 e 83,3%, rispettivamente, probabilmente sottovalutando la vera specificità. Il vera sieroprevalenza dell'anaplasmosi nei bovini svizzeri determinati da competitivo era probabilmente a zero con limiti di confidenza 95% superiore di 2,49% nel cantone dei Grigioni e 1,17% nel resto della Svizzera, rispettivamente, nel 1998. Per il 2003, queste stime sono stati addirittura inferiori. Non non c'era alcuna differenza significativa nella prevalenza apparente tra il 1998 e il 2003. In cerca di un possibile serbatoio, tre camosci fuori 46 gratis che vanno dal parco nazionale svizzero, Grigioni, i ruminanti selvatici risultati positivi nel competitivo. Questa reazione è conforme a. marginale o un agente cross reagire come Anaplasma ovis. Dai nostri risultati possiamo concludere che l'ipotesi di un aumento della prevalenza dell'anaplasmosi nei bovini in Svizzera deve essere respinto.

Screening Di Interferenza RNA in Segni Di Graduazione Per L'identificazione Di Antigeni Protettivi

Parasitology Research. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15824899

Le zecche sono ectoparassiti di selvatici e gli animali domestici e gli esseri umani e sono considerate più importante artropodo vettore di agenti patogeni in Nord America. Lo sviluppo di vaccini diretti contro le proteine tick può effetto riduzione delle infestazioni di zecche e la trasmissione di agenti patogeni da zecche. Il passo limito per lo sviluppo di vaccini tick è stata l'identificazione di antigeni protettivi tick. Vaccinologia inversa approcci volti a ridurre la sperimentazione animale, consentendo per lo screening rapido di piscine di potenziali candidati vaccinali di tick faciliterebbe notevolmente progressi verso lo sviluppo di vaccini tick. Qui, descriviamo la proiezione dei cDNAs scapularis Ixodes per l'identificazione di antigeni protettivi tick tramite interferenza del RNA (RNAi). I risultati dello screening RNAi erano simili a quelli ottenuti in precedenza tramite immunizzazione libreria espressione e ha dimostrato che la RNAi potrebbe servire come uno strumento più rapido e conveniente per la scoperta di antigene di vaccino in zecche e in altri organismi nonmodel.

BptA (bbe16) è Essenziale Per La Persistenza Della Malattia Di Lyme Spirochete, Borrelia Burgdorferi, Nel Suo Vettore Naturale Tick

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. May, 2005  |  Pubmed ID: 15860579

Borrelia burgdorferi (Bb), l'agente della malattia di Lyme, è un batterio spirochete zoonotico che dipende da artropodi (zecche Ixodes) e mammiferi (roditori) ospita per la sua persistenza in natura. La ricerca per identificare borrelial geni responsabili di questi due diversi host dipendenza dal parassita di Bb è stata ostacolata da limiti nella capacità di manipolare geneticamente ceppi virulenti di Bb. Nonostante questo vincolo, riportiamo qui l'inattivazione e complementazione genetica del gene lineare codificato del plasmide-25 (bbe16) per valutare il suo ruolo nella virulenza, la patogenesi e la sopravvivenza di Bb durante il suo ciclo di vita naturale. bbe16 è stato trovato a potenziare la virulenza di Bb nel modello murino della borreliosi di Lyme e fu essenziale per la persistenza di Bb in Ixodes scapularis zecche. Come tale, abbiamo rinominato bbe16 un gene codifica borrelial persistenza nelle zecche (bpt) A. Anche se gli esperimenti di accessibilità proteasi suggerito che BptA come una lipoproteina putativo è superficie esposti sulla membrana esterna di Bb, i meccanismi molecolari comprendono che BptA favorisce la persistenza Bb all'interno del relativo vettore tick rimane per essere chiarita. BptA inoltre è stato indicato per essere altamente conservata (> 88% somiglianza e > 74% identità ai livelli dedotta dell'amminoacido) in tutti i Bb sensu lato ceppi testati, suggerendo che BptA può essere usato da spirochete borreliosi di Lyme per persistenza in natura. Data di Bb dipendenza assoluta e associazione intima con sue schiere degli artropodi e dei mammiferi, BptA dovrebbe essere considerato un fattore di virulenza critico per la strategia complessiva parassita di Bb.

Caratterizzazione Di Tre Ixodes Scapularis CDNAs Protettivo Contro Le Infestazioni Di Zecche

Vaccine. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 16005748

immunizzazione di libreria espressione del cDNA (ELI) e l'analisi dei tag sequenziata espressa (EST) in un modello murino di infestazioni di zecche è stato utilizzato identificati cloni di cDNA che colpite I. scapularis. Tre antigeni protettivi contro le infestazioni larvali tick, 4F8, con omologia di un nucleotidasi e 4 8 e 4E6 della funzione sconosciuta, sono stati selezionati per ulteriore caratterizzazione. Tutti e tre gli antigeni sono stati espressi in tutte le fasi di scapularis I. e localizzati nei tessuti adulti tick. 4 D 8 è stato indicato per essere conservati in altre sei specie di zecche. Basata su prove di immunizzazione con polipeptidi sintetici contro le larve e le ninfe e su esperimenti di alimentazione artificiali degli adulti, questi antigeni, specialmente 4 8, sembrano essere buoni candidati per il costante sviluppo di un vaccino per il controllo delle infestazioni di zecche e possono essere utili in una formulazione di più specie di zecche.

Caratterizzazione Sierologica E Molecolare Dell'infezione Specie Anaplasma in Animali Da Fattoria E Zecche Dalla Sicilia

Veterinary Parasitology. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16043300

Sebbene Anaplasma marginale è stato conosciuto per essere endemica in Italia, la diversità di Anaplasma spp da quest'area non sono state caratterizzate. In questo studio, la prevalenza degli anticorpi spp. Anaplasma in animali da allevamento selezionato casualmente raccolti sull'isola di Sicilia è stata determinata dall'uso di un competitivo MSP5 per Anaplasma spp. e un test di immunofluorescenza specifico per Anaplasma phagocytophilum. Variazione genetica tra ceppi di Anaplasma spp da animali e da zecche è stato caratterizzato tramite la msp1alpha a. marginale e i geni di msp4 Anaplasma spp.. Otto specie di zecche sono stati raccolti e testati con PCR. Sieropositività per Anaplasma spp. e a. phagocytophilum è stato rilevato nei campioni di bovini e ovini. Tutti gli asini erano sieropositivi per a. phagocytophilum, ma non per Anaplasma spp. Quattro genotipi di a. marginale sono stati identificati dalle sequenze di msp4 da campioni di bovini e tick. Due nuovi genotipi di Anaplasma ovis sono state caratterizzate negli ovini. Le sequenze di a. phagocytophilum da tre asini ha dimostrato di essere identici alla sequenza della MRK equina isolare dalla California. Sei genotipi a. marginale sono stati trovati nei bovini e un tick utilizzando le sequenze di msp1alpha a. marginale. Tutti i genotipi avevano quattro sequenze ripetute nella porzione N-terminale del MSP1a, ad eccezione di uno che aveva cinque ripetizioni. I ceppi italiani di a. marginale contenevano tre sequenze ripetute che non sono stati segnalati in precedenza. Definizione della diversità di Anaplasma spp in Sicilia ha riferito, nel presente documento è fondamentale per lo sviluppo di strategie di controllo per a. marginale, a. ovis e a. phagocytophilum in Sicilia.

Vaccinazione Con Antigeni Ricombinanti Tick Per Il Controllo Di Ixodes Scapularis Adulti Infestazioni

Vaccine. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16153760

Gli antigeni protettivi contro le infestazioni scapularis Ixodes sono stati identificati da cDNA espressione libreria immunizzazione (ELI) e analisi dei tag sequenziata espressa (EST). Tre cDNAs protettivo contro le infestazioni larvali tick, 4F8, con omologia di un nucleotidasi e 4 8 e 4E6 della funzione sconosciuta, erano caratterizzati e ottenuto come proteine ricombinanti per studi di immunizzazione. Prove di vaccinazione con proteine ricombinanti hanno dimostrato un effetto di questi antigeni contro larve scapularis I. in un modello del mouse. Nel presente documento, abbiamo valutato l'effetto di antigeni ricombinanti su I. scapularis adulti infestazioni su pecore immunizzate. Vaccinazione con ricombinante 4 8, 4F8, 4E6 e la combinazione di tutti e tre gli antigeni ridotte infestazioni di zecche adulte 58, 12, 20 e 16%, rispettivamente, quando rispetto al gruppo di controllo, ma è stato statisticamente significativo per 4 8 e 4F8 solo. Deposizione delle uova è stato ridotto da 22-49% in tutti i gruppi immunizzati con antigeni ricombinanti tick (P < 0,05). L'efficacia complessiva delle formulazioni di vaccino considerando l'effetto sulla graduazione infestazioni e deposizione delle uova in media 33-71%. Questi antigeni e soprattutto 4 8, sembrano essere buoni candidati per il costante sviluppo di un vaccino per il controllo delle infestazioni di zecche.

Diversità Genetica Di Anaplasma Specie Principali Proteine Superficiali E Le Implicazioni Per Lo Sviluppo Di Test E Vaccino Anaplasmosi

Animal Health Research Reviews / Conference of Research Workers in Animal Diseases. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 16164010

Il genere Anaplasma (Rickettsiales: Anaplasmataceae) comprende diversi agenti patogeni di importanza medica veterinaria e umana. La comprensione della diversità di Anaplasma principali proteine della superficie (MSPs), compresi quelli MSPs che modulano l'infezione, lo sviluppo di infezioni persistenti e la trasmissione di agenti patogeni da zecche, è derivata in parte, di caratterizzazione e analisi filogenetiche dei ceppi geografici. Informazioni riguardanti la diversità genetica di Anaplasma spp MSPs probabilmente influenzeranno lo sviluppo del vaccino strategie per il controllo dell'anaplasmosi e dosaggi serodiagnostic.

Tubo Capillare Sistema Per Lo Studio Delle Interazioni Patogeno Tick Di Dermacentor Variabilis Di Alimentazione (Acari: Ixodidae) E Anaplasma Marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae)

Journal of Medical Entomology. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16366000

Un tubo capillare (CTF) sistema di alimentazione è stato adattato per studiare l'interazione tra Dermacentor variabilis (diciamo) e il bestiame rickettsie patogeno Anaplasma marginale Theiler. A. marginale subisce un complesso ciclo di sviluppo in segni di graduazione che inizia nell'intestino medio e termina con la trasmissione da ghiandole salivari. In questo sistema CTF, maschio d. variabilis erano alimentati a sangue infetto marginale o tick celle coltivate. Le zecche che si nutriva altamente rickettsemic vitelli sviluppato infezioni intestino e delle ghiandole salivari come rilevato mediante PCR, mentre le zecche che sono state alimentate da tubi capillari sul sangue stesso sviluppato solo le infezioni intestino. Un risultato imprevisto del tubo capillare di alimentazione era che gli anticorpi contro l'adhesin marginale a., la principale proteina di superficie, enhanced infezioni intestino e causato cellula derivata da cultura a. marginale infettare intestino medio. Un altro risultato inaspettato è stato l'infezione dell'intestino medio del nonvector zecca Amblyomma americanum (L.), dopo il tubo capillare, nutrendosi di sangue bovino infetto. La risposta di cella budello di segni di graduazione a. marginale, come determinato da profili di SDS-poliacrilammide gel elettroforesi proteica, non differiscono quando le zecche sono state alimentate le cellule infette o non infette da tubi capillari. Bande di proteine selezionate, come identificato dalla spettrometria di massa digestione trittica, contenevano principalmente le proteine di origine bovina, albumina, emoglobina catena alfa e beta non digerito e frammenti di emoglobina. Anche se l'infezione di zecche dal sistema CTF a. marginale non era lo stesso come infezione da alimentazione di bovini, i risultati ottenuti hanno dimostrato il potenziale utilizzo di questo sistema per l'identificazione di aspetti delle interazioni agente patogeno-vettore che non sono prontamente riconosciute nell'alimentazione naturalmente le zecche.

Potenziali Ospiti Serbatoio Vertebrati E Invertebrati Vettori Di Anaplasma Marginale E A. Phagocytophilum Nella Spagna Centrale

Vector Borne and Zoonotic Diseases (Larchmont, N.Y.). 2005  |  Pubmed ID: 16417435

Gli organismi del genere Anaplasma sono obligati patogeni intracellulari che si moltiplicano in ospiti vertebrati e invertebrati. La specie tipo, a. marginale, provoca anaplasmosi bovina e infetta solo zecche e ruminanti. A. phagocytophilum provoca anaplasmosi granulocitica umana e animale, e ceppi geneticamente strettamente correlati mostrano un'ampia gamma, tra cui zecche, ruminanti, roditori, equidi, canidi, gli uccelli e gli esseri umani. Rapporti recenti hanno dimostrato che marginale a. e a. phagocytophilum coesistere in aree geografiche e che le infezioni concomitanti si verificano nei ruminanti e le zecche. In questo studio, abbiamo caratterizzato marginale a. e a. phagocytophilum infezioni in natura e gli animali domestici, e zecche raccolte in Spagna centrale da sierologia, PCR e sequenza del 16S genotipi rRNA. Specie testate inclusi gli esseri umani, bovini, cani, roditori, iberico cervo rosso, cinghiale europeo, uccelli e zecche. Specie di Ditteri sono stati analizzati come potenziali vettori meccanici di Anaplasma spp. a. marginale ematofagi è stato rilevato nei tabanidi, zecche, bestiame e cervi, mentre a. phagocytophilum è stato rilevato in zecche, cervi, bovini e uccelli. Infezioni concomitanti dell'Anaplasma due trovate nei bovini e cervi. Questi risultati illustrano la complessità dell'epidemiologia della marginale a. e a. phagocytophilum nelle regioni dove entrambi gli agenti patogeni coesistono e condividono comuni serbatoio host e vettori. Il crescente contatto tra animali selvatici, animali domestici e popolazioni umane aumenta il rischio di focolai di anaplasmosi bovina e umana e la difficoltà di attuare misure di controllo e sorveglianza.

Geni Differenzialmente Espressi in Orofaringea Tonsille E Linfonodi Mandibolari Di Tubercolare E Cinghiali Contratto Europei Naturalmente Esposti a Mycobacterium Bovis

FEMS Immunology and Medical Microbiology. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16487312

Tubercolosi bovina, causata dal Mycobacterium bovis (complesso Mycobacterium tuberculosis), sono una malattia zoonotica che colpisce il bestiame in tutto il mondo. Il batterio infetta altre specie animali, domestici e selvatici, e questa gamma di host complica i tentativi di controllo o l'eradicazione della malattia. Nonostante i progressi nella caratterizzazione dei meccanismi coinvolti nell'interazione ospite-patogeno e risposte cellula ospite per M. tuberculosis complex di umano, bovino e mouse cellule, geni differenzialmente espressi in biopsie di tessuti di biofiltri tubercolare e individui esposti accertati sono stati mal caratterizzati. In questo studio, espressione genica differenziale è stato analizzato mediante ibridazione sottrattiva soppressione orofaringea tonsille e linfonodi mandibolari di raccolti in campo tubercolari e contratto europei cinghiali da una zona di tubercolosi è endemica della Spagna. PCR in tempo reale e semiquantitativo il transcriptase PCR di geni selezionati hanno confermato i risultati dell'analisi di ibridazione sottrattiva-soppressione. Espressione della proteina di geni differenzialmente espressi selezionati è stato analizzato mediante immunodiffusione radiale o immunoistochimica. Espressione genica differenziale varia tra gruppi tubercolari e non tubercolari e tra le tonsille e i linfonodi. Meccanismi cellulari singoli e multiple sono stati colpiti, tra cui la trasduzione del segnale, risposta immunitaria, infiammazione, lo stress, apoptosis/antiapoptosis, struttura cellulare, adesione e trasporto, proteine e metabolismo del DNA/RNA e processi enzimatici. Questi risultati dimostrano la modulazione dell'espressione genica di infezione micobatterica in tonsille e linfonodi mandibolari di cinghiali europei naturalmente esposti a M. bovis e forniscano una base per la definizione di interazioni ospite-patogeno e il meccanismo di immunità protettiva.

Effetto Sinergico Di Silenziare L'espressione Di Antigeni Protettivi Tick 4 8 E Rs86 Nel Rhipicephalus Sanguineus Di Interferenza Del RNA

Parasitology Research. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16518610

Le proteine Tick hanno dimostrate di essere utile per lo sviluppo di vaccini che ridurre le infestazioni di zecche. Potenziali antigeni protettivi tick sono stati identificati e caratterizzati, in parte, dall'uso di interferenza del RNA (RNAi). RNAi permette per l'analisi della funzione genica che caratterizza l'impatto della perdita di espressione genica su fisiologia di tick. Nel presente documento, abbiamo usato RNAi in Rhipicephalus sanguineus per valutare le funzioni del gene di due antigeni protettivi tick, 4 8 e Rs86, l'omologo di Bm86, infestazione di zecche, alimentazione e deposizione delle uova. Silenziamento di 4 8 da solo ha portato tick diminuito attaccamento, sopravvivenza, alimentazione e deposizione delle uova. Anche se l'effetto di RNAi Rs86 era meno pronunciato, silenziamento del gene anche ridotto peso tick e deposizione delle uova. Più in particolare, tacitazione simultanea di 4 8 e Rs86 di RNAi ha provocato un effetto sinergico in cui tick sopravvivenza, attaccamento, alimentazione, peso e deposizione delle uova erano profondamente ridotto. Valutazione microscopica dei tessuti tick ha rivelato che coraggio da zecche iniettate duale era dilatato con cellule epiteliali scarsamente distribuite lungo la membrana basale. Questi risultati hanno dimostrato l'effetto sinergico di silenziamento espressione dei due geni protettivi tick. L'inclusione di più antigeni protettivi tick può, quindi, migliorare l'efficacia dei vaccini tick.

L'antigene Protettivo Tick, 4 8, è Una Proteina Conservata Coinvolta Nella Modulazione Dell'ingestione Di Sangue Tick E Riproduzione

Vaccine. May, 2006  |  Pubmed ID: 16580098

Il gene che codifica l'antigene protettivo tick, 4 8, è stato clonato da 10 specie appartenenti ai 6 generi, e sono state analizzate le sequenze di nucleotidi e aminoacidi. 4 D 8 sequenze nucleotidiche e proteiche sono state conservate tra queste specie di zecche con identità/somiglianza tra 65-98 e 60-98%, rispettivamente. La funzione di 4 8 fu caratterizzata dall'interferenza del RNA (RNAi) in cinque specie di zecche. Dopo le zecche potevano nutrire, degenerazione dell'intestino, ghiandole salivari e tessuti riproduttivi è stata osservata, e deposizione delle uova, il peso e sopravvivenza tick sono sensibilmente ridotti. 4 D 8 RNAi effettuata &gt; 90% riduzione della deposizione delle uova in tutte le specie di zecche testato. A causa del ruolo critico che 4 D 8 gioca durante la graduazione di alimentazione e deposizione delle uova, che si traduce in definitiva nella riduzione della progenie di tick, abbiamo proposto il nome generico di "subolesin" (latino, suboles: discendenza, progenie) per spuntare 4 8 proteine e subA per il gene subolesin-codifica.

Autocidal Controllo Delle Zecche Di Silenziamento Di Un Singolo Gene Di Interferenza Del RNA

Biochemical and Biophysical Research Communications. May, 2006  |  Pubmed ID: 16630571

Zecche impatto salute umana e animale in tutto il mondo e nuovi metodi di controllo sono necessari per aggirare gli svantaggi del controllo tick di acaricida applicazione inclusa selezione di zecche farmaco resistenti e l'inquinamento ambientale. Utilizzo di interferenza del RNA silenziata l'espressione di un singolo gene, subolesin e prodotto zecche con diminuita performance riproduttiva e impedito l'accoppiamento di successo e la produzione di prole vitale. Proponiamo una tecnica sterile acarine (SAT) per la riduzione delle popolazioni di zecche dal rilascio di zecche subolesin a tacere. Conservazione di subolesin tra le specie di zecche suggerisce che SAT può essere utile per il controllo di molte specie di zecche medicamente ed economicamente importanti.

Caratterizzazione Di Sovraregolati Geni Selezionati in Non-tubercolare Cinghiale Europeo Come Possibili Correla Di Resistenza All'infezione Da Mycobacterium Bovis

Veterinary Microbiology. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16672181

Tubercolosi bovina (bTB), causata dal Mycobacterium bovis (complesso Mycobacterium tuberculosis), sono una malattia zoonotica che colpisce il bestiame e animali selvatici in tutto il mondo. Questi animali host possono fungere da serbatoi di infezione, aumentando così il rischio di infezione e di esposizione umana. In questo studio abbiamo quantificato mediante ibridazione fluorescente RNA macroarray e RT-PCR in tempo reale i livelli di mRNA di geni differenzialmente espressi in orofaringea tonsille e linfonodi mandibolari di tre e sette singoli tubercolari e non tubercolari cinghiali naturalmente esposti a M. bovis, rispettivamente. Questi risultati hanno dimostrato sovraregolazione di due geni, componente del complemento 3 (C3) e metilmalonil-CoA mutasi (MUT), nei cinghiali non tubercolari. Questi geni sovraregolati possono contribuire alla resistenza dei cinghiali a bTB modificando l'immunità innata, che limita la capacità di mycobacterium infettare e persistono all'interno dei macrofagi. I geni di C3 e di MUT, pertanto, sono suscettibili di essere buoni candidati per studiare come marcatori di resistenza bTB utilizzando genomica funzionale in sistemi modello animale. Identificazione di geni sovraregolati negli animali selvatici resistenti alla bTB contribuisce alla nostra comprensione dei meccanismi di immunità protettiva e resistenza agli organismi micobatterici.

Riduzione Delle Infezioni Da Zecche Con Anaplasma Marginale E A. Phagocytophilum Designando Il Tick Antigene Protettivo Subolesin

Parasitology Research. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 16816958

Subolesin è stato recentemente dimostrato di silenziamento genico e l'immunizzazione con la proteina ricombinante per proteggere contro le infestazioni di zecche e per causare tick ridotta sopravvivenza e degenerazione dei tessuti intestino e delle ghiandole salivari. In questa ricerca, abbiamo esteso questi studi testando se subolesin di RNAi di targeting o vaccinazione interferiva con la capacità di zecche di infettarsi con due agenti patogeni da zecche, Anaplasma marginale che provoca anaplasmosi bovina e Anaplasma phagocytophilum, l'agente eziologico della granulocytin umana anaplasmosi. Per gli studi di a. marginale, Dermacentor variabilis maschi sono stati iniettati con subolesin dsRNA o soluzione fisiologica e poi sono stati consentiti per nutrire il bestiame con ascendente rickettsemias, mentre per gli studi di a. phagocytophilum, topi sono stati immunizzati con la proteina subolesin ricombinante, infettati con l'agente patogeno e quindi infestati da larve scapularis Ixodes. Infezioni da zecche sono stati determinati dalla reazione a catena della polimerasi quantitativa dei tessuti intestino e delle ghiandole salivari. In entrambi gli approcci sperimentali, infezioni da zecche sono sensibilmente ridotti. Questi risultati suggeriscono che subolesin sembra essere un antigene di vaccino del candidato che può contribuire al controllo delle specie di zecche multiple e la riduzione degli agenti patogeni da zecche.

Caratterizzazione Genetica Di Anaplasma Ovis Ceppi Da Pecore Bighorn Nel Montana

Journal of Wildlife Diseases. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16870861

Specie-riserva della fauna selvatica e diversità genetica di Anaplasma ovis (Rickettsiales: Anaplasmataceae) sono state scarsamente caratterizzate. Pecore bighorn (Ovis canadensis), catturate in Montana dal dicembre 2004 al gennaio 2005, sono state testate per anticorpi anti-Anaplasma spp.; la presenza di a. ovis è stata determinata dalla caratterizzazione di sequenze msp4 proteina di superficie principali. Anaplasma anticorpi sono stati rilevati nel 25/180 (14%) nel campione pecore bighorn a. ovis msp4 sequenze furono amplificati dalla reazione a catena della polimerasi (PCR) e sequenziati da 9/23 (39%) di animali sieropositivi. Tutti gli animali sono stati negativi mediante PCR per i patogeni correlati e Anaplasma phagocytophilum Anaplasma marginale. Tutte le sequenze msp4 identificate in pecore bighorn erano identici e corrispondeva a un genotipo unica ovis a. che era identico a un isolato di pecore segnalato in precedenza dall'Idaho. Il ritrovamento di un unico genotipo di a. ovis in questa selvaggia mandria di pecore bighorn era in contrasto con la diversità genetica segnalata per a. marginale negli allevamenti di bestiame negli Stati Uniti occidentali e in tutto il mondo. Questi risultati hanno dimostrato che le pecore bighorn possono essere una riserva della fauna selvatica di a. ovis nel Montana.

Caratterizzazione Molecolare Di Ceppi Di Anaplasma Platys Da Cani in Sicilia, Italia

BMC Veterinary Research. 2006  |  Pubmed ID: 16872489

La diversità genetica di Anaplasma platys (Rickettsiales: Anaplasmataceae) ceppi è attualmente scarsamente definita. Il presente studio è stato progettato per caratterizzare i ceppi a. patys nei cani da Palermo, Sicilia, Italia, utilizzando una combinazione di analisi PCR e sequenza del 16S rDNA, geni shock operone groESL e citrato sintasi (gltA) di calore.

Barrare La Casella Controllo: Oltre Pensieri Su Un Programma Di Ricerca

Trends in Parasitology. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17005451

Tick control è un tema che ha stimolato l'interesse intenso per più di un secolo. Questo articolo è un commentario alle esigenze di ricerca per il controllo di graduazione proposti nel recente articolo di Peter Willadsen e richiama l'attenzione sulle strategie di controllo zecche che erano scarsamente rappresentati o omesso da quest'ultimo. Speciale considerazione è data ai dispositivi host-mirati a controllare le zecche vettore di malattia infestano la fauna selvatica, a richiami impregnato di feromoni per attirare e uccidere le zecche nell'ambiente naturale e su host e a più aggiornati progressi nello sviluppo del vaccino.

Epidemiologia Molecolare Di Anaplasmosi Bovina E Umana Nell'Europa Meridionale

Annals of the New York Academy of Sciences. Oct, 2006  |  Pubmed ID: 17114686

Il genere Anaplasma (Rickettsiales: Anaplasmataceae) comprende diversi agenti patogeni quali marginale a. e a. phagocytophilum che hanno un impatto sulla salute umana e veterinaria. In questo studio, abbiamo caratterizzato marginale a. e a. phagocytophilum infezioni negli esseri umani, selvatici e animali domestici, e zecche in Europa del sud (particolarmente in Spagna centro-meridionale e in Sicilia) mediante sierologici studiano, PCR e analisi delle principali proteine della superficie (msp) 4 1alpha e 16S rDNA di sequenza. I risultati suggeriscono che le infezioni a. marginale in questa regione sono mantenute nei bovini e cervi, con le zecche e tabanidi che serve come vettori meccanici e biologici del patogeno, rispettivamente. Infezioni con a. phagocytophilum possono verificarsi negli esseri umani e vengono mantenute in bovini, asini, cervi e uccelli e sono molto probabilmente trasmessa da diverse specie di zecche con come ancora un ruolo sconosciuto come ospiti serbatoio per altri mammiferi selvatici e domestici. La presenza di infezioni concomitanti in cervi e bovini suggerisce che questi agenti patogeni possono moltiplicarsi nell'ospite stesso serbatoio e illustra la complessità dell'epidemiologia dell'anaplasmosi bovina e umana in questa regione.

Anaplasmosi: Messa a Fuoco Sulle Interazioni Ospite-vettore-patogeno Per Lo Sviluppo Del Vaccino

Annals of the New York Academy of Sciences. Oct, 2006  |  Pubmed ID: 17114750

Anaplasma marginale e a. phagocytophylum sono rickettsiae intracellulari che causano l'anaplasmosi bovina e umana anaplasmosi granulocitica, rispettivamente. Il vaccino per il controllo dell'anaplasmosi ultimo sarebbe quella che riduce la trasmissione dell'agente patogeno e infezione da zecche. Vaccini efficaci per il controllo di anaplasmosi non sono disponibili, nonostante i tentativi utilizzando approcci diversi, quali ceppi attenuati, infettati eritrociti e tick cellule derivate antigeni purificati e patogeno ricombinante e proteine derivate da zecche. Tre linee di analisi funzionale sono stati condotti dal nostro laboratorio per caratterizzare le interazioni ospite-tick-Anaplasma per scoprire potenziali antigeni del candidato vaccino di controllo infestazioni di zecche e l'infezione e la trasmissione di Anaplasma spp.: (1) caratterizzazione di a. marginale adesine coinvolti nell'infezione e la trasmissione dell'agente patogeno, analisi globale (2) espressione di geni differenzialmente espressi nelle cellule umane promielocitica HL-60 in risposta all'infezione con a. phagocytophilume (3) identificazione e caratterizzazione degli antigeni tick-protettivo di espressione libreria immunizzazione (ELI) e analisi dei tag expressed sequence (EST) in un modello murino di infestazioni di zecche e di interferenza del RNA in segni di graduazione. Questi esperimenti hanno portato alla caratterizzazione del marginale a. MSP1a come un adhesin per bovini eritrociti e cellule tick, fornendo il supporto per il suo utilizzo come antigene di vaccino del candidato per il controllo dei bovini. Analisi di Microarray di geni differenzialmente espressi nelle cellule umane infettate con a. phagocytophilum identificate molecole chiave coinvolti nella moltiplicazione e l'infezione del patogeno. Lo screening per gli antigeni tick-protettivo portato candidati vaccinali riducendo l'infestazione di zecche, muta e la deposizione delle uova e che interessano i livelli di infezione Anaplasma in segni di graduazione.

Confronto Dell'efficacia Di Enroflossacina, Imidocarb E Ossitetraciclina Per Lo Sdoganamento Di Persistente Anaplasma Marginale Infezioni Nei Bovini

Veterinary Therapeutics : Research in Applied Veterinary Medicine. 2006  |  Pubmed ID: 17216590

Questo studio ha confrontato enroflossacina e imidocarb dipropionato trattamenti con un regime di ossitetraciclina proposto dall'organizzazione mondiale per la salute animale per l'eliminazione di persistente Anaplasma marginale infezioni nei bovini. È stato inoltre valutato l'effetto della terapia sul competitivo ELISA e polymerase chain reaction (PCR) reattività. Dodici vitelli a. vettore infetto marginale sono stati assegnati ai gruppi di ricezione o enroflossacina (5 mg/kg q24h IV per 5 giorni), imidocarb (5 mg/kg IM due volte, 7 giorni di distanza), o OSSITETRACICLINA (22 mg/kg q24h IV per 5 giorni). Un vitello infettato da un isolato di Oklahoma del gruppo imidocarb e uno infettato da un isolato del Virginia nel gruppo di ossitetraciclina non è riuscito a infettare un vitello splenectomized dopo subinoculation di sangue. Entrambi sono diventato competitiva ELISA negativa da 44 giorni dopo il trattamento, ma il vitello trattata imidocarb rimase PCR positiva. Nessuno dei trattamenti testati eliminato in modo affidabile le infezioni persistenti a. marginale in tutto il bestiame. Inoltre, la PCR non era un mezzo affidabile per determinare il successo di chemosterilization in vitelli.

Transovarial Silenziamento Del Gene Subolesin in Tre-host Ixodid Specie Di Zecche Dopo Iniezione Di Femmine Piene Con Subolesin DsRNA

Parasitology Research. May, 2007  |  Pubmed ID: 17372765

Interferenza del RNA (RNAi) è diventato il più potente strumento sperimentale per lo studio della funzione del gene in segni di graduazione. Subolesin, inizialmente chiamato 4 8, è stato trovato per essere protettivo contro le infestazioni di zecche quando viene utilizzato come un vaccino ed è stato indicato per essere altamente conservato tra le specie di zecche ixodid ai livelli di nucleotidi e proteine. RNAi causato silenziamento sistemica di subolesin e ha dimostrato che questa proteina è coinvolta nella regolazione della graduazione di alimentazione, riproduzione e sviluppo. Recentemente, questi risultati sono state estese per il segno di spunta uno-host microplus Rhipicephalus (Boophilus) in cui iniezione del dsRNA in femmine piene ha provocato transovarial silenziamento dell'espressione subolesin di uova e larve. Riportiamo qui, transovarial tacere di subolesin di RNAi nell'ospite tre zecche Amblyomma americanum, Dermacentor variabilis e Ixodes scapularis. Silenziamento dell'espressione subolesin di RNAi in queste specie di zecche anche colpiti subolesin espressione di uova e larve. Transovarial RNAi sembra essere un meccanismo comune nella ixodid zecche e fornisce un metodo semplice per la rapida caratterizzazione di tick geni coinvolti nella deposizione delle uova, embriogenesi e sviluppo larvale.

Analisi Proteomic E Trascrittomica Di Risposte Stress Differenziale/infiammatorie Nei Linfonodi Mandibolari E Orofaringea Tonsille Di Cinghiali Europei Naturalmente Infettate Con Mycobacterium Bovis

Proteomics. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 17163576

Le risposte dello stress differenziale/infiammatorie sono state caratterizzate presso i livelli di mRNA e proteine nei linfonodi mandibolari (MLN) e le tonsille orofaringea dell'europei i cinghiali (Sus scrofa), naturalmente infettati con Mycobacterium bovis. Ibridazione sottrattiva soppressione combinato con immunoistochimica e/o RT-PCR quantitativa in tempo reale sono stati utilizzati per identificare e caratterizzare abbondante stress/infiammatorie sequenze di geni differenzialmente espressi nella tubercolosi (TB +) cinghiali. Geni identificati in MLN e tonsille corrispondevano all'amiloide sierica A, arginase I, osteopontina, lisozima, annexin I e proteine di scossa di calore, rispettivamente. Pattern proteico globale in MLN e le tonsille sono stati confrontati tra TB + e accertati (TB-) verri 2-DE e MALDI-TOF MS cinque proteine, tra cui le proteine dello stress/infiammatorie Annessina V, albumina del siero, e apolipoproteina A1 sono state trovati a livelli inferiori in MLN di TB + cinghiali. Superossido dismutasi manganese fu trovato up-regolate in MLN di TB + cinghiali. Cinque proteine, tra cui la creatina chinasi e MHC classe II gli antigeni sono state trovate up-regolate in tonsille di TB + cinghiali. Questi risultati hanno dimostrato risposte stress differenziale/infiammatorie in cinghiali naturalmente infettati da M. bovis e suggeriscono possibili marcatori di tubercolosi in questa specie che può rivelarsi utile per gli studi futuri delle interazioni ospite-patogeno e per lo sviluppo di sistemi diagnostici e vaccini.

Gene Silencing Dei Antigeni Protettivi Tick, Bm86, Bm91 E Subolesin, in Uno-host Zecca Boophilus Microplus Di Interferenza Del RNA

International Journal for Parasitology. May, 2007  |  Pubmed ID: 17196597

L'uso di interferenza del RNA (RNAi) per valutare la funzione del gene è stata dimostrata in diverse specie di tre-host tick ma adattamento di RNAi per il segno di spunta uno-host, Boophilus microplus, non è stata segnalata. Abbiamo valutato l'applicazione di RNAi in b. microplus e l'effetto di silenziamento genico su tre antigeni anti-zecche: Bm86, Bm91 e subolesin. Gene-specific double-stranded (dsRNA) è stato iniettato in due fasi di tick, appena liquido femmine digiuni e gonfio, e silenziamento genico specifico è stato confermato da PCR in tempo reale. Silenziamento genico si è verificato nelle femmine digiuni iniettate dopo che sono stati autorizzati a nutrire. Iniezione del dsRNA in femmine ingorgo causato silenziamento genico in successivamente oviposited le uova e le larve che nati da tali uova, ma non negli adulti che sviluppato da queste larve. dsRNA iniettato in femmine gonfio potrebbe essere rilevato da RT-PCR quantitativa in tempo reale nelle uova 14 giorni dall'inizio della deposizione delle uova, dimostrando che non trasformato dsRNA fu incorporato nelle uova. Le uova prodotte dalle femmine engorged iniettate con subolesin dsRNA erano anormali, suggerendo che subolesin può svolgere un ruolo nello sviluppo embrionale. L'iniezione del dsRNA engorged femmine per ottenere specifici del gene silencing in uova e larve è un nuovo metodo che può essere utilizzato per studiare la funzione del gene in embriogenesi tick.

Analisi Di Sequenza Del Gene Msp4 Di Anaplasma Ovis Ceppi

Veterinary Microbiology. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 17052866

Anaplasma ovis (Rickettsiales: Anaplasmataceae) è un patogeno da zecche di pecore, capre e i ruminanti selvatici. La diversità genetica dei ceppi di a. ovis non è stato ben caratterizzata a causa della mancanza di informazioni di sequenza. In questo studio, abbiamo valutato pecore bighorn (Ovis canadensis) e il cervo mulo (Odocoileus hemionus) da Montana per l'infezione con a. ovis di analisi sierologiche e sequenza del gene msp4. Nel 37% e il 39% delle pecore bighorn e dal cervo mulo analizzato, rispettivamente sono stati rilevati anticorpi anti-Anaplasma spp. Sono stati identificati quattro nuovi genotipi di msp4. Le sequenze di a. ovismsp4 identificate nel presente documento sono state analizzate insieme a sequenze riportate in precedenza per la caratterizzazione della diversità genetica dei ceppi di a. ovis rispetto agli altri Anaplasma spp. I risultati di questi studi hanno dimostrato che anche se ovismsp4 a. genotipi possono variare tra aree geografiche e tra gli host di pecore e cervi, la variazione osservata era meno la variazione osservata tra marginale a. e a. phagocytophilum ceppi. I risultati riportati qui ulteriore confermano che a. ovis infezione si verifica in popolazioni ruminanti selvatiche naturali nell'ovest degli Stati Uniti e che pecore bighorn e dal cervo mulo può servire come serbatoi di fauna selvatica di a. ovis.

Analisi Di Ceppi Di Mondo Di Anaplasma Marginale Usando La Proteina Di Superficie Principali 1a Ripetere Sequenze

Veterinary Microbiology. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 17084044

Anaplasma marginale è un patogeno da zecche del bestiame che provoca la malattia anaplasmosi bovina in tutto il mondo. Principali proteine della superficie (MSPs) sono coinvolte in interazioni ospite-patogeno e tick-agente patogeno e sono state utilizzate come marcatori per la caratterizzazione genetica dei ceppi di a. marginale e studi filogenetici. MSP1a è coinvolto in aderenza e trasmissione di a. marginale da zecche e varia tra ceppi geografici in numero e sequenza del amminico-terminale tandem si ripete. Lo scopo di questo studio era di caratterizzare la diversità genetica dei ceppi di a. marginale raccolti da paesi in Nord e Sud America, Europa, Asia, Africa e Australia, comprensivi di tutti i continenti. In questo studio, abbiamo caratterizzato 131 ceppi di a. marginale usando 79 MSP1a ripetizione sequenze. Questi risultati corroborato l'eterogeneità genetica dei ceppi di a. marginale nelle regioni endemiche in tutto il mondo. Le analisi filogenetiche delle sequenze ripetute di MSP1a non hanno risultato in gruppi secondo la provenienza geografica dei ceppi di a. marginale ma phylogeographic fornito informazioni. Per cento di settantotto del MSP1a ripetizione sequenze erano presenti nei ceppi da una singola area geografica. Forte (&gt; o = 80%) il supporto è stato trovato per i cluster contenenti sequenze da ceppi italiano, spagnolo, cinese, Argentina e Sud America. Le analisi filogenetiche di MSP1a ripetere sequenze suggerite tick-patogeno co-evoluzione e ha fornito prove di introduzioni multiple dei ceppi di a. marginale da varie posizioni geografiche in tutto il mondo. Questi risultati contribuiscono alla comprensione della diversità genetica ed evoluzione delle interazioni a. marginale e tick-patogeno.

Interferenza Del RNA Per Lo Studio E La Manipolazione Genetica Di Zecche

Trends in Parasitology. Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17656154

Le zecche sono ectoparassiti di selvatici e animali domestici e gli esseri umani. Una comprensione più completa della funzione tick e l'interfaccia di tick-patogeno è necessario formulare metodi tick-controllo migliorato. Interferenza del RNA (RNAi) è la tecnica più ampiamente usata di silenziamento genico in zecche dove l'uso di altri metodi di manipolazioni genetiche è stata limitata. Nel breve tempo che RNAi è stato disponibile, ha dimostrato di essere uno strumento prezioso per studiare la funzione del gene tick, la caratterizzazione dell'interfaccia tick-patogeno e la proiezione e la caratterizzazione di antigeni protettivi tick. Questa recensione considera le applicazioni di RNAi alla ricerca di graduazione e le potenzialità di questa tecnica per studi funzionali tick e delucidare l'interfaccia tick-agente patogeno e tick-host. È probabile che la conoscenza acquisita da questo approccio sperimentale contribuirà allo sviluppo di vaccini per controllo infestazioni di zecche e la trasmissione di agenti patogeni da zecche.

Confronto Tra Il Test Di Fissazione Del Complemento Ed ELISA Competitivo Per Test Di Anaplasma Marginale Infezione in Manzi Infettati Sperimentalmente

American Journal of Veterinary Research. Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17669027

Per confrontare la sensibilità di un test di fissazione del complemento (CF) ed ELISA competitivo (competitivo) per il rilevamento di Anaplasma marginale in manzi infettati sperimentalmente.

Una Rassegna Di Dieci Anni Di Prestazioni Vaccino Commerciale Per Il Controllo Delle Infestazioni Di Zecche Sul Bestiame

Animal Health Research Reviews / Conference of Research Workers in Animal Diseases. Jun, 2007  |  Pubmed ID: 17692140

Le zecche sono ectoparassiti importanti degli animali domestici e selvatici, e infestazioni di zecche impatto economico produzione di bestiame in tutto il mondo. Controllo delle infestazioni di bestiami tick è stata principalmente dall'applicazione di acaricidi che ha portato nella selezione delle zecche resistente e l'inquinamento ambientale. Qui discutiamo di dati dall'applicazione vaccino tick in Australia, Cuba, Messico e altri paesi dell'America Latina. Vaccini commerciali tick per bestiame basati sull'antigene Boophilus microplus Bm86 gut hanno dimostrato di essere un metodo di controllo fattibile tick che offre un'alternativa conveniente, ecologica per l'uso di acaricidi. Vaccini commerciali tick ridotte infestazioni di zecche su bovini e l'intensità di utilizzo di acaricidi, come pure aumentando la produzione animale e ridurre la trasmissione di alcuni agenti patogeni da zecche. Anche se la commercializzazione di vaccini tick è stato difficile a causa di precedenti vincoli della scoperta dell'antigene, la spesa di sperimentazione vaccini nei bovini e società di ristrutturazione, il successo di questi vaccini nell'ultimo decennio ha chiaramente dimostrato il loro potenziale come un metodo migliorato di controllo tick per il bestiame. Lo sviluppo di vaccini migliorati in futuro sarà notevolmente rafforzato di nuovi ed efficienti tecnologie molecolari per la scoperta dell'antigene e l'urgente necessità di un metodo di controllo tick per ridurre o sostituire l'uso di acaricidi, soprattutto nelle regioni dove si è verificato resistenza vasto tick.

Trascrizione Sp110 è Indotta E Richiesto Da Anaplasma Phagocytophilum Per Infezione Delle Cellule Promielocitica Umana

BMC Infectious Diseases. 2007  |  Pubmed ID: 17883869

L'agente patogeno intracellulare da zecche, Anaplasma phagocytophilum (Rickettsiales: Anaplasmataceae) provoca anaplasmosi granulocitica umana dopo l'infezione di leucociti polimorfonucleati. Il gene umano Sp110 è un membro dei componenti del corpo nucleare (NB) che funzioni come un coactivator transcriptional del recettore nucleare dell'ormone e svolge un ruolo importante nei meccanismi di immunoprotective contro gli agenti patogeni in esseri umani. In questa ricerca, abbiamo ipotizzato che l'infezione delle cellule umane promielocitica HL-60 con a. phagocytophilum Sp110 potranno essere coinvolti.

Movimento Di Rhipicephalus Sanguineus Adulti Tra Cani Co-housed Durante L'alimentazione Attiva

Veterinary Parasitology. Nov, 2007  |  Pubmed ID: 17904292

Zecche maschile adulte hanno dimostrate capace di acquisizione sperimentale e la trasmissione di agenti patogeni da zecche senza la necessità di una muta. Per determinare la rilevanza ecologica di questo itinerario di trasmissione intrastadial, abbiamo valutato la misura in cui attivamente alimentazione maschio Rhipicephalus sanguineus mossa naturalmente tra co-housed cani infestati. Cani (n = 4) erano infestati da zecche colore singole, alloggiate singolarmente in gabbie tick-confinamento per 48 h mentre infestazioni stabilito, e quindi ogni cane esaminato e le zecche presenti conteggiate. Cani sono stati poi co-housed in un grande, gruppo penna per un ulteriore 7 (studio 1) o 5 (Studio 2) giorni. Nel primo studio, rapporti di sesso sono stati adeguati per favorire la migrazione, con due cani ricevono le zecche prevalentemente femminile e due cani ricevono tutte le zecche maschile. Nel secondo studio, ogni cane ha ricevuto un rapporto di zecche che parallels che trovano nelle infestazioni naturali (4:1 maschio a femmina). I risultati hanno mostrato che le zecche facilmente migrarono tra cani infestati, co-housed. Tariffe dell'immigrazione, definita come la percentuale di zecche precedentemente collegato a un cane che si è spostato su un altro cane, variavano da 0 a 46% (mean=31.1% studio 1; 9,4% Studio 2). Tassi di emigrazione, definiti come il numero delle zecche che infestano inizialmente un cane che si trasferisce a un altro cane, media 35,2% in studio 1 e 10,8% nello studio 2 (3,6-67,6%). Movimento di zecche adulti tra cani rappresenta una natura forma di interruzione di alimentazione, una strategia che ha dimostrata di ridurre il tempo di alimentazione necessario per consentire la trasmissione di agenti patogeni. In segni di graduazione che prontamente staccare da un host e ricollegare ad un seconda ospite per riprendere l'alimentazione, replica di eventuali agenti patogeni presenti è già stata avviata e quindi non può verificarsi il ritardo stesso in trasmissione visto in zecche associate a un host per la prima volta.

Studi Genomici Funzionali Delle Cellule Di Tick in Risposta All'infezione Con L'agente Patogeno Del Bestiame, Anaplasma Marginale

Genomics. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 17964755

La coevoluzione di zecche e gli agenti patogeni che trasmettono ha garantito la sopravvivenza reciproca. In questi studi, abbiamo utilizzato un approccio di genomica funzionale per caratterizzare tick geni regolati in risposta all'infezione di Anaplasma marginale. Geni/proteine differenzialmente regolamentate sono state identificate da ibridazione sottrattiva-soppressione e analisi differenziale elettroforesi in gel di colte IDE8 tick cellule infettate con a. marginale. Nove delle 17 di questi geni sono stati confermati da RT-PCR in tempo reale per essere differenzialmente regolamentata nelle zecche e/o tick IDE8 cellule in risposta all'infezione da a. marginale. Interferenza del RNA è stato utilizzato per studi funzionali. Sei geni, che codificano putativo selenoprotein W2a, cellule staminali/progenitrici ematopoietiche proteina-come, del proteasoma 26S subunità, ferritina, GST e controllo di subolesin, sono stati trovati per interessare a. marginale infezione nelle cellule tick IDE8. Quattro geni, che codificano GST putativo, salivari selenoprotein M, vATPase e ubiquitina, colpiti a. marginale infezione in siti diversi di sviluppo in segni di graduazione. I risultati di questi studi hanno dimostrato che un meccanismo molecolare si verifica da quale espressione del gene delle cellule tick da intermediario del ciclo di sviluppo a. marginale e il traffico attraverso le zecche.

Trasmissione Sperimentale Di Anaplasma Marginale Da Maschio Dermacentor Reticulatus

BMC Veterinary Research. 2007  |  Pubmed ID: 18053123

Anaplasmosi bovina sono stata segnalata in diversi paesi europei, ma non è stata determinata la competenza vettoriale delle specie di zecche per Anaplasma marginale da queste località. A causa della gamma ampia distributivo di Dermacentor reticulatus all'interno di Europa e il ruolo importante di Dermacentor spp come vettore di a. marginale negli Stati Uniti, abbiamo testato la competenza vettoriale di d. reticulatus per a. marginale.

Caratterizzazione Sierologica E Molecolare Dei Patogeni Tickborne in Leoni (Panthera Leo) Dal Parco Safari Di Fasano, Italia

Journal of Zoo and Wildlife Medicine : Official Publication of the American Association of Zoo Veterinarians. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18229868

Leoni (Panthera leo) sono una specie in pericolo, minacciata dalla caccia illegale, perdita dell'habitat e malattie infettive. Poco si sa circa gli agenti patogeni da zecche che infettano leoni e potrebbero contribuire al declino della popolazione. L'obiettivo di questo studio era quello di caratterizzare Rickettsia spp., Anaplasma phagocytophilum e Coxiella burnetii infezioni in 10 leoni dallo zoosafari di Fasano, in Italia da sierologia, reazione a catena della polimerasi e l'analisi di sequenza. Anche se gli animali non hanno mostrato segni clinici di malattie da zecche, evidenza di infezione da c. burnetii, gruppo di spotted fever Rickettsia SP., a. phagocytophilum furono trovate e nel 50%, 20% e il 10% dei leoni, rispettivamente. Uno dei leoni è risultato positivo per tutti e tre agenti patogeni. Questo studio è il primo rapporto di prove molecolari dell'infezione da c. burnetii, Rickettsia SP. e a. phagocytophilum nei leoni e fornisce la prova che questi felini infettano e fungano da host per i batteri trasmessi da zecche.

Panoramica: Le Zecche Come Vettori Di Agenti Patogeni Che Causano La Malattia Nell'uomo E Negli Animali

Frontiers in Bioscience : a Journal and Virtual Library. 2008  |  Pubmed ID: 18508706

Le zecche (Acari: Ixodidae) trasmettere un'ampia varietà di agenti patogeni per i vertebrati, tra cui virus, batteri, protozoi e helminthes. Agenti patogeni da zecche sono ritenuti responsabili di più di 100.000 casi di malattia negli esseri umani in tutto il mondo. Le zecche sono considerate secondo in tutto il mondo per le zanzare come vettori di malattie umane, ma sono i più importanti vettori della malattia-causanti patogeni negli animali domestici e selvatici. Infezione e lo sviluppo di germi patogeni in tick e ospiti vertebrati sono mediati da meccanismi molecolari all'interfaccia tick-patogeno. Questi meccanismi, che coinvolgono tratti di zecche e di agenti patogeni, includono l'evoluzione delle caratteristiche comuni e specie-specifiche. La caratterizzazione molecolare dell'interfaccia tick-patogeno è rapidamente avanzando e fornendo nuove vie per lo sviluppo di strategie di controllo romanzo sia per infestazioni di zecche e loro agenti patogeni associati.

L'interfaccia Di Tick-patogeno Per Le Strategie Di Controllo Romanzo Di Targeting

Frontiers in Bioscience : a Journal and Virtual Library. 2008  |  Pubmed ID: 18508707

Le zecche sono ectoparassiti di selvatici e gli animali domestici e gli esseri umani che hanno un impatto soprattutto salute globale di trasmissione di agenti patogeni che causano malattie. Mentre informazioni sulle interazioni molecolari tra zecche e patogeni che facilitano l'infezione da agenti patogeni, lo sviluppo e la trasmissione è limitata, una comprensione completa dell'interfaccia tick-patogeno sarebbe fondamentale verso lo sviluppo del romanzo e nuove misure per il controllo di infestazioni di zecche e di agenti patogeni da zecche. Recentemente, gli studi di vaccino utilizzando antigeni chiave tick e caratterizzazione di funzione del gene tick di interferenza del RNA (RNAi) hanno fornito nuove informazioni sui geni che hanno un impatto l'interfaccia tick-patogeno. In questa recensione riassumiamo la ricerca attuale e le prospettive dei vaccini tick e manipolazione genetica di zecche mirati all'interfaccia tick-patogeno. La conoscenza acquisita da questi studi collettivi sarà fondamentale verso la comprensione delle interazioni patogeno tick e per la formulazione di metodi di controllo mirati sia a zecche e agenti patogeni da zecche. Uso di questi approcci molecolari probabilmente contribuirà a misure di controllo che saranno in particolare ridurre popolazioni di zecche e malattie da zecche nel futuro.

Avanza Verso La Comprensione Della Biologia Molecolare Dell'interfaccia Anaplasma-tick

Frontiers in Bioscience : a Journal and Virtual Library. 2008  |  Pubmed ID: 18508714

Il genere Anaplasma comprende un gruppo eterogeneo di agenti patogeni da zecche trovato esclusivamente all'interno della membrana-limiti i vacuoli in cellule ospiti. Mentre a. marginale, centrale a. e a. ovis, vectored da zecche Dermacentor e Rhipicephalus, sono specifici per l'host per ruminanti, a. phagocytophilum, vectored da Ixodes spp., infetta un'ampia gamma di host. In zecche Anaplasma subisce un ciclo di sviluppo che è coordinato con il ciclo di alimentazione. Anche se la ricerca a livello di interfaccia tick/Anaplasma è nella sua infanzia, studi recenti hanno dimostrato che l'infezione Anaplasma e trasmissione è mediata da un meccanismo molecolare che coinvolgono entrambi geni di cellule e patogeno tick. Applicazione di una crescente gamma di approcci molecolari, come la RNA interference, genomica e proteomica, si stanno espandendo rapidamente la nostra conoscenza dell'interfaccia tick/patogeno. Targeting molecole delle cellule tick chiave necessarie per lo sviluppo di agenti patogeni nelle strategie di vaccino può compromettere la capacità vettoriale di segni di graduazione per Anaplasma, riducendo così la trasmissione e l'infezione dei vertebrati. Collettivamente, queste informazioni probabilmente porterà allo sviluppo di vaccini duplice obiettivo progettato per proteggere i vertebrati contro le infestazioni di zecche e impedire la trasmissione di agenti patogeni.

Silenziamento Espressione Della Defensina, Varisin, Nel Maschio Dermacentor Variabilis Di Interferenza Del RNA Si Traduce in Riduzione Anaplasma Marginale Infezioni

Experimental & Applied Acarology. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18523848

Peptidi antimicrobici, compreso defensine, sono componenti del sistema immunitario innato in zecche che hanno dimostrato di fornire protezione contro i batteri Gram-negativi e Gram-positivi. Varisin, una delle defensine identificato Dermacentor variabilis, è stato indicato per essere prodotta principalmente in esoscheletro, ma livelli di trascrizione sono state espresse anche nell'intestino medio e altre cellule di tick. In questa ricerca, abbiamo studiato il ruolo di varisin nell'immunità di segni di graduazione al patogeno Gram-negativi, bestiame, Anaplasma marginale. Espressione del gene varisin è stato messo a tacere dall'interferenza del RNA (RNAi) in cui le zecche maschile erano iniettate con varisin dsRNA e quindi permesso di nutrire e acquisire l'infezione da a. marginale su un polpaccio infettati sperimentalmente. Silenziamento espressione di varisin in esoscheletro, intestino medio e le ghiandole salivari è stata confermata da RT-PCR in tempo reale. Ci aspettavamo che tacere di varisin aumenterebbe marginale a. infezioni in zecche, ma i risultati hanno dimostrato che i numeri batterico, come determinato da un marginale a. msp4 PCR quantitativa, si sono sensibilmente ridotti nelle zecche varisin a tacere. Inoltre, colonie di a. marginale in zecche utilizzato per RNAi erano morfologicamente anormale da quelli osservati nelle zecche di controllo buffer iniettato eluizione. La forma di Colonia era irregolare e in alcuni casi che il marginale a. sembrava di essere libero nel citoplasma delle cellule di intestino. Alcuni segni di graduazione sono stati trovati per essere sistematicamente infettato da un microbo che può essere stato correlato al silenziamento di varisin. Questo sembra essere il primo rapporto di silenziamento dell'espressione di un defensina nelle zecche di RNAi che ha portato infezioni ridotto a. marginale.

Osservazioni Sulle Zecche Antricola: Piccole Ninfe Si Nutrono Di Mammiferi Padroni Di Casa E Hanno Una Struttura Delle Ghiandole Salivari Simile a Zecche Ixodid

The Journal of Parasitology. Aug, 2008  |  Pubmed ID: 18576742

Le zecche utilizzare bloodmeals come fonte di energia e nutrienti a muta e sopravvivere fino al pasto successivo e a oviposit, nel caso di femmine. Tuttavia, solo le larve di alcune specie di zecche sono noti per nutrirsi di pipistrelli; le femmine sono obbligatoriamente autogena e fasi ninfale si ritiene di non alimentare. Abbiamo studiato la presenza di sangue in una popolazione naturale del Ninfale Antricola delacruzi zecche raccolti dal guano di pipistrello; loro capacità di nutrirsi di schiere di laboratorio; e la struttura microscopica di ghiandole salivari e di intestino. L'amplificazione del DNA del contenuto intestinale di materiale raccolto di recente è stato positivo per un mammifero in 4 delle 11 prime instar ninfe, ma siamo stati infruttuosi l'amplificazione del DNA farine host dal tardo instar ninfe. Tutte le prime fasi ninfale (n = 10) alimentato su conigli e host DNA rilevato e sequenziato dal contenuto intestinale. Tuttavia, tutti i grandi ninfe (n = 10) ha rifiutato di alimentazione, e ospite del DNA è rimasto inosservato in queste zecche. Tutte le fasi di a. delacruzi hanno ghiandole salivari di morfologia simile alla ixodid agranulare tipo acini delle ghiandole salivari e di acini granulare tipo II o tipo B. Tutte le fasi di a. delacruzi avevano una struttura simile gut, costituiti da cellule digestive nella parte basale che conteneva granuli hematin. Né tracce di cellule rigenerative né secretori sono state osservate nelle sezioni dell'intestino.

Espressione Differenziale Di Geni Della Risposta Infiammatoria E Immunitaria in Pecore Infettate Con Anaplasma Phagocytophilum

Veterinary Immunology and Immunopathology. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 18640728

Anaplasma phagocytophilum infetta un'ampia varietà di specie ospite e provoca la febbre da zecche (TBF) di malattie nei ruminanti e anaplasmosi granulocitica in esseri umani, cavalli e cani. TBF negli ovini è diventata una delle più diffuse malattie da zecche in alcune regioni dell'Europa. A. phagocytophilum infezione Modifica espressione genica host e risposta immunitaria. L'obiettivo di questa ricerca era quello di caratterizzare l'espressione genica differenziale in pecore sperimentalmente e naturalmente infettate con a. phagocytophilum da ibridazione di microarray e Real-time RT-PCR. I risultati di questi studi hanno dimostrato negli ovini l'attivazione di percorsi immunitarie innate e infiammatorie e la compromissione dell'immunità adattativa durante l'infezione da a. phagocytophilum. La caratterizzazione dei geni e i loro profili di espressione negli ovini in risposta all'infezione da a. phagocytophilum fa avanzare la nostra comprensione dei meccanismi molecolari dell'infezione da agente patogeno e la patogenesi della TBF. Collettivamente, questi risultati espandere le informazioni correnti sulla risposta dell'ospite mammifero di a. phagocytophilum infezione.

Prove Del Ruolo Di Tick Subolesin Nell'espressione Genica

BMC Genomics. 2008  |  Pubmed ID: 18673577

Subolesin è una proteina conservata evolutiva che è stato scoperto recentemente in Ixodes scapularis come un antigene protettivo tick e ha un ruolo nella digestione di sangue tick, riproduzione e sviluppo. In altri organismi, subolesin orthologs possono essere coinvolti nel controllo dei processi di sviluppo. A causa dell'effetto profondo di subolesin atterramento di zecche e altri organismi, abbiamo ipotizzato che subolesin svolge un ruolo nell'espressione del gene, e quindi interessa più cellulari i processi. L'obiettivo di questo studio era di fornire la prova per il ruolo di subolesin nell'espressione genica.

Espressione Della Perilipina Promielocitica Umana Cellule in Risposta All'infezione Di Anaplasma Phagocytophilum Risultati Nel Metabolismo Dei Lipidi Modificati

Journal of Medical Microbiology. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18201980

L'agente patogeno intracellulare obligata Anaplasma phagocytophilum è trasmessa da zecche e provoca anaplasmosi granulocitica umana, febbre da zecche dei ruminanti e anaplasmosi granulocitica canina ed equina. In un precedente studio, è stato identificato il gene perilipina (PLIN) come uno dei geni differenzialmente espressi in promielocitica umana cellule HL-60 in risposta all'infezione con a. phagocytophilum. PLIN è degli adipociti principali lipidi gocciolina-associati fosfoproteina che svolge un ruolo centrale nella sintesi del colesterolo e lipolisi. Host colesterolo e altri lipidi sono tenuti da a. phagocytophilum per infezione e moltiplicazione nelle cellule umane. In questo studio, è stato ipotizzato che PLIN può essere coinvolto nell'infezione delle cellule HL-60 da a. phagocytophilum. Per verificare questa ipotesi, una combinazione di RT-PCR in tempo reale, immunofluorescenza e interferenza del RNA è stata usata per studiare l'espressione di PLIN. I risultati di questi studi hanno dimostrato che a. phagocytophilum modula il metabolismo lipidico aumentando i livelli di mRNA PLIN e facilita l'infezione delle cellule HL-60. I risultati di questi studi di espandere la nostra conoscenza del ruolo del metabolismo lipidico in a. phagocytophilum infezione e moltiplicazione in cellule HL-60 e suggeriscono un meccanismo da cui A. phagocytophilum modula il metabolismo lipidico.

Espressione Differenziale Del Tick Antigene Protettivo Subolesin Anaplasma Marginale - E Cellule Ospiti A. Phagocytophilum-infetti

Annals of the New York Academy of Sciences. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 19120168

Subolesin è stato recentemente dimostrato in RNA interference (RNAi) studi e vaccino per proteggere contro le infestazioni di zecche e di influire sulla graduazione di alimentazione, riproduzione e sviluppo così come infezione delle cellule ospiti da Anaplasma marginale e a. phagocytophilum. Recenti esperimenti fornito prove che infezione delle cellule ospiti sia tick e vertebrato con questi due patogeni modificati espressione genica. Abbiamo quindi ipotizzato che l'infezione delle cellule ospiti con a. marginale e a. phagocytophilum influisce sull'espressione di subolesin. Livelli di mRNA di Subolesin sono stati determinati da Real-Time reverse transcriptase (RT)-PCR non infetti e a. marginale-infettati Dermacentor variabilis budella e ghiandole salivari e le cellule coltivate IDE8 tick e non infette e a. phagocytophilum-infetta Ixodes scapularis ninfe, le cellule coltivate ISE6 tick e la cellula umana linea HL-60. Inoltre, l'effetto della subolesin su Anaplasma spp. infezione/moltiplicazione è stato caratterizzato da RNAi in tick tessuti e/o tick colta e cellule umane. Questi esperimenti ha presentato prove di espressione differenziale di subolesin in a. marginale - e a. phagocytophilum-cellule infette. Subolesin era differenzialmente espressi in a. zecche infette marginale in maniera tessuto-specifica in cui aumento dei livelli di mRNA in risposta all'infezione a. marginale nelle cellule delle ghiandole salivari tick, ma non nelle cellule dell'intestino. Subolesin atterramento di RNAi ridotto Anaplasma infezione/moltiplicazione solo nelle cellule in cui infezione aumentato subolesin espressione, cioè, nelle ghiandole salivari a. marginale-infetti d. variabilis e cellule IDE8. I risultati riportati qui ulteriore supporto il ruolo di subolesin in interazioni Anaplasma-host e suggeriscono un ruolo putativo di subolesin nei vaccini per il controllo del patogeno infezione/moltiplicazione in segni di graduazione.

Definire Il Ruolo Del Subolesin Nella Coltura Delle Cellule Tick Da Uso Di Interferenza Del RNA

Annals of the New York Academy of Sciences. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 19120170

Lo sviluppo di vaccini tick offre nuove opportunità per il controllo delle zecche infestazioni e malattie da zecche. Recentemente, è stata identificata la proteina anti-zecche, subolesin, in una linea cellulare derivata da Ixodes scapularis di espressione libreria immunizzazione e un modello murino di infestazioni di zecche. Mentre subolesin è stato conservato tra le specie di zecche ixodid, la funzione biologica di questo gene è sconosciuta. Subolesin espressione nelle zecche fu messo a tacere di interferenza del RNA (RNAi) per fornire informazioni sulla funzione del gene, e silenziamento del subolesin profondamente influenzato sopravvivenza tick, alimentazione e riproduzione. In questa ricerca per che abbiamo usato RNAi ulteriormente nella linea cellulare IDE8 tick studiare il ruolo di subolesin nello sviluppo delle cellule coltivate tick. Le cellule sono state incubate con subolesin double-stranded (ds) RNA ed è stata monitorata la crescita cellulare. Incorporazione di dsRNA da cellule tick è stato monitorato con Cy3-etichetta dsRNA. Dopo 72 ore le cellule sono state raccolte per la conta delle cellule, morfologia e per la conferma di silenziamento genico mediante reverse transcriptase-PCR. Mentre l'espressione di subolesin in cellule trattate era ridotta 80 + /-9% di RNAi rispetto alle cellule trattate con derisione, crescita delle cellule non sembrano essere colpiti durante il periodo di 72 h. Questo è il primo rapporto dell'uso di RNAi in coltura cellulare tick. RNAi è un potente strumento per lo studio della funzione del gene tick e probabilmente contribuiscono alla nostra comprensione del ruolo che tick geni svolgono nello sviluppo delle cellule e infezione da agenti patogeni.

Espressione Differenziale Di Geni Della Risposta Infiammatoria E Immunitaria Nei Linfonodi Mesenterici Di Iberico Rosso Cervo (Cervus Elaphus Hispanicus) Naturalmente Infettata Con Mycobacterium Bovis

Developmental and Comparative Immunology. 2008  |  Pubmed ID: 17604102

Poche informazioni sono disponibile sull'espressione del gene in infezione micobatterica naturale delle specie di fauna selvatica. Iberico cervi rossi possono fungere da serbatoio di Mycobacterium bovis in Spagna, aumentando così il rischio di tubercolosi bovina (bTB) negli esseri umani e bestiame. Nel presente documento, abbiamo caratterizzato l'espressione differenziale di infiammatoria e geni di risposta immunitaria nei linfonodi mesenterici di cervo naturalmente infettati da M. bovis mediante ibridazione di microarray. Risultati sono stati convalidati dalla determinazione delle concentrazioni di proteina del siero e/o RT-PCR in tempo reale. Dei 600 geni che sono stati analizzati nel microarray, 17 geni visualizzato un cambiamento di espressione piega superiore a 1,7 in cervo infetto o non infetti (P0.05). Questi geni includevano proteine tight junction, IL-11R, bactenecin, CD62L, CD74, desmogleina, IgA e IgM che costituiscono nuove scoperte e suggerire nuovi meccanismi di cui M. bovis può modulare host infiammatoria e risposte immunitarie. Questi risultati contribuiscono alla nostra comprensione di base dei meccanismi di patogenesi e immunità alle infezioni micobatteriche naturali e possono avere importanti implicazioni per il controllo di bTB.

Profili Di Espressione Genica Di Cinghiale Europeo Naturalmente Infettate Con Mycobacterium Bovis

Veterinary Immunology and Immunopathology. May, 2009  |  Pubmed ID: 19131115

Profili di espressione genica globale sono stati analizzati in cinghiale europeo naturalmente infettate con Mycobacterium bovis. Milza RNA è stato Estratto da 23 M. bovis-infetti e 17 non infetti animali e analizzati utilizzando un Pigoligoarray che rappresentano 20.400 geni. Differenzialmente espressi sequenze (N = 161) sono stati identificati i processi cellulari che interessano come apoptosi, trasduzione del segnale e comunicazione cellulare, crescita cellulare e/o manutenzione, organizzazione del citoscheletro e biogenesi, riparazione del DNA, sistema immunitario, metabolismo e percorsi energetici, metabolismo proteico, regolazione della proliferazione cellulare, regolazione dell'espressione genica, regolazione del metabolismo degli acidi nucleici, regolazione dei processi fisiologici e trasporto. Analisi di RT-PCR in tempo reale dei livelli di mRNA è stato utilizzato per corroborare risultati microarray di geni selezionati. Risposta immunitaria geni erano tra le sequenze più rappresentate differenzialmente espressione e sono stati selezionati per ulteriore discussione. Beta-defensina 129, T-cellula superficie glicoproteina CD8 e B-cell receptor-associated protein 29 erano overexpressed in animali infetti. Abbassare i livelli di espressione della risposta immunitaria geni galectin-1, complemento componente C1qB e certe molecole HLA di classe che i e gli antigeni di istocompatibilità II classe e catene di immunoglobuline eravamo trovate in animali infetti. Questo studio identificato nuovi meccanismi che naturalmente infetti cinghiale europeo rispondere all'infezione da M. bovis e come agente patogeno elude la risposta immunitaria ospite per stabilire l'infezione. Studi di espressione genica in infettati naturalmente wildlife serbatoi di tubercolosi bovina sono importanti per gli studi di vaccino per aiutare nel controllo delle malattie nella fauna selvatica e genomica funzionale.

Trasmissione Di Cytauxzoon Felis Di Un Gatto Domestico Di Amblyomma Americanum

Veterinary Parasitology. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19168288

Cytauxzoon felis è stata trasmessa a un gatto domestico di Amblyomma americanum. L'infezione è stata prodotta dal morso di a. americanum adulti che sono stati alimentati come ninfe su un gatto domestico che naturalmente sono sopravvissuti infezione di c. felis acquisizione. Febbre, inappetenza, depressione e letargia sono stati prima notato giorni 11 post-infestation (dpi). Mucose pallide, splenomegalia, ittero e dispnea sono stati osservati anche durante il corso della malattia. La temperatura corporea del gatto infettati sperimentalmente c. felis era subnormale da dpi 16 fino al 24 dpi quando è tornato a entro i limiti normali. Tutti i segni clinici di cytauxzoonsis ha cominciato a risolvere da 23 dpi quando il gatto è diventato subclinicamente infettato con c. felis. Il gatto sviluppato un inizio di anemia rigenerativa, contrassegnato da 13 dpi e raggiunto un nadir a 20 dpi prima di recuperare. Una moderata neutrofilia e linfocitosi contrassegnato anche sviluppato tra 18 e 26 dpi. Gli schizonti di c. felis sono stati osservati in aspirati milza del gatto infetto a 15 dpi. DNA di C. felis è stato amplificato mediante PCR in tempo reale a partire 17 dpi e piroplasms di c. felis in primo luogo sono state notate da microscopia chiara 18 dpi. Dermacentor variabilis, scapularis Ixodes, Rhipicephalus sanguineus sono stati testati anche in modo simile allo stesso tempo ma non ha fatto trasmettere c. felis. Prima del presente studio, solo d. variabilis aveva dimostrato sperimentalmente di trasmettere l'infezione di c. felis. Questa è la prima relazione di c. felis trasmesso da a. americanum. La trasmissione dell'infezione da c. felis da un gatto domestico a altro indica che i gatti domestici subclinicamente infettati con c. felis possono essere un serbatoio di infezione per i gatti domestici ingenui.

L'impatto Di Interferenza Del RNA Dei Geni Subolesin E Voraxin Nel Maschio Amblyomma Hebraeum (Acari: Ixodidae) Sulla Femmina Ingorgo E Deposizione Delle Uova

Experimental & Applied Acarology. Jan, 2009  |  Pubmed ID: 18830675

Riducendo o sostituendo l'uso di pesticidi chimici per il controllo di graduazione è un obiettivo auspicabile. L'approccio più promettente sarebbe quello di sviluppare vaccini che proteggono i padroni di casa contro infestazione di zecche. Antigeni adatti per lo sviluppo di vaccini anti-tick sarà probabilmente quelle essenziali per i processi fisiologici vitali, e in particolare coloro che sono coinvolti direttamente nella alimentazione e riproduzione. In questo studio geni da Amblyomma hebraeum Koch che codificano per subolesin e voraxin sono stati studiati in zecche maschile di interferenza del RNA (RNAi). I maschi (digiuni o fed) sono stati iniettati con dsRNA (1) subolesin, (2) voraxin, (3) subolesin plus voraxin o buffer di iniezione (4), dopo che erano tenuti off-host durante la notte e poi permesso di feed su conigli insieme normale femminile a. hebraeum. Femmine che alimentato insieme al maschile zecche iniettato con subolesin o subolesin + voraxin dsRNA ha avuto un più alto tasso di mortalità, pesava notevolmente inferiore e prodotto una più piccola massa di uovo più i controlli. Tuttavia, le femmine alimentazione con maschi iniettati con voraxin dsRNA da solo non erano significativamente differenti dai controlli per quanto riguarda la mortalità, peso gonfio o fecondità. Tuttavia, come valutato mediante RT-PCR semiquantitativa, voraxin non era tacere in questo studio, le ragioni per le quali restano sconosciute. I risultati di questo studio suggeriscono che subolesin a. hebraeum è degno di ulteriori test come un antigene di vaccino candidato tick.

Inoculazione Di Cervo Dalla Coda Bianca (Odocoileus Virginianus) Con Ap-V1 O NY-18 Ceppi Di Anaplasma Phagocytophilum E Dimostrazione Microscopica Di Ap-V1 In Ixodes Scapularis Adulti Che Ha Acquisito L'infezione Da Cervi Come Ninfe

Vector Borne and Zoonotic Diseases (Larchmont, N.Y.). Oct, 2009  |  Pubmed ID: 18973438

Quattro cervi dalla coda bianca sono stati inoculati con Ap-V1 o ceppo di NY-18 di Anaplasma phagocytophilum. Ixodes scapularis ninfe erano quindi permesso di acquistion nutrono il cervo inoculato e muta per adulti. Solo un cervo Ap-V1 infettata era persistentemente infetto e in grado di infettare scapularis Ixodes ninfale. Le zecche adulte liquido mantenuto Ap-V1 infezione come dimostrato dalla microscopia e PCR. Riportiamo, per la prima volta, una descrizione morfologica di a. phagocytophilum in I. scapularis.

Tick Subolesin è Un Ortholog Dell'akirins Descritto in Insetti E Vertebrati

Developmental and Comparative Immunology. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19041667

L'antigene protettivo tick, subolesin, è una proteina normativa coinvolta nel controllo di percorsi multipli cellulare. Subolesin è evolutivo conservato in invertebrati e vertebrati con omologia di sequenza di akirins, un gruppo di proteine che sono stati proposti come fattori di trascrizione in Drosophila e topi recentemente rinominato. L'obiettivo di questa ricerca era di fornire la prova della sequenza e omologia funzionale tra tick subolesin e akirins. L'analisi filogenetica di subolesin e akirins hanno dimostrato che essi sono evolutive conservate. L'effetto di subolesin e akirin2 il colpo è stato confrontato nell'adulte zecche e topi, rispettivamente. I risultati hanno dimostrato che subolesin tick è un ortholog dell'insetto e vertebrati akirins e suggerito che queste proteine funzionano nella regolazione dell'espressione di NF-kappaB-dipendente e indipendente della risposta immunitaria innata geni e trasduzione del segnale. Questi risultati suggeriscono che queste proteine hanno un ruolo importante nelle interazioni ospite-patogeno.

Modifiche Ultrastrutturali E Fluorochromatic Di Anaplasma Marginale Esposti a Ossitetraciclina, Imidocarb Ed Enroflossacina Nelle Culture Degli Eritrociti a Breve Termine

Veterinary Microbiology. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19054634

Anaplasma marginale causa da lieve a grave hemoparasitic malattia con conseguente significativa morbidità e mortalità nei bovini in tutto il mondo. In assenza di vaccini universalmente efficaci, la terapia antimicrobica combinata con biocontainment e strategie di biosicurezza sono fondamentali per controllo anaplasmosi. Nel presente documento, abbiamo confrontato l'effetto di ossitetraciclina, imidocarb ed enroflossacina su a. marginale isolati in colture a breve termine di eritrociti. Microscopio dettagliare antimicrobico-indotto cambiamenti nella morfologia rickettsie erano segnati (0-4) basati su modifiche ultrastrutturali. Questi sono stati confrontati a fluorochromatic cambiamenti rilevati tramite citometria a flusso (FACS) utilizzando la conversione di hydroethidine (egli) di bromuro di etidio (EB) da organismi viventi per valutare la redditività. A. marginale infettività nelle culture selezionate è stato confermato da subinoculation in vitelli sensibili. Gol di morfologia sono stati analizzati mediante test del chi quadrato e rispetto ai dati di FACS di ANOVA con isolato, droga e concentrazione come co-variates nel modello. Solo la Virginia e Oklahoma isolati esposti a 1,0 microg/ml imidocarb e l'isolato di Oklahoma esposto a 4.0 microg/ml enroflossacina sono stati sterilizzati dopo esposizione agli antimicrobici. Rickettsia con gol di morfologia 0 era significativamente più cellule positive EB di inclusioni con gol di morfologia di 4 (p = 0,039). C'era anche una significativa associazione tra alterazioni ultrastrutturali e l'infettività (p = 0,0047). Inoltre, la percentuale di cellule positive EB nelle colture esposte agli antimicrobici è stata altamente predittiva della probabilità di infettività (p = 0.0026). Questo è il primo studio che descrive le modifiche ultrastrutturali in marginale a seguito di esposizione a enroflossacina e imidocarb. Questi risultati dimostrano che FACS e microscopia elettronica sono strumenti utili agli antimicrobici nuovo schermo per l'utilizzo in chemioterapia anaplasmosi.

Espressione Differenziale Dei Geni Della Risposta Infiammatoria E Immunitaria in Arieti Infettati Sperimentalmente Con Un Ceppo Virulento Ruvido Di Brucella Ovis

Veterinary Immunology and Immunopathology. Feb, 2009  |  Pubmed ID: 19056128

Infezione di pecora con Brucella ovis risultati in brucellosi ovina, una malattia caratterizzata da infertilità negli arieti, aborto in pecore e aumentata mortalità perinatale in Agnelli. Durante il corso dell'infezione sono modificati ovina risposta immunitaria sia espressione del gene delle cellule ospite. L'obiettivo di questa ricerca era quello di condurre una caratterizzazione preliminare di espressione genica differenziale in arieti infettati sperimentalmente con b. ovis di ibridazione di microarray e Real-time RT-PCR. Dei 600 ruminante infiammatoria e risposta immunitaria geni che sono stati analizzati nel microarray, 20 e 14 geni visualizzata un'espressione fold change &gt; 1,75 con un P-value < 0.05 a 15 e 60 giorni post-challenge (dpc), rispettivamente. Di questi geni, 16 erano sovraregolati e 4 erano downregolata in arieti infetti a 15 dpc. A 60 dpc, 11 e 3 geni erano up - e down-regolato in arieti infetti, rispettivamente. Solo quattro geni, desmogleina, canale epiteliale del sodio, subunità alfa (ENaC-alfa), interleuchina 18 binding protein (IL18BP) e fattore di inibizione migrazione macrofagica (MIF) sono stati trovati sovraregolati in arieti infetti al dpc 15 e 60. L'analisi dei geni differenzialmente espressi hanno dimostrato l'attivazione di percorsi immuni infiammatorie e innati degli animali infetti. B. ovis infezione anche provocato sovraregolazione di geni coinvolti nella fagocitosi e downregulation dei meccanismi di difesa di protezione host, entrambi i quali possono contribuire alla cronicità dell'infezione da b. ovis. I profili di espressione genica differivano tra arieti con infezione grave e moderata b. ovis. Questa è la prima analisi di espressione genica differenziale in brucellae grezzi e particolarmente in b. ovis-infettati arieti. La caratterizzazione dei geni e i loro profili di espressione in risposta all'infezione da b. ovis ulteriormente contribuisce alla nostra comprensione dei meccanismi molecolari dell'infezione e la patogenesi della brucellosi.

Conservazione E L'immunogenicità Della Zanzara Ortholog Dell'antigene Protettivo Tick, Subolesin

Parasitology Research. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19229557

Il controllo di artropodi vettori di agenti patogeni che influiscono sulla salute umana e animale è importante per l'eradicazione di malattie trasmesse da vettori. Ortholog dell'antigene protettivo tick, subolesin, è stato identificato in Aedes albopictus e trovato a hanno conservato gli epitopi in zecche e zanzare. Interferenza del RNA con le zecche e zanzare double-stranded RNA in tick tre specie ha portato significativi del gene e diminuito peso tick e/o sopravvivenza. Alimentazione Anopheles atroparvus, Aedes caspius e Culex pipiens femmine zanzare su un siero iperimmune di subolesin a. albopictus ha portato in 11 + /-5% a 29 + /-6% inibizione di sopravvivenza rispetto ai controlli, alimentati con siero preimmune. Alimentazione, flebotomi Phlebotomus perniciosus, sulla sopravvivenza femminile Antizzanzare subolesin ortholog proteina anticorpi inibiti e il numero di larve e adulti ottenuti dopo la schiusa di 28 + 22% e 16 + /-3%, rispettivamente, rispetto ai controlli. Vaccinazione con zecche e zanzare subolesin ortholog proteine significativamente ridotta infestazione di zecche Ixodes scapularis e peso in un modo simile. Tuttavia, la vaccinazione con l'antigene ricombinante zanzara subolesin ortholog non proteggeva contro Amblyomma americanum e Rhipicephalus sanguineus spunta infestazioni. Collettivamente, questi risultati preliminari fornito la prima evidenza che lo sviluppo dei vaccini può essere possibile per il controllo di più vettori artropodi utilizzando subolesin orthologs ma ha suggerito che gli antigeni multipli possono essere richiesti per produrre un vaccino efficace.

Diversità Genetica Di Anaplasma Marginale in Argentina

Veterinary Parasitology. May, 2009  |  Pubmed ID: 19285808

Anaplasmosi bovina causata da Anaplasma marginale sono un vincolo importante in tutto il mondo per la produzione di bestiame. Il marginale a. proteina di superficie principali 1 alfa (msp1alpha) gene contiene un numero variabile di ripetizioni tandem della regione ammino terminale ed è stato utilizzato per la caratterizzazione della diversità genetica del patogeno. Questo studio riporta la prima caratterizzazione della diversità genetica a. marginale in Argentina basato su genotipi di msp1alpha e il suo rapporto putativo con infestazioni microplus Rhipicephalus (Boophilus). Nel presente documento, abbiamo analizzato campioni di sangue intero bovino da anaplasmosi focolai nelle regioni eradicata libero (14 campioni) e r. microplus infestato (9 campioni). Analisi di sequenza rivela l'esistenza di 15 msp1alpha diversi genotipi con 31 diverse unità di ripetizione. Sei di nuovo ripetere sequenze sono stati scoperti in questo studio e 13/31 (42%) si ripete erano uniche a ceppi argentino. L'analisi di msp1alpha ripetere sequenze secondo r. microplus infestazioni portato in tre gruppi di ripetizione: (i) trovati nelle regioni infestate da zecche (20 ripetizioni), (ii) trovato in tick gratis regioni (6 ripetizioni) e (iii) casualmente distribuite (5 ripetizioni). Inoltre, a. marginale msp1alpha diversità genetica era più alta nelle regioni infestate da zecche che in zone libere tick. Questi risultati, insieme al precedente evidenza suggerendo che marginale a. msp1alpha unità ripetute evoluta con il vettore di tick, potrebbe rappresentare una testimonianza del ruolo di trasmissione tick-mediato per la generazione della diversità genetica del patogeno.

Caratterizzazione Di Possibili Correlati Della Risposta Protettiva Contro L'infezione Da Brucella Ovis in Arieti Immunizzati Con Il Vaccino Rev 1 Di B. Melitensis

Vaccine. May, 2009  |  Pubmed ID: 19428917

La vaccinazione con il vivo attenuato Brucella melitensis Rev 1 vaccino è usata per controllare la brucellosi ovina causata da Brucella ovis negli ovini. L'obiettivo di questo studio è stato quello di identificare possibili correla di risposta protettiva di b. ovis infezione attraverso la caratterizzazione di ibridazione di microarray e Real-time RT-PCR di infiammatoria e la risposta immunitaria geni differenzialmente espressi in arieti precedentemente immunizzati con b. melitensis Rev 1 e sperimentalmente sfidato con b. ovis. Profili di espressione genica sono stati confrontati prima e dopo la sfida con b. ovis tra arieti protetti e quelli vaccinati ma trovato infetto dopo la sfida. I geni TLR10, Bak e ANXI sono state espresse a livelli più alti di montoni vaccinati e protetti. Questi geni forniscono possibili correla di risposta protettiva di b. ovis infezione in arieti immunizzati con il vaccino di b. melitensis Rev 1.

Silenziamento Dei Geni Coinvolti Nelle Interazioni Di Anaplasma Marginale-tick Colpisce Il Ciclo Dello Sviluppo Del Patogeno in Dermacentor Variabilis

BMC Developmental Biology. 2009  |  Pubmed ID: 19607704

L'agente patogeno del bestiame, Anaplasma marginale, subisce un ciclo dello sviluppo in segni di graduazione che inizia nelle cellule gut. Trasmissione di bestiame si verifica da ghiandole salivari durante una seconda alimentazione tick. In ciascun sito di sviluppo due forme di a. marginale (reticolato e densa) si verificano all'interno di un vacuolo parasitophorous nel citoplasma della cellula ospite. Tuttavia, il ruolo dei geni tick nello sviluppo del patogeno è sconosciuto. Quattro geni, trovati in precedenti studi differenzialmente espressi in Dermacentor variabilis zecche in risposta alle infezioni con a. marginale, sono stati zittiti da interferenza del RNA (RNAi) per determinare l'effetto di silenziamento sul ciclo di sviluppo a. marginale. Questi quattro geni codificati per putative glutathione S-transferase (GST), salivari selenoprotein M (SelM), H + trasporto pompa protonica vacuolar lisosomiale (vATPase) e subolesin.

Luce E Trasmissione Elettrone Microscopiche Caratteristiche Di Un Romanzo Hepatozoon Spp in Ratti Infetti Naturalmente Cotone (Sigmodon Hispidus)

Parasitology Research. Oct, 2009  |  Pubmed ID: 19629526

Una specie di romanzo di Hepatozoon è stato recentemente segnalata nei ratti del cotone (Sigmodon hispidus) raccolti da un'area di Oklahoma dove americano hepatozoonosis canina è endemica. In questo studio, le varie fasi di merogonia del parassita sono state caratterizzate da luce e microscopia elettronica. Meronts si è verificato all'interno di vacuoli parasitophorous in epatociti e variava da mononucleate forme sferiche a forme grandi e adulti nei vacuoli che conteneva circa 50 perifericamente organizzato merozoiti. Lo sviluppo di merozoiti aveva organelli caratteristici Apicomplexa, compresi anelli polari anteriori e posteriori, un conoide, microtubuli, rhoptries, micronemes e una membrana trilaminar. Come il meronts maturata, numerosi merozoiti curvilinee germogliato da un corpo residuo. Questa caratterizzazione morfologica si estende la nostra comprensione di questo romanzo Hepatozoon e aggiunge informazioni sul hepatozoa, parassiti Apicomplexa che infettare numerose specie.

Anaplasma Phagocytophilum E Anaplasma Marginale Suscitare Risposte Espressione Genica Diversa Nelle Cellule Coltivate Tick

Comparative and Functional Genomics. 2009  |  Pubmed ID: 19636428

Il genere Anaplasma (Rickettsiales: Anaplasmataceae) include obbligano gli organismi intracellulari trasmessi da zecche e Anaplasma phagocytophilum Anaplasma marginale che si moltiplicano in cellule ospite vertebrato sia tick. Recentemente, abbiamo dimostrato che marginale a. colpisce l'espressione dei geni di zecche che sono coinvolti nella moltiplicazione e tick sopravvivenza e patogeno infezione. Tuttavia, il profilo di espressione genica in cellule di a. phagocytophilum-infettati tick è attualmente scarsamente caratterizzato. Gli obiettivi di questo studio sono stati per caratterizzare il profilo di espressione genica tick in Ixodes scapularis zecche e colta ISE6 cellule in risposta alle infezioni con a. phagocypthilum e confrontare tick gene espressione risposte in a. phagocytophilum - e a. graduazione marginale-infetti cellule di microarray e analisi di RT-PCR in tempo reale. I risultati di questi studi hanno dimostrato la modulazione dell'espressione genica tick da a. phagocytophilum e fornito prove di risposte espressione genica diversa in tick cellule infettate con a. phagocytophilum e a. marginale. Queste differenze nelle interazioni Anaplasma-tick possono riflettere le differenze nel ciclo di vita del patogeno nelle cellule tick.

Analisi Phylogeographic Rivelano Associazione Di Agenti Patogeni Da Zecche, Anaplasma Marginale MSP1a Sequenze Con Caratteristiche Ecologiche Sulle Prestazioni Della Zecca Vettore

BMC Biology. 2009  |  Pubmed ID: 19723295

L'agente patogeno da zecche Anaplasma marginale, che è endemica in tutto il mondo, è la specie tipo del genere Anaplasma (Rickettsiales: Anaplasmataceae). Microplus Rhipicephalus (Boophilus) è il più importante vettore tick di a. marginale nelle regioni tropicali e subtropicali del mondo. Nonostante l'ampia caratterizzazione della diversità genetica in a. marginale ceppi geografici utilizzando sequenze di proteina di superficie principali, si conosce poco la biogeografia e l'evoluzione di a. marginale e altre specie di Anaplasma. Per a. marginale, MSP1a è stato indicato per essere coinvolti in interazioni vettore patogeno ed ospite-patogeno e si è evoluta sotto la pressione di selezione positiva. I ceppi di MSP1a di A. marginale differisce in peso molecolare a causa di un numero variabile di ripetizioni dell'amminoacido tandem 23-31 e ha dimostrato di essere un marker stabile dell'identità del ceppo. Mentre studi filogenetici di MSP1a ripetere sequenze hanno mostrato prove di co-evoluzione di a. marginale-tick, questi studi non hanno fornito informazioni phylogeographic su scala globale a causa dell'elevato livello di diversità genetica MSP1a tra ceppi geografici.

La Storia Naturale Di Anaplasma Marginale

Veterinary Parasitology. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 19811876

L'agente patogeno intracellulare Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), descritto da Sir Arnold Theiler nel 1910, è endemica in tutto il mondo nelle zone tropicali e subtropicali. Infezione del bestiame con a. marginale cause anaplasmosi bovina, un lieve o grave malattia emolitica che si traduce in una notevole perdita economica per industrie sia latticini e carne bovina. Trasmissione di a. marginale di bestiame si verifica biologicamente da zecche e meccanicamente da mordere mosche e da sangue contaminato fomiti. Entrambi ospita zecche e bovini maschi persistentemente infettarsi con a. marginale e fungesse da serbatoi di infezione. Mentre gli eritrociti sono il principale sito di infezione nei bovini, a. marginale subisce un complesso ciclo di sviluppo in segni di graduazione che inizia da infezione delle cellule gut e trasmissione agli host sensibili si verifica da ghiandole salivari durante l'allattamento. Principali proteine della superficie (MSPs) giocano un ruolo cruciale nell'interazione di a. marginale con cellule ospiti e comprendono le proteine di adesione e MSPs da multigene famiglie che subiscono variazione antigenica e selezione nei bovini, contribuendo così al mantenimento delle infezioni persistenti. Molti ceppi geografici di a. marginale sono stati identificati in tutto il mondo, che variano nel genotipo, composizione antigenica, morfologia e l'infettività per le zecche. Isolati di a. marginale possono essere mantenuti da eventi di trasmissione indipendenti e un meccanismo di infezione/esclusione nei bovini e zecche. I numeri aumentanti di a. marginale genotipi identificati in alcune regioni geografiche molto probabilmente è derivato dal movimento intensivo bovini. Tuttavia, infezioni ceppo simultanee a. marginale nei bovini è stato segnalato, ma questi ceppi erano più tiepidi. Studi filogenetici di isolati geografici selezionati di a. marginale, utilizzando msp4 e msp1alpha, ha fornito informazioni circa la biogeografia e l'evoluzione di a. marginale, e msp1alpha genotipi sembrano essersi evoluto sotto la pressione di selezione positiva. Vaccini vivi e uccisi sono stati utilizzati per il controllo di anaplasmosi ed entrambi i tipi di vaccini hanno vantaggi e svantaggi. I vaccini hanno impedito efficacemente anaplasmosi clinico nei bovini ma non sono riusciti a bloccare l'infezione da a. marginale. I vaccini sono necessari che possono prevenire la malattia clinica e, contemporaneamente, prevenire l'infezione nei bovini e zecche, eliminando questi host come serbatoi di infezione. I progressi nella genomica, proteomica, immunologia e tecnologie biochimiche e molecolari durante l'ultimo decennio sono stati applicati alla ricerca su a. marginale e gli organismi correlati, e il recente sviluppo di un sistema di coltura cellulare per a. marginale ha fornito un formato per studiare l'interfaccia agente patogeno/tick. Recenti progressi e nuove metodologie di ricerca dovrebbero fornire ulteriori opportunità per lo sviluppo di nuove strategie per il controllo e la prevenzione dell'anaplasmosi bovina.

Genomica Funzionale E L'evoluzione Delle Interazioni Tick-Anaplasma E Sviluppo Di Un Vaccino

Veterinary Parasitology. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 19819630

Il genere Anaplasma (Rickettsiales: Anaplasmataceae) comprende diversi patogeni trasmessi da zecche che influiscono sulla salute umana e veterinaria. Ciclo di agenti patogeni da zecche tra zecche vettori e ospiti vertebrati e la loro interazione è mediata da meccanismi molecolari all'interfaccia tick-patogeno. Questi meccanismi si sono evoluti caratteristiche che coinvolgono tratti da sia il vettore di graduazione e l'agente patogeno per assicurare la loro sopravvivenza reciproca. Nel presente documento, passiamo in rassegna le informazioni ottenute da studi genetici per caratterizzare il tick-Anaplasma interfaccia ed evoluzione del marginale a. e a. phagocytophilum e genomica funzionale. Anaplasma e tick geni e proteine coinvolte in interazioni agente patogeno tick sono state caratterizzate. I risultati di questi studi hanno dimostrato che apetti meccanismo molecolare Anaplasma e comune si verificano da quale espressione del gene patogeno e barrare la casella cella da intermediario o limita il ciclo dello sviluppo Anaplasma e il traffico attraverso le zecche. Questi risultati hanno avanzato la nostra comprensione della biologia delle interazioni tick-Anaplasma e hanno aperto nuove vie per lo sviluppo di metodi più efficaci per il controllo delle infestazioni di zecche e la trasmissione di agenti patogeni da zecche.

Identificazione Di Antigeni Protettivi Di Interferenza Del RNA Per Il Controllo Della Lone Star Tick, Amblyomma Americanum

Vaccine. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 20018267

Il lone star tick, Amblyomma americanum, vettori di agenti patogeni di malattie emergenti degli esseri umani e gli animali negli Stati Uniti. Attualmente, le misure non sono disponibili per un controllo efficace di a. americanum infestazioni. Lo sviluppo di vaccini diretti contro le proteine tick può ridurre le infestazioni di zecche e la trasmissione di agenti patogeni da zecche. Tuttavia, il passo limito per lo sviluppo del vaccino tick è stata l'identificazione di antigeni protettivi tick. Riportiamo qui, l'applicazione di interferenza del RNA (RNAi) per lo screening di una libreria di cDNA a. americanum per la scoperta degli antigeni protettivi tick che riducono la sopravvivenza tick e pesi dopo la poppata. Quattro cloni di cDNA, codifica per presunte threonyl-tRNA sintetasi (2 C. 9), proteine ribosomiale 60S L13a (2-10) e L13e (2B7), e interfase citoplasma foci proteine 45 (2 G 7), sono stati selezionati per vaccino studia nei bovini, insieme a subolesin, una proteina protettiva tick identificata in precedenza. Nei bovini vaccinati, un'efficacia complessiva (E) &gt; 30% è stato ottenuto quando si considera l'effetto del vaccino su adulti e ninfe, ma solo 2 10, 2 7 e subolesin colpite entrambe le fasi di tick. La massima efficacia di controllo per le zecche adulte (E &gt; 55%) è stata ottenuta nei bovini vaccinati con ricombinante 2 7 o subolesin. Questi risultati collettivi hanno dimostrato la fattibilità di sviluppare vaccini per il controllo delle infestazioni di lone star tick. L'uso di RNAi per l'identificazione di antigeni protettivi tick ha dimostrato di essere uno strumento rapido e conveniente per la scoperta degli antigeni del vaccino candidato, e questo approccio probabilmente potrebbe essere applicato ad altri parassiti di importanza medica e veterinaria.

Subolesin Espressione in Risposta All'infezione Del Patogeno in Segni Di Graduazione

BMC Immunology. 2010  |  Pubmed ID: 20170494

Le zecche (Acari: Ixodidae) sono vettori di agenti patogeni in tutto il mondo che causano malattie negli esseri umani e animali. Zecche e agenti patogeni hanno evoluta meccanismi molecolari che contribuiscono al loro sviluppo reciproco e sopravvivenza. Subolesin è stato scoperto come un antigene protettivo tick e successivamente è stato indicato per essere simili nella struttura e funzione di akirins, un gruppo evolutivamente conservato delle proteine in insetti e vertebrati che controlla il NF-kB-dipendente e indipendenti espressione dei geni della risposta immunitaria innata. L'obiettivo di questo studio era di indagare l'espressione subolesin in diverse specie di zecche infettate con una varietà di agenti patogeni e per determinare l'effetto di atterramento di gene subolesin sull'infezione del patogeno. Nel primo esperimento, espressione di subolesin è stato caratterizzato in zecche infettate sperimentalmente con l'agente patogeno del bestiame, Anaplasma marginale. Espressione di Subolesin allora è stato caratterizzato in questua o alimentazione zecche adulti ha confermate di essere infetti con Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia, Babesia o Theileria spp. Infine, l'effetto di subolesin atterramento di interferenza del RNA (RNAi) su infezione da zecche è stato analizzato in Dermacentor variabilis maschi esposti a vari agenti patogeni alimentando capillare (CF).

Espressione Differenziale Dei Geni Nelle Ghiandole Salivari Del Maschio Microplus Rhipicephalus (Boophilus) in Risposta All'infezione Con Anaplasma Marginale

BMC Genomics. 2010  |  Pubmed ID: 20298599

Anaplasmosi bovina, causata dall'agente patogeno da zecche rickettsie Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae), è vectored da microplus Rhipicephalus (Boophilus) in molte regioni tropicali e subtropicali del mondo. A. marginale subisce un complesso ciclo dello sviluppo nelle zecche che si traduce in una infezione delle ghiandole salivari da dove l'agente patogeno è trasmesso al bestiame. In studi precedenti, abbiamo riportato la modificazione dell'espressione genica in Dermacentor variabilis e colta Ixodes scapularis barrare le cellule in risposta alle infezioni con a. marginale. In questi studi, abbiamo esteso queste scoperte dall'uso di un approccio di genomica funzionale per identificare geni differenzialmente espressi in r. microplus maschio ghiandole salivari in risposta all'infezione da a. marginale. Inoltre, una linea di r. cella microplus-derivati, BME26, è stata utilizzata per la prima volta a studiare anche espressione del gene delle cellule tick in risposta all'infezione da a. marginale.

Caratterizzazione Di Anaplasma Phagocytophilum E A. Ovis Infezione in Un Gregge Di Ovini Naturalmente Infetti Con Condizione Di Salute Cagionevole

Tropical Animal Health and Production. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20405320

Anaplasma specie sono trasmesse da zecche e causano malattie negli esseri umani e animali. Questi agenti patogeni infettano pecora, un animale domestico economicamente importante in tutto il mondo. L'attuale studio è stato progettato per caratterizzare in 200 animali l'infezione con Anaplasma phagocytophilum Anaplasma ovis e la diversità genetica dei ceppi di a. ovis raccolti da un gregge di ovini naturalmente infetti con condizione di salute cagionevole. Pecore avevano 98% sieroprevalenza per Anaplasma anticorpi spp. Risultati PCR ha confermato la presenza di a. phagocytophilum e a. ovis DNA in 11,5% e il 37% delle pecore, rispettivamente. 6.5% Delle pecore sono state individuate infezioni concomitanti. Settantuno le zecche adulte sono stati raccolte da 45 pecore con infestazioni che vanno da uno a 15 Tick per animale. L'analisi delle sequenze di msp4 a. ovis ha dimostrato un polimorfismo non precedentemente dichiarato per questo agente patogeno con 17 diversi aplotipi negli ovini infetti. Questi risultati hanno dimostrato che, sebbene a. ovis msp4 aplotipi possono essere meno variabile quando confrontato con Anaplasma marginale e ceppi di a. phagocytophilum su scala globale, polimorfismi genetici si verificano in questo locus in ceppi ottenuti da un gregge di pecore infette con condizione di salute cagionevole.

Caratterizzazione Dell'agente Patogeno Specifico Espressione Dei Geni Di Risposta Immunitaria Ospite in Specie Anaplasma E Mycobacterium Infetti Ruminanti

Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 20952064

Specie Anaplasma e Mycobacterium sono tra i più diffusi agenti patogeni batterici in cervo europeo (Cervus elaphus) nella Spagna sud-centrale e sono noti per modificare l'espressione genica nei ruminanti. In questo studio, abbiamo utilizzato in tempo reale analisi di RT-PCR e ibridazione di microarray per caratterizzare i profili di espressione genica globale nel cervo in risposta a Anaplasma ovis e a. ovis/Mycobacterium bovis/Mycobacterium avium sub. paratuberculosis (mappa) infezioni, confrontare l'espressione dei geni di risposta immunitaria tra cervi rossi infettati con a. ovis, M. bovis e mappa/a. ovis/M. bovis e caratterizzano l'espressione differenziale di risposta immunitaria geni identificati in cervo nei bovini infetti da M. bovis e Anaplasma marginale. Differenziale espressione genica globale in a. ovis - e a. ovis/M. bovis/mappa-infetti cervi ha provocato la modifica dei processi biologici cellulari da organismi patogeni specifici e comuni. L'espressione differenziale dei geni di risposta immunitaria ospite ha mostrato patogeno e firme specifico per l'host e l'effetto dell'infezione da patogeni multipli sulla risposta immunitaria cervi. Questi risultati ha suggerito che batteri intracellulari da generi Anaplasma e Mycobacterium producano modelli di espressione di geni simili nei ruminanti infetti. Tuttavia, patogeno e differenze di host potrebbero contribuire alla diagnosi della malattia e il trattamento nei ruminanti.

Espressione Di Scossa Di Calore E Altre Proteine Della Risposta Di Stress in Segni Di Graduazione E Cellule Coltivate Tick in Risposta a Anaplasma Spp. Infezione E Shock Termico

International Journal of Proteomics. 2010  |  Pubmed ID: 22084679

Le zecche sono ectoparassiti degli animali e gli esseri umani che fungono da vettori di Anaplasma e altri agenti patogeni che colpiscono gli esseri umani e animali in tutto il mondo. Le zecche e gli agenti patogeni che trasmettono hanno coevolved interazioni molecolari che coinvolgono tratti genetici sia il segno di spunta che l'agente patogeno che mediano il loro sviluppo e la sopravvivenza. In questo documento, l'espressione di proteine di scossa di calore (HSP) e altri stress proteine di risposta (SRP) è stato caratterizzato in zecche e cellule coltivate tick da analisi proteomica e trascrittomica in risposta all'infezione da Anaplasma spp. e shock termico. I risultati di questi studi hanno dimostrato che la risposta allo stress è stata attivata in segni di graduazione e coltivate cellule tick dopo Anaplasma spp. infezione e heat shock. Tuttavia, nel rapporto naturale vector-patogeno, HSP e altri criteri di restrizione software sono non stati fortemente attivati, che probabilmente è derivato da coevoluzione tick-patogeno. Questi risultati hanno dimostrato anche patogeno e tick-differenze nell'espressione di HSP e altri criteri di restrizione software in zecche e cellule coltivate tick infettato Anaplasma spp. e suggerito l'esistenza di meccanismi espresione indotta da Anaplasma spp per controllare la risposta tick all'infezione. Questi risultati illustrato la complessità della risposta di stress in segni di graduazione e suggerito una funzione per la HSP e altri criteri restrizione software durante l'infezione Anaplasma spp.

Controllo Delle Infestazioni Microplus Rhipicephalus (Boophilus) Tramite La Combinazione Di Subolesin Di Vaccinazione E Barrare La Casella Di Controllo Di Autocidal Dopo Atterramento Gene Subolesin in Zecche Alimentato Sul Bestiame

Vaccine. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21288805

Tick subolesin è stato indicato nelle prove di immunizzazione con la proteina ricombinante per proteggere i padroni di casa contro le infestazioni di zecche. In questo studio, abbiamo dimostrato che subolesin vaccinazione e rilascio di zecche dopo subolesin atterramento di interferenza del RNA (RNAi) potrebbe essere utilizzato per il controllo della microplus Rhipicephalus (Boophilus) spuntare le infestazioni di bestiami e ha suggerito che la combinazione di questi metodi poteva aumentare l'efficacia del controllo del bestiame tick in alcune circostanze. Il massimo controllo di graduazione è stato ottenuto quando entrambi il rilascio di zecche dopo atterramento subolesin e vaccinazione sono stati utilizzati contemporaneamente. Tuttavia, risultati di modellazione suggerito che tale efficacia del vaccino potrebbe essere aumentato se almeno l'80% delle zecche infestano bestiame corrispondono alle zecche subolesin-atterramento. I risultati di questo trial di prova hanno dimostrato l'efficacia della tecnica sterile acarine (SAT) attraverso la produzione di larve di subolesin-atterramento mediante iniezione dsRNA femmine piene per il controllo delle infestazioni di zecche microplus r., da solo o in combinazione con la vaccinazione subolesin.

La Rilevanza Del Tick Morde Per La Produzione Di Anticorpi IgE Per I Mammiferi Oligosaccaride Galattosio-α-1,3-galattosio

The Journal of Allergy and Clinical Immunology. May, 2011  |  Pubmed ID: 21453959

Nel 2009, abbiamo riportato una nuova forma di anafilassi ritardata di carne rossa che è imparentato con anticorpi IgE l'oligosaccaride galattosio-α-1,3-galattosio (alfa-gal). La maggior parte di questi pazienti aveva tollerato la carne per molti anni in precedenza. L'implicazione è che qualche esposizione in età adulta aveva stimolato la produzione di questi anticorpi IgE.

Targeting Degli Artropodi Subolesin/akirin Per Lo Sviluppo Di Un Vaccino Universale Per Il Controllo Delle Infestazioni Di Vettore E Trasmissione Di Agenti Patogeni

Veterinary Parasitology. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21561715

Malattie causate da artropodi patogeni notevolmente l'impatto sulla salute umana e animale. La ricerca recente ha fornito prove che gli antigeni protettivi zecche possono essere utilizzati per lo sviluppo di vaccini, con l'obiettivo duplice di controllo di infestazioni di artropodi e riducendo la loro capacità di vettore di agenti patogeni. Come esaminato nel presente documento, antigeni protettivi quali subolesin/akirin, che sono altamente conservati tra specie vettore, promettenti per uso nello sviluppo di un vaccino universale per il controllo di infestazioni di artropodi e la riduzione della trasmissione di agenti patogeni. Tuttavia, ulteriore ricerca è necessaria nelle aree critiche verso il raggiungimento di questo obiettivo.

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