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Articles by Kathleen C. Prins in JoVE
JoVE Immunology and Infection
艾滋病毒的成像1信封引起的病毒学突触信号合成脂双层
1Department of Pathology, New York University Langone School of Medicine, 2Program in Molecular Pathogenesis, Marty and Helen Kimmel Center for Biology and Medicine and Skirball Institute for Biomolecular Medicine, 3Laboratory of Molecular Immunogenetics, National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases, National Institutes of Health, 4Veteran Affairs New York Harbor Healthcare System
本文介绍了一种方法，可视化的全内反射荧光显微镜（TIRF）HIV-1诱导信封上的玻璃支持平面双层病毒学突触的形成。该方法也可以结合免疫荧光染色检测艾滋病毒1信封引起的病毒学突触的形成过程中发生的信号分子的活化和再分配。
Other articles by Kathleen C. Prins on PubMed
埃博拉病毒蛋白 VP35 损害干扰素调控因子激活激酶 IKKepsilon 和 TBK-1 的功能。
埃博拉病毒 （EBOV） VP35 蛋白拮抗早期的抗病毒药物 α/β 干扰素 (测试版干扰素-α) 反应。我们以前表明 VP35 抑制病毒诱导干扰素 β 基因启动子激活，通过阻止磷酸化干扰素调节因子 3 (IRF-3），对于诱导干扰素-α/β 表达的至关重要的转录因子。此外，VP35 块干扰素 β 启动子激活诱导的几个组成部分的视黄酸诱导基因任何我 (钻机-我) / 黑色素瘤分化相关基因 (MDA-5)-激活信号通路包括钻机-5 一、 启动子刺激因子干扰素 β 1 (IPS-1），坦克绑定激酶 1 (TBK-1），和 IkappaB 激酶 epsilon （IKKepsilon）。这些结果表明 VP35 可能目标的 IRF 激酶 TBK-1 和 IKKepsilon。Coimmunoprecipitation 实验现在证明 VP35 与 IKKepsilon 和 TBK-1 的物理交互和使用 IKKepsilon 删除构造进一步演示 IKKepsilon 的氨基末端激酶域是足够的交互 IRF 3 或 VP35。在试管里，IKKepsilon 或 TBK 1 phosphorylates 公路 3 不仅 VP35。此外，VP35 表达损害 IKKepsilon-公路-3、 IKKepsilon-公路-7 和 IKKepsilon-IPS-1 相互作用。最后，从超量表达 IKKepsilon 的细胞裂解包含可以 phosphorylate IRF-3 体外的激酶活性。VP35 IKKepsilon 表示的单元格表示，当此激酶活性即被隐含。这些数据表明 VP35 施加它的干扰素拮抗作用，至少在部分，通过阻止激酶 IKKepsilon 和 TBK-1 和其正常互动合作伙伴，包括其基板，IRF 3 和 IRF 7 之间必要的交互。
废除与双链 RNA VP35 相互作用的突变呈现埃博拉病毒豚鼠无毒。
埃博拉病毒 （EBOV） 蛋白 VP35 是一种双链 RNA (dsRNA) 绑定抑制剂主机干扰素 （干扰素）-也可用作病毒聚合酶辅酶的阿尔法/贝反应。最近的结构研究确定关键功能，包括所需的 VP35 dsRNA 结合活性的中央基本修补程序。要解决这些 VP35 EBOV 复制和发病机制、 两个点突变，结构功能的功能意义确定了 K319A/R322A，废除 VP35 dsRNA 绑定活动，严重损害了其抑制干扰素-α/β 生产。解决方案核磁共振 (NMR) 光谱和 x 射线晶体学揭示在 K319A/R322A VP35 双突变体的最小结构扰动及建议的基本收费损失导致改变功能。重组 EBOVs 编码 VP35 突变展示，与野生型病毒 VP35、 干扰素缺陷 Vero 细胞中的最小增长衰减但干扰素主管细胞的严重损害。豚鼠，VP35 突变病毒发现毒力完全丧失。引人注目的是，VP35 突变病毒有效免疫动物对随后的野生型 EBOV 挑战。这些体内研究，使用重组 EBOV 病毒，加上所附的生化和结构分析直接关联 VP35 dsRNA 绑定和干扰素抑制职能与病毒发病机制。此外，这些研究针对这个关键 EBOV 毒力因子的抗病毒药物的发展提供了一个框架。
DsRNA 承认和干扰素的拮抗作用埃博拉病毒 VP35 的结构基础。
埃博拉病毒蛋白 35 （VP35），编码由高致病性的伊波拉病毒，通过信号通路，包括那些发起的钻机类似受体拮抗抗病毒药物有助于宿主免疫逃逸的研究。在这里我们报告埃博拉病毒 VP35 干扰素抑制域 (IID) 绑定到短双链 RNA (dsRNA)，以及体内结果揭示了 VP35 dsRNA 互动如何有助于免疫逃逸的晶体结构。VP35 IID 守恒基本残留承认 dsRNA 骨干，而 dsRNA 钝端是 '封端' 由模仿钻机类似受体识别的钝端 dsRNA 的疏水性残留的口袋里。残留物 RNA 结合的关键也为干扰素抑制体内而不是 VP35 的病毒聚合酶辅酶功能很重要。这些结果表明同时识别的 dsRNA 骨干和钝端提供的埃博拉病毒 VP35 拮抗宿主 dsRNA 传感器和免疫反应的机制。
赖斯顿埃博拉病毒 VP35 干扰素抑制作用域的结构和功能的表征。
Ebolaviruses 是在人类和非人类灵长类致命出血热的病原体。迄今为特点的 filoviruses，赖斯顿埃博拉病毒 (REBOV) 是唯一埃博拉病毒，是对人类尽管 REBOV 可以导致非人灵长类动物的致命疾病的病源。以前的研究也表明 REBOV 那么有效抑制比扎伊尔埃博拉病毒 (ZEBOV) 或马尔堡病毒宿主固有免疫反应。病毒式编码 VP35 蛋白是重要的免疫抑制，但目前缺乏了解从 REBOV 和其他 filoviruses VP35 蛋白质的相对贡献。为了解决这一问题，我们的特点 REBOV VP35 干扰素抑制 (IID) 使用域结构、 生化、 和病毒学研究。这些研究显示双链 RNA 绑定和干扰素抑制两个物种之间的差异。这些观察到的差异可能是由于增加的稳定性和灵活性在 REBOV VP35 IID，损失热位移稳定性检测方法所示。符合这一发现，REBOV VP35 IID 的 1.71 A 晶体结构显示它是高度相似的 ZEBOV VP35 IID，与整体的骨干 r.m.s.d.的 0.64 A，但包含一个附加的螺旋元素之间的两个子域，VP35 IID 的链接器在。链接器，包括交换序列之间 REBOV 和 ZEBOV，附近的突变揭示链接器序列具有有限变异性的宽容。以前解决无配体和双链 RNA 绑定形式的 ZEBOV VP35 IID 结构，以及我们对 REBOV VP35 IID 的当前研究加强免疫抑制的 VP35 的重要性。观察到 REBOV 和 ZEBOV VP35 蛋白质之间的功能差异可能有助于观察到的差异，在致病性，但这些都不可能是主要的决定因素。但是，在结构和序列变异，加上伊波拉病毒 VP35 蛋白质，多个关键角色的低容差的相似性的高水平突出显示 VP35 作为治疗发展的潜在目标的可行性。
Ebolavirus VP35 蛋白质内的基本残留物所需的其病毒聚合酶辅酶功能。
Ebolavirus (EBOV) VP35 蛋白绑定到双链 RNA （dsRNA）、 抑制宿主 α/β 干扰素 (干扰素-α/β) 生产，并是复杂的病毒聚合酶的重要组成部分。VP35 C 终端干扰素抑制域 (IID) 的结构研究确定特定结构功能，包括中央基本修补程序和疏水性的口袋，dsRNA 具有约束力和干扰素抑制作用非常重要。此外确定了几个其他守恒基本残留与中央基本修补程序和基本的残留物，称为第一次基本修补程序，独立群集接壤。丙氨酸替代突变体的功能分析表明中央基本修补程序以外的基本残留不需 dsRNA 绑定或干扰素抑制。然而，minigenome 检测方法，评估病毒 RNA 聚合酶复变函数，其中查明这些基本的其他残留物，是病毒的 RNA 合成的关键。其中，位于第一基本修补程序内的一个子集是重要的 VP35-核蛋白 (NP) 互动，由 coimmunoprecipitate 与 NP 丙氨酸替代突变体不能证明这一点。因此，第一次基本修补残留有可能通过与 NP 交互复制复杂地层的关键。Coimmunoprecipitation 研究进一步表明 VP35 IID 足以与 NP 进行交互，该 dsRNA 可调节 NP VP35 IID 交互。其他基本残留的突变，就会中断 VP35 聚合酶辅酶功能不会影响与 NP 或病毒聚合酶的氨基总站交互。集体，这些结果突出守恒基本残留物 EBOV VP35 C 终端 IID 的重要性，并验证 VP35 IID 作为潜在的治疗目标。
Ebolavirus VP35 是一个多功能的毒力因素。
埃博拉病毒 （EBOV） 是零星的暴发，期间会导致严重的出血性发热的 filoviridae 家庭的成员，目前可没有认可的治疗方法。多功能 EBOV VP35 蛋白通过拮抗病毒信号通路促进免疫逃逸的研究，是重要的病毒 RNA 合成。为了澄清规管机制，并制定对策，我们最近解决了扎伊尔的结构和赖斯顿 EBOV VP35 干扰素抑制域 (IID) 自由形式和扎伊尔 EBOV VP35 IID 的绑定到 dsRNA。与生化、 细胞生物、 和病毒学研究一起，我们结构的工作表明不同区域内 EBOV VP35 IID 有助于通过宿主免疫逃逸和病毒 RNA 合成的毒力。在这里我们总结一下我们最近的结构与功能的研究和讨论的潜力作为靶点的多功能埃博拉病毒 VP35。
艾滋病毒信封 Gp120 激活淋巴细胞功能相关抗原-1 对 CD4 T 淋巴细胞，并增加了针对 LFA 1 Leukotoxin (LtxA) 细胞易感性。
LFA-1 的细胞粘附分子和其细胞间粘附分子-1 配体发挥重要作用，促进艾滋病毒 1 传染性和传输。这些分子在信封上的艾滋病毒 1 virions 是目前，艾滋病毒病毒学突触的组成部分。然而，需要将 LFA 1 转换为积极构建具有高亲和性结合的细胞间粘附分子-1 的细胞激活。这项研究计算是否这种激活可以诱导艾滋病毒本身。数据显示，艾滋病毒 1 gp120 是不足以触发 LFA 1 激活完全静止幼稚的 CD4 T 细胞中 CD4 相关的方式，这些 CD4 T 细胞变得更容易受到由 LtxA，优先目标表达高水平的积极的 LFA 1 白细胞的细菌 leukotoxin 杀害。此外，病毒 p24 表示 CD4 T 细胞在外周血中感染艾滋病毒的科目中发现有更高水平的表面 LFA-1 和 LtxA 治疗导致病毒性 DNA 负担显著减少。这些结果首次证明了直接诱导淋巴细胞功能相关抗原-1 激活 CD4 T 细胞对艾滋病毒的能力。虽然 LFA 1 激活可能加强艾滋病毒传染性和传输，它还会呈现细胞更容易受到可能作为一种新型治疗战略消耗在艾滋病毒感染者的病毒水库利用 LFA 1 针对的细菌毒素。
