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Articles by Kathleen C. Prins in JoVE
JoVE Immunology and Infection
의 이미징 HIV-1 봉투 유발 Virological 시냅스와 합성 지질 Bilayers에 신호
1Department of Pathology, New York University Langone School of Medicine, 2Program in Molecular Pathogenesis, Marty and Helen Kimmel Center for Biology and Medicine and Skirball Institute for Biomolecular Medicine, 3Laboratory of Molecular Immunogenetics, National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases, National Institutes of Health, 4Veteran Affairs New York Harbor Healthcare System
이 문서는 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경에 의한 유리를 지원 평면 bilayers에서 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성을 시각화하는 방법을 설명합니다. 메소드는 또한 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성시 발생하는 신호 전달 분자의 활성화 및 재배포를 탐지하기 immunofluorescence 염색법과 결합 할 수 있습니다.
Other articles by Kathleen C. Prins on PubMed
에볼라 바이러스 단백질 VP35 인터페론 규제 요소 활성화 Kinases IKKepsilon 및 TBK 1의 기능을 손상
에볼라 바이러스 (EBOV) VP35 단백질 초기 항 바이러스 알파/베타 인터페론 (IFN-알파/베타) 응답 반감. 우리는 이전에 VP35 인은 산화의 IFN 규제 요인 3 (IRF-3), IFN-알파/베타 식의 유도 대 한 중요 한 전사 인자를 차단 하 여 IFN-베타 발기인의 바이러스 유도 활성화를 억제 한다을 시연 했다. 또한, VP35 블록 IFN-베타 발기인 활성화 유도 retinoic 산을 유도할 수 있는 유전자의 여러 구성 요소에 의해 나 (유 정-나) / 흑색 종 분화 관련 유전자 5 (MDA-5)-활성화 된 신호 경로 장비를 포함 하 여-나 IFN-베타 발기인 자극 기 1 (IPS-1) 탱크 바인딩 키 1 (TBK-1)와 IkappaB kinase 엡실론 (IKKepsilon). 이러한 결과 IRF kinases TBK-1 및 IKKepsilon VP35 대상 수 있습니다 제안 했다. Coimmunoprecipitation 실험 지금 TBK-1, Ikkepsilon와 vp35의 물리적 상호 고 추가 IKKepsilon 삭제 생성자를 사용 하 여 Ikkepsilon의 아미노 터미널 키 도메인 IRF 3 또는 vp35와의 상호 작용에 대 한 충분 한 보여 줍니다. 체 외, IKKepsilon 또는 TBK 1 IRF 3 뿐만 아니라 VP35 phosphorylates. 또한, VP35 overexpression IKKepsilon-IRF-3, IKKepsilon-IRF-7, IKKepsilon-IPS-1 상호 작용을 손상. 마지막으로, 셀 IKKepsilon overexpressing에서 lysates IRF 3 체 외 phosphorylate 수 키 니 아 제 활동을 포함. VP35 IKKepsilon 표현 셀 단위로, 키 니 아 제 활동이 표시 되지 않습니다. 이러한 데이터는 VP35 미치는 IFN-적에 게 기능을 적어도 부분에서 IKKepsilon 및 TBK 1 kinases와 IRF 3와 IRF-7 그들의 기질을 포함 하 여 그들의 정상적인 상호 파트너 간의 필요한 상호 작용을 차단 하 여 것이 좋습니다.
Abrogating VP35 상호 이중 가닥 RNA 변이 에볼라 바이러스 기니 피그에 Avirulent 렌더링
에볼라 바이러스 (EBOV) 단백질 vp35는 호스트 인터페론 (IFN)의 이중 가닥 RNA (dsRNA) 바인딩 억제제-알파/베타 응답도 바이러스 중 합 효소의 cofactor로 작동 합니다. 최근 구조 연구 VP35 dsRNA 바인딩 활동에 필요한 중앙 기본 패치를 포함 하 여 주요 기능을 식별 합니다. EBOV 복제 및 pathogenesis, 두 점 돌연변이 대 한 VP35 구조 기능의 기능적 중요성을 해결 하기 위해 K319A/R322A VP35 dsRNA 바인딩 활동을 파기 하 고 심각 하 게 손상 IFN-알파/베타 생산의 그것의 억제를 발견 했다. 솔루션 핵 자기 공명 (NMR) 분광학 및 x-선 결정학 최소한의 구조 물결 K319A/R322A VP35 이중 돌연변이 공개 하 고 기본 요금 손실 변경 된 기능을 끈다는 것이 좋습니다. 야생-타입 VP35 바이러스, IFN-결함 Vero 세포에 최소한의 성장 감쇠 하지만 IFN 유능한 세포에 심각한 장애를 기준으로 인코딩 돌연변이 VP35 재조합 EBOVs 전시. 기니 피그 VP35 돌연변이 바이러스 독성의 완전 한 상실을 공개 했다. 기 막히게, VP35 돌연변이 바이러스에는 효과적으로 후속 야생-타입 EBOV 과제에 대 한 동물 접종. 재조합 EBOV 바이러스를 사용 하 여 이러한 in vivo 연구 함께 하는 생 화 학적 및 바이러스 성 병으로 직접 상호 연결 VP35 dsRNA 바인딩 및 IFN 억제 기능 구조 분석. 또한, 이러한 연구 antivirals이 중요 한 EBOV 독성 요소를 대상으로 개발을 위한 프레임 워크를 제공 합니다.
에볼라 Vp35에 의해 DsRNA 인식 및 인터페론 적개심에 대 한 구조적으로
에볼라 바이러스 성 단백질 35 (VP35), 높은 병원 성 에볼라 바이러스에 의해 인코딩된 antagonizing 바이러스 신호 경로, 장비 형 수용 체에 의해 시작을 비롯 하 여 호스트 면역 회피 용이. 여기 우리는 생체 조건 결과 함께 VP35 dsRNA 상호 작용 면역 회피에 기여 하는 방법을 보여 하는 짧은 이중 가닥 RNA (dsRNA)에 바인딩된 에볼라 VP35 인터페론 억제 도메인 (IID)의 결정 구조를 보고 합니다. 보존된 기본 잔류물 VP35 IID dsRNA 무딘 끝 ' 끝-'로 뒤덮인 블런트 엔드 Dsrna의 장비 형 수용 체 인식을 모방 하는 소수 성 잔류물의 주머니는 dsRNA 백본 인식. RNA 바인딩을 위해 중요 한 잔류물도 비보에 인터페론 억제에 대 한 하지만 vp35의 바이러스 효소 공동 인자 기능에 중요 하다. 이 결과 dsRNA 백본 및 무딘 끝의 동시 인식 있는 에볼라 VP35 반감 호스트 dsRNA 센서와 면역 응답 메커니즘을 제공 합니다 것이 좋습니다.
레 스 에볼라 바이러스 VP35 인터페론 억제 도메인의 구조적 및 기능적 특성
Ebolaviruses는 인간과 nonhuman 영장류에서 치명적인 출혈의 원인이 되는 에이전트. 지금까지 특징 filoviruses 가운데 레 스 에볼라 바이러스 (REBOV) REBOV nonhuman 영장류에 치명적인 질병을 일으킬 수 있다는 사실에도 불구 하 고 인 간에 게 nonpathogenic은 유일한 에볼라 바이러스가입니다. 이전 연구는 또한 REBOV 덜 자이르 에볼라 바이러스 (ZEBOV) 또는 Marburg 바이러스 보다 호스트 타고 난 면역 반응 억제에 효과적 이다 제안. Virally 인코딩된 VP35 단백질은 면역 억제를 위해 중요 하지만 REBOV와 다른 filoviruses에서 VP35 단백질의 상대적 기여에 대 한 이해는 현재 부족 한. 이 문제를 해결 하기 위해 우리는 REBOV VP35 인터페론 억제 도메인 (IID) 구조적, 생화학를 사용 하 여 및 virological 연구 특징. 이 연구는 이중 가닥 RNA 바인딩 및 인터페론 억제 두 종족 간의 차이 공개. 이러한 관찰 된 차이 열 변화 안정성 분석 실험에 의해 증명으로 증가 한 안정성과 손실 REBOV VP35 IID에 유연성으로 인해. 이 발견과 일치, REBOV VP35 IID 1.71 A 크리스탈 구조 그것 0.64 A, 전반적인 백본 r.m.s.d.와 ZEBOV VP35 IID의 매우 유사 하지만 링커 VP35 IID의 두 하위 도메인 사이는 추가 헬리컬 요소가 보여준다. 스와핑 REBOV와 ZEBOV, 시퀀스를 포함 하 여 링커 근처 돌연변이 공개 링커 시퀀스 다양성에 대 한 허용 오차를 제한 했다. ZEBOV VP35 IID 구조체의 이전에 해결된 리간드 자유롭고 이중 가닥 RNA 바운드 폼, 함께 REBOV VP35 IID에 대 한 우리의 현재 연구는 면역 억제에 vp35의 중요성을 강화. REBOV 및 ZEBOV VP35 단백질 사이 관찰 기능 차이 pathogenicity, 관찰 된 차이 원인이 될 수 있지만 이들은 주요 결정 될 것. 그러나, 높은 수준의 구조와 순서 변화, 에볼라 바이러스 VP35 단백질에 의해 여러 중요 한 역할과 결합에 대 한 낮은 내성을 유사성 치료 개발에 대 한 잠재적인 대상으로 vp35의 생존 능력을 강조 표시 합니다.
Ebolavirus VP35 단백질 내의 기본 잔류물의 바이러스 효소 공동 인자 기능 필요 하다
Ebolavirus (EBOV) VP35 단백질 이중 가닥 RNA (dsRNA) 바인딩됩니다 호스트 알파/베타 인터페론 (IFN-α/β) 생산을 억제 하 고 복잡 한 바이러스 중 합 효소의 필수적인 구성 요소입니다. VP35 C 터미널 IFN 금지 도메인 (IID)의 구조 연구 특정 구조 기능, 중앙 기본 패치 등 소수 포켓 dsRNA 바인딩 및 IFN 저해에 대 한 중요 한 식별. 여러 다른 보존된 기본 잔류물 중앙 기본 패치 및 첫 번째 기본 패치 라는 기본적인 잔류물의 별도 클러스터 경계 또한 발견 했다. 알라닌 대체 돌연변이의 기능 분석 중앙 기본 패치 밖에 기본 잔류물 dsRNA 바인딩 또는 IFN 억제 필요 하지 않은 나타냅니다. 그러나, minigenome 분석 실험, 바이러스 성 RNA 효소 복잡 한 기능을 평가 하는 이러한 바이러스 성 RNA 합성에 대 한 중요 한 다른 기본적인 잔류물을 식별 합니다. 이들 중, 첫 번째 기본 패치 내에 있는 하위 집합 coimmunoprecipitate NP와 알라닌 대체 돌연변이의 무 능력에 의해 입증 VP35-nucleoprotein (NP) 상호 작용을 위해 중요 하다. 따라서, 첫 번째 기본 패치 잔류물 확률이 NP와의 상호 작용을 통해 복제 복잡 한 형성을 위한 중요 한. Coimmunoprecipitation 연구 추가 VP35 IID NP와 상호 작용 하는 데 충분 하 고 그 dsRNA NP VP35 IID 상호 변조 수 보여 줍니다. VP35 효소 공동 인자 기능을 방해 하는 다른 기본 잔류물 돌연변이 바이러스 중 합 효소의 아미노 말단 또는 NP와 상호 영향을 주지 않습니다. 샨 다, 이러한 결과 EBOV VP35 C 터미널 IID에서 보존된 기본 잔류물의 중요성을 강조 하 고 잠재적인 치료 대상으로 VP35 IID의 유효성을 검사.
Ebolavirus VP35 다기능 독성 요소 이다입니다
에볼라 바이러스 (EBOV)는 산발적 인 발생 시 심각한 출혈을 일으키는 filoviridae 제품군의 구성원 및 없음 승인 된 치료는 현재 사용할 수 있습니다. 다기능 EBOV VP35 단백질 면역 회피 antagonizing 항 바이러스 신호 경로 의해 용이 하 게 하 고 바이러스 성 RNA 합성을 위해 중요 하다. 규제 메커니즘을 명료 하 고 대책을 개발 하려면, 우리는 최근에 자이르 구조를 해결 하 고 레 스 EBOV VP35 인터페론 억제 도메인 (IID) 자유 양식 및 자이르 EBOV VP35 IID의 Dsrna에 바인딩됩니다. 생화학, 세포 생물학, 그리고 virological 연구와 함께, 우리의 구조 작업 EBOV VP35 IID 내에서 별개의 영역 호스트 면역 회피와 바이러스 성 RNA 합성을 통해 독성을 기여 공개. 여기 우리는 최근 우리의 구조 및 기능 연구 요약 다기능 에볼라 VP35 치료 대상으로 서의 가능성을 논의 하 고 있습니다.
에이즈 봉투 Gp120 LFA-1 CD4 T-세포에 활성화 하 고 세포 LFA-1 대상으로 Leukotoxin (LtxA) 민감성을 증가 시킵니다
세포 접착 분자 LFA-1과는 ICAM-1 리간드 HIV 1 infectivity와 전송에 중요 한 역할을 재생 합니다. 이러한 분자 에이즈-1 virions 봉투에 있으며 에이즈 virological 냅의 통합 구성 요소는. 그러나, 세포 활성화는 ICAM-1에 대 한 높은 선호도 바인딩이 활성화 나 란을 LFA-1을 변환 합니다. 이 연구 등 활성화 HIV 자체에 의해 유도 될 수 있는 여부를 평가 합니다. 데이터 보여줍니다 HIV 1 gp120 CD4 종속 방식에서 완전 무부하 순진한 CD4 T 세포에서 LFA-1의 정품 인증을 실행 하는 데에 충분 했다이 CD4 T 세포 더 취약 LtxA, 우선적으로 대상으로 활성 LFA-1의 높은 레벨을 표현 하는 백혈구는 세균 leukotoxin에 의해 살해 되었다. 또한, 에이즈에 감염 된 과목의 말 초 혈액에서 바이러스 p24 표현 CD4 T 세포 표면 LFA-1의 상부 및 바이러스 성 DNA 부담의 상당한 감소를 주도 LtxA 치료를 발견 했다. 이 결과 처음으로 직접 CD4 T 세포 LFA-1의 활성화를 유도 하는 HIV의 기능을 보여 줍니다. LFA-1 정품 인증에는 HIV infectivity 및 전송을 향상 시킬 수 있습니다, 하지만 그것은 또한 렌더링 셀은 LFA-1 대상으로 세균 독, HIV에 감염 된 개인의 저수지 바이러스 고갈 하는 새로운 치료 전략으로 다룰 수는 더 적습니다.
