Änderungen in Kardialen Myozyten-Morphologie Verändern Die Eigenschaften Der Spannung-gesteuerte Ionenkanäle

Cardiovascular Research. Jul, 2002  |  Pubmed ID: 12062709

Intrazellulären Ca (2 +) Regelt Die Reaktionsfähigkeit Der Kardialen L-Typ Ca (2 +), Um Aktuelle Proteinkinase A: Rolle Von Calmodulin

American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 12969890

Die Überexpression Des Integrin Beta (1A)-Untereinheit Und Der Beta (1A) Zytoplasmatische Domäne Modifiziert Die Beta-adrenerge Verordnung Des Kardialen L-Typ-Ca (2 +) Strom

Journal of Molecular and Cellular Cardiology. Jun, 2004  |  Pubmed ID: 15158122

Die Verordnung Von Herz-Volumen-sensitiven Chlorid-Kanal Von Focal Adhesion Kinase Und Src-Kinase

American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16040720

Adenoviral-vermittelte Ausdruck Des Dihydropyridin-unempfindliche L-Typ-Kalzium-Kanäle in Kardiale Ventrikuläre Muskelzellen Und Fibroblasten

European Journal of Pharmacology. Jun, 2007  |  Pubmed ID: 17397827

Kardiale Spannung-Gating Ca2 + Kanäle die intrazellulären Ca2 +-Konzentration zu regulieren und sind daher für die Muskelkontraktion, zweite Bote-Aktivierung, Genexpression und Elektrische Signalisierung. Als ersten Schritt beim Zugriff auf die strukturellen und funktionellen Eigenschaften des L-Typ Ca2 +-Kanals im Herzen, haben wir eine Dihydropyridin (DHP) geäußert-unempfindliche CaV1.2 Kanal Ratte ventrikuläre Muskelzellen und Fibroblasten. Nach Isolierung und Kultur wurden Zellen mit Adenoviren auszudrücken entweder LacZ oder ein mutant CaV1.2 Kanal (CaV1.2DHPi), enthält die doppelte-Mutation (T1039Y & Q1043M) infiziert. Diese Mutation rendert den Kanal unempfindliche gegen neutrale DHP-Verbindungen wie Nisoldipine. Der ganze Zellen und L-Typ Ca2 + Strom (ICa) gemessen im Steuerelement Myocytes in gewissem Sinne Konzentration abhängige, durch Nisoldipine mit einem IC50 66 nM und vollständigen Block bei 250 gehemmt war nM. ICa in Zellen, die mit AdCaV1.2DHPi infiziert wurde hingegen gehemmt von nur 35 % von 500 nM Nisoldipine aber komplett von 50 MicroM Diltiazem blockiert. Um CaV1.2DHPi isoliert zu studieren, waren Myocytes mit AdCaV1.2DHPi infiziert mit Nisoldipine inkubiert. Unter dieser Bedingung die Zellen ausgedrückt eine große ICa (12 pA/pF) und Ca2 + Transienten während der Stimulation Feld angezeigt. Darüber hinaus stiegen die Zugabe von 2 MicroM Forskolin und 100 MicroM 3-Isobutyl-1-Methylxanthine (IBMX), Protein-Kinase A, stimulieren stark IBa in den AdCaV1.2DHPi-infizierten Zellen. Ein Cd2 +-sensible IBa wurde auch aufgenommen in kardialen Fibroblasten mit AdCaV1.2DHPi infiziert. Ausdruck von CaV1.2DHPi wird somit ein wichtiges Instrument in Studien der kardialen Muskelfaser und Fibroblasten-Funktion bieten.

Neonatalen Ratte Kardialen Fibroblasten Schnelles Drei Arten Von Spannung-Gating K + Kanäle: Verordnung über Eine Vorübergehende Nach Außen Laufenden Durch Proteinkinase C

American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18156198

Kardiale Fibroblasten Regeln myokardiale Entwicklung über mechanische, chemische und elektrische Wechselwirkungen mit zugeordneten Cardiomyocytes. Das Ziel dieser Studie war zu identifizieren und Spannung-Gating K(+) (Kv) Kanäle in neonatalen Ratte ventrikuläre Fibroblasten zu charakterisieren. Mit dem Einsatz der gesamten Zelle Anordnung der die Patch-Clamp-Technik wurden drei Arten von Spannung-Gating, nach außen K(+) Strömungen in der kultivierten Fibroblasten gemessen. Die meisten Zellen ausgedrückt eine vorübergehende äußerliche K(+) aktuelle (I(to)), die bei Potenziale von-40 positive aktiviert mV und teilweise inaktivierte während depolarisierende Spannung Schritte. I(to) wurde durch die arrhythmischen Agent Flecainid (100 MicroM) gehemmt und BaCl(2) (1 mM), wurde aber von 4-Pyridinamin unberührt (4-AP; 0,5 und 1 mM). Eine kleinere Anzahl von Zellen ausgedrückt eine der zwei Arten von kinetisch getrennte, verzögert-Gleichrichter K(+) Strömungen [I(K) schnell (I(Kf)) und I(K) (I(Ks)) langsam], die 4-AP. Anwendung der Phorbol 12-Isopropylmyristat 13-Acetat, Proteinkinase C (PKC) stimulieren stark geblockt wurden, I(to) gehemmt, aber hatte keine Auswirkungen auf I(Kf) und I(Ks). Immunoblot Analyse ergab das Vorhandensein von Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5 und Kv2.1 Alpha-Untereinheiten aber nicht Kv4.2 oder Kv1.6 Alpha-Untereinheiten in den Fibroblasten. Schließlich Vorbehandlung der Zellen mit 4-AP gehemmt Angiotensin II-induzierte intrazelluläre Ca(2+) Mobilisierung. So drücken die neonatale kardiale Fibroblasten mindestens drei verschiedenen Kv-Kanäle, die zu Elektrische/chemische Signale in diesen Zellen beitragen können.

Entwicklung Eine Hochdurchsatz-Tests Für Die Überwachung Von CAMP Pegeln in Kardiale Ventrikuläre Myocytes

Journal of Cardiovascular Pharmacology. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19247193

G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) stellen die größte Familie von Transmembran-Rezeptoren Signaltransduktion der Zelle beteiligt. Viele von diesen GPCRs vermitteln ihre pharmakologischen Maßnahmen durch die Regelung des intrazellulären Ebenen von 3', 5'-zyklisches Adenosinmonophosphat (cAMP). Obwohl das Herz mehr als 100 GPCRs ausdrückt, Droge-Agonisten für etwa ein Drittel dieser GPCRs nicht wurden. Das Ziel dieses Projektes war die Entwicklung einer High-Throughput-Screening-Tests zur Überwachung der Lager im Herzen zu initiieren. Neonatalen Ratte kardiale ventrikuläre Myocytes waren isoliert und kultiviert auf Deckgläsern (ganze Zellen Patch Clamp Aufnahme) oder in 96-Well-Platten (Neon imaging Platte Leser Messungen). Zellen wurden mit Adenoviren auszudrücken entweder Beta-Galaktosidase (AdLacZ) oder ein mutant zyklische Nukleotid-Gating (CNG) Kanal mit die doppelte Mutation C460W/E583M (AdCNG) infiziert. Zusatz von 2 MicroM Forskolin zusammen mit 100 MicroM 3-Isobutyl-1-Methylxanthine, Steigerung der intrazellulären cAMP, aktiviert eine kation aktuelle in Muskelzellen, die mit dem AdCNG infiziert. In Muskelzellen geladen mit fluoreszierenden Ca Indikator Fluo-4 erhöhte Stimulation mit Forskolin, Adrenalin, Noradrenalin oder die adrenergenen Rezeptor-Agonist-Isoproterenol das Fluoreszenzsignal Indikativ von Ca Zustrom durch die CNG-Kanal. Abschließend CNG-Kanäle werden bereitwillig in kultivierten kardialen Myozyten ausgedrückt und in High-Throughput-Screening-Tests des intrazellulären cAMP genutzt werden können.

Eine Echtzeit-Screening-Test Zur GIRK1/4-Kanal-Blocker

Journal of Biomolecular Screening. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 20938046

Die kardiale Acetylcholin aktiviert K(+) Kanal (I(K,Ach)) stellt eine neuartige medikamentöse Therapie in der Behandlung von Vorhofflimmern (AF). Dieser Kanal ist Mitglied der G-Protein-gekoppelter nach innen Gleichrichter K(+) (GIRK) Kanal Überfamilie und besteht aus den Untereinheiten GIRK1/4 (Kir3.1 und Kir3.4). Das Ziel dieser Studie war eine zellbasierte Screening Assay zur Identifizierung von neuen Blocker des GIRK1/4 Kanal zu entwickeln. Die Maus Vorhofflimmern HL-1 Zelllinie, Ausdruck des GIRK1/4-Kanals, wurde plattiert in 96-Well-Plattenformat, geladen mit den fluoreszierenden Membrane Potential-empfindlichen Farbstoff BIZ-(1, 3-Dibutylbarbituric-Säure) Trimethine Oxonol (DiBAC(4)(3)) und gemessenen mit einer Leuchtstofflampe imaging Lesegerät (FLIPR). Anwendung von der Muskarinischer Agonist-Carbachol zu den Zellen verursacht eine schnelle, zeitabhängige Abnahme der das Fluoreszenzsignal, bezeichnend für K(+) Efflux durch den GIRK1/4-Kanal (Carbachol vs. Steuerungslösung, Z' Faktor = 0.5-0.6). Die GIRK1/4-Kanal-Fluoreszenzsignal wurde durch BaCl(2) blockiert und durch die treibende Kraft für K(+) über der Zellmembran erhöhen verbessert. Um das Dienstprogramm des Tests für das screening von GIRK1/4-Kanal-Blocker zu testen, wurden Zellen mit einer kleinen zusammengesetzte Bibliothek von Na(+) und K(+) Kanal Modulatoren behandelt. Analoga von Amilorids und Propafenone wurden identifiziert, wie Kanal-Blocker bei Konzentrationen weniger als 1 µM. So kann der GIRK1/4-Kanal-Assay in der Entwicklung von neuen und selektiven Agenten verwendet werden, zur Behandlung von AF.

Targeting GIRK Kanäle Für Die Entwicklung Neuer Therapeutika

Frontiers in Pharmacology. 2011  |  Pubmed ID: 22059075

G-Protein-gekoppelter nach innen Gleichrichter K(+) (GIRK) Kanäle stehen neue Ziele für die Entwicklung neuer Therapeutika. GIRK-Kanäle sind durch eine große Anzahl von G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) aktiviert und die elektrische Aktivität der Neuronen, kardiale Myozyten und β-Pankreas-Zellen zu regulieren. Abweichungen in GIRK Kanal Funktion haben in der Patho-Physiologie der neuropathischen Schmerzen, Drogensucht, Herzrhythmusstörungen und andere Erkrankungen verwickelt. Die Pharmakologie dieser Kanäle bleibt jedoch weitgehend unerforscht. In diesem Artikel beschreiben wir die Entwicklung eines Screening-Tests für identifizieren neue Modulatoren der neuronalen und kardiale GIRK-Kanäle. Hypophyse (AtT20) und kardiale (HL-1)-Zelllinien Ausdrücken GIRK Kanäle wurden in 96-Well Platten, geladen mit Oxonol Membrane Potential-empfindlichen Farbstoffen und mittels einer Leuchtstofflampe imaging Lesegerät kultiviert. Aktivierung der endogenen GPCRs in den Zellen verursacht, die eine schnelle, zeitabhängige Abnahme der das Fluoreszenzsignal. bezeichnend für K(+) Efflux durch die Kanäle GIRK (GPCR Stimulierung gegen Kontrolle, Z'-Faktor = 0.5-0.7). Erwartungsgemäß wurde dieses Signal durch Zusatz von Ba(2+) und die GIRK Kanal Toxin Tertiapin-Q gehemmt. Um das Dienstprogramm des Tests für das screening von GIRK-Kanalblocker zu testen, wurden Zellen für 5 min mit einer zusammengesetzten Bibliothek von Na(+) und K(+) Kanal Modulatoren inkubiert. Ion-Transporter-Inhibitoren wie 5-(N,N-hexamethylene)-Amilorids und SCH-28080 wurden als Blocker des Kanals bei Sub-micromolar Konzentrationen GIRK identifiziert. Daher wird im Screening-Test für den Ausbau der begrenzten Pharmakologie der GIRK-Kanal und bei der Entwicklung neuer Wirkstoffe zur Behandlung von GIRK Channelopathies nützlich sein.