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Articles by Kenric J. Hoegler in JoVE
JoVE Neuroscience
Targeting neuroni bulbo olfattivo utilizzo combinato In Vivo Elettroporazione e GAL4-Based Enhancer Trappola Linee Zebrafish
1Department of Biology, Pace University, 2Cellular and Molecular Medicine, University of California, San Diego, 3Division of Cell Biology and Cell Physiology, Zoological Institute, Braunschweig University of Technology
La risoluzione temporale e spaziale di manipolazioni genetiche determina lo spettro di fenomeni biologici che possono turbare. Qui usiamo temporalmente e spazialmente discreto
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Il Danio Rerio Optic Tectum Usando Elettroporazione in Vivo Di Targeting
Introduzione: elettroporazione In vivo è un metodo per la consegna di plasmidi e altri reagenti del oligonucleotide che offre un controllo temporale preciso. In zebrafish, elettroporazione in vivo è particolarmente adatto a fornire i vettori di espressione della proteina fluorescente verde (GFP) di sviluppo del sistema nervoso centrale. Questo protocollo descrive una modifica di elettroporazione in vivo che può essere utilizzati per indirizzare specificamente la tectum ottica lo sviluppo degli embrioni di zebrafish cominciando a post-fertilization h 24 (hpf). Gli elettrodi di elettroporazione richiesti per questo approccio possono essere facilmente costruiti da materiali relativamente poco costosi. Microiniezione del DNA del plasmide al ventricolo mesencefalo seguito da un posizionamento preciso degli elettrodi elettroporazione permette per il targeting di sviluppare neuroni in un solo emisfero dell'ottica tectum. Utilizzando questo protocollo, il tectum ottica può essere efficacemente mirati in un'alta percentuale (79%) di esprimere gli embrioni. Questo metodo può essere utilizzato anche per fornire simultaneamente i vettori di espressione e perdita di funzione reagenti, che possono fornire un controllo temporale preciso di atterramento di funzione del gene.
