Una Nueva Mutación Espontánea En El Ratón Ames Waltzer Gene, Pcdh15

Hearing Research. Jun, 2003  |  Pubmed ID: 12782354

Una mutación recesiva la sordera en el ratón surgió de forma espontánea y fue identificado en una colonia de la segregación de un alelo nulo de la gastrina-receptor del péptido liberador (GrPr,) locus. Evocados auditivos del cerebro mediciones de la respuesta madre reveló la sordera en ratones afectados de 7 semanas de edad. En los análisis de ligamiento, el fenotipo mutante se asignó cerca del marcador y el gen D10Mit186 protocaderina Pcdh15. Como se muestra en las pruebas de complementación, la nueva mutación es alélica con Ames Waltzer (Pcdh15 (AV)). Secuenciación mutante derivado de cerebro Pcdh15 ADNc identificado la inserción de un residuo de citosina en la posición nucleotídica C2099 (2099insC), lo que resulta en un marco de desplazamiento y prematuro codón de parada. Estereocilios anormal en las células pilosas internas y externas del órgano de Corti se identificaron mediante microscopía electrónica de barrido tan pronto como sea 0 días después del parto y la histología de la sección transversal reveló degeneración neuroepitelial grave en cócleas de 30-50 días de edad mutantes. El nuevo alelo de Ames Waltzer, designado Pcdh15 (AV-JFB), puede ayudar en el estudio de la histopatología asociada con el síndrome de Usher tipo 1F, que es causada por un alelo nulo funcional de PCDH15.

Evaluación De La Estructura De La Retina Y La Función En Ratones Ames Waltzer

Investigative Ophthalmology & Visual Science. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12939319

En los seres humanos, las mutaciones en protocaderina 15 son conocidos por causar Síndrome de Usher Tipo 1F (USH1F). Los pacientes con USH1F nacen con pérdida auditiva profunda y tienen problemas visuales que se desarrollan en la infancia tardía. Con base en la pérdida de la audición y fenotípica de una mutación asociada a protocaderina 15 (Pcdh15), los ratones Ames Waltzer se han presentado como posibles modelos para USH1F. Para determinar si el Waltzer Ames es un modelo de retinopatía en USH1F, estructura de la retina y la función se evaluaron en los cuatro alelos disponibles del ratón.

Las Interacciones En La Red Del Síndrome De Usher Tipo 1 Proteínas

Human Molecular Genetics. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15590703

Los defectos en la miosina VIIa, harmonin (una proteína de dominio PDZ), cadherina 23, 15 y protocaderina Sans (un andamio de proteínas putativo), subyacen en cinco formas de síndrome de Usher tipo I (USH1). Mutantes de ratón para todas estas proteínas presentan una desorganización de su paquete de pelo, que es la estructura mecanotransducción receptivos de las células sensoriales del oído interno, las células ciliadas de la cóclea y el vestíbulo. Hemos demostrado anteriormente que harmonin interactúa con la cadherina 23 y VIIa miosina. Aquí estamos frente a la magnitud de las interacciones entre los cinco conocidos USH1 proteínas. Establecemos el sugerido anteriormente sans-harmonin la interacción y encuentro que Sans también se une a la miosina VIIa. Se demuestra que pueden formar estructuras sans homomeric y que harmonin b puede interactuar con todas las isoformas harmonin. Nos revelan que harmonin también se une a protocaderina 15. La caracterización molecular de estas interacciones indica que a través de su unión a cuatro de los cinco USH1 proteínas, el primer dominio PDZ (PDZ1) de harmonin juega un papel central en esta red. Localizamos sans en la región apical de los cuerpos celulares coclear y vestibular del pelo debajo de la placa cuticular. En contraste con los otros cuatro conocidos USH1 proteínas, no hay etiqueta sans se detectó en los estereocilios. Proponemos que a través de su unión a la miosina VIIa y / o harmonin, sans controla el paquete de cohesión y el desarrollo adecuado del cabello mediante la regulación del tráfico de USH1 proteínas en el camino a los estereocilios.

Caracterización De Un Nuevo Alelo De Ames Waltzer Generados Por Mutagénesis ENU

Hearing Research. Apr, 2005  |  Pubmed ID: 15811708

La mutación en el protocaderina 15 (Pcdh15) gen causa la disfunción de las células ciliadas y se asocia con el desarrollo anormal de los estereocilios. Hemos caracterizado el alelo primero (Pcdh15 (AV-nmf19)) de Ames Waltzer (AV) obtenido por la N-etil-N-nitrosourea (ENU) mutagénesis. Pcdh15 (AV-nmf19) se ha generado en el Fondo de Mutagénesis Neurociencia (NMF) en el Laboratorio Jackson (Bar Habor, EE.UU.). Pcdh15 (AV-nmf19) mutantes muestran dando vueltas y el comportamiento anormal de la natación, junto con la falta de respuesta evocada auditiva del tronco cerebral-en las más altas intensidades de prueba. Mutación análisis muestra sustitución base (A -> G) en la secuencia de consenso donante del empalme vinculado al exón 14 que resulta en la omisión del exón 14 y el empalme del exón 13-15. Esto da como resultado la introducción de un codón de parada en la secuencia de codificación del exón 15 debido a un cambio en el marco de lectura. El efecto de la mutación nmf19 se espera que sea grave ya que la expresada Pcdh15 proteína se prevé que truncar en el dominio cadherina quinto. Las anormalidades de las células ciliadas cocleares estereocilios son evidentes en Pcdh15 (AV-nmf19) mutantes cerca del momento del nacimiento y alrededor de P15 (15 días después del nacimiento) hay evidencia de degeneración de las células sensoriales. La desorganización de los estereocilios las células ciliadas externas se observa ya en P2. Inner estereocilios las células de pelo son también afectados, pero menos severa que las de las células ciliadas externas. Estos resultados son consistentes con las características de la mutación en el Pcdh15 (AV-nmf19) alelo y apoyan nuestra conclusión anterior de que protocaderina 15 juega un papel importante en la morfogénesis de pelo atado.

Caracterización De La Disfunción Vestibular En El Modelo De Ratón Para El Síndrome De Usher 1F

Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15952048

El sordo-dando vueltas Ames Waltzer (av) del ratón alberga una mutación en el gen protocaderina 15 (Pcdh15) y es un modelo para los defectos del oído interno relacionados con el síndrome de Usher tipo 1F. Estudios anteriores mostraron alteración de la morfología de células cocleares del pelo en los ratones jóvenes av. En cambio, no una anomalía estructural en consonancia con la disfunción vestibular significativa en los ratones jóvenes se observó av. La luz y electrónica de barrido estudios microscópicos mostraron que las células pilosas vestibulares de los alelos nulos presuntos Pcdh15 (AV-Tg) y Pcdh15 (AV-3J) son morfológicamente similares a las células sensoriales vestibulares de los compañeros de camada de control, lo que sugiere que el fenotipo observado en estos alelos podría ser una resultado de una central, más que periférica, defecto. En el presente estudio, una combinación de métodos fisiológicos y anatómicos se utilizó para investigar más a fondo el origen de la disfunción vestibular en Ames ratones Waltzer. El análisis de los potenciales evocados vestibulares y angulares reflejos vestíbulo-ocular, reveló la falta de respuesta fisiológica a los estímulos acceleratory lineales y angulares en Pcdh15 ratones mutantes. Función refleja optocinético fue disminuida, pero presente aún en los animales mutantes, lo que sugiere que el defecto es principalmente periférica en la naturaleza. Estos resultados indican que la mutación en Pcdh15 resultados, ya sea en una anomalía funcional en los órganos receptores vestibulares o que los defectos se limitan al nervio vestibular. AM1-43 tinte absorción se ha demostrado que se correlaciona con la función normal en la transducción de células pilosas. Absorción de colorante se encontró que se ha reducido drásticamente en comparación con los mutantes Pcdh15 camada de control, lo que sugiere que la mutación afecta a la función de las células ciliadas, a pesar de las anomalías estructurales compatibles con disfunción vestibular importante no son evidentes por la luz y microscopía electrónica de barrido en el neuroepithelia vestibular de los animales jóvenes.

La Ciencia Básica De La Enfermedad De Ménière Y El Hidrops Endolinfático

Current Opinion in Otolaryngology & Head and Neck Surgery. Oct, 2005  |  Pubmed ID: 16160525

La enfermedad de Meniere se caracteriza por la tríada de la pérdida auditiva fluctuante, vértigo episódico, y el tinnitus y por hidrops endolinfático se encuentran en el examen post mortem. La causa de la enfermedad de Meniere sigue sin estar claro. Numerosos factores juegan un papel en el desarrollo de hidropesía y en la patogénesis de la disfunción cocleovestibular relacionada. Esta revisión destaca los avances recientes en la comprensión de la fisiopatología de la aparición de los síntomas en la enfermedad de Meniere, detallando el papel de la genética, la autoinmunidad, la homeostasis de fluidos endolinfático, excitotoxicidad, estrés oxidativo y la apoptosis celular. Se hace hincapié en la revisión de los modelos animales de reciente descripción que presentan edema endolinfático.

Un Estudio Cuantitativo De La Función De La Gravedad Del Receptor, En Cepas De Ratones Mutantes

Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16235133

El propósito de esta investigación fue identificar los déficit vestibular en ratones utilizando lineales potenciales evocados vestibulares (VsEPs). Umbrales de retiro voluntario, latencias y amplitudes de pico, pico de 24 cepas con mutaciones genéticas conocidas y 6 cepas puras de fondo fueron analizados y estadística descriptiva generada para cada cepa. Los parámetros de respuesta de los homocigotos mutantes se compararon con los heterocigotos y / o los controles de antecedentes y todas las medias de tensión se contrastaron con los rangos normativos. Los homocigotos de las siguientes mutaciones recesivas tenían VsEPs ausentes en las edades analizadas: ESPN (je), Atp2b2dfw 2J, Spnb4qv lnd2J, Spnb4qv 3J, Myo7ash1, Tmie (sr), Myo6sv, JC, J-Pcdh15av, Pcdh15av-2J, Pcdh15av-3J, Cdh23v-2J, Sans (JS), h, y Kcne1pkr Pou3f4del. Estos resultados sugieren profundos déficits de los receptores de gravedad para estos homocigotos, lo cual es consistente con los déficits estructurales que se han documentado para muchas de estas cepas. Los homocigotos de Catna2cdf, Grid2ho4J, Wnt1sw, qk, y las cepas Mbpshi y heterocigotos de Grid2lc tenía VsEPs mensurables, pero uno o más parámetros de respuesta difiere de la del grupo control respectivo (heterocigotos o la tensión de fondo) o se encontraban fuera de los rangos normales. Por ejemplo, qk y homocigotos Mbpshi mostró latencias significativamente prolongados en consonancia con la mielina anormal que ha sido descrito por estas cepas. Latencias prolongadas puede sugerir déficit en la conducción nerviosa; umbrales elevados sugieren una sensibilidad reducida, y la reducción de la amplitud puede ser sugerente para la sincronía neuronal reducida. Una mutación, Otx1jv, tenía todos los parámetros de respuesta de retiro voluntario dentro de los límites normales-un hallazgo esperado debido a la anormalidad en Otxljv presumiblemente restringida al canal semicircular lateral. Curiosamente, algunos grupos de heterocigotos también mostró anomalías en uno o más parámetros de respuesta de retiro voluntario, lo que sugiere que la disfunción vestibular, aunque menos grave, puede estar presente en algunos animales heterocigotos.

La Progresión De La Patología Del Oído Interno De Ratones Ames Waltzer Y El Papel De Protocaderina 15 En El Desarrollo De Las Células Ciliadas

Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16408167

El Waltzer Ames (AV) ratón mutante exhibe anomalías auditivas y vestibulares que resultan de la mutación de protocaderina 15 (Pcdh15). Ames Waltzer ha sido identificado como un modelo animal de patología del oído interno asociado con el síndrome de Usher tipo 1F. Estudios de correlación fenotipo anatómica con la gravedad de la alteración genética en varios alelos av están proporcionando una mejor comprensión del papel desempeñado por Pcdh15 en el desarrollo del oído interno y de las alteraciones neurosensoriales asociadas con alteraciones en la estructura de la proteína Pcdh15 como resultado de la mutación del gen. En este trabajo se presentan nuevos descubrimientos sobre la patología del oído interno en cuatro alelos de ratones con diferentes mutaciones av de Pcdh15 así como las diferentes alteraciones en la morfología del oído interno. Dos alelos con mutaciones de deleción en el cuadro (Pcdh15 (AV-J) y Pcdh15 (AV-2J)) y dos alelos nulos presuntos funcionales (Pcdh15 (AV-3J) y Pcdh15 (AV-Tg)) fueron estudiados. Observaciones microscópicas de luz y de electrones demostrado que la severidad de la patología coclear y vestibular en estos animales se correlaciona positivamente con el grado de mutación en Pcdh15 desde el primer día embrionario 18 (E18) hasta 12 meses. El análisis por microscopía electrónica de orejas inmaduros indicado anomalías tempranas en la disposición de estereocilios y las placas de pelo interior y exterior de células cuticulares, raicillas estereocilios, y la malla de actina dentro de la placa cuticular. En casos graves, el desplazamiento de la kinocilium y alteraciones en la forma de la placa cuticular se observó también. Los ratones portadores de mutaciones de supresión de fotogramas mostraron menos desorganización de los estereocilios y las placas cuticulares en el órgano de Corti que los presuntos alelos nulos funcionales en P0-P10. Una progresión más lenta de la patología también se observó a través de microscopía de luz en los animales más viejos con deleciones del marco en, en comparación con las mutaciones nulas funcionales presuntivos. En resumen, nuestros resultados demuestran que la mutación en Pcdh15 afecta a la formación inicial de los haces de estereocilios con los cambios asociados en la malla de actina dentro de la placa cuticular, estos efectos son más pronunciados en la supuesta mutación nula en comparación con las mutaciones que afectan solamente el dominio extracelular. La correlación positiva de la gravedad de los efectos con el alcance de la mutación se puede ver en la edad adulta.

Análisis De Expresión De Distintas Poblaciones De Células Aisladas De Ratón Y Humanos Tejido Interno Del Oído FFPE Uso De Láser Captura Microdissection - Un Informe Técnico Sobre La Base De Resultados Preliminares

Brain Research. May, 2006  |  Pubmed ID: 16529721

Láser captura microdissection (LCM) permite la contratación microscópica de tipos específicos de células de secciones de tejido que luego pueden ser utilizados para el análisis de la expresión génica. En primer lugar, a prueba este método con las secciones de orejas de ratón internos adultos y, posteriormente, se aplica a humanos secciones del oído interno. La morfología de los diversos tipos de células en el oído interno está bien conservado en formol fija parafina (FFPE) secciones, por lo que es más fácil identificar los tipos de células y sus límites. La recuperación de ARN de buena calidad de las secciones FFPE puede ser un reto, sin embargo, estudios recientes en la investigación del cáncer ha demostrado que es posible llevar a cabo análisis de expresión génica de material FFPE. Así, un método desarrollado utilizando tejido de ratón FFPE se puede aplicar a humanos huesos temporales de archivo. Esto es importante porque la mayoría de los bancos del hueso temporal humanos han especímenes conservados en formol y una técnica para el análisis retrospectivo de tejido humano del oído de archivo que se necesita. Hemos utilizado ratones FFPE secciones del oído interno para adquirir distintas poblaciones de células de los distintos ámbitos funcionales (órgano de Corti, el ganglio espiral, etc) por parte de LCM. Se extrajo el ARN de las células capturadas, se amplifica y se evaluó su calidad. La expresión de los genes seleccionados se puso a prueba por RT-PCR. Además de los genes de limpieza, hemos sido capaces de detectar marcadores de células específicas del tipo, como la miosina 7a, p27 (kip1) y transcripciones de neurofilamentos de genes que han confirmado la posible composición de las células en la muestra. También hemos probado el método descrito anteriormente en las secciones de FFPE humana ampullaris cresta. Estas secciones fueron de aproximadamente un año de edad. Las poblaciones de células del epitelio y el estroma se recogieron y analizaron de forma independiente para la expresión génica. El método descrito aquí tiene un uso potencial en muchas áreas de la audición de investigación. Por ejemplo, tras la exposición al ruido, medicamentos ototóxicos o la edad, sería muy conveniente analizar los perfiles de expresión génica de las poblaciones seleccionadas de células dentro del órgano de Corti o de las células del ganglio espiral en lugar de una población mixta de células de todo el tejido del oído interno. Además, este método puede ser aplicado para el análisis de tejido humano oreja de archivo.

Proteómica Del Oído Interno De Los Modelos De Ratón Para La Sordera, Una Estrategia De Descubrimiento

Brain Research. May, 2006  |  Pubmed ID: 16600193

Disfunción del oído interno a menudo se asocia con defectos en las células ciliadas. Por lo tanto, las células ciliadas son el foco de estudio en muchos de los ratones mutantes que muestran déficit auditivo y vestibular. Sin embargo, cosechando un número suficiente de células ciliadas del oído interno del ratón pequeño hueso para su análisis proteómico es un reto. Los nuevos enfoques que se aprovechan de los mutantes de ratón y evitar los pasos de procesamiento, tales como la descalcificación o microdissetion, sería más adecuado para el análisis proteómico. En este sentido, se propone un nuevo enfoque llamado SSUMM-sustractiva Estrategia Usando mutantes de ratón. SSUMM toma ventaja de las diferencias entre el control y muestras afectadas o mutante. Nuestra predicción es que SSUMM sería un método útil en la proteómica, especialmente en aquellos casos en los que el investigador debe trabajar con un pequeño número de diversos tipos de células de un órgano muy pequeño. Aquí, se discute la utilidad potencial de SSUMM para desentrañar los perfiles de expresión proteica de las células ciliadas con el ratón mutante Pou4f3 como un ejemplo. Pou4f3 ratones mutantes muestran una pérdida total de las células ciliadas internas y externas, pero las células de apoyo permanecen relativamente intactos en la cóclea, lo que proporciona un excelente modelo para la identificación de las proteínas y las transcripciones que son específicos de la célula de pelo en todas las etapas de la vida. SSUMM sería maximizar la sensibilidad de los análisis, mientras que evita la necesidad de tediosas sesiones de microdisección y la recolección de las células ciliadas. Al comparar el mutante para controlar las orejas en puntos de tiempo específicos, es posible identificar blancos directos de un producto génico de interés. Además, SSUMM podría ser utilizado para identificar y analizar interiores marcadores de desarrollo del oído y otros genes conocidos y proteínas que se coexpresan en el oído. En este informe técnico a corto, también hablamos de perfiles de proteínas métodos adecuados para SSUMM y discutir brevemente los enfoques utilizados en el campo de la proteómica.

N-acetil L-cisteína No Protege Contra La Prematura Pérdida De La Audición Relacionada Con La Edad En Los Ratones C57BL/6J: Un Estudio Piloto

Hearing Research. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 16930891

Un compuesto capaz de prevenir la relacionada con la edad la pérdida de audición podría ser muy útil en una población que envejece. N-acetil-L-cisteína (L-NAC) ha demostrado tener un efecto protector contra la exposición al ruido, una condición que conduce a un aumento del estrés oxidativo. No obstante los factores ambientales, existen evidencias de que relacionada con la edad la pérdida de audición (AHL) en el ratón está vinculada a más de un locus genéticos y, por extensión, en los seres humanos. Nuestra hipótesis es que los resultados de AHL de defectos en aumento de la sensibilidad al estrés oxidativo y la L-NAC sería capaz de proteger la audición de un modelo de ratón de la prematura AHL, el C57BL/6J (B6) cepa de ratón. L-NAC fue introducido en la botella de agua regular de ratones B6 (grupo experimental) y ad lib disponible. El otro grupo recibió el agua del grifo normal. Audiencia fue probado mensualmente por la capacidad de generar la respuesta auditiva del tronco encefálico (ABR). Después de la prueba ABR final, los ratones fueron sacrificados mediante una sobredosis de Avertin, las orejas fueron cosechadas y la pérdida de células ciliadas se cuantificó. No hubo diferencias en los umbrales de ABR o en la histopatología entre el grupo control y el grupo que recibieron L-NAC en el agua potable. En contraste con los efectos protectores de la L-NAC contra la pérdida de audición inducida por el ruido, la falta de efecto protector en este estudio puede ser debido a (i) el nivel de dosificación, (ii) la duración del tratamiento, (iii) los mecanismos bioquímicos que subyace a la edad la pérdida auditiva inducida, o (iv) cómo metaboliza el ratón L-NAC.

Optimización De La Detección De ácido Ribonucleico De La Retrospectiva Muestras Guinea Pig Del Hueso Temporal

Otology & Neurotology : Official Publication of the American Otological Society, American Neurotology Society [and] European Academy of Otology and Neurotology. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 16983313

La elección del ácido ribonucleico (ARN) protocolo de aislamiento acoplado con modificaciones para el ARN procedimientos de extracción y detección puede resultar en un método más fiable para detectar la expresión de genes en archivados huesos temporales.

Identificación Y Caracterización De Células Madre De Ratones Cocleares

Developmental Neuroscience. 2007  |  Pubmed ID: 17047322

Genética, el ruido y las drogas inducida por la pérdida de células ciliadas en el ratón y la cóclea humana conduce a la pérdida permanente de la audición debido a la falta de regeneración de las células ciliadas, que puede ser debido a la reducción del número o la pérdida de la capacidad regenerativa de las células madre en el adultos cóclea. La hipótesis de que los ratones recién nacidos cóclea puertos células madre capaces de diferenciarse en células ciliadas. Las células de la primaria de la cultura coclear recién nacido comenzó a proliferar y formar esferas flotantes después de 14 días in vitro (DIV). En comparación, las esferas de la cultura primaria de la corteza se observaron después de 7 DIV. Células cocleares esfera podría ser pasados ​​y los nuevos ámbitos se observaron después de 7 DIV. Células cocleares esfera eran capaces de diferenciarse en astrocitos y oligodendrocitos, pero no probado las neuronas en las condiciones. Células cocleares esfera expresó Sox2 y Myo7a, pero no pudo mostrar los marcadores que se expresan exclusivamente en tejido coclear madura, mientras que las células de la corteza esferas expresó Sox2 y Otx2, pero Myo7a no. Nuestros resultados muestran que la cóclea de ratones recién nacidos células portuarias capaces de formar esferas y las células de estas esferas parecen estar mejor dotado para convertirse en células de pelo.

Los Cambios Moleculares Asociados Con El Modelo Endolinfático Hidropesía

Otology & Neurotology : Official Publication of the American Otological Society, American Neurotology Society [and] European Academy of Otology and Neurotology. Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17468674

La pérdida de audición y la degeneración coclear en el modelo de conejillo de indias de hidrops endolinfático (ELH) los resultados, en parte, de los niveles tóxicos de aminoácidos excitatorios (AAE), como el glutamato, que a su vez conduce a cambios en la expresión de genes relacionados con el glutamato intracelular la homeostasis y la apoptosis, que conduce a la muerte neuronal.

Timpanometría Evaluación De 61 Cepas Puras De Ratones

Hearing Research. Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17611057

La otitis media (OM) representa más de 20 millones de visitas a la clínica en los Estados Unidos cada año. La resistencia a los antibióticos ha dificultado la gestión actual de la enfermedad. Identificación de factores genéticos que subyacen a la susceptibilidad a la OM es muy necesaria con el fin de desarrollar estrategias alternativas de tratamiento. Genéticamente definidos puras cepas de ratón ofrece una herramienta poderosa para la disección de los factores genéticos y ambientales que pueden conducir a la OM en los ratones. Aquí, se presenta un estudio de la función del oído medio de 61 cepas puras de ratones genéticamente diferentes que utilizan la timpanometría. De las 61 cepas puras analizadas, el 129P1/ReJ, 129P3 / J, 129S1/SvImJ, 129X1/SvJ, un Hej /, BALB / cJ, BUB / BNJ, C57L / J, EL / SuzSeyFrkJ, FVB / NJ, E / LNJ, LP / J, NZB / BlNJ, PL / J y cepas YBR / Ei exhibió timpanogramas que fueron estadísticamente diferente de otras cepas sanas de acuerdo con parámetros como la presión del oído medio, el volumen y el cumplimiento. Estas diferencias son muy probablemente el resultado de factores genéticos que, cuando se entiende, faciliten la prevención y el tratamiento de la otitis media en los seres humanos. Además, una correlación negativa entre la edad y el cumplimiento de la membrana timpánica se descubrió. Este es el primer reporte de utilizar con éxito para medir la timpanometría del ratón la función del oído medio, que ha sido un reto para el campo de la investigación auditiva debido al tamaño del ratón de la oreja pequeña.

Promotor, Las Formas Alternativas De Empalme Y Genómica De La Estructura 15 Protocaderina

Genomics. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17706913

Lo que originalmente se demostró que el gen protocaderina 15 (Pcdh15) es necesario para oír y funciones de la balanza, las mutaciones en Pcdh15 afectar el desarrollo de células de cabello en Ames Waltzer (AV) en ratones. Este sentido, ampliar este estudio para entender mejor cómo funciona Pcdh15 en una celda. El informe original identificaron 33 exones en Pcdh15, con el exón 1 no codificante ser; exones adicionales de Pcdh15 desde entonces han sido reportados. Los 33 exones de Pcdh15 descrito originalmente están incrustados en 409 kb de la secuencia genómica de ratón, mientras que los exones correspondientes de PCDH15 humano se extiende sobre 980 kb de ADN genómico; los exones en Pcdh15/PCDH15 varían en tamaño desde 9 a aproximadamente 2000 pb. La organización genómica de Pcdh15/PCDH15 tiene similitud con la de cadherina 23, pero difiere significativamente de los genes protocaderina otros, tales como Pcdhalpha, beta o gamma. Una isla CpG se encuentra a unos 2900 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCDH15. El promotor Pcdh15/PCDH15 carece de secuencias de TATAA o CAAT a menos de 100 bases río arriba del sitio de inicio de la transcripción; mapeo mostró que la supresión Pcdh15 puertos supresor y elementos potenciadores. Las búsquedas preliminares de transcripciones empalmados alternativamente de Pcdh15 identificado nuevas variantes de empalme no se informó previamente. Los resultados de nuestro estudio muestran que tanto los genes de ratón y humanos protocaderina 15 tienen estructuras complejas genómica y mecanismos de control de la transcripción.

El Desarrollo De Las Células Ciliadas Externas En Ames Ratones Waltzer: Mutación En El Protocaderina 15 Afecta El Desarrollo De La Placa Cuticular Y Estructuras Asociadas

Anatomical Record (Hoboken, N.J. : 2007). Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18085631

El Ames Waltzer (av) del ratón mutante alberga una mutación en el gen protocaderina 15 (Pcdh15) y es un modelo para la sordera en el síndrome de Usher y la sordera no sindrómica 1F DFNB23. La mutación en Pcdh15 afecta la morfogénesis y polaridad estereocilios. Las interrupciones de los componentes celulares apicales de las células ciliadas externas también se han descrito en los mutantes av. Organización de estereocilios y la polarización de la célula puede ser dependiente de la orientación adecuada de los componentes estructurales que residen en la parte apical de la célula durante el desarrollo. Se utilizó microscopía electrónica y de inmunofluorescencia para examinar la maduración estructural de las células ciliadas externas en ratones av3J con énfasis en la fonticulo, basal del cuerpo / recinto centríolo, malla de actina, y la red de microtúbulos durante la iniciación de la organización del conjunto, entre el día embrionario (E) 16.5 y después del día 5 (P5). Hemos encontrado grandes reordenamientos ultraestructurales cerca de la superficie de las células del pelo en ratones av3J. Primeros cambios fueron en kinocilia, basal del cuerpo, y la disposición estereocilios posicionamiento y microtúbulos una vez que el kinocilia había lateralizado al lado de la célula (entre E16.5 y días después del parto [P] 0, antes de la formación de placa cuticular y alargamiento estereocilios). Por P0, el fonticulo desarrollo en ratones av apareció ampliada, con una densidad de vesícula normal. La desorganización estereocilios paquete aumentó después de P0, con las interrupciones de la malla de actina dentro de la placa cuticular. Estas observaciones apoyan la hipótesis de que las mutaciones en Pcdh15 en ratones av3J afectan negativamente a la maduración coordinada de los componentes de las células apicales, lo que resulta en la polaridad alterada paquete estereocilios en ratones av.

Un Modelo De Ratón Con Hidrops Endolinfático Postnatales Y La Pérdida De Audición

Hearing Research. Mar, 2008  |  Pubmed ID: 18289812

Hidrops endolinfático (ELH), pérdida de audición y degeneración neuronal ocurren al mismo tiempo en una variedad de trastornos clínicamente significativos, incluida la enfermedad de Ménière (MD). Sin embargo, la secuencia de estos cambios patológicos y su relación entre sí no se comprenden bien. En este sentido, un modelo animal que desarrolla espontáneamente estas características postnatalmente sería útil para fines de investigación. La búsqueda de un modelo que nos llevó a la Phex Hyp-Duk ratón, un alelo mutante del gen que causa Phex ligadas al cromosoma X raquitismo hipofosfatémico. El macho hemicigotos (Phex Hyp-Duk / Y) se había informado anteriormente a exhibir diversas anomalías durante la edad adulta, que incluyen el engrosamiento de los huesos, ELH y la pérdida auditiva. El oído interno informó fenotipo sugestiva de patología y el desarrollo progresivo de la ELH espontánea después del nacimiento, pero no concluyente. Los principales focos de este informe son para caracterizar mejor el fenotipo de los ratones en el oído interno Phex Hyp-Duk / Y y para poner a prueba la hipótesis de que (a) la Phex Hyp-Duk / ratón Y desarrolla la pérdida de la audición después del nacimiento y la ELH, y (b) el desarrollo de la ELH en el Phex Hyp-Duk / Y del ratón se asocia con la obstrucción del conducto endolinfático (ED) debido a un engrosamiento del hueso circundante. Auditivos del tronco encefálico (ABR) las grabaciones en los puntos de tiempos diferentes y el análisis histológico de los huesos temporales representativas revelan que Phex Hyp-duk / Y los ratones desarrollan típicamente aparición en el adulto, asimétrica, pérdida de audición progresiva seguida de cerca por la aparición de la ELH. ABR y los datos histológicos muestran que la degeneración funcional precede a la degeneración estructural. El degenerativa importante correlato de pérdida de audición y ELH en los mutantes es la pérdida principal de las células del ganglio espiral. Además, Phex Hyp-duk / Y los ratones desarrollan ELH, sin evidencia de obstrucción de la disfunción eréctil, el apoyo a la idea de que ELH puede ser inducida por un mecanismo distinto de la interrupción del flujo longitudinal de líquido endolinfático, y la oclusión de la disfunción eréctil no es un requisito previo para el desarrollo de ELH en los pacientes.

Los Patrones En Espiral En La Degeneración Del Ganglio Hidrops Endolinfático

The Laryngoscope. Jul, 2008  |  Pubmed ID: 18364591

La asociación mecánica entre el hidrops endolinfático (ELH) y la pérdida de la audición (HL) no está claro. A pesar de la gravedad ELH se ha demostrado que se correlaciona en algunos estudios con HL, lesión de estructuras vitales, incluyendo las células ciliadas y el nervio coclear, no han podido demostrar una correlación con la gravedad de ELH. El objetivo de este estudio es evaluar la hipótesis de que la degeneración de las células del ganglio espiral es el sitio principio patológica de las lesiones relacionadas con ELH coclear, se correlaciona con la gravedad de ELH, y es más profunda en la región apical.

Síndrome De Usher III Gene Clarín-1 Es Esencial Para La Función De Las Células Ciliadas Y La Activación Neuronal Asociada

Human Molecular Genetics. Aug, 2009  |  Pubmed ID: 19414487

El síndrome de Usher 3A (USH3A) es una enfermedad autosómica recesiva caracterizada por pérdida progresiva de la audición y la visión debido a una mutación en el gen de Clarín-1 (CLRN1). La falta de un modelo animal ha obstaculizado nuestra capacidad para entender la función de CLRN1 y la fisiopatología asociada con USH3A. Aquí mostramos por primera vez un modelo de ratón para la enfermedad de la oreja en USH3A. Evaluación detallada del fenotipo del oído interno en el ratón knock-out Clrn1 (Clrn1 (- / -)), junto con el patrón de expresión de Clrn1 en el oído interno se presentan aquí. Clrn1 se expresó ya en el día embrionario 16,5 en el auditorio y las células ciliadas vestibulares y asociados neuronas ganglionares, con su expresión es mayor en las células ciliadas externas (OHCS) que las células ciliadas internas. Clrn1 (- / -) ratones mostraron que la pérdida auditiva temprana aparición que progresó rápidamente a niveles graves. De dos a tres semanas después del nacimiento (P14-P21), las Clrn1 (- / -) ratones mostraron elevados auditiva evocada del tronco cerebral (ABR) y los umbrales máximos y las latencias prolongadas interpicos. Por P21, aproximadamente el 70% de Clrn1 (- / -) ratones no tenían ABR detectable y por P30 estos ratones eran sordos. Las emisiones otoacústicas por productos de distorsión no grabable de Clrn1 (- / -) ratones. La función vestibular en Clrn1 (- / -) ratones reflejan el fenotipo coclear, a pesar de que se deterioró de manera más gradual de la función coclear. La desorganización de COH estereocilios se vio tan pronto como P2 y P21 pérdida de OHC se observó. En suma, la disfunción de las células del cabello y prolongadas latencias pico en los potenciales evocados vestibular y coclear en Clrn1 (- / -) ratones indican claramente que Clrn1 es necesario para el funcionamiento de las células ciliadas y la activación neuronal asociada.

Clarín-1, Codificada Por El Gen III Síndrome De Usher Causal, Forma Una Membranosa Microdominio: Posible Papel De Clarín-1 En La Organización Del Citoesqueleto De Actina

The Journal of Biological Chemistry. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19423712

Clarín-1 es el producto de la proteína codificada por el gen mutado en el síndrome de Usher III. A pesar de la función molecular de Clarín-1 es desconocida, su estructura primaria predice cuatro dominios transmembrana similares a una gran familia de proteínas de membrana que incluyen tetraspaninas. Aquí hemos investigado el papel de Clarín-1 mediante el uso de la expresión heteróloga y en los sistemas de modelos in vivo. Cuando se expresa en las células HEK293, Clarín-1 localizado en la membrana plasmática y se concentró en los compartimentos de baja densidad distintas de las balsas lipídicas. Clarín-1 reorganizado las estructuras de filamentos de actina y lamellipodia inducido. Esta función actina reorganización estaba ausente en la proteína modificada codificada por el más prevalente Norte América Usher mutación síndrome III, la forma de N48K Clarín-1 deficiente en N-glicosilación. Análisis de Proteómica de manifiesto una serie de Clarín-1-que interactúan las proteínas implicadas en la adhesión célula-célula, adhesiones focales, la migración celular, uniones estrechas, y la regulación del citoesqueleto de actina. En consonancia con el papel de la hipótesis de Clarín-1 en la actina organización, la F-actina enriquecida con estereocilios de las células ciliadas auditivas pone de manifiesto la desorganización estructural en Clrn1 (- / -) ratones. Estas observaciones sugieren un posible papel de Clarín-1 en la regulación y homeostasis de los filamentos de actina y de la relación Clarín-1 a la red interactiva de los productos de gen del síndrome de Usher.

Prólogo De La Edición Especial: Modelos De Ratón Para Investigación Auditiva

Brain Research. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19540992

Un Nonsynonymous SNP Dentro PCDH15 Se Asocia Con Rasgos De Lípidos En La Hiperlipidemia Familiar Combinada

Human Genetics. Jan, 2010  |  Pubmed ID: 19816713

Hiperlipidemia familiar combinada (HLFC) es un trastorno de lípidos común caracterizada por la presencia de fenotipos de lipoproteínas múltiples que aumentan el riesgo de enfermedad coronaria prematura. En un estudio anterior, hemos identificado un marcador microsatélite intragénica en el protocaderina 15 (PCDH15) del gen que se asocia con niveles altos de triglicéridos (TG) en las familias finlandesas con dislipidemia. En este estudio se analizaron los cuatro conocidos nonsynonymous SNPs en PCDH15 en 1.268 individuos de familias multigeneracionales finlandeses y holandeses con HLFC. Análisis de asociación de los rasgos cuantitativos de SNPs se realizó mediante la prueba QTDT. El rs10825269 nonsynonymous SNP dio lugar a una p = 0,0006 para el carácter cuantitativo de TG. Evidencia adicional para la asociación se observó con la misma SNP para los niveles de apolipoproteína B (apo-B) (p = 0,0001) y de colesterol total (CT) los niveles (p = 0,001). Ninguno de los otros tres SNPs prueba mostró una asociación significativa con algún rasgo ligado a los lípidos. Hemos investigado la expresión de PCDH15 en diferentes tejidos humanos, y observó que PCDH15 se expresa en varios tejidos, incluyendo el hígado y el páncreas. Además, se midieron los niveles de lípidos en el plasma en ratones con mutaciones de pérdida de función en Pcdh15 (Pcdh15 (AV-Tg) y Pcdh15 (AV-3J)) para investigar posibles anomalías en su perfil lipídico. Se observó una diferencia significativa en el plasma y las concentraciones de CT TG para los Pcdh15 (AV-3J) los transportistas, en comparación con el tipo salvaje (P = 0,013 y P = 0,044, respectivamente). Nuestro estudio sugiere que PCDH15 se asocia con anormalidades en los lípidos.

La Pérdida Del Ganglio Espiral Supera La Pérdida De Pelo En El Interior De La Célula Hidrops Endolinfático

The Laryngoscope. Jan, 2010  |  Pubmed ID: 19877178

La toxicidad neuronal se piensa que es importante en la enfermedad de Meniere y el hidrops endolinfático experimentales (ELH). Este estudio cuantifica la relación entre la degeneración neuronal y degeneración de las células de cabello en ELH para evaluar la hipótesis de que un insulto neuronal primaria daría una mayor pérdida en el ganglio espiral que a nivel de la célula de pelo interior.

Terapia Fotodinámica Del Rabo De Conejo Inducidos Por Virus Del Papiloma Papilomas En Una Severa Combinada Sistema Inmunodeficientes Xenoinjerto Ratón

The Laryngoscope. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20091778

Para evaluar la eficacia de la terapia fotodinámica (TFD) con la ftalocianina Pc 4 fotosensibilizador para el tratamiento de un modelo animal de la papilomatosis respiratoria recurrente (PRR).

La Proteómica, Bioinformática Y Análisis Específicos De Expresión Génica Revela Sobre Regulación De Cochlin E Identifica Otros Biomarcadores Potenciales En El Modelo De Ratón Para La Sordera En El Síndrome De Usher Tipo 1F

Human Molecular Genetics. Apr, 2010  |  Pubmed ID: 20097680

Las proteínas y las redes de proteínas asociadas con la patogénesis coclear en el Ames Waltzer (av) del ratón, un modelo para la sordera en el síndrome de Usher 1F (USH1F), fueron identificados. Proteína coclear de los ratones de tipo salvaje y AV en el día postnatal 30, un punto de tiempo en el que coclear patología está bien establecido, se analizó por electroforesis en gel 2D cuantitativo seguido por espectrometría de masas (MS). El gel analítica resuelta 2270 puntos, 69 puntos mostró cambios significativos en la intensidad en la Av. cóclea en comparación con el control. La proteína Cochlin fue identificado en 20 puntos de péptidos, la mayoría de los cuales fueron hasta reguladas, mientras que unos pocos se redujeron regulado. El análisis de la secuencia de datos de MS mostró que, en la cóclea AV, una serie de larga duración isoformas de Cochlin fue reglamentado, mientras que las isoformas de desaparecidos de la FCH N-terminal de dominio / LCCL se redujeron regulado. La interacción de proteínas análisis de la red de todas las proteínas expresadas diferencialmente se realizó con el software de MetaCore. Ese análisis reveló una serie de redes de proteínas estadísticamente significativas candidatos prevé que se altera en la cóclea afectada. PCR cuantitativa (qPCR) el análisis de los candidatos seleccionados de las investigaciones proteómicas y bioinformáticas mostraron sobre regulación del ARNm de Coch y los de la p53, y Brn3a Nrf2, factores de transcripción relacionados con la respuesta al estrés y la supervivencia. El aumento de ARNm de Brn3a y Nrf2 ha sido previamente asociados con una mayor expresión de Cochlin en malla trabecular glaucomatosa humana. Nuestro informe sugiere que un mayor nivel de Cochlin es un factor etiológico importante que conduce a la degeneración de la cóclea neuroepithelia en el modelo de USH1F.

N-acetil L-cisteína No Protege Las Orejas De Ratón a Partir De Los Efectos De Ruido *

Journal of Occupational Medicine and Toxicology (London, England). 2010  |  Pubmed ID: 20426871

Inducida por el ruido pérdida de la audición (pérdida de la audición) es una de las lesiones más comunes en los Estados Unidos. Sería extremadamente valioso, si un compuesto seguro, de bajo costo podría ser identificado que protege trabajador audición del ruido. En una serie de experimentos, Kopke ha demostrado que el compuesto N-acetil-L-cisteína (L-NAC) puede proteger la vista de chinchillas de los efectos de una sola exposición al ruido. L-NAC se utiliza en la medicina clínica y es muy seguro. Aunque la L-NAC se informó que se promete, no ha tenido éxito en otros estudios (Kramer et al, 2006;.. Hamernik et al, 2008). El presente estudio se llevó a cabo para determinar si la L-NAC podría proteger C57BL/6J (B6) los ratones de los efectos permanentes de ruido.

Protección Farmacológico De La Pérdida De La Audición En El Modelo De Ratón De Hidrops Endolinfático

The Laryngoscope. Aug, 2010  |  Pubmed ID: 20641076

Lesión inflamatoria excitotóxica y afines están implicados en la degeneración del ganglio espiral vista con la enfermedad de Meniere y el hidrops endolinfático (ELH). Excitotoxicidad se inicia con la elevación de glutamato y se asocia con aumentos posteriores en las especies reactivas de oxígeno que resulta en la inflamación mediada por la degeneración neuronal. Este estudio pone a prueba la hipótesis de que la interrupción de los aspectos iniciales y / o aguas abajo de la excitotoxicidad deben proporcionar protección para los oídos en la pérdida de audición asociada a la ELH.

Las Mutaciones En Protocaderina 15 Y 23 Cadherina Repercusiones Sobre Tip Y Mecanotransducción En Mamíferos Células Pilosas Sensoriales

PloS One. 2011  |  Pubmed ID: 21532990

Los estudios inmunocitoquímicos han demostrado que protocaderina-15 (PCDH15) y cadherina 23 (CDH23) se asocian con enlaces de punta, estructura el pensamiento hasta la puerta de los canales mechanotransducer de las células ciliadas del epitelio sensorial del oído interno. El presente informe se describen los análisis funcionales y estructurales de las células ciliadas de la Pcdh15 (av3J) (av3J), Pcdh15 (av6J) (av6J) y CDH23 (V2J) (V2J) ratones. Los ratones av3J y V2J llevar a mutaciones puntuales que se prevé introducir codones de parada prematuros en las transcripciones de Pcdh15 y CDH23, respectivamente, y los ratones tienen av6J una supresión en el marco previsto para eliminar la mayor parte de la novena de la cadherina ectodominio PCDH15. Perturbación grave de la morfología de pelo paquete se observa a lo largo de la cóclea posnatal temprana en ratones y av3J/av3J v2J/v2J. En contraste, sólo leve a moderada alteración paquete es evidente en los ratones av6J/av6J. Las células ciliadas de ratones av3J/av3J se ven afectados por los aminoglucósidos y no se pueden cargar con [(3) H]-gentamicina o FM1-43, los compuestos que atraviesan los canales de la célula del cabello mechanotransducer. En contraste, las células de cabello de av6J/av6J carga ratones con ambos FM1-43 y [(3) H]-gentamicina, y son sensibles aminoglucósido. Corrientes del transductor se puede grabar a partir de células del cabello de los tres mutantes pero se reducen en amplitud en todos los mutantes y tienen una sensibilidad direccional anormal en los mutantes av3J/av3J y v2J/v2J. Microscopía electrónica de barrido de las primeras células ciliadas de la cóclea postnatales revela la punta de enlace como enlaces en los ratones av6J/av6J, los números de una reducción considerable de los enlaces en los ratones av3J/av3J y virtualmente ninguno en los ratones v2J/v2J. Análisis de las mayores paquetes de pelo vestibulares revela una ausencia de vínculos de punta en los ratones y av3J/av3J v2J/v2J y una reducción en los ratones av6J/av6J. Estos resultados proporcionan la evidencia genética por lo tanto, coherente con PCDH15 CDH23 y ser parte de la punta de enlace complejo y necesario para mecanotransducción normal.