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Articles by Leah Fohl Villegas in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Una modificación de la EPA Método 1623 que utiliza el flujo tangencial de fibra hueca de ultrafiltración y la Plaza de calor de disociación para detectar a base de agua
1National Exposure Research Laboratory, Office of Research and Development, US Environmental Protection Agency, 2Shaw Environmental & Infrastructure, 3Office of Ground Water and Drinking Water, US Environmental Protection Agency
Este protocolo se describe el uso de un flujo tangencial de fibra hueca sistema de ultrafiltración concentración de la muestra y una disociación calor como pasos alternativos para la detección de vías acuáticas
Other articles by Leah Fohl Villegas on PubMed
Uso De La Transcriptasa Reversa Cuantitativa De PCR Y Ensayos En Cultivos Celulares De Placa Para Determinar La Resistencia De Los Ooquistes De Toxoplasma Gondii a Los Desinfectantes Químicos
Ooquistes de Toxoplasma gondii son altamente resistentes a muchos desinfectantes químicos. Los métodos utilizados para determinar la infectividad de ooquistes se han basado principalmente en el ratón, el pollo, y bioensayos de felinos. Aunque se consideran las normas de oro, que sólo proporcionan una evaluación cualitativa de la viabilidad de los ooquistes. En este estudio, dos enfoques alternativos se han desarrollado para cuantificar viables de T. gondii ooquistes después del tratamiento con varios desinfectantes comunes. La primera es una transcriptasa inversa cuantitativa en tiempo real PCR (RT-PCR cuantitativa) de ensayo dirigido a los genes ACT1 y SporoSAG para enumerar viables de T. gondii ooquistes. RT-qPCR C (T) valores entre Wescodyne (R), etanol acidificado, o calor oocistos tratados no fueron significativamente diferentes en comparación con los controles no tratados. Por el contrario, el tratamiento con formalina o Clorox (R) resultó en un 2-log (10) reducción en C (T) valores. Una in vitro de T. gondii ensayo de placa de ooquistes (TOP-ensayo) también fue desarrollado para medir la viabilidad de los ooquistes. Este ensayo utiliza una combinación de molienda con perlas y la digestión biliar, seguido por cultivo de los esporozoitos excysted en una monocapa de células de fibroblastos confluente. Los resultados mostraron que ninguna reducción significativa en la viabilidad esporozoito se detectó en etanol acidificado o Wescodyne (R) oocistos tratados mientras que al menos una reducción de 2-log (10) en las placas formadas se observó con Clorox (R) oocistos tratados. Además, el tratamiento con formalina o calor de ooquistes resultó en al menos una reducción de 5-log (10) en placas formadas. Este estudio demuestra que un ensayo basado en la PCR ARNm viabilidad orientación de los genes ACT1 o SporoSAG es una técnica relativamente rápida en comparación con in vitro y en ensayos in vivo. Además, el TOP-ensayo demostrado ser muy eficaz y sensible a la cuantificación de la viabilidad de ooquistes cuando se compara con los bioensayos animales.
