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Expression D'anticorps ScFv Chez Les Embryons De Xenopus De Perturber La Fonction De Protéine : Implications Pour L'évaluation à Grande échelle Du Protéome Embryonnaire

Résumé : Nous avons évalué l'utilisation de l'expression de chaîne unique anticorps (scFv) comme outil pour perturber la fonction des protéines spécifiques dans des embryons de la grenouille Xenopus laevis. L'expression de scFvs qui reconnaissent les récepteurs de protéine morphogénétique osseuse (ALK3) ou la croissance de fibroblastes facteur receptor1 (FGFR1) comme protéines ancrées à un réticulum endoplasmique provoqué des anomalies du développement distincts qui sont pratiquement indiscernables de défauts causés par l'expression des formes négatives dominantes de chaque récepteur. Ces résultats démontrent que scFvs du phage display bibliothèques peut être facilement transformé en inhibiteurs efficaces et spécifiques de la signalisation des voies dans les embryons en développement. En outre, plusieurs scFvs efficaces contre une cible spécifique peuvent être isolés rapidement, cette approche représente un nouvel outil précieux pour l'analyse fonctionnelle à grande échelle du protéome embryonnaire.

Tubby-like Protein 3 (TULP3) Réglemente La Structuration Dans L'embryon De Souris Par Inhibition De La Signalisation De Hérisson

Tubby-like protein 3 (TULP3) est nécessaire au bon développement embryonnaire chez la souris. Perturbation des souris Tulp3 se traduit par des anomalies morphologiques dans les régions cranio-faciales embryonnaires, la colonne vertébrale du tube neural et les membres. Ici, nous montrons que TULP3 fonctionne comme un roman régulateur négatif de la signalisation de Sonic hedgehog (Shh) chez la souris. Chez les mutants Tulp3, les types de cellules ventrale du tube neural lombaire, qui acquièrent leur identité en réponse à signalisation Shh, façon ectopique spécifiés au détriment des types de cellules dorsales. Expériences d'épistasie génétique montrent que ce phénotype ventralized se produit indépendamment de Shh et la protéine transmembranaire Smoothened, mais elle dépend du facteur de transcription Gli2. Le phénotype ventralized est également tributaire de la sous-unité II de kinésine Kif3A, qui est requis pour le ciliogenesis et le transport de. En outre, TULP3 est nécessaire pour la bonne structuration de limb Shh-dépendante et pour maintenir l'équilibre correct entre la différenciation et la prolifération dans le tube neural. Enfin, la localisation de TULP3 à l'extrémité des cils primaires soulève la possibilité qu'il règle la voie de hérisson au sein de cette structure.

L'inactivation De Gènes Conditionnelle Révèle Les Rôles Pour Fgf10 Et Fgfr2 En établissant Un Schéma Normal De Ramification épithéliales Des Poumons De Souris

Facteur de croissance fibroblastique 10 (FGF10) de signalisation par l'intermédiaire de récepteurs FGF 2 (FGFR2) est requis pour l'initiation du poumon. Tandis que les études indiquent que Fgf10 et Fgfr2 sont également importantes à un stade ultérieur du développement pulmonaire, leur rôle dans les événements ramifications précoces reste floues. Nous avons abordé cette question par le biais de l'inactivation conditionnelle des deux gènes chez la souris après l'initiation du poumon. Inactivation des Fgf10 dans le mésenchyme poumon a entraîné des lobes plus petits avec un nombre réduit de branches. Inactivation de Fgfr2 dans l'épithélium pulmonaire a abouti à la perturbation des lobes et petites excroissances épithéliales qui s'est posée arbitrairement le long des bronches principales. Dans les deux mutants, il y avait une augmentation dans la mort cellulaire. Aussi, les patrons d'expression de clé signalisation des molécules impliquées dans la morphogenèse des embranchement ont été modifiées et un marqueur de poumon proximale a été élargie dans la partie distale. Nos résultats indiquent que les Fgf10 et Fgfr2 sont nécessaire pour un programme normal de ramification et bonne structuration proximale-distale du poumon.

Règlement Androgènes Nombre Bud Ventrale épithéliale Et Modèle Chez La Souris Sinus Urogénital

Le sinus urogénital ventrale (UGS) de souris mâles témoins a deux rangées de 3-4 bourgeons prostatiques à la naissance, mais comment réguler androgènes ventrale du bourgeon (VB) le nombre et les motifs n'est pas claire. VBS dans les deux sexes semble être un mélange de bourgeons prostatiques et urétraux. Souris UGSS de Tfm mâle et anti-androgène (flutamide)-exposées eu petite VBS, ce qui suggère que l'initiation de certains VBS est androgéno-indépendant. Souris mâles tfm sont largement considérées comme totalement insensible aux androgènes encore leurs UGSS étaient 5-alpha-dihydrotestostérone (DHT) - réactif. VBS (6-8) ont été généralement distribués bimodale sur l'axe gauche-droite à la fois minimales et normal de signalisation des androgènes masculins. Pourtant, les femelles témoins et DHT-exposées hommes tfm eu 13-14 VBS, dont le gauche-droite de distribution était assez uniforme. Ces résultats suggèrent que le nombre et la distribution VB répondre biphasique comme androgène de signalisation augmente de minimes, et que les androgènes réglementer la spécification des bourgeons. Complete agénésie VB par l'inhibiteur sélectif en herbe la 2,3,7,8-tétrachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD) nécessaire de signalisation à haute androgènes.

Un Atlas Haute Résolution Moléculaire De La Parcelle De Fœtus De Souris Basse Génito-urinaire

Épithélium-stroma interactions dans la partie inférieure du tractus urogénital (LUT) sont partie intégrante du développement des vésicules séminales de la prostate et chez les hommes, le développement du vagin et l'utérus chez les femmes, et le développement urétral chez les deux sexes. Profilage de l'expression génique du stroma et l'épithélium isolé LUT a démêlé les mécanismes de développement LUT, mais ces études sont confondus par la cellule hétérogène et mal défini des sous-populations contenues dans chaque compartiment de tissu. Nous avons utilisé l'hybridation in situ pour synthétiser une haute résolution moléculaire atlas de 17 jours post-coït LUT fœtus de souris. Nous avons identifié les ARNm que les populations cellulaires sélectifs marque de la vésicule séminale, canal éjaculateur, de la prostate, l'urètre et du vagin, de subdiviser ces tissus en 16 stromales et épithéliales 8 sous-compartiments. Ces résultats constituent un outil puissant pour la cartographie des schémas LUT d'expression de gènes et révèlent aussi non caractérisée sous-compartiments qui peuvent jouer un rôle dans le développement mécanistes LUT dont nous avions conscience auparavant.

Atlas De L'expression Génique Wnt Et R-spondine Dans Le Tractus Souris Homme Développement Basse Génito-urinaire

De la prostate développement est influencé par β-caténine, mais il est difficile de savoir quels β-caténine activateurs sont impliqués, où ils sont synthétisés, et si leur abondance de l'ARNm est influencée par les androgènes. Nous avons identifié WNT / β-caténine sensible β-galactosidase dans la partie inférieure du tractus urogénital (LUT) de souris transgéniques journaliste, mais β-galactosidase activité différait entre les quatre souches de souris que nous avons examinés. On utilise l'hybridation in situ à comparer les modèles de Wnts, r-spondines (Rspos, des co-activateurs de β-caténine), β-caténine réagissant à ARNm, et un androgène récepteur réagissant ARNm de type foetal mâle sauvage, femelle foetal, et LUT néonatale masculine. La plupart des ARNm Wnt et RSPO étaient présents dans LUT au cours du développement de la prostate. Profils d'expression sexuellement dimorphes ont été observés pour WNT / β-caténine sensible gènes, et pour Wnt2b, Wnt4, Wnt7a, Wnt9b, Wnt10b, Wnt11, Wnt16, et Rspo3 ARNm. Ces résultats révèlent des différences sexuelles dans la signalisation Wnt / β-caténine dans LUT fœtale, soutenant l'idée que cette voie peut être directement ou indirectement sensibles aux androgènes au cours de la prostate canalaire développement.

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