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Articles by Luis Ugozzoli in JoVE
JoVE General
Die Herstellung von primären hämatopoetischen Zellkulturen aus Knochenmark der Maus für die Elektroporation
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories, Inc
Dieses Verfahren beschreibt, wie primäre hämatopoetischen Zellkulturen aus Knochenmark der Maus zu etablieren und wird durch Transfektion mit dem Gene Pulser MXCell Elektroporation Systems.
Other articles by Luis Ugozzoli on PubMed
Fluoreszierende Multicolor Multiplex Homogenen Assays Für Die Simultane Analyse Der Beiden Häufigsten Mutationen Hämochromatose
Linked Lineare Verstärkung Für Die Gleichzeitige Analyse Der Beiden Häufigsten Mutationen Hämochromatose
Vier-Farben-Multiplex-5'-Nuklease-Assay Zum Simultanen Nachweis Der Faktor V-Leiden Und Prothrombin G20210A Mutationen
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Vier-Farben-Multiplex Reverse Transkription Polymerase-Kettenreaktion - Die Überwindung Seiner Grenzen
Optimierung Der Elektroporation Bedingungen in Primär- Und Andere Schwierige Bioaktiven Zellen
Elektroporation ist ein wertvolles Werkzeug für Nukleinsäure-Lieferung, da es für eine Vielzahl von Zelltypen verwendet werden kann. Viele Wissenschaftler verlagern sich gegen die Verwendung von Zelltypen, die für in-vivo Anwendungen, einschließlich Primärzellen, die schwer zu bioaktiven gelten mehr relevant sind. Die Fähigkeit, Electroporate diesen Zelltypen mit Nukleinsäure-Moleküle des Interesses auf einen relativ hohen Wirkungsgrad unter Beibehaltung der Zellviabilität unbedingt elucidating die Pathway(s), an denen ein Genprodukt beteiligt ist. Wir stellen Daten zeigen, dass durch Elektroporation Parameteroptimierung Nukleinsäuremolekülen auf hocheffiziente Weise geliefert werden können. Wir zeigen die Transfektion Ergebnisse für Primär- und schwierigen bioaktiven Zelltypen, einschließlich menschliche primäre Fibroblasten, Endothelzellen der menschlichen Nabelschnur Vene, Jurkat Zellen und zwei Neuroblastom-Zelllinien [SK-N-SH (Mensch) und Neuro-2A (Maus)] mit Plasmid DNA und SiRNAs. Unsere Daten zeigen, dass durch richtige Electroporation Bedingungen ermitteln, Glycerinaldehyd-phosphat-Dehydrogenase, die mRNA in Jurkat zum Schweigen gebracht wurde Zellen verglichen mit der Negativkontrolle SiRNA Electroporations so früh wie 4 h Post-transfection. Andere Experimente zeigten, dass 75 % Transfektionseffizienz für Neuro-2A, optimierte Elektroporation-Bedingungen, die mit einem Leuchtstoff beschriftetem Transfektion Steuerelement SiRNA geführt 93 % für menschliche primäre Fibroblasten und 94 % bei HUVEC Zellen, wie durch Durchflusszytometrie analysiert.
