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Articles by Marcin P. Iwanicki in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Ensayo in vitro Liquidación mesoteliales que modela los pasos iniciales de la metástasis del cáncer ovárico
Department of Cell Biology, Harvard Medical School
El ensayo de depuración mesotelial se describe aquí se aprovecha de las células de la etiqueta fluorescente y time-lapse microscopía de vídeo para visualizar y medir cuantitativamente las interacciones de los esferoides multicelulares de cáncer de ovario y monocapas de células mesoteliales. Este ensayo permite simular las primeras etapas de la metástasis del cáncer de ovario.
Other articles by Marcin P. Iwanicki on PubMed
RACK1 Dirige a La Vía De La Cinasa De Proteína Cinasa/mitógeno Activada Regulada Por Señal Extracelular Para Vincular La Integrina Compromiso Con Movilidad De Desmontaje Y Célula De Adhesión Focal
La cascada de la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK) se activa en respuesta a una multitud de señales extracelulares y convierte estas señales en una variedad de respuestas biológicas específicas, incluyendo la diferenciación celular, movimiento celular, división celular y apoptosis. La especificidad de la respuesta biológica suele ser controlado en gran medida por la localización de la señalización, permitiendo la actividad ERK a orientarse hacia objetivos específicos. Aquí demostramos que la proteína RACK1 funciona específicamente en integrina mediada por la activación de la cascada de la cinasa/ERK de proteínas activadas por mitógenos y apunta ERK activo a adherencias focales. Encontramos que RACK1 asociados con las quinasas de la base de la vía ERK, Raf, MEK y ERK, y esa atenuación de expresión RACK1 dio lugar a una disminución de la actividad ERK en respuesta a la adhesión, pero no en respuesta a factores de crecimiento. RACK1 silenciamiento también producen una reducción de activo ERK adherencias focales, un aumento en la longitud de adherencia focal, una disminución de la tasa de desmontaje de adhesión focal y disminución de la motilidad. Nuestros datos más sugieren que quinasa de adhesión focal es un activador ascendente de la vía RACK1/ERK. Sugerimos que RACK1 anclar las ERK vía base quinasas y canales señales de activación ascendente por integrinas a objetivos aguas abajo en adherencias focales.
FAK, PDZ-RhoGEF Y ROCKII Cooperan Para Regular La Contracción De Movimiento Y Que Se Arrastra-borde De Adherencia En Fibroblastos
Un paso clave en la migración celular es la formación dinámica y el desmontaje de las adherencias en el frente y el movimiento concomitante y liberación de adherencias en la parte posterior de la célula. Fibroblastos en la ausencia de suero tienen adherencias estables dentro de la parte posterior de la célula y exhiben reducida borde que se arrastra de retracción, dando lugar a un fenotipo de células alargadas. Adición de ácido lisofosfatídico (LPA) inducida por el movimiento de las adherencias y retracción del borde de fuga, imitando así retracción de cola en una celda de la migración. Quinasa de adhesión focal (FAK), factores de intercambio de guanina nucleótido (GEF) para Rho y la Rho efectoras Rho cinasa II (ROCKII) son cruciales para la regulación del movimiento de adhesión y retracción de bordes que se arrastra. Downregulation de FAK por ARN interferente pequeño o pequeña horquilla RNAs había bloqueado movimiento LPA-inducida de la adherencia y la restauración de la forma de la célula. Este fenotipo fue rescatado por la expresión ectópica de PDZ-RhoGEF o un mutante de RhoA-dominio efector que activa la roca. Caída de PDZ-RhoGEF o ROCKII había inhibida LPA-arrastre-borde retracción y adherencia movimiento inducido por. Por otra parte, sobreexpresa PDZ-RhoGEF co-immunoprecipitated y adherencias localizadas a que contienen FAK FAK. Estos estudios apoyan un modelo en el que FAK y PDZ-RhoGEF cooperan para inducir movimiento de adhesión focal Rho/ROCKII-dependiente y retracción de bordes que se arrastra en respuesta a la LPA.
Quinasa Regulada Por Señal Extracelular 2 (ERK2) Sitios De Fosforilación Y Dominio De Acoplamiento En La Proteína Complejo De Poro Nuclear Tpr Cooperativamente Regulan Interacción ERK2-Tpr
Identificar sustratos directos de quinasas de proteínas activadas por mitógenos (MAPKs) y entender cómo se seleccionan los sustratos es central para comprender cómo estos ubicuo activan enzimas generan diversas respuestas biológicas. En trabajos anteriores, se identificaron varios nuevos substratos de candidato para la ERK2 MAPK (extracelular quinasa regulada por señal 2), incluyendo la proteína complejo poro nuclear Tpr (región del promotor translocados). En este informe, identificamos sitios de Tpr para ERK2 fosforilación y vinculante y demostrar su interacción funcional. Erk2 fosforilación y dimerización son necesarios para ERK2-Tpr vinculante, y esto ocurre a través de una definición (sitio de atraque para ERK2, FXF) dominio en Tpr. sorprendentemente, el dominio DEF y los sitios de fosforilación muestran cooperatividad positiva para promover ERK2 vinculante a Tpr, en contraste a los substratos donde fosforilación reduce atascamiento. Expresión ectópica o agotamiento de Tpr resultó en menos movimiento de ERK2 activado desde el citoplasma al núcleo, lo que implica un papel para Tpr en desplazamiento ERK2. Colectivamente, los datos proporcionan evidencia directa que un componente del complejo poro nuclear es un sustrato de buena fe de ERK2 in vivo y eso ERK2 activado estable se asocia a este sustrato después de fosforilación, donde podría desempeñar un papel continuo en función del poro nuclear. Proponemos que el Tpr es un substrato y un andamio para ERKs activados.
Regulación Transcripcional De La Entidad Metastásico [Id] Por KLF17
Una novela en la estrategia de cribado in vivo ha identificado como un gen KLF17 supresor de la metástasis clave que actúa a través de la regulación de la transcripción factor de Id1 dependiente de la inducción de la transición epitelio-mesenquimal.
Unidades De P53 Mutante Invasión Mediante La Promoción De La Integrina Reciclaje
p53 es una proteína supresora de tumores, cuya función se pierde con frecuencia en los cánceres a través de mutaciones missense en el gen TP53. Esto da como resultado la expresión de punto-mutado proteínas p53 que tienen tanto perdido de tipo salvaje actividad supresora del tumor y la ganancia de demostración de las funciones que contribuyen a la transformación y la metástasis. Aquí, mostramos que la expresión de p53 mutante puede promover la invasión, la pérdida de la direccionalidad de la migración y el comportamiento metastásico. Estas actividades de p53 reflejan mejor la integrina y el factor de crecimiento epidérmico tráfico receptor (EGFR), que depende de la proteína Rab-acoplamiento (RCP) y resulta en la activación constitutiva del EGFR / señalización de integrina. Ofrecemos pruebas de que mutantes de p53 promueve la invasión de las células a través de la inhibición de la TAp63, y la pérdida simultánea de p53 y TAp63 recapitula el fenotipo de los mutantes de p53 en las células. Estos hallazgos abren la posibilidad de que el bloqueo de alpha5/beta1-integrin y / o el receptor de EGF tendrá un beneficio terapéutico en el que expresan mutantes de p53 cánceres.
Esferoides Cáncer De Ovario El Uso Miosina Generado Por La Fuerza Para Despejar El Mesotelio
La difusión de los tumores de ovario consiste en la implantación de esferoides de cáncer en la monocapa mesotelial en las paredes de órganos de la cavidad peritoneal y pleural. Las biopsias de los tumores vinculados a órganos peritoneales muestran que las células mesoteliales no están presentes en las masas tumorales. Hemos desarrollado un vivo, basado en imágenes en el modelo in vitro en el que las interacciones entre los esferoides tumorales y las células mesoteliales se puede controlar en tiempo real para proporcionar la comprensión espacial y temporal de la autorización mesotelial. Aquí nos proporcionan pruebas de que el cáncer de ovario esferoides utilizan la integrina - y Talin - dependiente de la activación de la miosina y la fuerza de tracción para promover el desplazamiento de las células mesoteliales de debajo de un esferoide de las células tumorales. Estos resultados sugieren que ováricos grupos de células tumorales tener acceso al entorno de sub-mesotelial ejerciendo fuerza sobre las células mesoteliales que recubren los órganos diana, conduciendo la migración y el aclaramiento de las células mesoteliales.
