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Articles by Marie Cross in JoVE
JoVE General
In Vitro Assemblée nucléaire utilisant fractionnée extraits d'œufs de Xénope
Department of Cell Biology, Emory University
Assemblage membrane nucléaire est une étape essentielle dans le cycle de division cellulaire, ce processus peut être reproduit dans le tube à essai en combinant la chromatine des spermatozoïdes de Xenopus, le cytosol et des fractions membranaires de lumière. Remplissez noyaux sont formés, y compris les membranes nucléaires avec des complexes de pores, et ces noyaux reconstitués sont capables du processus normal de nucléaire.
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Apprendre A Propos Du Cancer De Grenouilles: Analyse Des Fuseaux Mitotiques Dans Les Extraits D'œufs De Xénope
Le fuseau mitotique est responsable de la ségrégation correctement chromosomes pendant la division cellulaire. La perturbation de ce processus conduit à une instabilité génomique sous la forme de l'aneuploïdie, qui peut contribuer au développement du cancer. Par conséquent, l'identification et la caractérisation des facteurs qui sont responsables de l'assemblage et le réglage de la broche sont cruciales. Non seulement ces facteurs souvent altéré dans le cancer, mais ils servent aussi comme des cibles thérapeutiques potentielles. Xenopus oeuf extrait est un outil puissant pour étudier l'assemblage du fuseau et d'autres liées au cycle du cellulaire en raison des événements, en grande partie, à la facilité avec laquelle la fonction des protéines peuvent être manipulés dans l'extrait. Fait important, les facteurs de broche qui ont été caractérisés dans l'extrait d'œufs sont conservés dans l'assemblage du fuseau humaine. Dans cette revue, nous expliquons comment l'extrait est préparé et manipulé pour étudier la fonction des facteurs individuels dans l'assemblage de la broche et du checkpoint du fuseau. En outre, nous fournissons des exemples de facteurs de broche plusieurs qui ont été définis fonctionnellement en utilisant le système extrait et discuter comment ces facteurs sont modifiés dans le cancer humain.
NUP98 Régule Assemblée Fuseau Bipolaire Par L'association Avec Les Microtubules Et L'opposition De MCAK
Au cours de la mitose, le complexe du pore nucléaire est démonté et, de plus en plus, nucléoporines se révèlent avoir des fonctions mitotiques lorsqu'il est libéré du pore. Nous trouvons une contribution de l'nucléoporine NUP98 à l'assemblage du fuseau mitotique par la réglementation de la dynamique des microtubules. Lorsqu'il est ajouté à l'extrait de Xenopus essais d'assemblage de broche, le domaine C-terminal de NUP98 stimule la croissance incontrôlée des microtubules. A l'inverse, l'inhibition ou l'épuisement des NUP98 conduit à la formation des monopolaire stable broches. Bipolarité broche est restauré par addition d'eau purifiée, recombinante NUP98 C-terminale. La région minimale requise de NUP98 correspond à une portion du domaine C-terminal manque une fonction précédemment caractérisé. Nous montrons l'association entre cette région de l'extrémité C-terminale de la NUP98 et les deux Taxol-stabilisées microtubules et la mitotique microtubules dépolymérisation centromère kinésine associée (MCAK). Il est important, nous démontrons que ce domaine de NUP98 inhibe l'activité de dépolymérisation MCAK in vitro. Ces données appuient un modèle dans lequel NUP98 interagit avec les microtubules et antagonise l'activité MCAK, favorisant ainsi l'assemblage du fuseau bipolaire.
