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Articles by Marie Cross in JoVE
JoVE General
In Vitro Nuclear Assembly mit Fraktionierte Xenopus Egg Auszüge
Department of Cell Biology, Emory University
Kernmembran Montage ist ein wesentlicher Schritt in der Zellzyklus; dieser Prozess im Reagenzglas durch die Kombination von Xenopus Spermien Chromatin, Cytosol und Licht Membranfraktionen repliziert werden. Komplette Kerne gebildet werden, einschließlich der nuklearen Membranen mit Poren-Komplexe, und diese rekonstituierte Kerne sind in der Lage normale Kernprozesse.
Other articles by Marie Cross on PubMed
Lernen über Krebs Von Fröschen: Analyse Der Mitotischen Spindeln in Xenopus-Ei-Extrakte
Die mitotische Spindel ist für richtig Segregieren Chromosomen während der Zellteilung verantwortlich. Störung dieses Prozesses führt zu genomische Instabilität in Form von Aneuploidie, die zu der Entstehung von Krebs beitragen können. Identifizierung und Charakterisierung von Faktoren, die verantwortlich für die Montage und Regulierung der Spindel sind daher von entscheidender Bedeutung. Nicht nur sind diese Faktoren oft in Krebs verändert, sondern sie dienen auch als mögliche therapeutische Ziele. Xenopus-Ei-Extrakt ist ein leistungsfähiges Werkzeug für das Studium der Spindel Montage und andere Zellzyklus-bezogene Ereignisse wegen, größtenteils auf die Leichtigkeit, mit welcher, die Protein Funktion im Extrakt manipuliert werden kann. Die Spindel-Faktoren, die in Ei-Extrakt geprägt haben sind vor allem in menschlichen Spindel Baugruppe konserviert. In diesem Bericht erklären wir, wie der Extrakt vorbereitet und manipuliert, um die Funktion der einzelnen Faktoren Spindel Montage-und der Spindel-Prüfpunkt zu studieren. Zusätzlich bieten wir Beispiele für mehrere Spindel-Faktoren, die funktional mit dem Extrakt-System definiert wurden und diskutieren, wie diese Faktoren im menschlichen Krebs verändert werden.
Nup98 Regelt Bipolar Spindel Montage Durch Verbindung Mit Mikrotubuli Und Opposition Von MCAK
Während der Mitose die nukleare Pore Komplex ist demontiert und in zunehmendem Maße Nucleoporins unter Beweis stellen mitotische Funktionen als aus der Pore freigegeben haben. Wir finden einen Beitrag von der Nucleoporin Nup98 mitotische Spindel Assembly durch Regulierung des Microtubule-Dynamik. Wenn Xenopus Extrakt Spindel Baugruppe Proben hinzugefügt, stimuliert die C-terminale Domäne des Nup98 unkontrolliertes Wachstum der Mikrotubuli. Umgekehrt führt Hemmung oder Erschöpfung der Nup98 zur Bildung von stabilen Monopolare Spindeln. Spindel Bipolarität wird durch Zusatz von gereinigtem, rekombinante Nup98 C-Terminus wiederhergestellt. Die minimale erforderliche Region Nup98 entspricht einem Teil der C-terminalen Domäne fehlt eine zuvor gekennzeichnete Funktion. Wir zeigen die Vereinigung zwischen dieser Region von der C-Terminus von Nup98 und sowohl Taxol-stabilisiert Mikrotubuli und die Microtubule-depolymerizing mitotische Zentromere-assoziierte Kinesin (MCAK). Wichtig ist, beweisen wir, dass diese Domäne des Nup98 MCAK Depolymerisation Aktivität in vitro hemmt. Diese Daten unterstützen eine Modell in der Nup98 interagiert mit Mikrotubuli und antagonizes MCAK Aktivität, um bipolare Spindel Baugruppe zu fördern.
