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 JoVE General

Mutagénesis dirigida casera de plásmidos enteros


JoVE 1135 5/11/2009

1Department of Biology, Johannes Gutenberg-University Mainz, Germany, 2Proteomics division, AlPlanta, Neustadt an der Weinstrasse, Germany

Mutagénesis dirigida de los plásmidos es toda una forma sencilla de crear variaciones ligeramente diferentes de un plásmido original. Aquí se demuestra de una manera fácil y rentable para introducir sustituciones de bases en un plásmido usando reactivos estándar.

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Contacto Manchas De Proteína Juntada Con Espiga De Proteína Normalizador De Microarrays Permite Análisis Resuelta En El Tiempo De La Señalización De Receptores ERBB

Microarrays de proteínas permiten comparación altamente precisa y cuantificación de numerosas muestras biológicas en paralelo mientras que requieren solamente poco material. Esto califica matrices de proteína para Biología de sistemas y la investigación clínica donde sólo muestra limitada del material está disponible, pero se requiere una lectura precisa. Con la introducción de medidas de normalización de señal para controlar el tamaño de la gota de matrices de proteína RP manualmente contacto con manchas, se demostró la utilidad de las proteínas normalizador para asegurar un alto rendimiento pero análisis de proteína de bajo costo. Este enfoque se aplicó para el análisis de señalización a través de quinasas de receptor activado ERBB en la línea de células de cáncer de mama MCF-7. Activación de ERK1/2 y AKT por ERBB1 (EGFR), ERRB2 (HER2/neu), y ERBB3-4 fue supervisada de manera resuelta en el tiempo. Análisis de activación de la vía por estimulación con factor de crecimiento epidérmico y heregulin o inhibición bloqueando con gefitinib o herceptin permitió una caracterización de las distintas propiedades de señalización de los diferentes subtipos de receptores ERBB.

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