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Articles by Matthew L. Fowler in JoVE

 JoVE General

Détection directe de l'activité Acétate de formation de l'acétate kinase Enzyme


JoVE 3474 12/19/2011

Department of Genetics and Biochemistry, Clemson University

Une méthode pour la détermination de l'activité kinase acétate est décrite. Ce test utilise une réaction directe pour déterminer l'activité enzymatique et la cinétique de l'acétate kinase dans le sens de l'acétate de former avec différents accepteurs phosphoryle. Par ailleurs, cette méthode peut être utilisée pour doser les autres phosphates d'acétyle ou l'acétyl-CoA d'enzymes utilisant.

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Le Lonidamine De L'agent Anti-trypanosomes Inhibe Trypanosoma Brucei Hexokinase 1

La glycolyse est essentielle pour le protozoaire parasite Trypanosoma brucei. La première étape de cette voie métabolique est médiée par l'hexokinase, une enzyme qui transfère le gamma-phosphate de l'ATP pour un hexose. Le T. brucei génome (GUTat10.1 TREU927/4) encode deux hexokinase (TbHK1 et TbHK2) qui est identique à 98 % au niveau de l'acide aminé. Nos efforts antérieurs ont révélé que le TbHK2 est un régulateur important de TbHK1 les parasites de forme procycliques. Ici, nous avons trouvé par le biais de RNAi que TbHK1 est essentiel au parasite de forme de circulation sanguine. Silencing du gène pendant 4 jours réduit l'hexokinase cellulaire environ 60 % et conduit à la mort du parasite. En outre, nous avons trouvé que l'enzyme recombinante est inhibée par le lonidamine (IC (50) = 850 microM), un médicament anticancéreux qui cible tumorale hexokinase. Cet agent inhibe également l'activité de tout parasite de lysat de HK (IC (50) = 965 microM). Enfin, lonidamine est toxique pour les parasites forme cultivée de circulation sanguine (LD (50) = 50 microM) et procycliques forme parasites (LD (50) = 180 microM). Fait intéressant, la surexpression de TbHK1 protège parasites PF lonidamine. Ces études fournissent des preuves génétiques que TbHK1 est une cible thérapeutique valable tout en identifiant une cible moléculaire potentielle de la lonidamine de l'agent anti-trypanosomes.

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