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Articles by Melanie K. B. Wills in JoVE
JoVE General
Adenovirus-vermittelte genetische Entfernung von Signalmolekülen in kultivierten primären embryonalen Maus-Fibroblasten
Department of Molecular and Cellular Biology, University of Guelph
In diesem Video verwenden wir ein Adenovirus Durchführung der Cre-Rekombinase-Gen zur primären embryonalen Maus-Fibroblasten Tragen einer floxed Rac1 Allel zu infizieren.
Other articles by Melanie K. B. Wills on PubMed
Ausdrucksmuster ShcD Und Shc Familie Adapter-Proteine Während Der Embryonalentwicklung Der Maus
Der Src-Homologie und Kollagen (Shc) Proteine fungieren als molekulare Adapter in Signalisierung Wege, die von einer Vielzahl von Oberflächen Zellrezeptoren vermittelt. Von den vier Säugetierproteine Shc ist ShcD die wenigsten gekennzeichnet. Zu diesem Zweck wurde ShcD Ausdruck dokumentiert und im Vergleich zu anderen Familien Shc-Proteinen. In der dritten Maus-Embryo überlappt Ausdruck des ShcD mit der anderen Shc-Proteinen in das zentrale Nervensystem mit bestimmten Distribution in post-mitotic Neuronen. Darüber hinaus differenziert robuste ShcD Ausdruck innerhalb gesehen ist Epithelzellen von mehreren Organen sowie Skelett und Herz-Muskel und verschiedenen Geweben Neuralleiste Ursprungs. Interessanterweise sind alle Mitglieder der Shc-Familie in hypertrophen Chondrozyten, der erste Bericht von Shc-Proteinexpression in den Entwicklungsländern Skelett ausgedrückt. Die einzigartige Gewebe-Verteilungsmuster der Shc-Proteine, die wahrscheinlich dazu beitragen, ihre komplexen Gewebe-spezifischen Signalling Funktionen während der Embryogenese.
Prolin Auswechslungen Und Threonin Pseudophosphorylation Des Liganden SH3 Von 18,5-kDa-Myelin-basisches Protein Seine Affinität Für Die Fyn-SH3-Domäne Zu Verringern, Und ändern Prozess-Entwicklung Und Protein-Lokalisierung in Oligodendrozyten
Die entwicklungspolitisch geregelten Myelin grundlegende Proteine (Mbit/s), die durch die Golli (Gen Oligodendrozyt Verwandtschaftsgruppe) komplexe entstehen, sind sehr positiv aufgeladen, intrinsisch ungeordneten, multifunktionelle Proteine mit mehreren alternativ gespleißten Isoformen und posttranslationale Modifikationen, und sie spielen eine Schlüsselrolle im Myelin Verdichtung. Die klassische 18,5-kDa-MBP-Isoform hat eine Prolin-reiche Region bestehend aus Aminosäuren 92-99 (Murine laufende-T(92)PRTPPPS(99)-), die eine minimale SH3-Ligand-Domäne enthält. Wir haben bereits gezeigt, dass 18,5-kDa-MBP an mehreren SH3-Domänen bindet, einschließlich der Fyn, Mitglied der Src-Familie von Tyrosinkinasen, die in einer Vielzahl von Signalwege während der CNS-Entwicklung beteiligt. Um zu bestimmen, die physiologische Rolle dieser Bindung sowie die Rolle der Phosphorylierung von Thr92 und Thr95, in der aktuellen Studie haben wir mehrere MBP-Varianten, die speziell auf Phosphorylierung Websites und strukturelle Schlüsselregionen MBPs-SH3-Ligand-Domäne hergestellt. Isothermischer Titrierung Kalorimetrie verwenden, wir haben gezeigt, dass, verglichen mit dem Wildtyp-Protein, diese Varianten haben niedrigere Affinität für die SH3-Domäne von Fyn. Außerdem eine Überexpression von N-Terminal-Tag GFP-Versionen in verewigt oligodendroglial N19 und N20.1 Zelle Kulturen Ergebnisse in abweichenden Dehnung von Membranverfahren und Verzweigungen Komplexität erhöht, und hemmt die Fähigkeit des MBP, Ca(2+) Zustrom zu verringern. Phosphorylierung von Thr92 verursachen MBP-Datenverkehr an den Zellkern dem es in zusätzliche Protein-Protein Interaktionen teilnehmen können. Coexpression von MBP mit einer konstitutiv aktive Form von Fyn-Kinase führte Membran Prozess Ausarbeitung, ein Phänomen, das durch Punkt Aminosäure Ersetzungen in MBPs SH3 Ligand Domäne abgeschafft wurde. Diese Ergebnisse legen nahe, dass MBPs SH3 Ligand Domäne spielt eine Schlüsselrolle in der intrazellulären Protein-Interaktionen in-vivo und für reibungslose Membran Ausarbeitung der Entwicklung von Oligodendrozyten erforderlich sein und darüber hinaus die Phosphorylierung von Thr92 und Thr95 diese Funktion regulieren kann.
