Translate this page to:
German
In JoVE (3)
- Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen
- Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification
- Imaging Effektor-Memory-T-Zellen im Ohr nach Induktion der Adoptive DTH
Other Publications (9)
Automatic Translation
This translation into German was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Melanie P. Matheu in JoVE
JoVE General
Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI), 2Department of Neurobiology and Behaviour, University of California, Irvine (UCI)
Zwei-Photonen-Imaging hat Lymphozyten Motilität und zellulären Interaktionen im Lymphknoten unter basalen Bedingungen und während einer Immunantwort Antwort 1 aufgedeckt. Hier zeigen wir, adoptiven Transfer von T-Zellen, Isolierung von Lymphknoten und Imaging-Motilität der CD4 + T-Zellen in der explantierten Lymphknoten.
JoVE General
Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification
Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
Isolation von Lymphozyten mit der Miltenyi MACs Kit ist eine zuverlässige Methode, um Zellen aus ganzen lymphatischen Gewebe-Homogenaten zu reinigen. Cells unter Verwendung der Miltenyi-System sind in der Regel ≥ 96% rein. Hier zeigen wir, welche Schritte unternommen wurden, um CD4 + T-Zellen, einer der vielen Kits von Miltenyi angeboten isolieren.
JoVE General
Imaging Effektor-Memory-T-Zellen im Ohr nach Induktion der Adoptive DTH
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI), 2Department of Neurobiology and Behavior, University of California, Irvine (UCI)
Hier zeigen wir ein Verfahren zur Induktion und Aufzeichnung des Fortschritts einer verzögerten Typ-Überempfindlichkeit (DTH)-Reaktion bei der Ratte Ohr. Dies wird durch eine Demonstration der Vorbereitung der Ratte Ohrgewebe für Zwei-Photonen-Imaging der Effektor / Memory T-Zell-Antwort folgte.
Other articles by Melanie P. Matheu on PubMed
Sphingosin-1-Phosphat-Typ-1-Rezeptor-Agonismus Hemmt Transendothelial Migration Medulläre T-Zellen, Lymphatische Nebenhöhlen
Sphingosin-1-Phosphat-Typ 1 (S1P(1))-Rezeptor-Agonisten verursachen Sequestrierung von Lymphozyten in sekundären lymphatischen Organen durch einen Mechanismus, der nicht gut verstanden. Eine Hypothese schlägt vor, Agonisten als 'funktionelle Antagonisten' fungieren, indem Sie binden und Verinnerlichung S1P(1) Rezeptoren auf Lymphozyten; eine zweite Hypothese schlägt stattdessen vor, dass S1P(1)-Agonisten auf Endothelzellen Lymphozyte Ausstieg aus Lymphknoten zu verhindern. Hier zwei-Photonen-imaging des lebenden T-Zellen in explantierten Lymphknoten nach der Behandlung mit S1P(1)-Agonisten oder Antagonisten hat bot Einblick in den Mechanismus durch welche S1P(1)-Agonisten-Funktion. Die selektive S1P(1)-Agonist verursachten SEW2871, reversible verlangsamt und 'Protokoll-jamming' von T-Zellen zwischen gefüllt medulläre Schnüre und leere Nebenhöhlen, während Motilität im diffusen Kortex unverändert war. Entfernung oder Antagonist Wettbewerb der SEW2871 Erholung der T-Zelle Motilität durch die stromal endothelial-Schranke, zum Nachfüllen der Nebenhöhlen in das Parenchym der Medulla und Wiederaufnahme der Migration gestattet. Unsere Ergebnisse Visualisierung der Transendothelial Migration von T-Zellen in den lymphatischen Nebenhöhlen und schlagen vor, daß S1P(1)-Agonisten hauptsächlich auf endothelial Zellen S1P(1) Rezeptoren hemmen Lymphozyte Migration zu handeln.
Verbesserung Der Kapilläre Leckage Und Wiederherstellung Der Lymphozyte Ausstieg Durch Einen Chiralen S1P1-Antagonisten, Die In-vivo
Sphingosin-1-Phosphat (S1P, 1) regelt die vaskuläre Barriere und lymphatischen Entwicklung sowie Lymphozyten Ausstieg aus lymphoide Organe, durch die Aktivierung von hoher Affinität S1P1-Rezeptoren. Wir verwendeten reversible chemische Sonden i mechanistische Einblicke in S1P Systeme Organisation durch genetische Manipulationen nicht zugänglich und (Ii) ihr Potenzial für die therapeutische Modulation zu untersuchen. Vaskuläre (aber nicht Airway) Gabe das bevorzugte R-Enantiomer von einer in Vivo-aktive chirale S1P1-Rezeptorantagonisten induzierte Verlust der Kapillare Integrität in Maus-Haut und Lunge. Im Gegensatz dazu hatte der Antagonist, keine Auswirkungen auf die Anzahl der konstitutiven Blut-Lymphozyten. Stattdessen Veränderung der Lymphozyte Menschenhandel und Phänotyp erforderlich Supraphysiological Höhe von S1P1-Ton und kehrte sich durch den Antagonisten. In-vivo-zwei-Photonen-Bildgebung der Lymphknoten bestätigt Anforderungen für obligat Agonismus und die Daten entsprachen die Anwesenheit eines stromal Barrier-Mechanismus für Anspritzung Lymphozyte Ausstieg. So chemische Modulation ergeben sich Unterschiede im S1P-S1P1 Sollwerte zwischen Gewebe und highlights mechanistische Vorteile (Lymphozyten-Sequestrierung) und Risiken (Lungenödem) therapeutische Intervention.
Klasse IA Phosphoinositid-3-Kinase Moduliert Motilität Der Basalen Lymphozyten in Den Lymphknoten
Rekrutierung von PI3K auf der Zellmembran ist ein unverzichtbarer Schritt in normalen Lymphozyten-Proliferation und Aktivierung. In dieser Studie identifizieren wir PI3K als eine wichtige signalisierende Molekül für die Aufrechterhaltung der basalen T und B-Lymphozyten Motilität und Referenzfahrt in die intakte Lymphknoten. Pharmakologische Hemmung der PI3K katalytische Isoformen Breite Auswirkungen auf die basalen Lymphozyte Motilität, einschließlich Änderungen der zielsuchende Kinetik, Lokalisierung von B-Zellen in den Lymphknoten, ausgeübt und Zelle Geschwindigkeiten reduziert. Lymphozyten, die einen Mangel an eine oder beide der Klasse IA PI3K regulatorischen Untereinheiten p85alpha und p85beta, die auch ausgestellt reduzierte Geschwindigkeiten, mit dem Ausmaß der Reduktion je nach beiden Zelle Art und Isoform Spezifität. B-Zellen einen Mangel an p85alpha ausgestellt grobe morphologische Anomalien, die in Zellen mit einem PI3K-Inhibitor behandelt nicht erkennbar waren. Unsere Ergebnisse zeigen erstmals, Klasse IA PI3Ks spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung der basalen Lymphozyte Motilität und p85alpha regulatorische Untereinheit Ausdruck muss B Zellmorphologie in gewissem Sinne unabhängig von PI3K katalytische Funktion beizubehalten. Darüber hinaus zeigen wir unterschiedliche Rollen für katalytische Funktion und Klasse IA PI3K regulatorischen Domäne Aktivität Domain in Lymphozyten Motilität, Referenzfahrt und homöostatische Lokalisierung von Reifen ruhenden B-Zellen.
Imaging Von Effektor-Gedächtnis-T-Zellen Während Einer Verzögerten Typ Überempfindlichkeitsreaktion Und Unterdrückung Von Kv1.3 Kanal Blockieren
Effektor T (Tem) Speicherzellen sind wesentliche Mediatoren Autoimmunkrankheit und verzögerten Typ Überempfindlichkeit (DTH), eine bequeme Modell für zwei-Photonen-Imaging der Tem-Zelle-Teilnahme an einer Entzündungsreaktion. Kurz (3 Std.) nach Inkrafttreten der Antigen-grundiert Ohr Gewebe, Tem-Zellen stabil an Antigen-Antigen-präsentierende Zellen (APC) angeschlossen. Nach 24 h erweiterten Tem Zellen waren stark gekrümmter entlang Kollagenfasern und rasch für 18 Std. Tem-Zellen migrieren weiter Vertrauen auf Spannung-Gating Kv1.3 Kaliumkanäle, Kalzium Signalisierung zu regulieren. ShK-186, ein bestimmter Kv1.3-Blocker, gehemmt DTH und unterdrückte Erweiterung der Tem-Zelle und Motilität im entzündeten Gewebe hatte aber keine Auswirkung auf Referenzfahrt auf oder Motilität in Lymphknoten naive und zentralen Speicher T (Tcm) Zellen. ShK-186 behandelt effektiv Krankheit in einem Rattenmodell der multiplen Sklerose. Diese Ergebnisse zeigen eine Anforderung für Kv1.3 Kanäle in Tem-Zellen während einer entzündlichen Immunantwort in peripheren Geweben. Kv1.3 Ausrichtung ermöglicht Effektor Speicher Antworten unterdrückt werden soll, während die zentralen Speicher Antworten intakt bleiben.
