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Articles by Michael E. Werner in JoVE
JoVE Bioengineering
制定通过Nanoprecipitation技术嵌段聚合物纳米粒子
1Laboratory of Nano- and Translational Medicine, Department of Radiation Oncology, Lineberger Comprehensive Cancer Center, University of North Carolina School of Medicine, 2Carolina Center for Nanotechnology Excellence, University of North Carolina
本文介绍了nanoprecipitation方法使用嵌段共聚物的合成聚合物为基础的纳米粒子。我们将讨论合成的嵌段共聚物，nanoprecipitation技术，和潜在的应用。
Other articles by Michael E. Werner on PubMed
特异性确定回路的整合素 Beta4 亚细胞与层粘连蛋白-5 和外内的信号转导的绑定中的关键作用。
内每个 hemidesmosome，alpha6beta4 整合素在 hemidesmosome 大会通过绑定到层粘连蛋白-5 中基底膜的上皮组织中发挥了至关重要的作用。最近的分析有牵连"特异性确定循环"(Sdl) 的 β 整合素在调节配体结合中类似的域中。在这里，我们调查了 SDL 花纹 4 整合素类似的胞内的作用。我们生成点突变在 SDL 4 整合素与绿色荧光蛋白 (GFP beta4K150A 和绿色荧光蛋白基因 beta4Q155L) 标记内。我们也产生类似的域内 4 整合素，一种突变躺在 SDL 区域 (绿色荧光蛋白-beta4V284E) 外。我们转染到 804 G 的单元格，装配 hemidesmosomes 和人体的血管内皮细胞，表示小内源性 4 整合素编码突变的 beta4 整合素与绿色荧光蛋白共轭野生型 4 整合素 (绿色荧光蛋白-beta4WT） 的构造。在单元格中，804 G 转染绿色荧光蛋白基因 beta4WT 和绿色荧光蛋白基因 beta4V284E colocalize 与 hemidesmosome 蛋白质，而细胞表达绿色荧光蛋白基因 beta4K150A 和绿色荧光蛋白基因 beta4Q155L 的 hemidesmosomal 组件闭合的本地化。内皮细胞绿色荧光蛋白基因 beta4WT 和突变蛋白质是 alpha6 整合素与细胞表面的多发性骨髓瘤。时转染血管内皮细胞镀到层粘连蛋白-5 基质上，绿色荧光蛋白基因 beta4WT 和绿色荧光蛋白基因 beta4V284E 本地化与层粘连蛋白-5，而绿色荧光蛋白基因 beta4K150A 和绿色荧光蛋白基因 beta4Q155L 不这样做。绿色荧光蛋白基因 beta4WT 和血管内皮细胞表达绿色荧光蛋白-beta4V284E 时与关联适配器蛋白特困情况与层粘连蛋白-5 刺激的单元格。然而，绿色荧光蛋白基因 beta4K150A 和绿色荧光蛋白基因 beta4Q155L 未能与特困情况相关联，即使在目前，层粘连蛋白-5 时从而影响下游信号。这些结果提供 beta4 整合素亚单位的 SDL 部分对于配体绑定是必需和是在外面的信号中所涉及的证据。
小热休克蛋白 Alpha B-晶状体蛋白是一种新型抑制剂抑制半胱氨酸蛋白酶-3 活化的 TRAIL 诱导凋亡。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL) 是使它有前途的癌症治疗的优先诱导转化细胞凋亡的细胞因子肿瘤坏死因子 α 家庭成员。然而，许多肿瘤药物有抗药性 TRAIL 诱导细胞凋亡的机制，却不甚了解。我们表现出小热休克蛋白 alpha B-晶状体蛋白 (但没有其他热休克蛋白或凋亡调节蛋白) 的表达式关联与径抵抗癌细胞的面板中。稳定表达野生型 alpha B-晶状体蛋白，但不是损害其程序集和伴侣的功能，在一个 pseudophosphorylation 突变体防止癌细胞 TRAIL 诱导半胱氨酸蛋白酶-3 活化与凋亡的实验研究。此外，选择性抑制 RNA 干扰技术的 alpha B-晶状体蛋白表达的增敏肿瘤细胞与线索。此外，野生型 alpha B-晶状体蛋白促进皮下移植瘤生长和抑制 TRAIL 诱导凋亡裸小鼠体内，而 pseudophosphorylation alpha B-晶状体蛋白突变体有损于其抗凋亡功能抑制异种移植肿瘤的生长。集体，这些结果表明，alpha B-晶状体蛋白是 TRAIL 诱导细胞凋亡和肿瘤生长的新型调节。此外，这些研究结果显示，有针对性地的抑制 α B-晶状体蛋白的促进 TRAIL 诱导凋亡，从而暗示克服 TRAIL 抵抗的癌症的新策略。
AlphaB-晶状体蛋白是预测差临床成果在乳腺癌组织中的新型组织。
最近的基因分析研究确定了新乳房癌亚型，基底样组，其中表示的基底上皮细胞的基因特性并与穷人的临床结果相关联。不过，负责观察到此组中的攻击性行为的基因是主要是未知的。在这里我们报告小热休克蛋白 α-基本-晶状体蛋白 (alphaB-晶状体蛋白) 常有人在基底样肿瘤和预测不良独立于其他预后标志乳腺癌患者的存活率。我们还表明该表达的 alphaB-晶状体蛋白转化永生化人乳腺上皮细胞 (布林克）。在 3D 基底膜文化中，alphaB-晶状体蛋白表达诱导鲁米那灌装和乳腺腺泡，其他肿瘤样改变而沉默 alphaB-晶状体蛋白 RNA 干扰技术抑制这些异常。alphaB-晶状体蛋白过度表达也诱导表皮生长因子和碇泊处独立增长、 增加的细胞迁移和入侵，并且一激活 MAPK 激酶/ERK (MEK/ERK） 途径。此外，由 MEK 抑制剂，抑制了所赋予的 alphaB-晶状体蛋白的转换表型。此外，超量表达 alphaB-晶状体蛋白的永生化人布林克概括人类基底样乳腺癌肿瘤方面的裸鼠体内形成创乳腺肿瘤。集体，我们的结果显示，alphaB-晶状体蛋白是新型蛋白基底样乳腺癌癌组织中表达独立预测较短的生存。我们的数据也牵连 MEK/ERK 通路作为这些肿瘤的潜在治疗目标。
整合素 Beta4 亚基半胱氨酸蛋白酶蛋白质水解扰乱 Hemidesmosome 大会、 促进细胞凋亡，和抑制细胞迁移。
半胱氨酸蛋白酶是一个保守的家庭切割胞基质在 Asp 残留，修改它们的功能和促进细胞凋亡的细胞死亡蛋白酶。在本报告中我们为使用克隆策略表达式新型半胱氨酸蛋白酶底物识别整合素 beta4 亚基。Alpha6 及其合作伙伴 alpha6beta4 整合素锚定到基底膜在专门的胶粘剂结构，称为 hemidesmosomes 的上皮细胞和多样的上皮细胞的功能，包括细胞存活和迁移中发挥了重要作用。我们显示该整合素 beta4 分解的半胱氨酸蛋白酶-3 和-7 在一个保守的 Asp 残留物 （Asp(1109)) 在体外和上皮细胞进行细胞凋亡，导致大部分细胞质尾巴的去除。整合素 beta4 的半胱氨酸蛋白酶裂解生产两种产品，1） 是不稳定和迅速退化的蛋白酶体的羧基末端产品和 2） 不能装配到成熟 hemidesmosomes 的氨基末端裂解产品 (氨基酸 1-1109年)。我们还表明半胱氨酸蛋白酶劈裂的整合素 beta4 觉悟上皮细胞的凋亡，抑制细胞迁移。两者合计，我们已确定生成的半胱氨酸蛋白酶，扰乱了关键的结构和功能属性的上皮细胞和促进细胞凋亡的整合素 beta4 以前无法识别蛋白水解截断。
具体的酪氨酸磷酸调解 SHIP2 肌醇磷酸酶活性，依赖于信号的刺激，虽然 SH2 域授予保持基底活动的抑制作用。
SH2 域包含 5 肌醇磷酸酶 (SHIP2) 被卷入了 2 型糖尿病和癌症的发展。酪氨酸磷酸化的 SHIP2 是所示，以加强其磷酸酶活性。请在 IP4 使用作为衬底，我们在这里展示 986、 987 和 1135年酪氨酸是表皮生长因子诱导刺激的 SHIP2 活动的关键。与中断的 SH2 域 (R47G 突变) SHIP2 显示比野生型 SHIP2 高本构活动。删除 C 总站区域同样激活 SHIP2。因此，SHIP2，C-总站，结合的 SH2 域赋予抑制的作用，以维持一个低的基底活动，以及信号诱导酪氨酸磷酸克服这种惰性，激活 SHIP2。
皮质收缩力及主轴定位蛋白磷酸酶 6 PPH 6 个细胞阶段 C.线虫胚胎的规管。
微管和肌动蛋白细胞骨架的调节是关键适当的细胞分裂。蛋白磷酸化被认为是一种重要的监管机制，调节这些骨架网络。相比之下，有关于如何蛋白磷酸酶有助于这种调制的信息相对稀少。在这里，我们的特点是蛋白磷酸酶 PPH 6 和一个细胞阶段 C.线虫胚胎及其关联的亚结构调整方案 1 单位的要求。我们建立复杂的 PPH 6 和结构调整方案 1 （PPH-6/结构调整方案-1） 是需要收缩的肉网络和适当的主轴定位。我们的分析表明 PPH-6/结构调整方案-1 规定了组织的皮层非肌肌球蛋白二 (NMY-2)。因此，我们发现 PPH-6/结构调整方案-1 有助于通过刺激肉收缩的胞质分裂。此外，我们表明 PPH-6/结构调整方案-1 需要适当代期间后期主轴两极拉动力量。我们的研究结果表明这一要求是不同的作用，组织皮层肉网络。相反，我们发现 PPH-6/结构调整方案-1 有助于皮质本土化的两个积极监管机构的拉动力量，探地雷达-1/2 和林-5。我们的研究结果首次后生发展中磷酸酶的 PP6 家庭成员的角色深入。
叶酸靶向纳米粒子交付放化疗疗效和治疗卵巢癌腹膜转移为 Radiotherapeutics。
腹膜转移是卵巢癌的发病率和死亡率的主要原因。虽然腹腔化疗和放射治疗已显示出良好的临床效果，两者都受到其非目标的性质的限制。我们旨在发展生物有针对性的纳米粒子治疗卵巢癌腹膜转移治疗。封装化疗或放疗的叶酸靶向纳米粒子被设计出来。紫杉醇 （Ptxl） 被用作化疗和 yittrium-90 ((90) Y） 被聘为治疗的放射性同位素。因为大多数卵巢癌去叶酸受体为靶向的配体利用叶酸。纳米表征研究表明 Ptxl 控释单分散粒子。叶酸靶向配体介导的肿瘤细胞到 NPs 的吸收。体外药效研究证明叶酸针对 NPs 包含放化疗是最有效的治疗相比 NPs 包含单个治疗或任何非目标 NP 治疗学的叶酸目标。使用表明，叶酸针对 NP 治疗学卵巢腹膜转移模型体内药效研究了比非目标 NP 疗法有效得多。叶酸靶向疗法，当中载有放化疗的 NP 似乎是最有效。我们的研究结果表明叶酸靶向纳米粒放化疗有可能作为一种治疗卵巢腹膜转移。
肌动蛋白和微管在 Multiciliated 细胞中驱动器平面细胞极性的差异的方面。
偏振平面单元格代表东方的组织与尖底轴正交平面内细胞的能力。适当两极分化的细胞功能的 multiciliated 需要协调纤毛间距和纤毛极性以及殴打期间 metachronal 同步性的纤毛的时机。已显示的平面细胞极性途径和动力，指示纤毛极性。在本文中，我们展示如何胞内效应器解释极性组织按照非对称细胞功能的细胞形态。我们观察细胞肌动蛋白和微管网络经过剧烈的重组，期间两极化的纤毛组织提供差别的角色。我们使用的纤毛方向计算角关联分析，报告分级蜂窝组织下游细胞极性提示。肌动蛋白动力学和所需的间距适当纤毛、 全球协调的纤毛极性，殴打、 metachronic 纤毛协调而胞质微管动力学所需的地方协调之间相邻纤毛的极性。
多西他赛有针对性的叶酸高分子纳米粒子制定是有效的分子靶增敏作用与效能取决于放射治疗的时间。
纳米粒子 (NP) 化疗增敏作为具有很大潜力。其独特的属性，如优惠积累的肿瘤以及他们有能力目标肿瘤分子靶向的配体，通过非常适合用于放射增敏作用。我们旨在开发多西他赛 (Dtxl) 的分子靶的纳米制订和评估其属性作为增敏作用。我们作为一种分子靶向配体使用一种可生物降解及生物相容性的脂质聚合物 NP 平台和叶酸，工程 Dtxl 叶酸靶向纳米粒子 (英尺-NP) 制定。这些 NPs 有 72 ± 4 nm 的大小和表面电荷的-42 ± 8 mV。我们使用叶酸受体转基因 KB 细胞和叶酸受体低 HTB 43 单元格，显示叶酸介导的细胞内吸收的 NPs。体外放射增敏研究最初表明英尺-NP 是不如 Dtxl 作为增敏作用有效。但是，依赖于时间的放射治疗放射增敏作用效果。体外放射增敏作用进行照射在表明英尺-NP Dtxl Dtxl 一样有效的最佳时间 (24 h)。相比金融时报 》 NP Dtxl 是 Dtxl 和 nontargeted 纳米粒子 (NT-NP) Dtxl 体内、 金融时报 》 NP 被发现要比 Dtxl 或 NT-NP Dtxl 作为增敏作用的有效得多。我们还确认，放射增敏作用是依赖于时间的照射在体内。总之，金融时报 》 NP Dtxl 是增敏叶酸受体转基因肿瘤细胞中的有效作用。照射的时间是在实现与此纳米平台的最大效能的关键。据我们所知的最好的我们的报告是增敏的第一次为有前途的一类新证明分子靶 NPs 的潜力。
