Modulazione Del Mouse La Secrezione Di Alfa-defensina Cellule Paneth Da MIKCa1, Un Ca2 +-canale Attivato, Intermedio Di Conduttanza Del Potassio

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2002  |  Pubmed ID: 11724775

Le cellule di Paneth in piccole cripte intestinali secernono microbicida alpha-defensine in risposta a batteri e antigeni batterici (Ayabe, T., Satchell, d. P., Wilson, C. L., parchi, W. C., Selsted, M. E. e Ouellette, J. (2000) NAT. Immunol. 1, 113 - 38). Riportiamo ora che il mIKCa1 di canale attivato Ca(2+) K(+) modula la secrezione di mouse Paneth cell. cloni di cDNA mIKCa1 identificati in una libreria piccola cripta intestinale del mouse tramite l'ibridazione di sonde di cDNA umane IKCa1 sono stati isolati, e analisi di sequenza del DNA ha dimostrato che essi erano identici a mIKCa1 cDNAs isolata dal fegato e cellule eritroidi. L'organizzazione genomica è stata trovata per essere conservato tra mouse e IKCa1 umana, come dimostrato dal confronto dei rispettivo cDNA e sequenze genomiche. Esperimenti reverse transcriptase-PCR, utilizzando primer nidificati amplificato mIKCa1 dalla metà inferiore delle cripte sezionate e da singole cellule di Paneth, ma non da superiore metà delle cripte sezionate, epitelio dei villi o cellule epiteliali indifferenziate cripta, suggerendo un ruolo specifico lignaggio di mIKCa1 nell'epitelio dell'intestino tenue del mouse. Il canale mIKCa1 clonato è stato attivato calcio e bloccati da dieci strutturalmente diversi inibitori del peptide e nonpeptide con potenze che attraversa 9 ordini di grandezza e indistinguibile da quella dell'omologo umano. Coerente con blocco canale, charybdotoxin, Clotrimazolo e altamente selettivi inibitori di IKCa1, 34-TRAM e TRAM-39, inibiscono (50% circa) Paneth secrezione cellulare stimolata da batteri o lipopolisaccaride batterica, misurata sia come attività battericida e proteina secreta cryptdin, ma l'analogico inattivo, TRAM-7, non bloccare la secrezione. Questi risultati dimostrano che mIKCa1 è il modulatore di alfa-defensina secrezione delle cellule di Paneth e divulgare un coinvolgimento in difesa della mucosa dell'epitelio intestinale contro agenti patogeni batterici ingeriti.

Angoli Più Riposti Di Polycystin-2 Come Un Canale Di Rilascio Del Calcio

Nature Cell Biology. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11875447

Due-fotone Imaging Della Risposta Di Motilità E Antigene Dei Linfociti Nel Linfonodo Intatto

Science (New York, N.Y.). Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12016203

Motilità dei linfociti è di vitale importanza per il traffico all'interno degli organi linfoidi e per l'avvio di contatti con presentanti l'antigene delle cellule. Visualizzazione di questi processi in precedenza è stato limitato ai sistemi in vitro. Descriviamo l'uso della microscopia del due-fotone laser all'immagine del comportamento dinamico dei singoli viventi linfociti profondi all'interno dei linfonodi intatti. Nel loro ambiente nativo, le cellule T raggiunto velocità di picco di più di 25 micrometri al minuto, visualizzando un coefficiente di motilità è 5-6 volte che delle cellule B. Sfida antigenica cambiato le traiettorie delle cellule T da cammini casuali a cluster "sciami" e stabile. In tempo reale immagini del due-fotone rivela comportamenti dei linfociti che sono fondamentali per l'avvio della risposta immunitaria.

Società Americana Di Ecocardiografia E Society of Anesthesiologists Cardiovascolare Guidelines Task Force Per L'addestramento in Ecocardiografia Perioperatoria

Anesthesia and Analgesia. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12031993

Società Americana Di Ecocardiografia E Society of Anesthesiologists Cardiovascolare Guidelines Task Force Per L'addestramento in Ecocardiografia Perioperatoria

Journal of the American Society of Echocardiography : Official Publication of the American Society of Echocardiography. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12050607

Proprietà Distinte Di Canali CRAC E MIC in Cellule RBL

The Journal of General Physiology. Aug, 2002  |  Pubmed ID: 12149283

Nel ratto Leucemia basofila (RBL) e cellule Jurkat T, Ca(2+) rilascio attivato canali Ca(2+) (CRAC) aperto in risposta al passivo Ca(2+) negozio di esaurimento. Interiormente che rettifica il CRAC canali ammettono cationi monovalenti, quando gli ioni bivalenti esterni vengono rimossi. Rimozione di Mg(2+) interno espone una corrente esteriormente rettifica (Mg(2+)-inibito catione [MIC]) che ammette anche cationi monovalenti, quando gli ioni bivalenti esterni vengono rimossi. Qui dimostriamo che CRAC e MIC correnti sono separabili dalle proprietà di selettività e rettifica di ioni: cinetica di attivazione e suscettibilità alla fatiscente e sensibilità farmacologica per esterni Mg(2+), spermina e SKF-96365. Importante, fatiscente selettiva di MIC corrente consentita CRAC e MIC corrente ad essere caratterizzato in condizioni identiche ioniche con Mg(2+) interna bassa. Rimozione di Mg(2+) interna indotta MIC attuale nonostante ampiamente diversi livelli Ca(2+) ed EGTA, suggerendo che esaurimento Ca(2+)-store non è coinvolto nell'attivazione dei canali MIC. Aumento interno Mg(2+) da submicromolar a livelli millimolare diminuito le correnti MIC senza intaccare la rettifica ma non alterava CRAC attuale rettifica o ampiezze. Esterno Mg(2+) e Cs(+) portato corrente attraverso il microfono, ma non i canali di CRAC. SKF-96365 bloccato reversibilmente CRAC corrente ma inibiscono irreversibilmente MIC corrente. A concentrazioni micromolari, spermina sia extracellulare Mg(2+) bloccato monovalente MIC corrente reversibilmente ma non monovalente CRAC corrente. Le caratteristiche biofisiche della corrispondenza corrente MIC bene con canali TRPM7 clonati ed espressi. I risultati precedenti vengono rivalutati in termini di canali separati di CRAC e MIC.

Imaging Del Due-fotone Nel Tessuto Linfoide Intatto

Advances in Experimental Medicine and Biology. 2002  |  Pubmed ID: 12405205

Imaging Del Due-fotone Tessuto: Vedendo Il Sistema Immunitario in Una Nuova Luce

Nature Reviews. Immunology. Nov, 2002  |  Pubmed ID: 12415310

Molte funzioni dei linfociti, come riconoscimento dell'antigene, prendono posto nel profondo popolato densamente organi linfoidi. Perché non era possibile osservazione diretta in vivo, la dinamica delle interazioni cellula immunitaria è state dedotta o estrapolata da studi in vitro. Eccitazione del due-fotone di fluorescenza utilizza estremamente breve (< 1 picosecondo) e intensi impulsi di luce di 'vedere' direttamente nei tessuti viventi, a una maggiore profondità e con minore fototossicità rispetto a metodi di imaging convenzionali. Microscopia del due-fotone, in combinazione con molecole di recente sviluppato indicatore, promette di estendere la cella singola approcci all'impostazione in vivo e per rivelare nel dettaglio le collaborazioni cellulari che sottendono la risposta immunitaria.

Sviluppo E Analisi Di Un Nuovo Esame Di Certificazione in Ecocardiografia Transesofagea Perioperatoria

Anesthesia and Analgesia. Dec, 2002  |  Pubmed ID: 12456404

Un elemento chiave nello sviluppo di un processo per determinare le conoscenze e le abilità nell'applicare l'ecocardiografia perioperatoria ha incluso un esame. Riportiamo sullo sviluppo di un esame di certificazione in ecocardiografia perioperatoria. Inoltre, abbiamo testato l'ipotesi che le prestazioni di esame sono correlata alla esperienza clinica in ecocardiografia. Dal 1995, più di 1200 partecipanti hanno preso l'esame, e sono passati più di 70%. In generale prestazioni esame era correlato positivamente per più di 3 mo di formazione (o equivalente) in ecocardiografia e performance e interpretazione di almeno sei esami alla settimana. Abbiamo concluso che l'esame di certificazione in ecocardiografia perioperatoria è un valido strumento per aiutare a determinare la conoscenza individuale nell'applicazione di ecocardiografia perioperatoria. IMPLICAZIONI: Questa relazione descrive il processo di sviluppo la certificazione esame di ecocardiografia transesophageal e identifica correla con le prestazioni in esame.

Una Romanzo Tossina Fluorescente Per Rilevare Ed Indagare Kv1.3 Canale Up-regulation in Linfociti T Attivati Cronicamente

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12511563

Linfociti T con insolitamente alta espressione del canale voltaggio-dipendente Kv1.3 (cellule Kv1.3(high)) sono stati implicati nella patogenesi dell'encefalomielite sperimentale autoimmune, un modello animale per la sclerosi multipla. Abbiamo sviluppato un analogo fluoresceinated di ShK (ShK-F6CA), il più potente inibitore conosciuto di Kv1.3, per la rilevazione di cellule Kv1.3(high) in citometria a flusso. ShK-F6CA bloccato Kv1.3 a concentrazioni picomolar con un coefficiente di Hill di 1 ed esposto &gt; 80-fold specificità per Kv1.3 sopra altri canali K(V) e Kv1.1. In esperimenti di citometria a flusso, ShK-F6CA tinto in particolare le cellule che esprimono Kv1.3 con un limite di circa 600 canali per ogni cella. Ratto e cellule T umane che erano stata ripetutamente stimolate 7 - 10 volte con antigene prontamente sono stati distinti in base ai loro livelli elevati di canali Kv1.3 (&gt; 600 canali/cella) e colorazione ShK-F6CA da cellule T o cellule che erano sottoposti a turni di 1-3 di attivazione a riposo. Livelli di espressione funzionali Kv1.3 aumentato sostanzialmente in una linea di cellule T specifiche di mielina ratto seguendo la stimolazione antigene mielina, piazzandosi al 15-20 h e poi in calo previsione per i prossimi 7 giorni, in parallelo con l'acquisizione e la perdita di encephalitogenicity. Percorsi di chinasi C-dipendente sia calcio e proteina sono stati richiesti per l'antigene-indotta Kv1.3 up-regolamento. ShK-F6CA potrebbe essere utile per la rilevazione rapida e quantitativa delle cellule che esprimono Kv1.3(high) in tessuti normali e malati e di visualizzare la distribuzione di canali funzionali nelle cellule intatte.

Canali Microfonici Sono Inibiti Da Cationi Divalenti Interni Ma Non ATP

Biophysical Journal. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12547774

TRPM7 canali sono canali non selettivi cazione che possiedono un dominio alfa-chinasi funzionale. È stato proposto che heterologously espressi TRPM7 canali sono attivati (Runnels et al., 2001) o inibito (Nadler et al., 2001) di dialisi la cella con millimolare livelli di ATP. La correlazione endogeno di TRPM7 è stato identificato nel T-linfociti e RBL (Leucemia basofila ratto) cellule e denominato MagNuM (per metallo Mg(2+)-nucleotide-inibito) o microfono (per inibito Mg(2+) cazione). Qui, segnaliamo che interna Mg(2+) piuttosto che MgATP inibisce questa corrente. Citoplasmatico MgATP, fornito da dialisi a concentrazioni millimolare, inibisce efficacemente solo quando un debole chelante Mg(2+) è presente nella soluzione di pipetta. Così, MgATP agisce come una fonte di Mg(2+), piuttosto che una fonte di ATP. Utilizzando un sito accessibile dall'esterno all'interno del poro del canale MIC se stessa come un'analisi biologica, mostriamo che soluzioni equimolari di MgCl(2) e MgATP contengono quantità simili di Mg(2+) gratuito, spiegando il fatto che i valori numerici delle concentrazioni di Mg(2+) e MgATP necessarie per la completa inibizione sono gli stessi. Inoltre, dimostriamo che Mg(2+) non è unica nella sua azione inibitoria, come Ba(2+), Sr(2+), Zn(2+) e Mn(2+) possono sostituire Mg(2+), provocando una inibizione totale. Possiamo concludere che l'inibizione di corrente MIC si verifica semplicemente da cationi divalenti.

Autonoma Delle Cellule T Traffico Esaminato in Vivo Con Intravital Microscopia Del Due-fotone

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12601158

Il ricircolo di cellule T tra il sangue e organi linfoidi secondari richiede che le cellule T sono motili e sensibili ai segnali del tessuto-specifici. Motilità delle cellule t è stato studiato in vitro, ma il comportamento migratorio delle singole cellule T in vivo è rimasta enigmatico. Qui, utilizzando la microscopia intravital laser del due-fotone, abbiamo ripreso la locomozione e il traffico delle cellule T CD4(+) ingenue nei linfonodi inguinali di topi anestetizzati. Intravital registrazioni profondi all'interno del linfonodo ha mostrato le cellule T che scorre rapidamente il microvasculature e catturarono singoli eventi homing. All'interno della corteccia diffusa, le cellule T visualizzato motilità robusto con una velocità media di circa 11 microm x min(-1). Le cellule T in bici tra gli Stati di alta e bassa motilità all'incirca ogni 2 min, raggiungere velocità di picco &gt; 25 microm x min(-1). Un'analisi di migrazione delle cellule T in uno spazio 3D ha rivelato un programma traffico predefinito analogo ad un random walk. I nostri risultati mostrano che le cellule T naive non migrano collettivamente, come essi possano sotto la direzione di gradienti chemokine pervasivo. Invece, essi sembrano migrare come agenti autonomi, ogni cella prendendo un percorso indipendente di traffico. Nostri risultati di rimettere in discussione il ruolo di gradienti chemokine per traffico di basale delle cellule T all'interno di aree di cellule T e suggeriscono che l'individuazione dell'antigene possa derivare da un processo stocastico, attraverso il quale un random walk facilita il contatto con le cellule dendritiche presentanti l'antigene.

Cationi Polivalenti Come Sonde Permeant MIC E TRPM7 I Pori

Biophysical Journal. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12668438

Recenti studi in cellule Jurkat T e nelle cellule di Leucemia basofila ratto ha rivelato un canale inibito Mg(2+) cazione (MIC) che ha proprietà elettrofisiologiche simili a Eyring TRPM7 modello di tasso espresso in maniera esogena in cellule di mammifero. Qui si confrontano le caratteristiche dei diversi cationi polivalenti e Mg(2+) di bloccare monovalente MIC corrente dall'esterno. Putrescina, spermidina, spermina, PhTX-343 (un derivato della naturale poliammina tossina philanthotoxin) e Mg(2+) bloccato in maniera dose - e voltaggio-dipendente, che indica un blocco sito all'interno del campo elettrico della scanalatura dello ione. Spermina e la PhTX-343 relativamente ingombranti esposto dipendenza tensione più ripida rispetto a quello previsto per il numero di cariche sulla molecola. Poliammine e Mg(2+) sono permeant bloccanti, come giudicato dal rilievo del blocco a potenziali di membrana fortemente negativo. Dialisi intracellulare con spermina (300 microM) ha avuto alcun effetto, che indica un poro asimmetrico. A livello di singolo canale, spermina e Mg(2+) indotta flickery blocco dei canali singola 40-pS. I / V caratteristiche e blocco delle poliammine sono simili in TRPM7 espresso e nelle correnti MIC native, coerente con la conclusione che nativa canali microfonici sono composte da subunità TRPM7. Un modello di tasso di Eyring è stato sviluppato per conto per I / le caratteristiche V e blocco di MIC canali di cationi polivalenti dall'esterno.

Immagini in Tempo Reale Dei Linfociti in Vivo

Current Opinion in Immunology. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 12900266

Nuovi preparati, sonde fluorescenti e tecniche di imaging forniscono i mezzi per osservare il comportamento delle cellule nell'ambiente dei tessuti degli organi linfoidi. In particolare, quando combinato con microscopia del due-fotone laser, intravital imaging dei linfonodi chirurgicamente esposti fornisce una vista unica della presentazione di migrazione e l'antigene dei linfociti, che si verifica all'interno dell'animale vivente. La vista è emergenti che linfociti migrano in modo casuale all'interno di organi linfoidi e quel contatto di linfociti con presentanti l'antigene delle cellule possono essere un processo stocastico, piuttosto che uno guidato dai gradienti chemokine.

Una Vista Stocastica Di Motilità Dei Linfociti E Il Traffico All'interno Del Linfonodo

Immunological Reviews. Oct, 2003  |  Pubmed ID: 12969316

Microscopia del due-fotone sta fornendo la comprensione letterale la dinamica cellulare degli organi linfoidi e, guidati dall'analisi delle immagini tridimensionali, in meccanismi che sottendono alla migrazione cellulare e riconoscimento dell'antigene in vivo. Questa recensione descrive la motilità dei linfociti e riconoscimento dell'antigene nell'ambiente nativo tessuto e paragona questi risultati con una molto più vasta letteratura sulla motilità dei linfociti, segnalazione e chemiotassi in vitro. Noi discutere la letteratura in vitro su aspetti dinamici della motilità dei linfociti, la chemiotassi e la risposta all'antigene e presentare la visione che casuale migrazione dei linfociti può guidare un meccanismo di riconoscimento dell'antigene in organi linfoidi, piuttosto che essere guidato da chemiotassi stocastico.

Regolamento Di Organizzazione Di Traffico E Sottocellulari Membrana Di Compartimenti Endocitico Rivelato Con FM1-43 in Riposo E Attiva Le Cellule T Umane

Experimental Cell Research. Nov, 2003  |  Pubmed ID: 14597416

FM1-43, un colorante fluorescente styryl che penetra e macchie di membrane, è stato usato per studiare la cinetica di endocitosi costitutiva e visualizzare il destino degli organelli endocitico in riposo e attiva i linfociti T umani. Il tasso di accumulo di colorante era fortemente temperatura dipendente e circa 10 volte superiore in attivato rispetto a cellule T a riposo. Elevazione di free Ca2 + concentrazione citosolica con thapsigargin o ionomicina accelerato ulteriormente il tasso di accumulazione FM1-43 associato a polimerizzazione actina citosolico. Modulazione diretta di polimerizzazione dell'actina colpite traffico di membrana. Condensazione di actina sotto la membrana plasmatica con calyculin A abolito FM1-43 interiorizzazione, considerando che la depolimerizzazione dell'actina con citocalasina D ha avuto alcun effetto. Photoconversion di tamponare da FM1-43 ha rivelato alterati vano endocitico targeting associati con l'attivazione delle cellule T. Interiorizzata cargo è stato trasportato a compartimenti lisosoma-come in riposo le cellule T e di corpi multivesicular (MVB) in cellule T attivate. Esternalizzazione di fatto da MVB avvenuti comunemente in attivato ma non in cellule T riposa. Cellule t fatto contenute zattera-associated proteins CD3, Solfatati GM1 e fosfatidilserina presso l'opuscolo della membrana esterna. Il presente studio dimostra l'utilità della FM1-43 come un marcatore di membrana traffico di cellule T e rivela i possibili meccanismi di sua modulazione durante l'attivazione delle cellule T.

SK3-1C, Un Soppressore Di Dominante Negativo Di Canali SKCa E IKCa

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14638680

Piccola conduttanza Ca2 +-attivazione canali K +, prodotti dei geni SK1-SK3, regolano l'eccitabilità di membrana sia all'interno che all'esterno del sistema nervoso. Riportiamo la caratterizzazione di una variante SK3 (SK3-1C) che si differenzia da SK3 utilizzando un esone alternativo (esone 1 C) al posto di esone 1A utilizzato da SK3, ma altrimenti è identico a SK3. RT-PCR quantitativo rilevato abbondanti espressione delle trascrizioni SK3-1 C nei tessuti linfoidi umani, muscolo scheletrico, trachea e delle ghiandole salivari, ma non il sistema nervoso. SK3-1 C non produrre canali funzionali quando espresse solo in cellule di mammifero, ma soppressa canali SK1, SK2, SK3 e IKCa1, ma non BKCa o KV canali. Microscopia confocale ha rivelato che SK3-1 C sequestrato SK3 proteina intracellularly. Attività dominante-inibitoria SK3-1C non era dovuto ad un effetto spugna calmodulina aspecifici poiché la sovraespressione della calmodulina non ha fatto retromarcia SK3-1 C-mediata trapping intracellulare della proteina SK3 e calmodulina-Ca2 +-dipendente dalla inattivazione dei canali del CaV non è stata influenzata da iperespressione SK3-1 C. Analisi di delezione individuato un segmento dominante-inibitorio in SK3-1 C C terminale che assomiglia a avvolto a spirale di tetramerization domini segnalati per migliorare la stabilità del tetramero e selettività di multimerization di molti canali del K +. SK3-1 C può quindi sopprimere gated la calmodulina SKCa/IKCa canali intrappolando queste proteine canale intracellularly tramite interazioni di subunità mediate dal segmento dominante-inibitorio e ridurre così espressione funzionale canale sulla superficie della cellula. Tale livello famiglia dominante-negativo soppressione da SK3-1 C fornisce un potente meccanismo per titolo eccitabilità di membrana ed è un approccio utile a definire il ruolo funzionale in vivo di questi canali in tessuti diversi dal loro silenzio mirati.

Scansione Di Repertorio Delle Cellule T è Promosso Dal Comportamento Dinamico Delle Cellule Dendritiche E Motilità Casuale Delle Cellule T Nel Linfonodo

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14722354

Le cellule dendritiche (DCs) ingeriscono antigeni nei tessuti periferici e migrano ai linfonodi dove presentano antigeni MHC classe II-associati a cellule T CD4(+). Abbiamo usato Microscopia del due-fotone all'immagine la cella singola dinamica delle interazioni tra il DCs e T cellule nei linfonodi intatti in assenza di antigene pertinenti. DCs fluorescente sono stati etichettati in vivo mediante iniezione cutanea di adiuvante allume compreso chetone di fluoromethyl Diacetato succinimidil estere (CFSE). DCs CFSE-positivi (CD11c(+), CD11b(+) e CD8(+)) basso-intermedio sono stati osservati nei linfonodi di drenaggio 24-72 h dopo. Controller di dominio con etichetta serpeggiava lentamente (2-3 microm x min(-1)) nella zona vicino a follicoli di cellule B ma energicamente estesi lungo agile dendriti delle cellule T. Incontri tra cellule T e DCs è sorto come le cellule T si trasferisce autonomamente lungo percorsi casuali. Inoltre, le cellule T non ha fatto accumulare intorno DCs e loro velocità relative si avvicina e in partenza DCs erano equivalenti, che implica che le cellule T non sono attratti verso DCs da gradienti chemiotattici, ma piuttosto li incontrano per caso. Contatti cellula t/DC avvenne principalmente su dendriti alla lunghezza del braccio da soma DC e in genere è durato circa 3 min., consentendo un DC individuale interagire con fino a 5000 cellule T all'ora. Concludiamo che gesticolazione DC dinamico e motilità casuale delle cellule T insieme migliorano la scansione stocastico del repertorio delle cellule T, consentendo in tal modo rapido avvio della risposta immunitaria.

Un Canale Di Calcio Store-operati Nelle Cellule Di Drosophila S2

The Journal of General Physiology. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14744989

Utilizzando cellule intere registrazione nelle cellule di Drosophila S2, abbiamo caratterizzato una corrente Ca(2+)-selettivo che viene attivata da deplezione di negozi di Ca2 + intracellulare. Deplezione negozio passivo con una libero Ca(2+) pipetta soluzione contenente 12 mM BAPTA attivato un interiormente rettificando Ca2 + corrente con un potenziale di inversione &gt; 60 mV. Le correnti verso l'interno sviluppato con un ritardo e ha raggiunto un massimo di 20-50 pA a -110 mV. Questa corrente raddoppiata nella ampiezza su aumento esterno Ca2 + da 2 a 20 mM e non è stata influenzata dalla sostituzione di colina per Na +. Una soluzione di pipetta contenente circa 300 nM Ca2 + e 10 mM EGTA impedito spontanea attivazione gratuita, ma Ca2 + corrente attivato prontamente, su richiesta di ionomicina o thapsigargin, o durante la dialisi con IP3. Sostituzione isotonica di 20 mM Ca2 + da cationi divalenti test hanno rivelato una sequenza di selettività di Ba2 + &gt; Sr2 + &gt; Ca2 + &gt; Mg2 +. Le correnti di BA2 + e Sr2 + inattivate in pochi secondi di esposizione a zero-Ca2 + soluzione a un potenziale di partecipazione di 10 mV. Inattivazione di Ba2 + e Sr2 + correnti ha mostrato il recupero durante forti impulsi hyperpolarizing. Rumore analisi fornito una stima della conduttanza unitaria di valori in 20 mM Ca2 + e Ba2 + FS 36 e 420, rispettivamente. Dopo l'espianto di tutti gli ioni bivalenti esterni, una corrente transitoria monovalente esposto forte selettività per Na + sopra Cs +. La corrente di Ca2 + è stata completamente e reversibilmente bloccata da Gd3 +, con un valore di CL50 di circa 50 nM ed è stato anche bloccato da 20 microM SKF 96365 e da 20 microM 2-APB. A concentrazioni tra 5 e 14 microM, applicazione di 2-APB aumentato la grandezza delle correnti Ca2 +. Concludiamo che S2 cellule esprimono canali Ca2 + archivio gestito con molte delle stesse caratteristiche biofisiche come canali CRAC in cellule di mammifero.

PA-PWRmax è Veramente Un Indice Indipendente Dal Precarico Della Contrattilità Del Miocardio in Esseri Umani Anestetizzati?

Cardiology. 2004  |  Pubmed ID: 15103176

Questo studio ha testato l'ipotesi che l'indice di potenza massima regolazione precarico (PA-PWRmax) è un indice di carico indipendente della contrattilità del miocardio umano. Basato sul rapporto pressione-volume ventricolare e derivato dal lavoro di ictus, l'indice è il prodotto di istantanee modifiche pressione e volume ventricolare, diviso da un termine di correzione del volume di fine diastole (EDV2) o zona fine-diastolica (EDA3/2) per regolare gli effetti di precarico. Ecocardiografici misure di cambiamento istantaneo zona ventricolare possono essere utilizzati per ottenere il PA-PWRmax in modo non invasivo. Abbiamo valutato prospetticamente 28 soggetti umani in fase di evacuazione cardiaci prima le procedure di bypass cardiopolmonare. Sono state registrate periferica continua della pressione arteriosa, pressione arteriosa polmonare e viste ecocardiografiche del ventricolo sinistro nella vista corta-asse transgastrica. Contemporaneamente gated istantanea accorciamento frazionale (FS) e sono stati calcolati gli indici di PA-PWRmax, con FS = (EDA - ESA) / EDA e PA-PWRmax = [mappa (EDA - ESA)] / EDA3/2, dove ESA = zona fine-sistolica e mappa = pressione arteriosa media istantanea. FS è diminuito in modo uniforme con evacuazione cardiaca e diminuzione della pressione diastolica dell'arteria polmonare (t =-5.4; 95% intervallo di confidenza, da -10 a-0.046; p < 0.001), come ha fatto PA-PWRmax (t = 5,8; 95% intervallo di confidenza,-2.25 a-1.08; p < 0.001). FS e PA-PWRmax ha mostrato una forte correlazione verso il basso (r = 0,81). A differenza dei precedenti studi di animali autonomically denervati, il nostro studio non ha trovato PA-PWRmax per essere indipendente dal precarico, forse a causa dei meccanismi omeostatici istantanei di umano sistema nervoso autonomo che collega contrattilità a condizioni di carico.

Canali K + Come Bersagli Per Immunomodulazione Specifici

Trends in Pharmacological Sciences. May, 2004  |  Pubmed ID: 15120495

Il canale voltaggio-dipendente di Kv1.3 e il canale attivato Ca(2+) IKCa1 K(+) sono espressi in cellule T in un modello distinto che dipende dallo stato di attivazione dei linfociti e differenziazione. Le modifiche del fenotipo canale durante la progressione da riposo allo stato delle cellule attivate e da ingenui da cellule effettrici memoria, offrendo la promessa di immunomodulatori specifiche azioni di bloccanti dei canali del K(+). In questo articolo, abbiamo rivedere i ruoli funzionali di questi canali sia ingenuo e cellule di memoria, descrivere lo sviluppo di inibitori selettivi dei canali Kv1.3 e IKCa1 e fornire una spiegazione logica per il potenziale utilizzo terapeutico di questi inibitori in disturbi immunologici.

Di Imaging, Le Dinamiche Di Singola Cellula Di Attivazione Delle Cellule T CD4 + Da Cellule Dendritiche Nei Linfonodi

The Journal of Experimental Medicine. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15466619

La risposta immunitaria adattativa è iniziata in organi linfoidi secondari dal contatto tra antigene-cuscinetto le cellule dendritiche (DCs) e cellule T CD4 + antigene-specifiche. Tuttavia, c'è nonostante le scarse informazioni per quanto riguarda la dinamica della singola cella di questo processo in vivo. Utilizzando la microscopia del due-fotone, abbiamo ripreso il comportamento in tempo reale delle cellule T CD4 + ingenue e in vivo-etichetta DCs nei linfonodi durante una risposta robusta cellula T. Nel primo 2 h dopo l'entrata in linfonodi, le cellule T fatto contatti di breve durata con antigene-cuscinetto DCs, ogni contatto dura una media di 11-12 min e che si verificano principalmente su dendriti. Alterato pattern di motilità delle cellule T durante questa fase iniziale di antigene riconoscimento promosso seriale fidanzamento con diversi DCs adiacenti. Successivamente, il comportamento delle cellule T progredito attraverso ulteriori fasi distinte, cluster di lunga durato, dinamici sciami e finalmente autonome migrazione punteggiato da divisione cellulare. Queste osservazioni suggeriscono che la sinapsi immunologica nei tessuti nativi è straordinariamente fluida e quello stabile sinapsi forma solo in specifiche fasi della presentazione dell'antigene alle cellule T. Inoltre, la natura di queste interazioni seriale implica che le cellule T si attivano a titolo di più eventi di riconoscimento dell'antigene.

STOP! In Nome Della Selezione Positiva

Nature Immunology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15662438

Funzione Di Canale è Dissociato Dall'attività Chinasica Intrinseca E Autophosphorylation Di TRPM7/ChaK1

The Journal of Biological Chemistry. May, 2005  |  Pubmed ID: 15781465

TRPM7/ChaK1 è un'unica canale/chinasi che contiene un dominio di canale TRPM con 6 segmenti transmembrane fusi a un dominio di romanzo serina-treonina chinasi al suo capolinea C. L'obiettivo di questo studio era di indagare su un possibile ruolo di attività della chinasi e autophosphorylation nella regolazione dell'attività del canale di TRPM7/ChaK1. Residui essenziali per l'attività della chinasi sono stati identificati da mutagenesi luogo-diretta. Due siti maggiore di autophosphorylation sono stati identificati in vitro di spettrometria di massa a Ser(1511) e Ser(1567), e questi siti sono stati trovati per essere fosforilato in cellule intatte. TRPM7/ChaK1 è un canale cationico selettivo che esibisce rettifica forte verso l'esterno e l'inibizione da millimolare livelli di interni [Mg(2+)]. Mutazione di due siti di autophosphorylation o di un sito catalitico chiave che abolì l'attività della chinasi non alterava attività del canale misurata mediante registrazione di cellule intere o Ca(2+) afflusso. Inibizione di Mg(2+) interna era inalterato anche nel sito autophosphorylation o mutanti "chinasi-morti". Inoltre, l'attività della chinasi è stata migliorata da Mg(2+), è diminuita del Zn(2+) e fu influenzato da Ca(2+). Al contrario, attività del canale è stata inibita da tutti e tre questi cationi divalenti. Tuttavia, eliminazione di gran parte del dominio C-terminale chinasi risultò nell'espressione di un canale apparentemente inattivo. Concludiamo che attività corrente né regolamento di Mg(2+) interna è influenzata dalle attività della chinasi o autophosphorylation ma che il dominio della chinasi possa giocare un ruolo strutturale nel canale assembly o localizzazione subcellulare.

Fidanzato Con Antigene B Cellule Subiscono Chemiotassi Verso La Zona T E Forma Motili Coniugati Con Le Cellule T Helper

PLoS Biology. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15857154

Interazioni tra le cellule B e T sono essenziali per la maggior parte delle risposte anticorpali, ma le dinamiche di queste interazioni sono capite male. Da microscopia del due-fotone dei linfonodi intatti, mostriamo che all'esposizione all'antigene, le cellule B migrano con preferenza direzionale verso il confine di zona B-zona-T in modo CCR7-dipendente, attraverso una regione che presenta un gradiente CCR7-ligando. Inizialmente le cellule B mostrano ridotta motilità, ma dopo 1 d, motilità è aumentato a circa 9 microm/min B antigene-occupato celle coppia con antigene-specifiche cellule di T helper per 10 a più di 60 min, considerando che le interazioni non specifiche per l'antigene ultima meno di 10 min delle cellule di B-T cell coniugati sono altamente dinamici e migrano estesamente, essendo guidato da cellule B. Le cellule B contatto occasionalmente più di una cellula di T, mentre le cellule T sono strettamente monogame nelle loro interazioni. Questi risultati forniscono la prova della chemiotassi dei linfociti in vivo, e cominciano a definire la dinamica cellulare spatiotemporal associata risposte anticorpali cellule T-dipendente.

STIM1, Un Componente Essenziale E Conservato Di Archivio Gestito Di Funzione Canale Ca2 +

The Journal of Cell Biology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15866891

Archivio-operati Ca2 + canali (SOC) regolano molti processi cellulari, ma i componenti molecolari sottostanti non sono ben definiti. Utilizzando un'interferenza del RNA (RNAi) - basato su schermo per identificare i geni che alterano thapsigargin (TG) - voce di Ca2 + dipendenti, abbiamo scoperto un ruolo richiesto e conservato di Stim in afflusso SOC. RNAi-mediata atterramento di Stim in drosofila S2 cellule significativamente ridotta TG-dipendenti Ca2 + voce. Registrazione di patch-clamp ha rivelato quasi completa soppressione del drosofila Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + corrente (CRAC) che ha caratteristiche biofisiche simile al CRAC corrente nelle cellule T umane. Analogamente, atterramento dell'omologo umano STIM1 significativamente ridotta attività del canale CRAC in cellule Jurkat T. RNAi-mediata atterramento di STIM1 inibito TG-agonista-dipendente Ca2 + entrata nelle cellule HEK293 o SH-SY5Y. Al contrario, sovraespressione di STIM1 nelle cellule HEK293 enhanced modestamente TG-induced Ca2 + voce. Proponiamo che STIM1, una proteina ubiquitously espressa che è conservata da Drosofila in cellule di mammifero, gioca un ruolo essenziale nell'afflusso SOC e può essere un componente comune dei canali SOC e CRAC.

Caratterizzazione in Situ Del Comportamento Delle Cellule T CD4 + Nei Tessuti Linfoidi Sistemici E Della Mucosa Durante L'induzione Di Tolleranza E Di Adescamento Orale

The Journal of Experimental Medicine. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15928201

Il comportamento dei linfociti T CD4 + antigene-specifiche durante l'esposizione iniziale all'antigene influenza probabilmente loro decisione di diventare adescata o tolerized, ma questo è non stato esaminato direttamente in vivo. Noi abbiamo pertanto monitorati tali cellule in tempo reale, in situ durante l'induzione di adescamento orale versus tolleranza orale. Ci sono stati contrassegnati contrasti per quanto riguarda la frequenza e il tipo di movimento e clustering tra cellule T naive e quelli esposti all'antigene in immunogenico o tollerogeniche forme. Tuttavia, la maggiore differenza quando si confrontano tolerized e verniciato cellule T era che quest'ultimo formato cluster più grande e dura all'interno dei linfonodi periferici e delle mucose. Questo è il primo confronto del comportamento delle cellule T CD4 + antigene-specifiche in situ nei tessuti linfoidi sistemici e della mucosa durante l'induzione di adescamento contro tolleranza in un modello fisiologicamente rilevante in vivo.

Gatifloxacina Come Una Possibile Causa Di Grave Ipoglicemia Post-operatorio

Anesthesia and Analgesia. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16115964

Nel caso che vi presentiamo descrive un episodio di ipoglicemia grave post-operatorio dopo bypass cardiopolmonare per un regime cardiaco relativamente minore. Era stato somministrato un antibiotico fluorochinolonico, e crediamo che questo ha contribuito fortemente a questo evento. Antibiotici fluorochinolonici hanno una propensione riconosciuta ad alterare l'omeostasi del glucosio.

STIM1 è Un Sensore Di Ca2 + Che Attiva I Canali CRAC E Migra Dal Deposito Di Ca2 + Nella Membrana Del Plasma

Nature. Oct, 2005  |  Pubmed ID: 16208375

Come il solo Ca2 + meccanismo di voce in una varietà di cellule non eccitabili, afflusso di calcio store-operato (SOC) è importante in Ca2 + segnalazione e molti altri processi cellulari. Un canale di calcio calcio-comunicato-attivato (CRAC) in linfociti T è il canale di afflusso SOC best-characterized ed è essenziale per la risposta immunitaria, sostenuta attività di canali CRAC essendo necessaria per la proliferazione e l'espressione genica. L'identità molecolare e il meccanismo di controllo dei canali SOC e CRAC sono rimasti sfuggente. In precedenza abbiamo identificato Stim e l'omologo mammifero STIM1 come componenti essenziali di attivazione canale CRAC in drosofila S2 cellule e linfociti T umani. Qui ci mostra che l'espressione dei mutanti di EF-mano di Stim o STIM1 attiva i canali CRAC costitutivamente senza cambiare negozio contenuto di Ca2 +. Immunofluorescenza, localizzazione di EM e superficie biotinylation che mostriamo che STIM1 migra da endoplasmic-reticolo-come siti di membrana del plasma all'esaurimento del Ca2 + store. Proponiamo che STIM1 funzioni come l'anello mancante tra Ca2 + negozio deplezione e SOC afflusso, che serve come un sensore di Ca2 + che trasloca al negozio deplezione di membrana del plasma per attivare canali di CRAC.

Carica Di PH Interno E Cationi Polivalenti Di Screening Come Un Meccanismo Di Attivazione, Inibizione E Carrellata Di Canali TRPM7/MIC

The Journal of General Physiology. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16260839

Il Mg2 +-inibito catione (MIC) corrente, ritiene che rappresentano l'attività dei canali del TRPM7, è trovato in linfociti e mastociti, cardiaco e muscolo liscio e diversi altri tipi di cellule eucariote. MIC corrente viene attivato durante la dialisi cellule intere con soluzioni interne bivalente-libero. Millimolare concentrazioni di Mg2 + intracellulare (o altri cationi metallici bivalenti) inibiscono i canali in modo indipendente dalla tensione. La natura della inibizione bivalente e il meccanismo di attivazione del canale in una cella intatta rimangono sconosciute. Mostriamo che le poliammine (spermina, spermidina e putrescina) inibiscono il MIC corrente, anche in modo indipendente dalla tensione, con una potenza che il numero di cariche di parallels. Neomicina e poli-lisina anche potentemente inibiti corrente in assenza di Mg2 + MIC. Questi stessi caricato positivamente ioni inibiscono IRK1 corrente in parallelo con MIC attuale, suggerendo che essi probabilmente agire da screening i fosfati gruppo testa su PIP2 e altri fosfolipidi di membrana. D'accordo con questa ipotesi, protoni interni inibiscono anche MIC corrente. Al contrario, tetrametilammonio, tetraetilammonio e hexamethonium prodotto blocco voltaggio-dipendenti ma senza inibizione. Mostriamo che inibizione di cationi polivalenti interni può essere alleviato da alcalinizzanti citosol utilizzando ammonio applicato esternamente o aumentando il pH in inside out patch. Inoltre, nelle registrazioni perforata-patch e cella collegata, quando Mg2 + intracellulare non è impoverito, endogeno MIC o ricombinante TRPM7 correnti sono attivate da alcalinizzazione citosolico e inibite dall'acidificazione; e può essere riattivati da PIP2 seguito carrellata in patch inside-out. Noi proponiamo che canali microfonici (TRPM7) sono regolati da una meccanismo di screening di carica e possono funzionare come sensori di pH intracellulare.

Incontri Ravvicinati Del Primo E Del Secondo Tipo: Interazioni T-B E T-DC Nel Linfonodo

Seminars in Immunology. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16263308

Interazioni cellulari negli organi linfoidi avviare la risposta immunitaria e determinano l'esito. Utilizzando la microscopia del due-fotone nel linfonodo, vari gruppi hanno iniziato a studiare le caratteristiche di motilità e le interazioni tra i linfociti T, linfociti B e le cellule dendritiche (DC) negli organi linfoidi. Nel primo "incontro ravvicinato", cellule T una specificità antigenica particolare interagiscono con le cellule dendritiche antigen-cuscinetto e cominciano ad attivare. Attivazione delle cellule CD4 + e CD8 + T si evolve attraverso vari stadi; da interazioni transienti di pacchetti stabili e successivamente di dissociazione e la proliferazione delle cellule T (espansione clonale). Il secondo "incontro vicino" richiede che le cellule B antigene-occupato diventano accessibili a cellule T di migrazione diretta verso il bordo del follicolo. Le cellule T e le cellule B poi coppia e valzer insieme per un periodo prolungato, mentre le cellule T helper di fornire segnali per le cellule B a differenziarsi in cellule del plasma. In questa recensione d'attualità, confrontiamo le coreografie di attivazione delle cellule T CD4 + prima interagendo con le cellule dendritiche e poi con le cellule B, durante l'avvio della risposta immunitaria umorale.

Agonismo Di Sfingosina 1-fosfato Tipo 1 Recettore Inibisce La Migrazione Transendoteliale Delle Cellule T Midollare a Seni Linfatici

Nature Immunology. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16273098

Tipo di sfingosina 1-fosfato 1 (agonisti del recettore S1P(1)) causano il sequestro dei linfociti negli organi linfoidi secondari da un meccanismo che non è ben compreso. Una delle ipotesi propone che agonisti agiscono come 'antagonisti funzionali' di associazione e interiorizzare S1P(1) recettori sui linfociti; una seconda ipotesi propone invece che S1P(1) agonisti agiscono sulle cellule endoteliali per impedire l'uscita dei linfociti dai linfonodi. Qui, due-fotone imaging di vivere cellule T nei linfonodi espiantati dopo trattamento con S1P(1) agonisti o antagonisti ha fornito insight nel meccanismo di funzione di agonisti S1P(1). L'agonista selettivo S1P(1) che sew2871 causato rallentamento reversibile e 'log-jamming' di cellule T tra riempito cordoni midollari e vuota dei seni, mentre la motilità era inalterata nella corteccia diffusa. Concorso rimozione o antagonista di SEW2871 consentito recupero della motilità delle cellule T nel parenchima del midollo e ripresa delle migrazioni attraverso la barriera endoteliale stroma, che portano al riempimento dei seni paranasali. I nostri risultati forniscono visualizzazione della migrazione transendoteliale delle cellule T nei seni linfatici e suggeriscono che S1P(1) agonisti agiscono principalmente sui recettori S1P(1) delle cellule endoteliali per inibire la migrazione dei linfociti.

Il Senso Del Luogo Nel Sistema Immunitario

Nature Immunology. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16550194

Questa serie di recensioni esamina l'effetto di differenti ambienti di tessuto sull'attività e capacità funzionale delle cellule del sistema immunitario. Dalle loro origini come cellule staminali ematopoietiche, nel corso del loro sviluppo e come cellule mature, le cellule del sistema immunitario si trovano in nicchie distinte e altamente specializzate e il contatto con l'antigene o cambiamenti infiammatori segnali loro fenotipo, attività e traffici. Microscopia del due-fotone ha fornito la prima osservazione diretta di cellule viventi e la loro attivazione coreografia nell'ambiente di tessuto e senza dubbio continuerà a fornire una maggiore comprensione delle dinamiche cellulari e la funzione immunitaria.

Genome-wide Screen RNAi Di Afflusso Ca(2+) Identifica I Geni Che Regolano L'attività Del Canale Ca(2+) Ca(2+) Attivato Dal Rilascio

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16751269

Recenti studi dal nostro gruppo e altri hanno dimostrato un ruolo richiesto e conservato di Stim nel negozio gestito Ca(2+) afflusso e attività del canale Ca(2+) (CRAC) attivato dal rilascio Ca(2+). Utilizzando un imparziale schermo di interferenza del RNA genome-wide in cellule di Drosophila S2, identifichiamo ora 75 hits che fortemente inibito Ca(2+) afflusso al negozio lo svuotamento da thapsigargin. Tra questi successi sono 11 proteine transmembrana predetta, tra cui Stim e uno, olf186-F, che su RNA interferenza-mediata atterramento esposto una profonda riduzione delle thapsigargin evocato Ca(2+) voce e CRAC corrente e su sovraespressione un triplice aumento del CRAC corrente. CRAC correnti sono state ulteriormente aumentate a ad superiori di controllo e si è sviluppato più velocemente quando era cotransfected olf186-F con Stim. olf186-F è un membro di una famiglia altamente conservata del quattro-transmembrane spanning proteine con omologhi da Caenorhabditis elegans di umani. Il reticolo endoplasmatico (ER) Ca(2+) pompa sarco- / ER Calcio ATPasi (SERCA) e la proteina recettore (rullante) allegato N-ethylmaleimide-sensibili (NSF) transmembrana solubile singola Syntaxin5 inoltre erano necessari per attività del canale CRAC, coerente con una via di segnalazione in cui Stim i sensi Ca(2+) esaurimento entro l'ER, trasloca a membrana del plasma e interagisce con olf186-F a trigger CRAC canale attività.

Imaging La Coreografia Di Traffico Dei Linfociti E La Risposta Immunitaria

Current Opinion in Immunology. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16765574

Il funzionamento del sistema immunitario dipende squisitamente coreografiche interazioni tra le componenti cellulari. Microscopia del due-fotone ora ci permette di visualizzare la cella cellula-cellula e motilità interazioni profonde all'interno intatti tessuti e organi, sia in preparazioni espiantati e in vivo. Tecniche di immunoimaging in tempo reale hanno illuminato i ruoli di motilità casuale e chemokine-driven per strategie di ricerca cellulari, la complessa dinamica delle interazioni cellulari e la micro-anatomico localizzazione e controllo del traffico dei linfociti. Recentemente, sono stati fatti progressi in queste aree di ricerca, come esemplificato da studi studiando interazioni cellula dendritica delle cellule T, interazioni cellula B-cellula T e la regolazione di uscita dei linfociti dal linfonodo.

Valorizzazione Della Perdita Capillare E Restauro Di Uscita Dei Linfociti Da Un Antagonista S1P1 Chirale in Vivo

Nature Chemical Biology. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16829954

Sfingosina 1-fosfato (S1P, 1) regola la barriera vascolare e sviluppo linfoide, così come uscita dei linfociti da organi linfoidi, attivando i recettori S1P1 ad alta affinità. Abbiamo utilizzato sonde chimiche reversibile (i) per acquisire conoscenze meccanicistiche in organizzazione di sistemi S1P non accessibile attraverso manipolazioni genetiche e (ii) per indagare il loro potenziale per modulazione terapeutica. Vascolare (ma non delle vie aeree) amministrazione dell'enantiomero R preferito di in vivo-attivo chirale S1P1 recettore antagonista indotta da perdita dell'integrità capillare del polmone e della pelle del mouse. Al contrario, l'antagonista non ha interessato il numero dei linfociti del sangue costitutiva. Invece, alterazione del traffico dei linfociti e fenotipo necessaria elevazione sovrafisiologici di tono S1P1 ed è stato invertito con l'antagonista. Imaging in vivo del due-fotone dei linfonodi confermato requisiti per agonismo obligata, e i dati sono stati coerenti con la presenza di un meccanismo di barriera stromale gating egress dei linfociti. Così, modulazione chimica rivela differenze in S1P-S1P1 'set point' tra tessuti e mette in evidenza sia vantaggi meccanicistici (sequestro dei linfociti) e rischi (edema polmonare) di intervento terapeutico.

Identificazione Molecolare Del Canale CRAC Di Selettività Dello Ione Alterato in Un Mutante Di Orai

Nature. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 16921385

Schermi di interferenza RNA recenti hanno identificato diverse proteine che sono essenziali per negozio-operati Ca2 + afflusso e Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + attività del canale (CRAC) in Drosophila e nei mammiferi, tra cui le proteine transmembrane Stim (molecola di interazione stromale) e Orai. Stim probabilmente funziona come un sensore di luminal Ca2 + contenuto e innesca l'attivazione dei canali CRAC nella membrana superficiale dopo il negozio di deplezione di Ca2 +. Tra i tre umani omologhi di Orai (noto anche come olf186-F), ORAI1 sul cromosoma 12 è stato trovato per essere mutato in pazienti affetti da immunodeficienza combinata grave, ed espressione del selvaggio-tipo Orai1 restaurato Ca2 + afflusso e attività del canale CRAC nel paziente cellule T. La sovraespressione di Stim e Orai insieme aumenta marcatamente CRAC corrente. Tuttavia, non è ancora chiaro se Stim o Orai in realtà costituisce il canale CRAC, o se la loro espressione limita semplicemente CRAC canale attività mediata da una subunità che formano canali differente. Qui ci mostra che l'interazione tra il selvaggio-tipo Stim e Orai, valutato da co-immunoprecipitazione, è notevolmente migliorato dopo trattamento con thapsigargin per indurre il negozio deplezione di Ca2 +. Da mutagenesi luogo-diretta, ci mostra che una mutazione puntiforme da glutammato di aspartato nella posizione 180 nel ciclo S1-S2 conservato dell'Orai trasforma le proprietà di selettività dello ione di corrente da essere Ca2 + CRAC-selettiva con rettificazione interiore ad essere selettivi per cationi monovalenti e rettifica esteriormente. Una carica-neutralizzante mutazione nella stessa posizione (glutammato di alanina) agisce come una subunità non conduttore dominante-negativo. Altri mutanti carica-neutralizzante nel ciclo stesso esprimono grandi CRAC interiormente rettifica attuale, e due di questi esposizione ridotta sensibilità all'antagonista Gd3 +. Questi risultati indicano che Orai si formi il Ca2 +-filtro di selettività del canale CRAC.

Anomalie Parete-movimento Segmentale Dopo Un'arteria Interruttore Funzionamento Indicano Ischemia

Anesthesia and Analgesia. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 17056946

Abbiamo studiato prospetticamente 29 consecutivi neonati sottoposti a un'operazione di switch arterioso per determinare se anomalie di movimento segmentale parete (SWMA) rappresentato l'ischemia del miocardio. Ecocardiogramma transesofageo intraoperatorio è stato registrato al basale e due volte dopo bypass cardiopolmonare. Troponina cardiaca I (n) livelli sono stati misurati prima incisione sternale e 3, 6, 12, 24, 48 e 72 ore dopo la rimozione della Croce-pinza aortica. Holter postoperatorio immediato e 15-piombo elettrocardiogrammi (ECG) sono stati valutati per ischemia. Transtoracico ecocardiogrammi sono stati ottenuti prima di scarico dell'ospedale. Al termine della tangenziale, subito dopo la somministrazione di protamina, movimento segmentale muro era normale nei nove neonati e anormale in 20. SWMA erano presenti al momento della chiusura del torace in 15 neonati e transitori in cinque. I neonati in cui SWMA erano presenti al petto chiusura aveva più segmenti coinvolti rispetto a quelli in cui SWMA sono stati transitori (P &gt; 0.001). Neonati con SWMA alla chiusura del torace avevano livelli più elevati di n postoperatorio rispetto a neonati con movimento di parete normale (P = 0,02). Erano disponibili nei 26 neonati dati ECG postoperatori. Non c'era evidenza ECG di ischemia del miocardio in due delle otto neonati con movimento di parete normale, uno dei cinque con SWMA transitorio e nove di 13 con SWMA alla chiusura del torace. N livelli a 12, 24 e 48 h e SWMA intraoperatoria erano predittivi di SWMA postoperatoria. Crediamo che questi dati indicano che SWMA, che persistono al completamento di un'operazione di switch arterioso, e che sono presenti in diversi segmenti del miocardio, correlare con ischemia del miocardio. Ulteriore follow-up di questi pazienti è necessaria per determinare se aumentato ischemia miocardica intraoperatoria è correlata con i risultati a lungo termine.

Valutazione Della Sinistra Globale E Segmentale Sistolica Funzione Ventricolare Con Ecocardiografia Transesofagea

Anesthesiology Clinics. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17342962

La valutazione della funzione sistolica di LV segmentale e globale è un'applicazione primaria per perioperatoria TEE. Sebbene le tecniche di pratiche abitualmente usate per queste applicazioni hanno limitazioni, permettersi misure dirette della funzione non altrimenti disponibile al clinico nell'impostazione della sala operatoria o intensiva.

Basi Molecolari Del Canale CRAC

Cell Calcium. Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17482674

CA(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) (CRAC) canali, che si trova nella membrana del plasma, sono aperti dopo il rilascio di Ca(2+) dai depositi intracellulari, permettendo Ca(2+) voce e sostenuta [Ca(2+)](i) segnalazione che riempie il negozio in numerosi tipi di cellule. Questo meccanismo è particolarmente importante nei linfociti T del sistema immunitario, che forniscono il collegamento mancante nella cascata di trasduzione del segnale viene avviato dall'impegno del recettore delle cellule T, che conduce alla alterata espressione dei geni che si traduce in definitiva la produzione di citochine e delle cellule di proliferazione. Negli ultimi tre anni, gli schermi di interferenza RNA insieme con sovraespressione e mutagenesi luogo-diretta hanno identificato la molecola scatenante (Stim) che link negozio deplezione di CRAC canale-mediata Ca(2+) afflusso e la subunità poro (Orai) del canale CRAC che permette l'ingresso altamente selettivo di ioni Ca(2+) in cellule.

Le Cellule Natural Killer Patrol Attivamente Linfonodi Periferici Formando Coniugati Stabili Per Eliminare Bersagli Non Corrispondenti MHC

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 17609379

Naturale cellule killer (NK) sono noti per respingere MHC-non corrispondenti obiettivi all'interno di organi di sangue, eppure il loro ruolo nel tessuto linfoide periferico rimane irrisolta. Qui affrontiamo la capacità delle cellule NK di migrare all'interno dei linfonodi (LN) usando microscopia del due-fotone per caratterizzare la cella velocità e dinamiche di interazione all'interno dell'ambiente nativo di tessuto linfoide. Adoptively trasferite manipolate le cellule NK erano altamente motili (6-7 microm/min) e in grado di formare transitori contatti con le cellule B Carlo e allogenici. Stabile interazioni coniugate (durata &gt; 5 min) costituita preferenzialmente con cellule allogeniche, con conseguente diminuita motilità e successiva eliminazione della cellula bersaglio. In netto contrasto con cellule manipolate, le cellule NK purificate dalla selezione positiva CD49b esposto solo limitata motilità (2-3 microm/min). Questa svalutazione velocità sorse in gran parte perché CD49b cross-linking migliorata adesione delle cellule NK alle fibre di collagene all'interno del nodo. Inoltre, cross-linking CD49b impedito le cellule NK ricostitutivo funzione citolitica effettrici in vivo, lisi delle cellule bersaglio inibito in vitro e le risposte IFN-gamma aumentate attivazione IL-2 in vitro. Presi nel loro insieme i nostri dati dimostrano che le cellule NK sono una componente funzionale importante del microambiente LN, e tale funzione di cellule effettrici e motilità sono fortemente modulata tramite manipolazione CD49b.

Segnali Di Ca2 + in Cellule T CD4 + Durante I Primi Contatti Con Le Cellule Dendritiche Antigen-cuscinetto Nel Linfonodo

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17641025

Attivazione delle cellule t da APC richiede citosolico Ca(2+) ([Ca(2+)](i)) elevazione. Utilizzando la microscopia del due-fotone, abbiamo visualizzato Ca(2+) segnalazione e motilità delle cellule T CD4(+) murine all'interno del linfonodo (LN) explants sotto condizioni di controllo, infiammatorio e immunologico. Senza Ag in condizioni basali noninflammatory, cellule T ha mostrato rari picchi di Ca(2+) associati a rallentamento sostenuta. Infiammazione ridotta velocità e Ca(2+) chiodare in assenza di specifici Ag. Durante il primo incontro Ag, la maggior parte delle cellule T impegnati cellule dendritiche presentanti Ag in cluster e ha mostra maggiore frequenza di spike Ca(2+) ed elevato basale [Ca(2+)](i). Questi segnali Ca(2+) persistette per ore, indipendentemente dal fatto se le cellule T sono stati a contatto con le cellule dendritiche visualizzate. Proponiamo che sostenuta aumenta in basale [Ca(2+)](i) e chiodare frequenza costituiscono una modalità di segnalazione Ca(2+) che, integrato su ore, distingue immunogenici dallo stato basale nell'ambiente nativo linfoide.

Classe IA Fosfoinositide 3-chinasi Modula Motilità Basale Dei Linfociti Nel Linfonodo

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17675487

Reclutamento di PI3K a membrana delle cellule è un passo indispensabile nella attivazione e proliferazione dei linfociti normali. In questo studio ci identifichiamo PI3K come una molecola di segnalazione importante per mantenere la motilità basale T e dei linfociti B e Radiobussola nel linfonodo intatto. Inibizione farmacologica delle isoforme di PI3K catalitico esercitato grandi effetti sulla motilità basale dei linfociti, incluse le modifiche apportate nella cinetica di homing, localizzazione delle cellule di B all'interno del linfonodo e ridotta velocità di cella. Linfociti carenti in uno o entrambi della classe IA PI3K normativo subunità p85alpha e p85beta anche esposto ridotta velocità, con la grandezza della riduzione dipendendo entrambi specificità di tipo e isoforma di cella. B cellule carenti di p85alpha esposto lordi anomalie morfologiche che non erano evidenti nelle cellule trattate con un inibitore di PI3K. I nostri risultati mostrano, per la prima volta, tale classe IA PI3Ks gioca un ruolo importante nella regolazione della motilità basale dei linfociti e che espressione di regolamentazione subunità p85alpha è necessaria per mantenere la morfologia delle cellule di B in modo indipendente della funzione catalitica di PI3K. Inoltre, dimostriamo distinti ruoli per dominio catalitico funzione classe IA PI3K dominio regolamentazione attività e nella motilità dei linfociti, homing e omeostatica localizzazione delle cellule di B mature riposa.

Accreditamento Sottospecialità: è Essere Buono Speciale?

Current Opinion in Anaesthesiology. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 17989552

Abbiamo esaminato i vantaggi e svantaggi della certificazione aggiuntiva subspecialties in anestesiologia da cinque punti panoramici - pazienti, gli anestesisti generalista, anestesisti subspecialist, reparti di anestesiologia e la società nel suo complesso - al fine di consigliare un corso di azione.

Coreografia Di Cellula Motilità E Interazione Dinamica Ripreso Dalla Microscopia Del Due-fotone Negli Organi Linfoidi

Annual Review of Immunology. 2008  |  Pubmed ID: 18173372

Il sistema immunitario è il più diffuso sistema cellulare del corpo. Di conseguenza, a lungo raggio migrazione delle cellule e la comunicazione a corto raggio da segnalazione chimica locale e tramite i contatti cellula-cellula sono vitali per il controllo di una risposta immunitaria. Cellulare homing e migrazione all'interno degli organi linfoidi, riconoscimento dell'antigene e segnalazione delle cellule e l'attivazione sono chiaramente vitale durante una risposta immunitaria, ma questi eventi non direttamente osservati in vivo fino a poco tempo. Introdotto nel campo dell'immunologia nel 2002, due-fotone microscopia è il metodo di scelta per la visualizzazione di vivere cellule profonde all'interno degli ambienti tessuto nativo, e ora sta rivelando una coreografia elegante cellulare che sottende la risposta immunitaria adattativa alla sfida dell'antigene. Passiamo in rassegna dinamica cellulare e molecolari fattori che contribuiscono alla motilità basale dei linfociti nei linfonodi e interazioni cellulari che portano alla cattura dell'antigene e riconoscimento, attivazione delle cellule T, attivazione delle cellule B, funzione citolitica effettrici e produzione dell'anticorpo.

Orai1 E STIM1 Spostare La Sinapsi Immunologica E Sono Up-regolate Durante L'attivazione Delle Cellule T

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18250319

Per uno sviluppo efficiente di una risposta immunitaria, i linfociti T richiedono duraturo afflusso di calcio attraverso i canali di calcio calcio attivato dal rilascio (CRAC) e la formazione di una sinapsi immunologica stabile (IS) con le cellule presentanti l'antigene (APC). Schermi RNAi recenti hanno identificato Stim e Orai nelle cellule di Drosophila e loro corrispondenti omologhi dei mammiferi STIM1 e Orai1 in cellule T, come essenziale per l'attivazione del canale CRAC. Qui, ci mostra che STIM1 e Orai1 sono reclutati per la sinapsi immunologica tra primarie umane delle cellule T e cellule dendritiche autologhe. STIM1 sia Orai1 accumulato nella zona di contatto tra riposo o super-antigen (SEB)-pretrattati cellule T e cellule dendritiche SEB-pulsato, dove essi erano colocalized con il recettore delle cellule T (TCR) e molecole di costimolazione. Inoltre, imaging del calcio intracellulare segnalazione in cellule T caricate con EGTA ha rivelato significativamente superiore Ca2 + concentrazione vicino l'interfaccia, che indica Ca2 + afflusso localizzata presso l'area di contatto delle cellule dendritiche/T cell. Espressione di un mutante Orai1 dominante-negativo bloccato T cell Ca2 + segnalazione ma non ha interferito con l'accumulazione iniziale di STIM1, Orai1 e CD3 nella zona di Contatta. Nelle cellule T attivate blasti, espressione del mRNA per STIM1 endogeni e tutti i tre umani omologhi di Orai era up-regolato, accompagnato da un marcato aumento nell'afflusso Ca2 + attraverso i canali CRAC. Questi risultati implicano un ciclo di feedback positivo, in cui un segnale iniziale TCR favorisce la up-regulation di STIM1 e Orai proteine che vuoi aumentare Ca2 + segnalazione durante successive antigene incontro.

Modalità Store-dipendente E - Indipendenti Che Regolano Ca2 + Attivato Dal Rilascio Ca2 + Canale Attività Di Orai1 Umano E Orai3

The Journal of Biological Chemistry. Jun, 2008  |  Pubmed ID: 18420579

Abbiamo valutato le correnti indotte dall'espressione di umane omologhi di Orai insieme STIM1 in cellule renali embrionali umane. Quando co-expressed con STIM1, Orai1 indotta da una grande corrente interiormente rettifica Ca(2+)-selettiva con inattivazione lenta Ca(2+)-indotta. Una mutazione puntiforme del Orai1 (E106D) alterato la selettività dello ione di indotta Ca(2+) attivato dal rilascio caratteristica di Ca(2+) (CRAC) - come corrente mantenendo un interiormente che rettifica I - V. Espressione della porzione C-terminale del STIM1 con Orai1 era sufficiente per generare corrente senza negozio deplezione CRAC. 2-APB attivato una grande corrente relativamente selettivo nelle cellule co-expressing STIM1 e Orai3. 2-APB Ca(2+) afflusso anche indotta in cellule che esprimono Orai3 senza negozio deplezione o co-expression di STIM1. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB esposto rettifica verso l'esterno e una componente interiore che rappresenta un misto di calcio e monovalente corrente. Un mutante del poro di Orai3 inibito operati dal negozio Ca(2+) voce e non ha fatto trasportare corrente significativo in risposta a negozio di esaurimento o aggiunta di 2-APB. Analisi di una serie di Orai1-3 chimere rivelato determinante strutturale responsabile della corrente 2-APB-indotta all'interno della sequenza dal secondo al terzo segmento transmembrana di Orai3. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB potrebbe riflettere una modalità indipendente dal negozio di attivazione canale CRAC che apre un poro cazione relativamente non selettivi.

L'ecocardiografia Perioperatoria: Applicazioni Bidimensionali E Tridimensionali

Anesthesiology Clinics. Sep, 2008  |  Pubmed ID: 18765215

L'ecocardiografia perioperatoria è un'abilità essenziale per anestesista cardiaco di oggi e una forza trainante per l'innovazione e la realizzazione per il futuro della sottospecialità. Transesofagea tridimensionale in tempo reale (RT3-D TEE) dominerà il futura pratica di ecocardiografia perioperatoria, ma l'ecocardiografia transtoracica (TTE) crescerà in applicazione, come sarà contrasto ecocardiografia. Ultrasonongraphs portatile sarà rivale corrente macchine nelle capacità e rendono possibile per TTE diventare lo stetoscopio del futuro per gli anestesisti cardiaci.

Il Canale CRAC è Costituito Da Un Tetramero Formato Da Stim-indotta Di Dimerizzazione Di Dimeri Orai

Nature. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 18820677

CA(2+)-rilascio-attivato canali Ca(2+) (CRAC) sottostanno sostenuta Ca(2+) segnalazione nei linfociti e numerose altre cellule dopo la liberazione di Ca(2+) dal reticolo endoplasmatico (ER). RNA interference approcci di screening identificato due proteine, Stim e Orai, che insieme formano la base molecolare per attività del canale CRAC. Stim senses deplezione del negozio ER Ca(2+) e fisicamente inoltra questa informazione da translocating da ER per giunzioni adiacente alla membrana del plasma, e Orai incarna il poro del canale del calcio della membrana plasmatica. Una stretta interazione tra Stim e Orai, identificato da co-immunoprecipitazione e dal trasferimento di energia per risonanza, è coinvolto nell'apertura del canale Ca(2+) formato da subunità Orai. La maggior parte dei canali ionici sono multimeri di poro-formazione delle subunità che circondano un canale centrale, che sono preassemblati in ER e trasportati nella loro stechiometria finale alla membrana del plasma. Qui vi mostriamo, da analisi biochimica dopo cross-linking in cellule intatte e lisati cellulari e tramite elettroforesi su gel non denaturante senza cross-linking, che Orai è principalmente un dimero nella membrana del plasma in condizioni di riposo. Inoltre, imaging di singola molecola della proteina fluorescente verde (GFP)-tagged Orai espressa in ovociti di Xenopus ha mostrato principalmente in due fasi photobleaching, ancora una volta coerente con uno stato basale dimerica. Al contrario, co-expression di Orai GFP-etichettato con il capolinea di carboxy della Stim come una proteina citosolica per attivare il canale Orai senza indurre deplezione negozio Ca(2+) o clustering di Orai in punctae ceduto principalmente quattro fasi photobleaching, coerente con una stechiometria tetramerica del canale attivo Orai. Interazione con il C-terminale di Stim induce così Orai dimeri a dimerize, formando tetrameri che costituiscono il poro Ca(2+)-selettivo. Questo rappresenta un nuovo meccanismo in cui montaggio e attivazione del canale ionico funzionali sono mediati dalla stessa molecola scatenante.

Punti Quantici Per Rilevamento Delle Cellule Dendritiche E L'innesco Di Una Risposta Immunitaria in Vitro E in Vivo

PloS One. 2008  |  Pubmed ID: 18820727

Le cellule dendritiche (DCs) giocano un ruolo chiave nell'avvio di risposta immunitaria adattativa di presentare l'antigene alle cellule T negli organi linfoidi. Qui, si indaga il potenziale dei punti quantici (QDs) come nanoparticelle fluorescenti per l'imaging in vitro e in vivo di DCs e come un sistema basato su particella antigene-consegna per migliorare la risposta immunitaria mediata da DC. Abbiamo usato confocal, due-fotone e allevamento di elettrone per visualizzare assorbimento QD in DCs e rispetto CD69 espressione, proliferazione delle cellule T e la produzione di IFN-gamma di DO11.10 e OT-II T cellule in vivo in risposta all'antigene libero o coniugato antigene a QDs. CD11c(+) DCs avidamente e preferenzialmente endocytosed QDs, inizialmente in piccole vescicole vicino a membrana del plasma da un meccanismo di actina-dipendente. Entro 10 min DCs contenute le vescicole di varie dimensioni, movimento e luminosità distribuiti in tutto il citoplasma. In tempi più tardi, QDs endocytosed erano compartimenti all'interno dei lisosomi. Maturazione LPS-indotta di DCs ridotto il tasso di endocitosi e la proporzione di cellule riprendendo QDs. Dopo iniezione sottocutanea di QDs in un deposito di adiuvante, DCs che aveva endocytosed QDs sono stati visualizzati fino a 400 microm profondo all'interno dei linfonodi di drenaggio. Quando sono stati utilizzati QDs coniugato con l'antigene, T cellule formate cluster stabili a contatto con DCs. antigene coniugato QDs indotta espressione CD69, proliferazione delle cellule T e la produzione di IFN-gamma in vivo con maggiore efficienza rispetto a quantità equivalenti di antigene libero. Questi risultati stabiliscono QDs come una piattaforma versatile per immunoimaging delle cellule dendritiche e come un sistema di consegna efficiente basata su nanoparticelle antigene per l'innesco di una risposta immunitaria.

Imaging Delle Cellule T Di Memoria Effettrici Durante Una Reazione Di Ipersensibilità Di Tipo Ritardato E La Soppressione Di Blocco Del Canale Di Kv1.3

Immunity. Oct, 2008  |  Pubmed ID: 18835197

Le cellule T (Tem) di memoria effettrici sono mediatori essenziali della malattia autoimmune e ipersensibilità di tipo ritardato (DTH), un modello comodo per l'imaging del due-fotone di partecipazione cella Tem in una risposta infiammatoria. Poco (3 ore) dopo l'entrata in antigene-innescato all'orecchio dei tessuti, le cellule Tem stabilmente fissato all'antigene-cuscinetto cellule presentanti l'antigene (APC). Dopo 24 ore su 24, allargata Tem cellule erano altamente motili lungo fibre di collagene e ha continuato a migrare rapidamente per 18 ore le cellule Tem si basano sui canali del potassio di Kv1.3 tensione-gated di regolare segnalazione di calcio. ShK-186, un blocco specifico Kv1.3, inibito DTH e soppresso l'allargamento cella Tem e motilità nel tessuto infiammato ma ha avuto alcun effetto su homing a o motilità nei linfonodi delle cellule T (Tcm) memoria centrale e ingenuo. ShK-186 trattata efficacemente la malattia in un modello del ratto di sclerosi multipla. Questi risultati dimostrano un requisito per i canali Kv1.3 in cellule Tem durante una risposta immunitaria infiammatoria nei tessuti periferici. Kv1.3 di targeting consente risposte memoria effettrici a essere soppresse mentre risposte memoria centrale rimangono intatte.

Un Funzionale Polimorfismo a Singolo Nucleotide Nel Promotore Gene TRPC6 Associato Con Ipertensione Arteriosa Polmonare Idiopatica

Circulation. May, 2009  |  Pubmed ID: 19380626

Eccessiva proliferazione di cellule muscolari lisce di arteria polmonare (PASMCs) svolge un ruolo importante nello sviluppo dell'ipertensione arteriosa polmonare idiopatica (IPAH), considerando che un aumento della concentrazione di Ca2 + citosolico attiva contrazione PASMC e stimola la proliferazione PASMC. Recentemente, abbiamo dimostrato che sovraregolazione di TRPC6 canale contribuisce alla proliferazione di PASMCs isolati da pazienti con IPAH. Questo studio ha cercato di identificare i polimorfismi a singolo nucleotide (SNPs) nel promotore del gene TRPC6 che sono associati con IPAH e hanno un significato funzionale nella regolazione della attività TRPC6 in PASMCs.

Stimolando Operati Dal Negozio Ca(2+) Voce

Nature Cell Biology. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19488056

Afflusso di calcio attraverso i canali di membrana plasmatica operati dal negozio Ca(2+) (SOC) è attivato quando il reticolo endoplasmatico (ER) Ca(2+) negozio è impoverito - un Ca(2+) omeostatico segnalazione meccanismo che è rimasta enigmatica per più di due decenni. Screening di interferenza del RNA (RNAi) e analisi molecolare e cellulare fisiologica recentemente identificato STIM1 come meccanicistico 'missing link' tra ER e la membrana plasmatica. Le proteine STIM senso l'esaurimento delle Ca(2+) da ER oligomerize, traslocano nel giunzioni adiacente alla membrana del plasma, organizzare Orai o TRPC (catione potenziali transient receptor) canali in cluster e aprire questi canali per portare sulla voce SOC.

La Rete Funzionale Dei Canali Ionici in Linfociti T

Immunological Reviews. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19754890

Per più di 25 anni, esso è stato ampiamente apprezzato che afflusso di Ca2 + è essenziale per innescare l'attivazione dei linfociti T. Patch clamp analisi, identificazione molecolare e studi funzionali utilizzando bloccanti e manipolazione genetica hanno dimostrato che un unico contingente dei canali ionici Orchestra l'iniziazione, l'intensità e la durata del segnale Ca2 +. Cinque tipi distinti di canali ionici - Kv1.3, KCa3.1, Orai1 + stroma interagente molecola 1 (STIM1) [Ca2 +-rilasciare attivando Ca2 + canale (CRAC)], TRPM7 e Cl (swell) - costituiscono una rete che esegue le funzioni vitali per l'omeostasi cellulare in corso e per l'attivazione delle cellule T, offrendo potenziali bersagli per immunomodulazione. Più recentemente, i ruoli di STIM1 e Orai1 sono stati rivelati in triggering e formando il canale CRAC seguito fidanzamento del recettore delle cellule T. Kv1.3, KCa3.1, STIM1 e Orai1 sono stati trovati a raggrupparsi presso la sinapsi immunologica dopo contatto con delle cellule presentanti l'antigene; discutiamo come canali presso la sinapsi potrebbero funzionare per modulare la segnalazione locale. Immuno-imaging approcci stanno cominciando a far luce sulla funzione dei canali ionici in vivo. Soprattutto, il pattern di espressione dei canali Ca2 + e K + e quindi la rete funzionale può adattarsi a seconda dello stato di attivazione e differenziazione, e questo consente per le diverse fasi di una risposta immunitaria a essere mirate specificamente.

L'impatto Della Routine Ecocardiografia Trans-esofagea (tep) in Cardiochirurgia

Best Practice & Research. Clinical Anaesthesiology. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19862886

L'ecocardiografia trans-esofagea (tep) è cambiato profondamente cardiochirurgia e il ruolo dell'anestesista cardiaco. È stato la forza motrice per una collaborazione in tempo reale di diagnostica e decisionale tra cardiaci anestesisti e chirurghi cardiaci che ha avanzato significativamente la sicurezza e l'efficacia della moderna cardiochirurgia. Con le informazioni fornite dal TOE, anestesisti e chirurghi possono reindirizzare la cura dei pazienti chirurgici cardiaci per ridurre la morbilità e la mortalità. Di conseguenza, di routine TOE intraoperatoria è un'aspettativa in molte pratiche di chirurgiche cardiache. Mentre alcuni colleghi continuano a mettere in discussione se punta deve essere utilizzata routinariamente in tutti i pazienti di chirurgici cardiaci, crediamo che è impossibile prevedere in quali pazienti cardiaci TOE scoprirà nuove informazioni d'importanza vitale. Pertanto, si consiglia che in assenza di controindicazione alla strumentazione esofagea con la sonda, la punta deve essere eseguita in tutti i pazienti di chirurgici cardiaci. Con uso di routine TOE, TOE avrà il maggior beneficio.

NK Cell Pattugliamento E L'eliminazione Delle Cellule Dendritiche Derivate Da Donatore a Favore Alloreactivity Indiretta

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20139277

Presentazione diretta di straniere molecole MHC espresse dal donatore-derivate le cellule dendritiche (DCs) è stato considerato generalmente il pathway dominante di alloriconoscimento nel rigetto acuto di trapianto. Tuttavia, recenti studi coinvolgono attivazione preferenziale della via indiretta dall'host controller di dominio. La rispettiva importanza di ogni percorso e i meccanismi che determinano i contributi relativi devono ancora essere chiaramente stabilito. In questo studio, utilizzando la microscopia del due-fotone, visualizzato host NK cell interazioni con Carlo e allogenici DCs all'interno dei linfonodi intatti di topi. A contatto con DCs allogeniche, cellule NK formano interazioni prolungate che ha portato direttamente alla lisi delle cellule di destinazione. Questa rapida eliminazione limitata capacità di DCs allogenici per stimolare la primaria e ricordare le risposte delle cellule T. Per discriminare se donatore o host DCs sono principalmente coinvolti nel presentare Ag derivato da allograft, abbiamo utilizzato topi di recettore tossoide CD11c-difterite condizionatamente ablazione DCs CD11c(+) e di mostrare che presentazione diretta da donatore DCs da solo è sufficiente a suscitare rigetto acuto di allotrapianto. Proponiamo quindi che rapida eliminazione della DCs allogenici limita la presentazione diretta di Ag e favorisce quindi il pathway indiretto di alloreactivity.

La Sinapsi Immunologica: Una Piattaforma Dinamica Per La Segnalazione Locale

Journal of Clinical Immunology. May, 2010  |  Pubmed ID: 20390326

La sinapsi immunologica (IS) come un concetto si è evoluto da una visione statica della giunzione tra cellule T e i loro partner di cellule presentanti l'antigene. L'intero processo di formazione è e l'estinzione è ora conosciuto a comportare una riorganizzazione dinamica delle proteine all'interno e adiacente a quei domini e domini di membrana. DISCUSSIONE: L'intero processo anche complicato è legato alla motilità sia macchine come macchina dirige "scansione" prima dell'impegno del recettore delle cellule T e come esso si appropriò durante gli sviluppi in corso presso l'IS. Mentre la sinapsi spesso rimane dinamica al fine di incoraggiare la sorveglianza di nuove superfici presentanti l'antigene, forze citoscheletriche regolano anche lo sviluppo dei segnali, probabilmente compreso il montaggio delle scanalature dello ione. Nelle sinapsi neuronali e immunologici, localizzata Ca2 + segnali e accumulo o deplezione di ioni in microdomains accompagnano la concentrazione di molecole nelle sinapsi di segnalazione. Tale segnalazione spatiotemporal nelle sinapsi notevolmente accelera la cinetica e fornisce i checkpoint essenziali per convalidare la comunicazione cellula-cellula efficace.

Mobilizzazione Selettiva E Site-specific Di Dermico Cellule Dendritiche E Cellule Di Langerhans Da Coadiuvanti Polarizzazione Th1 E Th2

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. May, 2010  |  Pubmed ID: 20404167

Le cellule dendritiche (DCs) avviare e polarizzano risposte immunitarie verso diversi esiti funzionali. Mezzo intravital microscopia del due-fotone, segnaliamo che le cellule dendritiche cutanee (DDCs) e cellule di Langerhans (LCs) sono differenzialmente mobilitate durante il Contatta, sensibilizzazione e di coadiuvanti come unmethylated CpG oligonucleotide (CpG) e LPS che inducono T helper tipo 1 (Th1) risposte, o papaina che induce T helper tipo 2 (Th2) risposte. In pinna orecchio, contattare sensibilizzazione, CpG, LPS, e papaina tutti mobilitati DDCs in tre fasi distinte: aumento motilità e sondare dendritiche, regia migrazione e l'ingresso nei vasi linfatici. Durante il trattamento stesso, il LCs adiacenti nella pinna orecchio rimasto Immobilità ciliare per un periodo di 48 ore di osservazione. Al contrario, footpads mancava DDCs e coadiuvanti Th1-polarizzazione indotta selettivamente una mobilizzazione ritardata di LCs dopo 48 h polarizzazione Th1 delle cellule T CD4(+) era indipendente del sito immunizzazione, mentre immunizzazione orecchio favorito polarizzazione Th2, correlando con site-specific DC distribuzione e dinamica. I nostri risultati forniscono una descrizione iniziale della periferica dinamica DC in risposta a coadiuvanti e implicano che la mobilitazione LC migliora la risposta Th1 e non è sufficiente a innescare una risposta Th2, mentre la mobilizzazione di DDCs da solo è sufficiente a innescare la proliferazione delle cellule T e di polarizzare l'attivazione delle cellule T iniziale verso una risposta Th2.

Biologia Delle Cellule. Come Stimolare I Canali Del Calcio

Science (New York, N.Y.). Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20929798

Mzb1 Proteina Regola L'omeostasi Del Calcio, La Secrezione Di Anticorpi E Attivazione Di Integrina Nell'innata-come Le Cellule B

Immunity. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 21093319

Zona marginale (MZ) B cellule della milza e le cellule B1, definito innata-come le cellule B, differiscono dalle cellule B follicolare da loro mobilitazione Ca(2+) attenuato e secrezione dell'anticorpo veloce adesione aumentata delle cellule. Abbiamo identificato e caratterizzato Mzb1 come una proteina localizzata del reticolo endoplasmatico e specifiche delle cellule di B che è stato più abbondantemente espresso nelle cellule MZ B e B1. Atterramento di Mzb1 in cellule B MZ Ca(2+) mobilizzazione e localizzazione di fattore di trascrizione NFAT nucleare è aumentato, ma ridotta secrezione anticorpale indotta dal lipopolisaccaride e adesione integrina-mediata delle cellule. Al contrario, espressione ectopica di un transgene Lck-Mzb1 a cellule T periferiche portato attenuato Ca(2+) mobilizzazione e aumentata adesione integrina-mediata delle cellule. Oltre alla sua interazione con il substrato specifico chaperone Grp94, Mzb1 aumentata la funzione dell'ossidoriduttasi ERp57 in favorendo l'espressione delle integrine nella loro conformazione attivata. Così, Mzb1 aiuta a diversificare le funzioni delle cellule B periferiche regolando Ca(2+) negozi, secrezione di anticorpi e attivazione di integrina.

Chinasi Di Proteina D Coordina L'attivazione Di DRAK2 in Risposta a TCR-induced Ca2 + Afflusso E La Generazione Di Ossigeno Reattivo Mitocondriale

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21148796

DRAK2 è una serina/treonina chinasi altamente arricchita nei linfociti che genera la soglia per l'attivazione delle cellule T e mantiene la sopravvivenza delle cellule T dopo attivazione produttiva. Cellule T manca DRAK2 sono inclini ad attivazione in condizioni non ottimali e mostrano maggiore calcio risposte alla stimolazione AgR. Nonostante questo, topi privi di DRAK2 sono resistenti alle malattie autoimmuni organo-specifiche a causa di difettosa autoreattivi la sopravvivenza delle cellule T. L'attività della chinasi DRAK2 è indotta da AgR di segnalazione e in questo studio che ci mostrano che l'induzione di DRAK2 attività richiede afflusso Ca(2+) attraverso il Ca(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) canale formato da subunità Orai1. Blocco dell'attività DRAK2 con l'inibitore della proteina chinasi D (PKD) Gö6976 o espressione di un mutante PKD chinasi-morti ha impedito la attivazione di DRAK2, considerando che un mutante costitutivamente attivo di PKD promosso DRAK2 funzione. Atterramento di PKD in cellule T bloccato fortemente endogeno DRAK2 attivazione dopo legatura TCR, implicando PKD come intermedio essenziale nell'attivazione del DRAK2 da Ca(2+) afflusso. Inoltre, individuiamo DRAK2 come substrato romanzo di PKD e dimostrare che DRAK2 e PKD interagire fisicamente in condizioni che attivano la PKD. Generazione mitocondriale di intermedi reattivi dell'ossigeno è stato necessario e sufficiente per l'attivazione del DRAK2 in risposta all'afflusso di Ca(2+). Presi insieme, DRAK2 e PKD formano un modulo di segnalazione romanzo che controlla l'omeostasi del calcio dopo l'attivazione delle cellule T.

Approccio Generale Al Trasferimento Adottivo E Cella Di Etichettatura Per Immunoimaging

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285265

Induzione Di Una Risposta Immunitaria Per Imaging Interazioni Cellula/T-cellule Presentanti L'antigene

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285266

Imaging Di Linfonodo in Situ

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285267

Linfonodo in Vivo Imaging

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285268

Immunoimaging: Studiare La Dinamica Del Sistema Immunitario Mediante Microscopia Del Due-fotone

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285279

Rigetto Del Trapianto Di Imaging: Una Nuova Vista

Nature Medicine. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21647143

Analisi Del Comportamento Di Migrazione Transitori Delle Cellule Natural Killer Fotografato in Situ E in Vitro

Integrative Biology : Quantitative Biosciences from Nano to Macro. Jul, 2011  |  Pubmed ID: 21687858

Vi presentiamo un metodo semplice per la caratterizzazione rapida e automatica della migrazione dei linfociti da dati di microscopia di fluorescenza time-lapse. Time-lapse di imaging delle cellule natural killer (NK) in vitro ed in situ, entrambi hanno mostrato che le singole celle transitoriamente alterano il loro comportamento di migrazione. In genere, le cellule NK hanno mostrato periodi di alta motilità, interrotta da periodi transitori di lenta migrazione o arresti quasi completi. Analisi dei dati in vitro hanno dimostrato che questi periodi spesso ha coinciso con i contatti con le cellule bersaglio, che a volte portano alla lisi delle cellule bersaglio. Tuttavia, le cellule NK sono state osservate anche comunemente fermare indipendentemente dal contatto con altre cellule. Al fine di caratterizzare oggettivamente la migrazione delle cellule NK, abbiamo implementato un semplice metodo per discriminare quando le cellule NK interrompere o motilities basso, hanno periodi di migrazione diretto o subiscono movimento casuale. Questo è stato ottenuto utilizzando un approccio di finestra scorrevole e valutare la media al quadrato MSD curvatura lungo traiettorie da singole cellule NK e spostamento (MSD) per valutare il coefficiente di migrazione nel corso del tempo. Il metodo presentato qui può essere usato a rapidamente e valutare quantitativamente le dinamiche delle singole cellule, come pure la eterogeneità all'interno di ensemble. Inoltre, utilizzabile anche come strumento per rilevare automaticamente transitorio si arresta a causa della formazione delle sinapsi immunitarie, la divisione delle cellule o la morte delle cellule. Ci mostra che questo potrebbe essere particolarmente utile per l'analisi di fluorescenza di time-lapse in situ imaging dati dove la maggior parte delle cellule, così come la matrice extracellulare, è solitamente senza etichetta e quindi invisibile.

Mutazioni Nel Segmento Del Transmembrane Orai1 1 Causa Attivazione STIM1 Indipendente Dei Canali Orai1 a Glicina 98 E Chiusura Canale All'arginina 91

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21987804

Stim e Orai proteine comprendono macchine molecolari dei canali Ca(2+) (CRAC) attivato dal rilascio di Ca(2+). Come un approccio verso la comprensione del gating dei canali Orai1, abbiamo studiato gli effetti delle mutazioni selezionati in due siti, conservate nel primo segmento del transmembrane (TM1): arginina 91 situato vicino all'estremità citosolico del TM1 e glicina 98 vicino al centro di TM1. R91C Orai1, quando coespressi con STIM1, è stata attivata normalmente da deplezione Ca(2+)-store. Trattamento con diammide, un agente ossidante tiolo, induce la formazione di ponti disolfuro tra residui di R91C nella subunità Orai1 adiacente e rapidamente bloccato STIM1 operati Ca(2+) corrente. Diammide-indotta di blocco è stato stornato dagli agenti di riduzione del legame disolfuro. Questi risultati indicano che R91 costituisce una parte molto ristretta del poro condotta sul lato citosolico. Sostituzione dell'alanina a G98 impedito attività del canale STIM1-indotta. È interessante notare che, mutazione di aspartato (G98D) o prolina (G98P) causato attivazione costitutiva di canale in modo indipendente dal STIM1. Entrambi mutanti Orai1 G98 formano una conduttanza permeabile Ca(2+) non selettivo che era relativamente resistente al blocco di Gd(3+). Il doppio mutante R91W/G98D fu anche costitutivamente attive, superando la normale inibizione dell'attività del canale di triptofano in posizione 91 trovato in alcuni pazienti con immunodeficienza combinata grave (SCID), e il doppio mutante R91C/G98D resistente al blocco diammide. Questi dati suggeriscono che il poro del canale è allargato e selettività dello ione è alterata da mutazioni al sito G98 che possono perturbare la struttura α-elicoidale. Proponiamo distinti ruoli funzionali per G98 come un controllo cerniera e R91 come parte della fisica porta alla stretta bocca interna del canale.

Stechiometria Subunità Dei Canali Orai1 E Orai3 Umane Negli Stati Aperti E Chiusi

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21987805

Abbiamo applicato la singola molecola photobleaching per studiare la stechiometria dei canali Orai1 e Orai3 umani taggati con eGFP ed espresso in cellule di mammifero. Orai1 è stato rilevato prevalentemente come dimeri in condizioni di riposo e tetrameri quando coespressi con C-STIM1 per attivare Ca(2+) afflusso. Orai1 è stato anche trovato per essere tetramerica quando coespressi con STIM1 e valutata a seguito di fissazione. Mostriamo che fissazione rapidamente provoca il rilascio di Ca(2+), ridistribuzione di STIM1 alla membrana plasmatica e formazione puncta STIM1/Orai1 e può causare il canale di essere nello stato attivato. Coerente con questa possibilità, Orai1 è stato trovato principalmente come un dimero quando coespressi con STIM1 in cellule viventi in condizioni di riposo. Mostriamo ulteriormente che Orai3, come Orai1, è dimerica sotto condizioni di riposo ed è prevalentemente tetramerica quando attivato dal C-STIM1. Interessante, una stechiometria Orai3 dimerica è stato trovato prima e durante l'applicazione del borato 2-aminoethyldiphenyl (2-APB) per attivare una conduttanza catione non selettivi in modalità indipendente STIM1. Possiamo concludere che i canali Orai1 e Orai3 umani subiscono una transizione di dimero-tetramero per formare un poro Ca(2+) selettivo durante attivazione negozio-operati e che Orai3 forma un catione non selettivo dimerica poro dopo l'attivazione di 2-APB.

CD95 Innesca Orai1-mediata Localizzata Ca2 + Voce, Regola Il Reclutamento Della Chinasi Di Proteina C (PKC) β2 E Previene La Formazione Di Complessi Segnalazione Induttori Di Morte

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Nov, 2011  |  Pubmed ID: 22065776

Il recettore di morte CD95 svolge un ruolo cruciale nella sorveglianza immunitaria e tolleranza immunologica. Associazione di CD95L a CD95 conduce al reclutamento della proteina adattatore proteina Fas-associated death (FADD), che a sua volta aggregati caspase-8 e caspasi-10. Efficiente formazione di CD95/FADD/caspase complesso, noto come la morte-indurre segnali complessi (disco), culmina nell'induzione di apoptosi. Mostriamo che le cellule esposte a CD95L subiscono una riorganizzazione della membrana del plasma in cui il Ca(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) canale Orai1 e la molecola di interazione stromale residente in reticolo endoplasmatico attivatore 1 colocalize con CD95 in un cluster di dimensioni micrometriche in cui il canale suscita una voce polarizzata di calcio. Orai1 atterramento e l'espressione di un costrutto negativo dominante (Orai1E106A) rivelano che sull'impegno di CD95, l'afflusso di Ca(2+) localizzata Orai1-driven è fondamentale per la chinasi di proteina Ca(2+)-dipendente β2 C (PKC) per il disco di reclutamento. PKCβ2 a sua volta transitoriamente detiene il complesso in uno stato inattivo, impedendo l'attivazione di caspase e trasmissione del segnale apoptotico. Questo studio identifica un ruolo biologico di Ca(2+) e il canale Orai1 che spinge un ciclo di feedback negativo transitoria, introducendo una fase di ritardo nei primi passi del segnale CD95. Suggeriamo che questi eventi localizzati forniscono un tempo di decisione per prevenire la morte cellulare accidentale.