MIKCa1によるマウスパネート細胞α-ディフェンシンの分泌は、Ca2 +活性化、中間コンダクタンスカリウムチャネルの変調

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2002  |  Pubmed ID: 11724775

小腸陰窩のパネート細胞分泌する微生物α-ディフェンシンの細菌や細菌の抗原（綾部、T.、サッチェル、DP、ウィルソン、CL、公園、トイレ、Selsted、ME、およびウレットル、AJ（2000）ナット。免疫に応答して、 1、113から38）。我々は今のCa（2 +）活性化K（+）チャネルmIKCa1は、マウスパネート細胞分泌を調節すること。報告人間IKCa1 cDNAプローブへのハイブリダイゼーションにより、マウス小腸のcryptライブラリで識別されるmIKCa1 cDNAクローンを単離し、DNA配列分析は、赤血球細胞や肝臓から単離されたcDNA mIKCa1に同一であることを示した。ゲノム構成は、それぞれのcDNAとゲノム配列の比較によって示されるようにマウスとヒトのIKCa1間で保存されていることがわかった。 mIKCa1の系統固有の役割を示唆し、バイセクト陰窩の下半分から、単一のパネート細胞からではなく、バイセクト窩、絨毛上皮、または未分化陰窩の上皮細胞の上半分からmIKCa1を増幅ネストされたプライマーを用いて転写酵素-PCR実験を逆転マウス小腸上皮インチクローニングされたmIKCa1チャネルは、カルシウム活性化され、効力が9桁違いとヒト相同体のものと区別がつかないのスパニング10構造的に多様なペプチドと非ペプチド阻害剤によってブロックされました。チャネル遮断、カリブドトキシン、クロトリマゾール、および選択性の高いIKCa1阻害剤、TRAM-34とTRAM-39と一致し、（約50％）、細菌や細菌のリポ多糖類により刺激されたパネート細胞分泌を抑制するように殺菌活性および分泌cryptdinタンパク質の両方を測定し、しかし、非アクティブ、アナログ、TRAM-7は、分泌をブロックしていませんでした。これらの結果はmIKCa1はパネート細胞のα-ディフェンシンの分泌の調節因子であることを示していると摂取した細菌の病原体に対する腸上皮の粘膜防御への関与を開示している。

カルシウム放出チャネルとしてPolycystin-2のインとアウト

Nature Cell Biology. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11875447

無傷のリンパ節におけるリンパ球の運動性と抗原反応の二光子イメージング

Science (New York, N.Y.). Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12016203

リンパ球の運動は、リンパ器官内および抗原提示細胞との接触を開始するための人身売買のために不可欠です。これらのプロセスの可視化は、以前のin vitroシステムではこれらに限定されています。我々は、画像への2光子レーザー顕微鏡無傷のリンパ節内の深い個々の生きているリンパ球の動的挙動の使用方法について説明します。それらのネイティブ環境では、T細胞は5〜6倍のB細胞のことである運動性係数を表示し、毎分以上25マイクロメートルのピーク速度を達成しました。抗原チャレンジはランダムウォークから "群れ"と安定したクラスタへのT細胞の軌道を変更しました。リアルタイム2光子イメージングは​​、免疫応答の開始に基本的なリンパ球の行動を明らかにする。

周術期心エコーでのトレーニングのための心臓麻酔タスクフォースガイドラインのエコーと社会のアメリカの社会

Anesthesia and Analgesia. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12031993

周術期心エコーでのトレーニングのための心臓麻酔タスクフォースガイドラインのエコーと社会のアメリカの社会

Journal of the American Society of Echocardiography : Official Publication of the American Society of Echocardiography. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12050607

RBL細胞におけるCRACとMICチャンネルの個別のプロパティ

The Journal of General Physiology. Aug, 2002  |  Pubmed ID: 12149283

ラット好塩基球性白血病（RBL）細胞およびJurkat T細胞、カルシウムCaの受動的に応答して開いている（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）チャネル（2 +）のストア枯渇。内向き整流CRACチャネルは、外部の二価のイオンが除去される一価のカチオンを認める。内部のMg（2 +）の除去は、公開され外側に整流電流（のMg（2 +）を阻害陽イオン[MIC]）は、外部価のイオンが除去されたときも、一価の陽イオンを認めている。活性化と感受性の動態によって実行ダウンし、外部のMg（2 +）、スペルミン、およびSKF-96365の薬理学的感受性によって：ここでは、CRACとMIC電流がイオン選択性と整流特性によって分離可能であることを示している。重要なのは、MIC許容電流CRACと低い内部のMg（2 +）と同一のイオン条件下で特徴づけられる現在のMICの実行ダウン選択。のCa（2 +）ストアの枯渇がMICチャネルの活性化に関与していないことを示唆して広くのCa（2 +）およびEGTAのレベルを変化させることにもかかわらず、内部のMg（2 +）誘導MIC電流の除去。マイクロモル以下のからミリモルのレベルに内部のMg（2 +）を増加させると整流に影響を与えることなく、MIC電流を減少させたが、CRAC電流整流または振幅を変化させなかった。外部のMg（2 +）及びCs（+）はMICを介して現在はありませんCRACチャネルを運んだ。 SKF-96365は、可逆的にCRAC電流をブロックしますが、不可逆的に現在のMICを阻害した。マイクロモル濃度で、スペルミンおよび細胞外のMg（2 +）の両方が現在の可逆的ではなく、一価CRAC電流の一価MICをブロックされています。クローン化、発現TRPM7チャネルとよくMIC現在のマッチの生物物理学的特性。以前の結果は、別々のCRACとMICチャネルの用語で再評価されます。

無傷のリンパ組織における二光子イメージング

Advances in Experimental Medicine and Biology. 2002  |  Pubmed ID: 12405205

二光子組織のイメージング：フレッシュライトの免疫システムを見

Nature Reviews. Immunology. Nov, 2002  |  Pubmed ID: 12415310

そのような抗原認識などの多くのリンパ球の機能は、人口密度の高いリンパ器官の深い場所を取る。 in vivoでの観察で直接はできませんでしたので、免疫細胞の相互作用のダイナミクスは、推論またはin vitro試験から外挿されています。二光子蛍光励起が大きく深さに、従来のイメージング法より少ない毒性で、直接生体組織に "見る"ために光の非常に短い（<1ピコ秒）と、強烈なパルスを使用しています。二光子顕微鏡は、新たに開発した指標の分子との組み合わせで、in vivoでの設定で、単一セルのアプローチを拡張し、詳細に免疫応答の基礎となる細胞のコラボレーションを明らかにすることを約束します。

周術期経食道心エコーの新しい資格試験の開発と解析

Anesthesia and Analgesia. Dec, 2002  |  Pubmed ID: 12456404

周術期の心エコー検査を適用することで知識と能力を決定するプロセスを開発する重要な要素は、検査が含まれています。我々は、周術期の心エコー検査で認定試験の開発について報告する。さらに、検査のパフォーマンスがエコーの臨床経験に関連しているという仮説を検証した。 1995年以来、1200以上の参加者は、検査を受けており、70％以上が経ちました。全体的な検査のパフォーマンスは心エコー検査、性能と少なくとも6週間の試験の解釈のトレーニング（または同等のもの）のより長い3カ月に積極的に関連していた。我々は、周術期の心エコー検査で認定試験は周術期の心エコー検査アプリケーション内の個々の知識を判断するための有効なツールであると結論した。影響：このレポートには、認定経食道心エコー検査の開発に関連するプロセスを説明し、検査性能と相関を示しています。

慢性的に活性化Tリンパ球でアップレギュレーションKv1.3チャネルを検出し調査するための新規蛍光毒素

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12511563

電位依存性Kv1.3チャネル（Kv1.3（高）細胞）の異常に高​​発現Tリンパ球は、実験的自己免疫性脳脊髄炎、多発性硬化症の動物モデルの病態に関与している。我々は、Kv1.3（高）フローサイトメトリーによる細胞の検出のためのSHK（SHK-F6CA）、Kv1.3の最も強力な既知の阻害剤のフルオレセインアナログを開発しました。 SHK-F6CA 1のヒル係数はピコモル濃度でKv1.3を遮断し、> 80倍Kv1.1以上Kv1.3に対する特異性と他のK（V）チャネルを示した。フローサイトメトリー実験では、SHK-F6CAは、特にセル当たり約600チャンネルの検出限界とKv1.3発現細胞を染色した。ラット繰り返し抗原と7から10回を刺激したヒトT細胞は、容易に高いKv1.3チャネル（> 600チャンネル/セル）、および休止T細胞からSHK-F6CA染色のレベルや、細胞に基づいて区別されていましたアクティベーション1-3ラウンドを受けていた。機能的なKv1.3発現レベルは15〜20時間でピークに達し、その後encephalitogenicityの取得及び損失と並行して、次の7日間のベースラインに減少、ミエリン抗原刺激後のミエリン特異的ラットT細胞株で大幅に増加した。カルシウムとプロテインキナーゼC依存性経路の両方が抗原誘発Kv1.3アップレギュレーションのために必要であった。 SHK-F6CAは正常と病気の組織では発現細胞のKv1.3（高）の迅速かつ定量的検出に有用である可能性があり、無傷の細胞における機能チャネルの分布を可視化する。

MICチャンネルは内部価カチオンによって阻害したが、ATPされていません。

Biophysical Journal. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12547774

TRPM7チャネルは機能的なα-キナーゼドメインを有している非選択的陽イオンチャネルである。それは異種TRPM7チャネルを発現することが提案されているATPのミリモルレベルで細胞を透析により活性化（Runnelsら、2001）または禁止（ナドラーら、2001）されています。内因性のTRPM7の相関は、またはMIC（MG（2 +）-阻害するカチオン）（MG（2 +）-ヌクレオチド阻害する金属用）T-リンパ球およびRBL（ラット好塩基球性白血病）細胞で同定され、マグナム命名されました。ここでは、MgATPより内部のMg（2 +）ではなく、これは現在のを阻害すると報告している。ミリモル濃度で透析によって供給される細胞質MgATPは、効果的に阻害した場合にのみ弱いのMg（2 +）キレート剤は、ピペット溶液中に存在しています。したがって、MgATPは、Mgのソース（2 +）ではなく、ATPの供給源としての役割を果たします。バイオアッセイとしてMICチャネル自体の細孔内に外部からアクセス可能なサイトを使用して、我々は事実を説明する、等モルのMgCl（2）MgATPソリューションは、フリーMgの類似した量（2 +）が含まれていることを示しているMgの数値（2 +完全に抑制するために必要）とMgATP濃度は同じである。さらに、我々は、Mg（2 +）BA（2 +）は、Sr（2 +）は、Zn（2 +）、およびMn（2 +）として、その抑制作用に固有のものではありませんことを示している（2 + Mgのために置き換えることができます）、完全な阻害を引き起こす。我々は、MIC現在の阻害は二価陽イオンだけ発生していると結論する。

自律的なT細胞の人身売買は、生体内二光子顕微鏡を用いたin Vivoで検討し

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12601158

血液および二次リンパ器官の間にT細胞の再循環は、T細胞は運動性と組織特異的なシグナルに敏感である必要があります。 T細胞の運動性は、in vitroで検討されていますが、生体内での個々のT細胞の移動行動は謎残っている。ここで、生体2光子レーザー顕微鏡を用いて、麻酔したマウスの鼠径部リンパ節でナイーブCD4（+）T細胞の運動と人身売買をイメージした。リンパ節内の深い生体録音は微小血管が急速に流れるT細胞を示し、個々のホーミングイベントを捕獲した。びまん性の皮質内では、T細胞は、約11マイクロモルxは、min（-1）の平均速度と堅牢な運動性を表示します。 T細胞は、ピーク速度> 25マイクロモルxは、min（-1）を達成、低域と高運動性の状態の間で約2分ごとに循環。 3D空間でのT細胞遊走の分析は、ランダムウォークに類似してデフォルトの人身売買のプログラムを明らかにした。我々の結果は、それらが普及するケモカイン勾配の方向の下かもしれないとして、ナイーブT細胞は、一括して移行しないことを示している。代わりに、彼らは、自律的なエージェントとして移行する独立した人身売買のパスを取って、各セルに表示されます。我々の結果は、質問に、T細胞領域内の基底T細胞の人身売買のケモカイン勾配の役割を呼び出すと、その抗原の検出がランダムウォークは、樹状細胞の抗原提示との接触を容易にする通過確率過程から生じることが示唆された。

透過MICのプローブおよびTRPM7孔等の多価陽イオン

Biophysical Journal. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12668438

Jurkat T細胞とラット好塩基球性白血病細胞の最近の研究では、Mgを明らかにした（2 +）は、哺乳動物細胞に外因性に発現するTRPM7アイリングレートモデルに似て電気生理学的特性を有するカチオン（MIC）チャネルを阻害した。ここでは、外部からの現在の一価のMICをブロックするために、いくつかの多価陽イオン及びMg（2 +）の特性を比較します。プトレシン、スペルミジン、スペルミン、PhTX-343（天然ポリアミン毒素philanthotoxinの誘導体）、およびMg（2 +）は、各イオンの電界中でのブロッキングサイトを示す用量と電圧に依存した方法でブロックされたチャンネル。スペルミン、比較的かさばるPhTX-343は、分子上の電荷の数が予想よりも急峻な電圧依存性を示した。ポリアミンおよびMg（2 +）は、強く負の膜電位でのブロックの救済によって判断透過性ブロッカーである。スペルミン（300マイクロモル）と細胞内の透析は、非対称細孔を示す、影響を及ぼさなかった。シングル·チャネル·レベルで、スペルミン及びMg（2 +）、40 psのシングルチャネルの誘導flickeryブロック。 I / V特性とポリアミンブロックが発現するTRPM7に類似しており、ネイティブMIC電流の、ネイティブMICチャンネルがTRPM7のサブユニットから構成されているという結論と一致している。アイリングレートモデルは、外部からの多価カチオンによるI / V特性とマイクチャンネルのブロックを考慮するために開発されています。

生体中のリンパ球のリアルタイムイメージング

Current Opinion in Immunology. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 12900266

新しい製剤、蛍光プローブとイメージング技術は、リンパ系器官の組織環境における細胞の挙動を観測する手段を提供しています。特に、二光子レーザー顕微鏡と組み合わせた場合、外科的に露出したリンパ節の生体内イメージングは​​、リンパ球の移行と、それが生きている動物内で発生したとして、抗原提示のユニークなビューを提供します。ビューには、リンパ球はリンパ器官内でランダムに移行することを新興されており、抗原提示細胞とそのリンパ球の接触は確率過程ではなく、ケモカイン勾配に導かれたものかもしれません。

リンパ節内リンパ球の運動と人身売買の確率を表示

Immunological Reviews. Oct, 2003  |  Pubmed ID: 12969316

二光子顕微鏡は、細胞の遊走とin vivoでの抗原認識の根底にあるメカニズムに、3次元画像の解析によって導かれ、リンパ器官の細胞ダイナミクスにリテラル洞察を提供しています。このレビューは、ネイティブの組織環境でのリンパ球の運動性および抗原認識を説明し、リンパ球の運動性、シグナリング、およびin vitroでの走化性にはるかに広範な文献でこれらの結果を比較します。我々は、リンパ球運動性、走化性​​、抗原への応答の動的側面に関するin vitroでの文献を検討し、リンパ球のランダムな移行がなく、走化性によって導かれることなく、リンパ系器官における抗原認識の確率的メカニズムを駆動することができるビューを提供する。

休止期および活性化ヒトT細胞のFM1-43で明らかに膜輸送とエンドサイトーシスコンパートメントの細胞内機構の調節

Experimental Cell Research. Nov, 2003  |  Pubmed ID: 14597416

FM1-43に浸透し、汚れの膜蛍光スチリル色素は、構成的エンドサイトーシスの動態を調査し、休止期および活性化ヒトTリンパ球でエンドサイトーシスオルガネラの運命を視覚化するために使用されていました。色素蓄積の速度は温度に強く依存し、休止T細胞よりも活性の約10倍高かった。タプシガルギンまたはイオノマイシンと細胞質ゾルの遊離Ca2 +濃度の上昇は、さらに細胞質アクチンの重合に関連付けられたFM1-43蓄積の速度を加速させた。アクチン重合の影響を受ける膜輸送の直接変調。 calyculin廃止FM1-43ナリと細胞膜下にアクチンの凝縮は、サイトカラシンDでアクチンの脱重合に対し影響を及ぼさなかった。 FM1-43によるDABの光変換は、T細胞活性化に関連付けられたターゲットに変更するエンドサイトーシスコンパートメントを明らかにした。内在貨物は休止T細胞のリソソーム様コンパートメントに、活性化T細胞の多胞体（MVB）に実施した。 MVBからエクソソームの外部化がアクティブではなく、T細胞を休息で一般的に発生しました。 T細胞はエクソソームは、外膜のリーフレットでいかだに関連したCD3タンパク質、スフィンゴ糖脂質GM1と、ホスファチジルセリンが含まれていました。本研究ではT細胞の膜輸送のマーカーとしてFM1-43の有用性を示し、T細胞の活性化中に変調の可能なメカニズムを明らかにする。

SK3-1C、SKCaとIKCaチャネルのドミナントネガティブ抑制

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14638680

小コンダクタンスカルシウム活性化K +チャネル、SK1-SK3遺伝子の産物は、神経系内と外、両方の膜興奮性を調節する。私たちは、SK3で使用されるエクソン1Aの代わりに別の第一エクソン（エクソン1C）を利用してSK3異なりSK3変異体（SK3-1C）の特性を報告したが、SK3にそうでない場合と同じです。定量的RT-PCRはSK3-1C人間のリンパ組織における転写、骨格筋、気管、唾液腺ではなく、神経系の大量発現を検出しました。 SK3-1Cは、機能的哺乳動物細胞内で単独で発現チャネルが、抑制SK1、SK2、SK3、とIKCa1チャネルではなく、BKCaまたはKVチャネルを生成しませんでした。共焦点顕微鏡は、SK3-1Cは、細胞内SK3蛋白質を隔離することを明らかにした。 SK3-1Cのドミナント阻害活性はカルモジュリンの過剰発現はSK3蛋白質のSK3-1C-介在細胞トラップを逆にしなかったし、CAVチャネルのカルモジュリンのCa2 +依存性の不活化はSK3の影響を受けなかったので、非特異的カルモジュリンスポンジ効果によるものではなかった-1C過剰発現。欠失解析は、多くのK +チャネルの多量体の四量体の安定性と選択性を高めることが報告四量体、コイルドコイルドメインに似ているSK3-1C C末端に支配的な阻害セグメントを同定した。 SK3-1Cしたがって、支配的な阻害セグメントによって媒介されるサブユニットの相互作用を介して細胞内でこれらのチャネルタンパク質を捕捉することによってカルモジュリン依存性SKCa / IKCaチャネルを抑制し、それによって細胞表面上に機能的なチャネルの発現を減少させるかもしれません。 SK3-1Cによって、家族全体のドミナントネガティブ抑制は、細胞膜の興奮性を滴定するための強力なメカニズムを提供し、彼らの標的サイレンシングによる、多様な組織中のこれらのチャネルのin vivoでの役割で機能を定義するための有用なアプローチである。

T細胞レパートリースキャンはリンパ節における樹状細胞の動的挙動とランダムT細胞運動によって促進される

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14722354

樹状細胞（DC）は、末梢組織で抗原を取り込み、それらはCD4（+）T細胞にMHCクラスIIに結合した抗原を提示リンパ節に移行します。我々は、画像に関連する抗原の存在下で無傷のリンパ節内の樹状細胞とT細胞間の相互作用の単一細胞動態を2光子顕微鏡を使用していました。樹状細胞は蛍光カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（CFSE）を含むミョウバンアジュバントの皮膚注射することによりin vivoで標識した。 CFSE陽性樹状細胞は（のCD11c（+）、CD11bを（+）と、低〜中間CD8（+））後のリンパ節に24〜72時間の消耗が観察された。標識した樹状細胞、B細胞濾胞の近くにT細胞のゾーンに（2-3マイクロモルxは、min（-1））をゆっくりと蛇行が精力的に長いアジャイル樹状突起を伸ばした。 T細胞は、ランダムなパスに沿って自律的に移動したとして、T細胞とDC間の出会いが生まれました。また、T細胞は樹状細胞の周りに蓄積されなかったし、DCを近づいて出発し、その相対速度は、T細胞が走化性勾配によって樹状細胞に引き寄せではなく、偶然に遭遇されていないことを意味し、同等であった。 T細胞/ DC接点はDC相馬から腕の長さで主に樹状突起で発生し、通常は個々のDCは時間当たり最大5000のT細胞と相互作用できるようになり、約3分間続いた。我々は、それによって免疫応答の迅速な開始を可能にし、T細胞レパートリーの確率スキャンを強化すると共に、動的DCの身振りとランダムなT細胞の運動性を締結する。

ショウジョウバエS2細胞におけるストア作動性カルシウムチャネル

The Journal of General Physiology. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14744989

ショウジョウバエS2細胞における全細胞記録を使用して、我々は細胞内Ca2 +ストアの枯渇により活性化されるCa（2 +）の選択的電流を特徴とする。 12mMのBAPTA Caを含んだパッシブストアの枯渇（2 +）フリーピペット溶液は逆転電位> 60 mVの内向き整流性のCa2 +電流がアクティブになります。内向き電流は遅れて開発され、-110 mVで20から50 pAの最大値に達した。この電流は2から20 mmから外部のCa2 +を増加させる際に振幅が倍増し、Na +のコリンの置換の影響を受けませんでした。のCa2 +および10mM EGTAが自発的活性化を防止するが、Ca2 +の電流がイオノマイシンまたはタプシガルギンのアプリケーションに速やかに活性化するか、IP3と透析中にフリー約300nmを含むピペット溶液。テスト二価の陽イオン20 mMのCa2 +の等張性の置換は、BA2の選択順序を明らかにした+>のSr2 +>のCa2 +> Mg2 +を。 BA2 +とのSr2 + 10 mVの保持電位でゼロのCa2 +溶液への暴露から数秒以内に不活性化電流。 BA2 +とのSr2 +電流の不活性化は、強力な過分極パルス中に回復を示した。ノイズ解析は、それぞれ+とBa2 + 36、420 ​​fSの20mMのカルシウムでは単一のコンダクタンス値の推定値を提供した。すべての外部二価イオンの除去時に、一時的な一価現在は、Naのための強力な選択性を示した+ CS以上+。のCa2 +電流は完全に可逆的であり、約50nMのIC50値を使用して、GD3 +によってブロックされ、また、20マイクロモルSKF 96365で、20マイクロモル2-APBによってブロックされました。 5〜14マイクロモルの濃度で、2-APBのアプリケーションは、Ca2 +電流の大きさを増加させた。我々は、S2細胞が哺乳動物細胞におけるCRACチャネルと同じ生物物理学的特性の多くはストア作動性Ca2 +チャネルを発現することを結論付けている。

PA-PWRmaxは本当に麻酔ヒトにおける心筋収縮のプレロード独立したインデックスですか？

Cardiology. 2004  |  Pubmed ID: 15103176

本研究では、プリロード調整最大電力のインデックス（PA-PWRmax）は人間の心筋収縮の負荷に依存しない指標であるという仮説を検証した。心室圧 - 容積関係に基づいており、脳卒中の作業から派生した、インデックスは、補正拡張末期容積の項（EDV2）または拡張末期面積（EDA3 / 2）で割った瞬時心室圧力と体積変化の積であり、プリロード効果を調整することができます。瞬時心室領域変化のエコー対策は非侵襲的にPA-PWRmaxを取得するために使用されることがあります。我々は前向きに心肺バイパス手術前に心臓の避難を受けて28ヒト被験者を評価した。連続的な末梢動脈圧、肺動脈圧、およびtransgastric短軸ビューの左心室の心エコービューが記録された。 / EDAおよびPA-PWRmax = [MAP（EDA - ESA）] / EDA3 / 2、ESA =収縮末期 - 同時にゲート瞬時短縮率（FS）およびPA-PWRmaxインデックスはFS =（ESA EDA）で、計算したエリアとMAP =瞬時平均動脈圧。 PA-PWRmaxた（t = -5.8と同じように、95％信頼区間は、FSは、心臓避難と減少肺動脈拡張期血圧（P <0.001; 95％信頼区間-10〜-0.046はt = -5.4）で一様に減少した-2.25の-1.08、P <0.001）。 FSおよびPA-PWRmaxは強い下向きの相関（r = 0.81）を示した。自律的除神経動物の以前の研究とは異なり、我々の研究はおそらく条件をロードする収縮性を結びつける人間の自律神経系の瞬間的な恒常性のメカニズムの、独立した予圧になるPA-PWRmaxが見つかりませんでした。

特定の免疫調節のターゲットとしてのK +チャネル

Trends in Pharmacological Sciences. May, 2004  |  Pubmed ID: 15120495

電位依存性Kv1.3チャネルとCa（2 +）活性化IKCa1 K（+）チャネルは、リンパ球活性化と分化の状態に依存して異なるパターンでT細胞で発現されています。 Kの特定の免疫のアクション（+）チャネルブロッカーの約束がもたらさ活性化細胞の状態にし、ナイーブからエフェクターメモリー細胞への休んでいるから進行中のチャネルの表現型が変化します。この記事では、我々はナイーブ細胞とメモリー細胞の両方でこれらのチャネルの機能的役割を確認し、Kv1.3とIKCa1チャネルの選択的阻害剤の開発について説明し、免疫疾患におけるこれらの阻害剤の潜在的な治療に使用するための論理的根拠を提供しています。

イメージングCD4の単一細胞ダイナミクス+リンパ節における樹状細胞によるT細胞の活性化

The Journal of Experimental Medicine. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15466619

適応免疫応答は、抗原軸受樹状細胞（DC）と、抗原特異的CD4 + T細胞間の接触による二次リンパ器官で開始されます。しかし、in vivoで、このプロセスの単一細胞ダイナミクスに関するわずかな情報があります。二光子顕微鏡を用いて、我々はナイーブCD4の動作をリアルタイム+ T細胞をイメージしたとのin vivo標識堅牢なT細胞応答の間にリンパ節の樹状細胞。リンパ節へのエントリの後の最初の2時間では、T細胞は抗原ベアリングのDC、11月12日分の平均値を持続し、主に樹状突起上で発生する各接触短命の接点を作りました。抗原認識のこの初期の段階でT細胞の運動性の変化したパターンは、隣接する複数のDCとシリアル関与を促進した。その後、T細胞の挙動は、長寿命のクラスタ、ダイナミック群れ、細胞分裂によって強調され、最終的に自律的な移行を含む、追加の異なる段階を通じて進行した。これらの観​​察結果は、ネイティブの組織における免疫学的シナプスが著しく流体であることが示唆され、安定したシナプスは、T細胞に抗原提示の特定の段階でのみ形成している。さらに、これらの相互作用のシリアル性質は、T細胞は、複数の抗原認識イベントの方法で活性化することを意味します。

ストップ！ポジティブセレクションの名前で

Nature Immunology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15662438

チャネルの機能TRPM7/ChaK1の固有キナーゼ活性と自己リン酸化から解離

The Journal of Biological Chemistry. May, 2005  |  Pubmed ID: 15781465

TRPM7/ChaK1は、そのC末端の新規セリン·スレオニンキナーゼドメインに融合した6膜貫通セグメントを持つTRPMチャネルドメインを含むユニークなチャネル/キナーゼである。本研究の目的は、TRPM7/ChaK1のチャネル活性の調節におけるキナーゼ活性と自己リン酸化の役割の可能性を検討することであった。キナーゼ活性に必須の残基は部位特異的突然変異誘発法により同定した。自己リン酸化の二つの主要な部位がSer（1511）およびSer（1567）で質量分析法によりin vitroで同定され、これらのサイトは無傷の細胞でリン酸化されることが判明した。 TRPM7/ChaK1は、内部のミリモルレベルで強く外側に整流し、阻害を示す陽イオン選択的チャネルである〔Mg（2 +）]。 2自己リン酸化部位のか、キナーゼ活性を廃止したキー触媒部位の変異は、細胞全体の記録またはCa（2 +）流入によって測定されたチャネルの活性を変化させなかった。内部のMg（2 +）による阻害はまた、自己リン酸化部位または "キナーゼデッド"変異体の影響を受けなかった。また、キナーゼ活性はMg（2 +）によって増強された、亜鉛（2 +）減少し、Ca（2 +）による影響を受けなかったしました。対照的に、チャネル活性はこれらの2価の陽イオンの3つのすべてによって阻害された。しかし、C-末端キナーゼドメインの多くの削除は、明らかに非アクティブなチャネルの発現をもたらした。我々は内部のMg（2 +）により、現在のアクティビティも規制のいずれもキナーゼ活性または自己リン酸化の影響を受けますが、キナーゼドメインがチャネルアセンブリまたは細胞内局在性の構造的役割を果たしていることされていることを結論付けている。

抗原従事するB細胞はTゾーンとフォームに向けて走を受けるようにして運動性ヘルパーT細胞とのコンジュゲート

PLoS Biology. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15857154

BとT細胞間の相互作用は、ほとんどの抗体応答に不可欠であるが、これらの相互作用のダイナミクスはほとんどわかっていない。無傷のリンパ節の二光子顕微鏡によって、我々は、抗原への曝露によって、B細胞はCCR7リガンドを示す領域を介して、CCR7依存的にB-ゾーンTゾーンの境界に向かって方向優先して移行することを示す勾配。当初はB細胞が減少し運動性を示すが、1日後、運動性は、約9マイクロモル/分に増加されています。最後に以下の10分の非抗原特異的な相互作用のに対し、B細胞のペア以上の60分に10抗原特異的ヘルパーT細胞と抗原が、従事した。 B細胞、T細胞の複合体は非常に動的であり、B細胞によって導かれて、広範囲に移行します。 T細胞は、それらの相互作用で厳密に一夫一婦制であるのに対し、B細胞は時折、複数のT細胞にお問い合わせください。これらの知見は、生体内でのリンパ球走化性の証拠を提供し、彼らは、T細胞依存性抗体応答に関連付けられている時空間の細胞ダイナミクスを定義するために開始します。

STIM1、ストア作動性Ca2 +チャネル機能の基本と保存コンポーネント

The Journal of Cell Biology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15866891

ストア作動性Ca2 +（SOC）のチャネルは多くの細胞プロセスを調節するが、根本的な分子成分は十分に定義されていません。タプシガルギン（TG）に依存したCa2 +流入を変更する遺伝子を同定するためのRNA干渉（RNAi）ベースの画面を使用して、我々は、SOC流入にスティミュラスの必須および保存された役割を発見しました。ショウジョウバエS2細胞におけるスティミュラスのRNAiによるノックダウンが大幅にTG-依存性のCa2 +流入を減少させた。パッチクランプ記録は、ヒトT細胞では、現在のCRACに似た生物物理学的特性を持つショウジョウバエのCa2 +放出活性化カルシウム（CRAC）現在のほぼ完全な抑制を明らかにした。同様に、ヒト相同体STIM1のノックダウンは著しく、Jurkat T細胞におけるCRACチャネル活性を減少させた。 STIM1のRNAiによるノックダウンは、HEK293またはSH-SY5Y細胞内TG-またはアゴニスト依存性のCa2 +流入を阻害した。逆に、HEK293細胞におけるSTIM1の過剰発現は、控えめにTG-誘発性Ca2 +流入を増強した。我々は、STIM1、ショウジョウバエから哺乳動物細胞に保存されている普遍的に発現タンパク質は、SOC流入に重要な役割を果たしているとSOCとCRACチャネルの一般的な構成要素であってもよいことを提案する。

CD4のその場キャラクタリゼーション+オーラルプライミングと寛容の誘導時に粘膜と全身リンパ組織におけるT細胞の挙動に

The Journal of Experimental Medicine. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15928201

抗原特異的CD4 + Tリンパ球の抗原への最初の露光時の動作は、おそらくプライミングまたはtolerizedになるための意思決定に影響を与えるが、これはin vivoで直接検討されていません。そこで我々は経口プライミングに対する経口免疫寛容の誘導時にその場で、リアルタイムでそのような細胞を追跡しました。ナイーブT細胞と免疫原性または免疫寛容の形態で抗原にさらされ、それらの間の移動とクラスタリングの速度およびタイプに関してマークのコントラストがありました。しかし、tolerizedとプライミング、T細胞を比較して大きな違いは、後者は粘膜と末梢リンパ節内に大きく、より長い寿命のクラスターを形成していることでした。これは生体内での生理学的に関連するモデルのプライミングに対する寛容の誘導時の粘膜と全身のリンパ組織におけるin situでの抗原特異的CD4 + T細胞の挙動の最初の比較である。

重篤な術後低血糖の原因としてガチフロキサシン

Anesthesia and Analgesia. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16115964

我々は本症例は比較的マイナーな心臓手術のために心肺バイパス後の重篤な術後の低血糖のエピソードを説明しています。フルオロキノロン系抗生物質を投与し、我々は、これが強く、このイベントに貢献したと信じていました。フルオロキノロン系抗生物質は、グルコースの恒常性を変化させる傾向を認識しています。

STIM1はCRACチャネルをアクティブにし、細胞膜へのCa 2 +ストアからの移行のCa2 +センサーです。

Nature. Oct, 2005  |  Pubmed ID: 16208375

唯一のCa2 +非興奮性細胞の様々なエントリ·メカニズム、ストア作動性カルシウム（SOC）として流入がCa2 +シグナル伝達と、他の多くの細胞プロセスにおいて重要である。 Tリンパ球におけるカルシウム放出活性化カルシウム（CRAC）チャネルは、最高の特徴とSOC流入チャネルであり、免疫応答、遺伝子発現および増殖に必要されているCRACチャネルの持続的な活動に不可欠です。分子のアイデンティティとSOCとCRACチャネルの開閉機構は、とらえどころのない残っています。以前に我々は、ショウジョウバエS2細胞およびヒトTリンパ球のCRACチャネル活性化の必須成分としてスティミュラスおよび哺乳動物ホモログSTIM1を同定した。ここでは、Ca2 +ストアの内容を変更せずに恒常的にスティミュラスまたはSTIM1活性化CRACチャネルのEF-ハンド変異体の発現を示しています。免疫蛍光法、EM局在と表面ビオチン化によって我々は、STIM1は、小胞体 - のようなサイトからのCa2 +ストアの枯渇時の細胞膜に移行することを示している。我々は、Ca2間のミッシングリンクとして機能STIM1 +ストアの枯渇とSOC流入は、細胞膜へのストア枯渇時に移行しがCRACチャネルを活性化することのCa2 +センサーとして機能することを提案する。

内部のPHと多価カチオン活性化、抑制するためのメカニズムとして、とTRPM7/MICチャンネルのランダウンでスクリーニングを充電

The Journal of General Physiology. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16260839

MG2は陽イオン（MIC）は、現在の+禁止、TRPM7チャネルの活性を表すために考えられてリンパ球および肥満細胞、心筋、平滑筋、および他のいくつかの真核細胞の種類に含まれています。 MIC電流は、二価の鉛フリー内部ソリューションを全細胞透析中に活性化されています。細胞内Mg2 +（又は他の二価金属陽イオン）のミリモル濃度は電圧に依存しない方法でチャネルを阻害する。価の抑制と無傷の細胞のチャネル活性化のメカニズムの性質は不明のままである。我々は、ポリアミンは（スペルミン、スペルミジン及びプトレシン）電荷の数に匹敵する効力で、電圧に依存しない方法でも、MIC電流を抑制することを示している。ネオマイシン、ポリ-リジンはまた、強力のMg2 +存在下で現在のMICを抑制した。これらの同じ正に帯電したイオンは、彼らはおそらく、PIP2と他の膜リン脂質の頭部基のリン酸塩をスクリーニングすることによって行動することを示唆し、現在のMICと並行してIRK1電流を抑制した。この仮説と一致して、内部の陽子は、現在のMICを抑制した。対照的に、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、及びヘキサは、電位依存性ブロックがありません阻害を生じた。我々は、内部多価陽イオンによる阻害は、外部から印加されたアンモニウムを使用してサイトゾルをアルカリ化したり、インサイドアウトパッチでpHを増加させることによって緩和されることを示す。さらに、穿孔パッチとセルに接続されたレコーディングで、細胞内のMg2 +が枯渇されていない場合は、内因性のMIC又は組換えTRPM7電流は細胞質アルカリ化によって活性化されており、酸性化によって阻害され、それらはインサイドアウトパッチでPIP2以下の要約でアクティブにすることができます。我々は、MIC（TRPM7）チャネルは、電荷のスクリーニング機構によって調節されると細胞内pHのセンサーとして機能することができることを提案する。

リンパ節にT-DCおよびTB相互作用：第1と第2種類の出会いを閉じます。

Seminars in Immunology. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16263308

リンパ系器官における細胞間相互作用は、免疫応答を開始し、その結果を決定します。リンパ節に2つの光子顕微鏡を用いて、いくつかのグループは、リンパ系器官におけるTリンパ球、Bリンパ球、および樹状細胞（DC）間の運動の特性と相互作用を調査し始めている。最初の "接近遭遇"では、特定の抗原特異性のT細胞は抗原軸受樹状細胞と相互作用し、活性化を開始します。両方のCD4 +およびCD8 + T細胞の活性化は、いくつかの段階を経て進化して、一時的な相互作用から安定したクラスタに、後に解離し、T細胞の増殖（クローン性増殖）へ。番目の "接近遭遇"は、その抗原に従事B細胞は毛包の端に向け移行によって、T細胞へアクセスできるようになりますが必要になります。 T細胞とB細胞は、長期間一緒にペアリングとワルツ、ヘルパーT細胞は形質細胞に分化するB細胞に信号を提供した。この局所的なレビューでは、体液性免疫応答の開始時に、B細胞とし、CD4の活性化振り付け+樹状細胞で最初の相互作用のT細胞を比較します。

スフィンゴシン1 - リン酸タイプ1受容体アゴニストは、リンパ洞へ髄様T細胞の経内皮移動を抑制する

Nature Immunology. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16273098

スフィンゴシン1 - リン酸タイプ1（S1P（1））受容体アゴニストは、十分に理解されていないメカニズムによって二次リンパ器官におけるリンパ球の隔離を引き起こします。 1つの仮説は、そのアゴニストがリンパ球上のS1P（1）受容体を結合し、内在化によって "機能性拮抗薬"として作用する提案、第二の仮説は、S1P（1）アゴニストがリンパ節からリンパ球出口を防ぐために、内皮細胞に作用することの代わりに提案する。ここでは、S1Pで処理した後に植リンパ節にT細胞を生きた二光子イメージング（1）アゴニストまたはアンタゴニストは、どのS1P（1）アゴニスト関数によってメカニズムへの洞察を提供しています。運動は、びまん性皮質で不変であったのに対し、選択的なS1P（1）アゴニストSEW2871は、可逆減速充填髄質コードと空の副鼻腔の間にT細胞の "ログ·ジャミング"を引き起こした。副鼻腔の補充につながる質の内皮障壁間の移行の髄質と再開の実質のT細胞の運動性のSEW2871許可されて回復の除去またはアンタゴニスト競争。我々の結果はリンパ洞にT細胞の経内皮移動の視覚化を提供し、S1P（1）アゴニスト（1）受容体がリンパ球遊走を抑制するために血管内皮細胞のS1Pを中心に行動す​​ることを示唆している。

免疫系におけるセンス·オブ·プレイス

Nature Immunology. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16550194

レビューのこのシリーズは、免疫系の細胞の活性および機能能力に組織の環境の異なる効果を調べます。造血幹細胞としての起源から、その開発を通じて、成熟した細胞など、免疫系の細胞は、異なる専門性の高いニッチで自分自身を見つけて、抗原または炎症シグナルとの接触は、その表現型、活動と人身売買を変更します。二光子顕微鏡は、組織の環境で最初の直接生きた細胞の観察とその活性化の振り付けを提供していないと疑い、細胞動態と免疫機能のより深い理解を提供していきます。

流入は、Ca（2 +）リリース活性化のCa（2 +）チャネル活性を制御する遺伝子を識別し、CaのゲノムワイドなRNAiスクリーニング（2 +）

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16751269

私たちのグループおよびその他の最近の研究では、ストア作動性Ca（2 +）流入とCa（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）チャネル活性にスティミュラスの必須および保存された役割を実証した。ショウジョウバエS2細胞の公平なゲ​​ノムワイドなRNA干渉スクリーンを使用することによって、我々は今、強くタプシガルギンによって空店舗にCa（2 +）の流入を抑制した75のヒットを識別します。 - これらのヒット曲の中に貫通スティミュラスを含むタンパク質、およびRNA干渉によるノックダウンにタプシガルギン誘発のCa（2 +）のエントリとCRAC電流の深遠な減少を示し、過剰発現時3 1つ、olf186-Fを11と予測されるCRAC電流の倍に増強。 olf186-Fは、スティミュラスをコトランスフェクトされたときにCRAC電流がさらに制御よりも8倍以上に増加し、より迅速に開発されました。 olf186-Fは、4つの貫通は、線虫Caenorhabditis elegansからヒトへの相同体を有するタンパク質をスパニングツリーの高度に保存されたファミリーのメンバーである。小胞体（ER）のCa（2 +）ポンプsarco-/ERカルシウムATPアーゼ（SERCA）、および単一の膜貫通可溶性N-エチルマレイミド感受性（NSF）添付ファイルの受容体（SNARE）タンパク質Syntaxin5も、CRACチャネル活性に必要であったER内でのスティミュラスの感覚のCa（2 +）の枯渇、細胞膜へ移行しシグナル伝達経路と一致すると、CRACチャネル活性をトリガするためにolf186-Fと対話します。

イメージングリンパ球トラフィッキングと免疫応答の振り付け

Current Opinion in Immunology. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16765574

免疫システムの機能は、細胞成分との間の絶妙な振り付けの相互作用に依存します。二光子顕微鏡は細胞の運動性と無傷の組織や器官の奥深く細胞間相互作用、植調剤およびin vivoの両方を可視化することを可能にします。リアルタイムimmunoimaging技術は、携帯電話の検索方法、細胞間相互作用の複雑なダイナミクス、ミクロ解剖学的局在とリンパ球トラフィッキングを制御するためのランダムおよびケモカイン·ドリブン運動の役割を点灯しています。最近の進歩は、T細胞、樹状細胞の相互作用、T細胞-B細胞相互作用、およびリンパ節からリンパ球の出口の規制を調査研究に代表される、これらの研究分野で行われています。

生体内キラルS1P1アンタゴニストによってリンパ球Egressの毛細血管漏出と復元の強化

Nature Chemical Biology. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16829954

スフィンゴシン1 - リン酸（S1P 1）は、高親和性のS1P1受容体を活性化することによって、血管壁やリンパの開発だけでなく、リンパ器官からのリンパ球の出力を調節する。我々は、遺伝子操作を介してアクセスすることはできませんS1Pシステム組織に機械的な洞察を得るために、および（ii）治療の変調の可能性を調査する可逆化学プローブ（i）を使用します。マウス皮膚及び肺の毛細血管の完全性の損失を誘発した生体活性なキラルS1P1受容体拮抗薬での好ましいR鏡像異性体の血管（ただし、気道）の管理。対照的に、アンタゴニストは、構成血リンパ球の数に影響を及ぼさなかった。代わりに、リンパ球の人身売買と表現型の変化は、S1P1トーンの生理学的上昇が必要であり、拮抗薬で逆転した。リンパ節転移のin vivo二光子イメージングに嫌気アゴニズムの要件を確認し、データがゲートリンパ球の出口のために間質バリア機構の存在と一致していた。したがって、化学的変調は、組織間のS1P-S1P1 "セットポイント"の違いを明らかにし、治療的介入のメカニズムの利点は（リンパ球分画）とリスク（肺水腫）の両方を強調表示します。

往来の変異体における改変されたイオン選択性によるCRACチャネルの分子同定

Nature. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 16921385

最近のRNA干渉の画面は、ストア作動性Ca2 +流入とCa2 +放出活性化カルシウム+（CRAC）ショウジョウバエの膜貫通タンパク質のスティミュラス（間質相互作用の分子）と往来を含む哺乳動物におけるチャネル活性に不可欠ないくつかのタンパク質を同定した。スティミュラスは、おそらく内腔のCa2 +含量のセンサーとしての機能とCa2後の表面膜のCRACチャネルの活性化+ストアの枯渇をトリガします。 12番染色体上の往来の3つのヒト相同体（またolf186-Fとも呼ばれる）、ORAI1の中で重症複合免疫不全疾患の患者で変異することが発見され、野生型Orai1の発現は、患者のT細胞におけるCa 2 +流入とCRACチャネル活性を回復した。一緒にスティミュラスと往来の過剰発現が著しくCRAC電流を増加させます。しかし、スティミュラスや往来が実際にCRACチャネルを形成するかどうか、またはそれらの発現は、単に別のチャネルを形成するサブユニットによって媒介されるCRACチャネル活性を制限するかどうかまだ明確ではありません。ここでは、共免疫沈降により評価野生型スティミュラスと往来、間の相互作用を示しますが大幅にCa2 +のストア枯渇を誘導するタプシガルギンで処理した後に強化されています。部位特異的突然変異誘発により、我々は往来の保存S1-S2ループの位置180のグルタミン酸からアスパラギン酸への点変異は一価の陽イオンに対して選択的であることに内向き整流でのCa2 +選択的であることからCRAC電流のイオン選択性の特性を変換することを示していると外向き整流。同じ位置にある電荷中和変異は、（アラニンにグルタミン酸）ドミナントネガティブ非導電性のサブユニットとして機能します。同じループ内の他の電荷中和変異体は、大規模な内向き整流CRAC電流を表現し、これらの展示の2は、チャネルブロッカーGD3 +に対する感受性を減少させた。これらの結果は、往来自体はCRACチャネルのCa2 +の選択性フィルタを形成していることを示しています。

動脈スイッチ操作後のセグメント壁運動異常は、虚血を示す

Anesthesia and Analgesia. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 17056946

我々は前向きに分節壁運動異常（SWMA）が心筋虚血を表しているかどうかを判断するために動脈スイッチ手術を受ける29の連続した​​新生児を調査した。術中経食道心エコー図は、ベースライン時と二回心肺バイパス後に記録された。心筋トロポニンI（cTnI）レベルは、大動脈のクロスクランプを除去した後の胸骨切開と3、6、12、24、48、72時間前に測定した。即時術後のホルターと15リード心電図（ECG）は虚血を評価した。経胸壁心エコー図検査は退院前に得られた。バイパス終了時に、すぐにプロタミン投与後に、セグメントの壁運動は、20の9つの新生児と異常に正常であった。 SWMAは15新生児の胸の閉鎖の時点で5人に一過性と存在していた。 SWMAは、胸の閉鎖時に存在していた人で新生児はSWMAが一時的であった者でこれらの（P> 0.001）よりも関与して複数のセグメントを持っていた。胸の閉鎖でSWMAの新生児は正常壁運動（P = 0.02）の新生児に対し、術後に高いcTnIレベルを持っていた。術後の心電図データは26新生児で使用可能であった。通常の壁運動、一時的なSWMAを持つ5つの一つであり、胸の閉鎖でSWMAの13の9の2つの8つの新生児の心筋虚血の心電図証拠があった。 CTnI 12でレベル24、および48時間と術中SWMAは術後SWMAの予測因子であった。我々は、これらのデータは、動脈スイッチ操作の完了時に保持され、複数の心筋セグメントに存在するSWMAが、心筋虚血と相関していることを示すと信じています。これらの患者のフォローアップ、さらには増加した術中心筋虚血は、長期的な転帰と相関するかどうかを判断するために必要とされる。

経食道心エコーによる左心室グローバルおよび分節収縮機能の評価

Anesthesiology Clinics. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17342962

LVグローバルおよび分節収縮機能の評価は、周術期TEEの主なアプリケーションです。通例、これらのアプリケーションに使用される実用的な技術は限界があるが、彼らは手術室や集中治療室の設定で臨床医にそうでなければ利用できない機能の直接的な対策を余裕。

CRACチャネルの分子基盤

Cell Calcium. Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17482674

Ca（2 +）の細胞膜に位置して放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）チャネルは、許可、細胞内貯蔵からのCa放出（2 +）に開かれたCa（2 +）のエントリ、持続的な〔Ca（ 2 +）]（i）の多数の細胞型の店舗を補充シグナル。このメカニズムは、T細胞受容体の関与によって開始され、サイトカインや細胞増殖の生産に最終的に結果は遺伝子の発現の変化につながっているシグナル伝達カスケードにおけるミッシングリンクを提供し、免疫システムのTリンパ球では特に重要です。過去3年間に、過剰発現と部位特異的突然変異誘発法と一緒に、RNA干渉の画面はCRACチャネルを介したCa（2 +）の流入との細孔サブユニット（往来）へのリンクストア枯渇そのトリガ分子（スティミュラス）を同定した細胞内へのCa（2 +）イオンの選択性の高いエントリを可能にするCRACチャネル。

ナチュラルキラー細胞が積極的にMHC-不一致のターゲットを排除するために安定した複合体を形成する末梢リンパ節を巡回

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 17609379

ナチュラルキラー（NK）細胞は、血液の臓器内でMHC-不一致の目標を拒否することが知られている、まだ末梢リンパ組織におけるそれらの役割は未解決のままです。ここでは、ネイティブのリンパ組織の環境内のセルの速度との相互作用のダイナミクスを特徴づけるために2光子顕微鏡を用いたリンパ節（LN）内に移行するには、NK細胞の能力に対応しています。養子転送unmanipulated NK細胞は、非常に運動（6-7マイクロモル/ min）と同系および同種両方のB細胞との一時的なコンタクトを形成することが可能であった。安定した複合体の相互作用（持続> 5分）が減少した運動性と標的細胞のその後の除去の結果、同種細胞を優先的に形成されている。 unmanipulated細胞へのマークは対照的に、CD49b陽性選択により精製されたNK細胞は、限られた運動（2-3マイクロモル/ min）を示した。この速度障害が発生した主な理由CD49b架橋ノード内のコラーゲン繊維に強化されたNK細胞接着を。また、CD49b架橋は、in vitroでIL-2活性化をin vitroで標的細胞の溶解、および拡張IFN-γ応答を抑制し、in vivoにおけるエフェクター細胞傷害機能を再構成することから、NK細胞を防いだ。一緒に我々のデータは、NK細胞はLNの微小環境の機能的に重要なコンポーネントと、その細胞の運動性とエフェクター機能CD49b操作を介して強く変調であることを示している。

リンパ節における抗原軸受樹状細胞の初期の接点間にCD4 + T細胞におけるCa2 +の信号

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17641025

APCによるT細胞の活性化は細胞内Ca（2 +）が必要です（の[Ca（2 +）]（i））を上昇。二光子顕微鏡を用いて、我々は、Ca（2 +）シグナル伝達と運動性マウスのCD4（+）の制御下リンパ節（LN）植内T細胞、炎症、および免疫状態を可視化した。基底非炎症性の条件下でのAgがなければ、T細胞は持続的な減速に関連付けられているまれなのCa（2 +）のスパイクを示した。炎症減少速度とCa（2 +）は、特定のAgの存在下でスパイク。初期の銀との遭遇は、ほとんどのT細胞はクラスターのAg提示樹状細胞に従事し、Caの増加が認められた（2 +）の基底スパイク周波数と上昇した[Ca（2 +）]（I）。これらのCa（2 +）の信号にかかわらず、T細胞を可視化した樹状細胞と接触したかどうかの、数時間持続した。我々は、基底の持続的な増加は〔Ca（2 +）]（i）とスパイク周波数時間積分は、Ca（2 +）シグナル伝達のモダリティを構成し、ネイティブリンパ球環境の基底状態からの免疫原性を区別すること。提案

クラスIAホスホイノシチド3 - キナーゼはリンパ節に基底リンパ球の運動性を調節する

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17675487

細胞膜にPI3Kの動員は、通常のリンパ球の増殖と活性化に不可欠なステップです。本研究では、無傷のリンパ節に基底TおよびBリンパ球の運動とホーミングを維持するための重要なシグナル伝達分子としてPI3Kを識別します。 PI3Kの触媒アイソフォームの薬理学的阻害は、ホーミング動態の変化、リンパ節内でB細胞の局在と、細胞の減少速度を含む基底リンパ球運動に幅広い効果を発揮。クラスIA PI3Kの調節サブユニットp85alphaとp85betaのいずれかまたは両方に欠損リンパ球はまた、細胞の種類やアイソフォーム特異性の両方に依存して減少の大きさと、減少速度を示した。 p85alpha欠損B細胞は、PI3K阻害剤で処理した細胞では明らかでなかった総形態異常を示した。我々の結果は、初めて、そのクラスのIA PI3KsはPI3K触媒機能の独立した方法で、B細胞の形態を維持するために必要とされる基礎的リンパ球の運動とそのp85alpha調節サブユニットの発現の調節に重要な役割を果たして、表示​​されます。さらに、リンパ球の運動、ホーミング、成熟した休止期のB細胞の恒常性局在の触媒ドメインの関数やクラスIA PI3Kの調節ドメインの活動のために別個の役割を示しています。

専門分野認定：特別グッドされていますか？

Current Opinion in Anaesthesiology. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 17989552

アクションのコースをお勧めするために - 患者、ジェネラリスト麻酔、超専門医麻酔科、麻酔科の部門、および全体としての社会 - 私たちは、5つの有利な点から麻酔の認証の追加専門分野の利点と欠点を検討した。

細胞運動との相互作用ダイナミクスの振り付けは、リンパ系器官における二光子顕微鏡によるイメージング

Annual Review of Immunology. 2008  |  Pubmed ID: 18173372

免疫システムは体内で最も拡散セルラーシステムである。したがって、局所的な化学シグナルによって、細胞間接触によって細胞と短距離通信の長距離移行は免疫応答の制御に不可欠である。リンパ器官、抗原認識、細胞シグナリングとアクティベーション内の細胞のホーミングと移行は、免疫応答の間に明らかに不可欠であるが、最近までこれらのイベントは直接in vivoで観察されていませんでした。 2002年には免疫学の分野に導入され、二光子顕微鏡は、ネイティブの組織環境の奥深くに、生きた細胞を可視化するための最適な方法であり、それは今の抗原チャレンジに対する適応免疫応答の基礎となるエレガントな携帯電話振り付けを明らかにされています。我々は、細胞動態とリンパ節におけるリンパ球と抗原の取り込みと認識、T細胞の活性化、B細胞活性化、細胞傷害性エフェクター機能、および抗体の生産につながる細胞の相互作用の基礎的運動に寄与する分子要因を確認してください。

Orai1とSTIM1 T細胞の活性化の間に免疫学的シナプスに移動し、アップレギュレートしています

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18250319

免疫応答の効率的な開発のため、Tリンパ球がカルシウム放出活性化カルシウム（CRAC）チャネルと抗原提示細胞（APC）との安定した免疫シナプス（IS）の形成を介して長期的なカルシウム流入を必要とします。最近のRNAiの画面は、T細胞ではCRACチャネル活性化のための必須STIM1とOrai1をショウジョウバエの細胞内でスティミュラスと往来を同定し、それらに対応する哺乳類ホモログています。ここでは、STIM1とOrai1は、プライマリヒトT細胞と自己樹状細胞間の免疫シナプスに動員されることを示している。 STIM1および休止またはスーパー抗原（SEB）前処理T細胞とそれらがT細胞受容体（TCR）と共刺激分子と共局在したSEB-パルス樹状細胞のいずれかとの接触面積に蓄積されOrai1両方。さらに、EGTAを搭載したT細胞のシグナル伝達、細胞内カルシウムのイメージングは​​、T細胞/樹状細胞の接触面積に局在するCa2 +の流入を示し、有意に高いCa2 +の界面近傍の濃度を明らかにした。ドミナントネガティブOrai1変異体の発現はT細胞のCa2 +シグナル伝達を遮断しますが、接触ゾーン内のSTIM1、Orai1と、CD3の初期蓄積を妨げることはありませんでした。活性化T細胞芽球、内因性のSTIM1のmRNA発現と往来の3つのすべてのヒト相同体であったアップレギュレーション、CRACチャネルを介したCa2 +流入の著しい増加を伴う。これらの結果は初期のTCR信号は、その後の抗原との遭遇のCa2 +シグナル伝達を増強するでしょうSTIM1と往来タンパク質のアップレギュレーションを支持する正のフィードバックループを意味しています。

人間Orai1とOrai3のCa2 +放出活性化Ca2 +チャネル活性を調節ストア依存性および非依存性モード

The Journal of Biological Chemistry. Jun, 2008  |  Pubmed ID: 18420579

我々は、ヒト胎児腎臓細胞のSTIM1と一緒に往来のヒト相同体の発現によって誘導電流を評価した。 STIM1と共発現する場合、Orai1は、Ca（2 +）によって誘発される遅い不活性化で大きな内向き整流性のCa（2 +）選択的電流を誘導した。内向き整流性のIV特性を維持しながら、Orai1（E106D）の点突然変異が誘発Ca（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）のような電流のイオン選択性を変化させた。 Orai1とSTIM1のC末端部分の表現は、ストア枯渇せずにCRAC電流を生成するのに十分であった。 2-APBは、STIM1とOrai3共発現細胞では大規模な比較的非選択的な電流がアクティブになります。 2-APBまた、ストアの枯渇またはSTIM1の共発現することなくOrai3発現細胞におけるCa（2 +）の流入を誘発した。 2-APBによって誘導されるOrai3電流は外向き整流および混合カルシウムと現在の一価を表す内部コンポーネントを示した。 Orai3の細孔変異体は、ストア作動性Ca（2 +）のエントリを抑制し、ストアの枯渇または2-APBの追加のいずれかに応答して、大きな電流を運ばなかった。 Orai1-3キメラの​​一連の分析はOrai3の第三の膜貫通セグメントの2番目からシーケンス内の2-APB-誘導電流の責任構造の決定要因を明らかにした。 2-APBによって誘導されるOrai3電流が相対的に非選択性陽イオン空孔を開き、CRACチャネル活性化のストアに依存しないモードを反映している可能性があります。

周術期の心エコー図：二次元および三次元アプリケーション

Anesthesiology Clinics. Sep, 2008  |  Pubmed ID: 18765215

周術期の心エコー検査は、今日の心臓麻酔科医と専門分野の将来のための技術革新と業績の原動力のために不可欠なスキルです。リアルタイム三次元経食道心エコー検査（RT3-D TEE）は、心エコー検査を対比するように、周術期の心エコー検査の今後の実践が、経胸壁心エコー（TTE）アプリケーション内で成長するを支配する。ハンドヘルドultrasonongraphsは、機能で現在のマシンに匹敵する、それが可能TTEは心臓麻酔科医の将来の聴診器になるのを行います。

CRACチャネルは往来ダイマーのスティミュラス誘起二量体化によって形成された四量体の構成されてい

Nature. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 18820677

のCa（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）チャネルが小胞体からのCa（2 +）の解放（ER）の後にリンパ球および他の多くの細胞内シグナル伝達持続のCa（2 +）の根底にある。 RNA干渉スクリーニングは、一緒にCRACチャネル活性の分子基盤を形成して識別される2つのタンパク質は、スティミュラスと往来に近づく。細胞膜に隣接する接合にERから転位によってERのCa（2 +）ストアと物理的にリレーのスティミュラスの感覚の枯渇、この情報と往来は、原形質膜カルシウムチャネルのポアを体現しています。共免疫沈降さとフェルスター共鳴エネルギー移動によって識別スティミュラスと往来の間に密接な相互作用は、往来のサブユニットによって形成されるのCa（2 +）チャネルの開口部に関与​​している。ほとんどのイオンチャネルは、小胞体内で組み立てられ、原形質膜への最終的な化学量論で輸送され、中央のチャネルを、周囲の細孔を形成するサブユニットの多量体である。ここでは、往来は主に安静時の条件の下で原形質膜の二量体、すなわち、細胞ライセートと無傷の細胞で架橋後の生化学的解析により、クロスリンクすることなく、非変性ゲル電気泳動を用いて、表示されます。また、緑色蛍光タンパク質の1分子イメージング（GFP）タグ付き往来アフリカツメガエル卵母細胞で発現さは二量体の基底状態と再び一貫性のある、主に2つのステップの退色を示した。対照的に、punctaeに往来のCa（2 +）ストアの枯渇やクラスタリングを誘導することなく往来チャネルをアクティブにするにはサイトゾルタンパク質として、スティミュラスのカルボキシ末端のGFPタグ付きの往来の共発現では、と一貫し、主に4段階の光退色をもたらしたアクティブな往来チャネルの四量体化学量論。スティミュラスのC末端との相互作用は、このようにCa（2 +）の選択的な細孔を構成する二量体、四量体形成に往来二量体を誘導する。これは、アセンブリと機能イオンチャネルの活性化は、同じトリガ分子によって媒介される新しいメカニズムを表しています。

トラッキング樹状細胞およびプライミングin Vitroおよびin Vivoでの免疫応答の量子ドット

PloS One. 2008  |  Pubmed ID: 18820727

樹状細胞（DC）は、リンパ系器官におけるT細胞に抗原を提示することによって、適応免疫応答を開始するのに重要な役割を果たしている。ここでは、in vitroおよび樹状細胞のin vivoイメージング用蛍光ナノ粒子として量子ドットのポテンシャル（量子ドット）を調査し、粒子ベースの抗原デリバリーシステムとしてDC-媒介性免疫応答を増強する。我々は、DCにQDの取り込みを可視化するために、共焦点顕微鏡、二光子、電子microscopies使用され、無料の抗原または抗原に応答して、CD69の発現、T細胞の増殖、およびin vivoでDO11.10とOT-II T細胞によるIFN-γ産生を比較量子ドットへの標識。 CD11cは（+）のDCは熱心にして優先的に最初にアクチン依存性の機構によって細胞膜の近くの小さな小胞に、量子ドットをエンドサイトーシス。 10分樹状細胞内の大きさ、動き、細胞質全体に分散明るさを変化させた小胞が含まれていました。後の時代では、エンドサイトーシス量子ドットは、リソソームの内部に区画された。樹状細胞のLPS誘導性成熟は、エンドサイトーシスの速度と量子ドットを取って細胞の割合を減少させた。アジュバントデポ内の量子ドットの皮下注射に続いて、量子ドットをエンドサイトーシスした樹状細胞はリンパ節を排出するの奥深くに400マイクロモルまで可視化した。抗原 - 結合量子ドットを用いた場合、T細胞は樹状細胞と接触して安定したクラスターを形成した。抗原 - 結合量子ドットは、CD69発現、T細胞の増殖、無料抗原に相当する額以上の効率で生体内でのIFN-γ産生を誘導した。これらの結果は、樹状細胞のimmunoimagingとプライミング免疫応答のための効率的なナノ粒子ベースの抗原デリバリーシステムとしてのための汎用プラットフォームとして量子ドットを確立します。

Kv1.3チャネルのブロックによる遅延型過敏反応と抑制の間にエフェクターメモリーT細胞のイメージング

Immunity. Oct, 2008  |  Pubmed ID: 18835197

エフェクターメモリーT（TEM）細胞が自己免疫疾患、遅延型過敏（DTH）、炎症反応のTEMセルへの参加の二光子イメージングのための便利なモデルの重要なメディエーターである。まもなく（3時間）抗原感作耳組織、安定した抗原軸受抗原提示細胞（APC）に接続されたTEMセルへのエントリの後に。 24時間後、拡大したTEMセルでは、コラーゲン繊維に沿って非常に運動したと18時間急速に移行し続けた。 TEMセルは、カルシウムシグナル伝達を調節するために電位依存性カリウムチャンネルKv1.3に依存しています。 SHK-186は、特定のKv1.3ブロッカー、炎症組織におけるDTHおよび抑制TEMセルの拡大と運動性を阻害したが、ナイーブとセントラルメモリーT（TCM）は、細胞のリンパ節へのホーミングや運動性に影響を及ぼさなかった。 SHK-186は実質的に多発性硬化症のラットモデルで病気を治療した。これらの結果は、末梢組織における炎症性免疫応答間にテム細胞におけるKv1.3チャネルの要件を示しています。中央メモリー応答が無傷のままながら、エフェクターメモリーの応答が抑制されるためにKv1.3を標的とすることができます。

特発性肺動脈性肺高血圧症に関連付けられているTRPC6遺伝子プロモーターの機能的一塩基多型

Circulation. May, 2009  |  Pubmed ID: 19380626

肺動脈平滑筋細胞の過剰増殖は（PASMCs）、特発性肺動脈性肺高血圧症（IPAH）の開発において重要な役割を果たしている細胞質内カルシウムの上昇に対し、+濃度がPASMC収縮をトリガーとPASMC増殖を刺激する。最近、我々は、TRPC6チャネルのアップレギュレーションは、IPAH患者から分離されたPASMCsの増殖に寄与して実証した。本研究では、IPAHに関連付けられているTRPC6遺伝子プロモーター内の単一塩基多型（SNP）を識別し、PASMCsでTRPC6の活性の調節に機能的意義を持つように努めた。

ストア作動性Ca（2 +）のエントリを刺激する

Nature Cell Biology. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19488056

細胞膜ストア作動性Ca（2 +）（SOC）チャネルを介してカルシウム流入がトリガーされたときに小胞体（ER）のCa（2 +）ストアが枯渇している - 恒常性のCa（2 +）以上の謎めいたままでのシグナリング機構二十年。 RNA干渉（RNAi）をスクリーニングと分子細胞生理学的な分析は、最近、ERと細胞膜との間のメカニズム "ミッシングリンク"としてSTIM1を同定した。 STIMタンパク質が小胞体からのCaの枯渇（2 +）を感知し、オリゴマー、原形質膜に隣接する接合部に転位置、往来またはTRPC（一過性受容器電位陽イオン）のクラスターにチャンネルを編成し、SOCのエントリをもたらすために、これらのチャネルを開きます。

Tリンパ球におけるイオンチャンネルの機能ネットワーク

Immunological Reviews. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19754890

25年以上にわたり、それは広くのCa2 +流入がTリンパ球活性化をトリガーすることが不可欠であることが理解されています。ブロッカーと遺伝子操作を用いたパッチクランプ法、分子の同定、および機能の研究では、イオンチャネルのユニークな偶発的に開始、強度、およびCa2 +シグナルの持続時間を調整することを示した。 Kv1.3、KCa3.1、Orai1 +間質相互作用の分子1（STIM1）のCa2 +放出活性化カルシウム（CRAC）チャネル]、TRPM7、およびCl（うねり） - - イオンチャネルの5つの異なったタイプは、実行するネットワークを構成する免疫調節のための潜在的なターゲットを提供する継続的な細胞の恒常性およびT細胞活性化のための重要な機能。最近では、STIM1とOrai1の役割は、T細胞受容体の関与は、次のCRACチャネルをトリガと形成に明らかにされている。 Kv1.3、KCa3.1、STIM1、Orai1とは、抗原提示細胞との接触後に免疫シナプスでのクラスタに発見された、我々は、シナプスでのチャネルがローカルシグナリングを調節するために機能するかもしれない方法について説明します。免疫イメージングのアプローチは、生体内でのイオンチャネルの機能に光を当てるために始めています。重要なのは、Ca2 +とK +チャネル、したがって、機能的なネットワークの発現パターンは、分化と活性化の状態に応じて適応することができ、これが特異的に標的する免疫応答のさまざまな段階を可能​​にします。

心臓手術におけるルーチンのトランス食道心エコー（TOE）の影響

Best Practice & Research. Clinical Anaesthesiology. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19862886

トランス食道心エコー検査（TOE）は、深く心臓手術や心臓anaesthesiologistの役割を変更しました。それはかなり現代的な心臓手術の安全性と有効性を進んでいる心臓麻酔と心臓外科医の間でリアルタイムの診断と意思決定のパートナーシップの原動力となっています。 TOEによって提供される情報で、麻酔し、外科医は罹患率と死亡率を減少させるために心臓手術患者のケアをリダイレクトすることができます。その結果、ルーチン術中TOEは、多くの心臓手術の慣行の期待である。いくつかの同僚は、TOEはすべての心臓手術患者では日常的に使用されるべきかどうかを疑問視し続けている間、我々はそれが心臓病患者のTOEは、極めて重要な新しい情報を発見している予測することは不可能であると信じています。したがって、我々はプローブと食道計装への禁忌が存在しない場合に、TOEはすべての心臓手術患者で実行する必要がありますことをお勧めします。ルーチンTOEの使用と、TOEは、その最大の利点があります。

ドナー由来樹状細胞のNK細胞パトロールと除去は、間接的な同種反応性を支持

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20139277

ドナー由来の樹状細胞（DC）で表される外国のMHC分子の直接表示は、一般的に急性移植片拒絶反応でallorecognitionの主要な経路と考えられてきた。しかし、最近の研究では、ホストDCによる間接的な経路の選択的活性化を巻き込む。各経路のそれぞれの重要性とその相対的な寄与を決定するメカニズムが明確に確立されていない。本研究では、二光子顕微鏡を用いて、マウスの無傷のリンパ節内で同系および同種DCと宿主NK細胞の相互作用を可視化した。同種の樹状細胞と接触すると、NK細胞は細胞溶解をターゲットに直接つながった長期の相互作用を形成した。この急速な除去は、主刺激とT細胞応答をリコールするために同種の樹状細胞の能力を制限されています。ドナーまたはホストDCは主に同種移植から派生したAgを提示に関与しているかどうかを区別するために、我々は、条件付きのCD11c（+）のDCを切除し、ドナー樹状細胞によって、その直接のプレゼンテーションを表示するにはCD11cは、ジフテリアトキソイド受容体のマウスを使用すると、急性移植片拒絶反応を引き出すためだけでは不十分です。 。そこで我々は、その同種の樹状細胞の迅速な除去は直接銀プレゼンテーションを制限し、それによって同種反応性の間接的な経路を支持する提案する。

免疫学的シナプス：ローカルシグナリングのためのダイナミックなプラットフォーム

Journal of Clinical Immunology. May, 2010  |  Pubmed ID: 20390326

概念としての免疫学的シナプス（IS）はT細胞およびそれらの抗原提示細胞のパートナーとの間の接合部の静的なビューから進化してきました。形成と絶滅ISの全体のプロセスは、現在、これらのドメインの内で、隣接する膜ドメインとタンパク質の動的な再編成を伴うことが知られています。 DISCUSSION：この機械は、T細胞受容体の関与する前に、 "スキャン"し、それがISで進行中の開発中に充当されている指示として、全体のプロセスも複雑に運動機械の両方に接続されています。シナプスは、しばしば新しい抗原提示面の監視を促進するために動的なままで、細胞骨格の力は、おそらくイオンチャネルのアセンブリを含む、信号の開発を規制しています。神経と免疫の両方のシナプスでは、ローカライズされたCa2 +の信号とマイクロドメイン中のイオンの蓄積や枯渇はシナプスでシグナル伝達分子の濃度を伴う。シナプスのような時空シグナリングは大幅に速度を加速し、効果的な細胞間コミュニケーションを検証するために不可欠なチェックポイントを提供します。

Th1細胞とTh2-偏光アジュバントによる皮膚樹状細胞およびランゲルハンス細胞の選択とサイト固有の動員

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. May, 2010  |  Pubmed ID: 20404167

樹状細胞（DC）が機能的転帰を変化させることに向かって適応免疫応答を開始し、二極化。生体2光子顕微鏡を用いて、我々は、真皮樹状細胞（DDCS）とランゲルハンス細胞（LC）は差動接触感作時とTヘルパー1型（を誘発するような非メチル化CpGオリゴヌクレオチド（CPG）とLPSなどのアジュバントによって動員されているレポートTH1）応答、またはパパインTヘルパー2型（TH2）応答を誘導する。増加した運動性と樹状プロービング、監督移行、およびリンパ管への参入：耳介、接触感作は、CpG、LPS、および3つのフェーズのすべての動員をDDCをパパインである。同じ治療中は、耳介内の隣接するLCは、観測の48時間の期間にわたって動けないままであった。対照的に、足蹠を選択48時間後のLCの遅延動員を誘導DDCをおよびTh1偏光アジュバントを欠いていた。耳の予防接種は、サイト固有のDCの分布と動態と相関し、Th2の偏光を好むのに対し、CD4のTh1分極（+）T細胞は、接種部位とは無関係であった。我々の結果は、アジュバントへの応答における末梢DCダイナミクスの初期説明を提供し、LC動員はTh1応答を増強し、Th2応答を引き起こすのに十分ではありませんが、単独でDDCの動員は、T細胞増殖を引き起こすのに十分であるのに対し、初期の分極することを意味Th2反応に向かってT細胞活性化。

細胞生物学。カルシウムチャネルを刺激する方法

Science (New York, N.Y.). Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20929798

Mzb1タンパク質は、自然のようなB細胞のカルシウムの恒常性、抗体分泌、およびインテグリンの活性化を調節する

Immunity. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 21093319

辺縁帯（MZ）のB脾臓およびB1細胞の細胞と呼ばれる先天性のようなB細胞は、その減衰のCa（2 +）の動員、高速抗体分泌、および増加した細胞接着による濾胞性B細胞とは異なります。我々は、最も豊富にMZ BとB1細胞で発現させた小胞体にローカライズされたAとB細胞特異的タンパク質としてMzb1を同定し、特徴とする。 MZ B細胞のMzb1のノックダウンは、Ca（2 +）の動員および核NFAT転写因子の局在を増加したが、リポ多糖誘発性抗体分泌とインテグリン介在細胞接着の低下。逆に、末梢T細胞のLckが、Mzb1遺伝子の異所性発現が減衰のCa（2 +）の動員と拡張インテグリン介在細胞接着をもたらした。基質特異的シャペロンGRP94、Mzb1との相互作用に加えて、それらの活性コンフォメーションにおけるインテグリンの発現を支持するの酸化還元酵素ERp57の機能を増強。したがって、Mzb1は、Ca（2 +）を格納し、抗体分泌、およびインテグリンの活性化を調節することにより、末梢B細胞の機能を多様化するのに役立ちます。

プロテインキナーゼDは、TCR誘導性のCa2 +流入とミトコンドリア活性酸素生成に応答するDRAK2のアクティベーションを調整

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21148796

DRAK2は、T細胞活性化のためのしきい値を上げ、生産性のアクティベーション後にT細胞の生存を維持する非常にリンパ球が濃縮されたセリン/スレオニンキナーゼである。 DRAK2を欠いているT細胞は、次善の条件の下で活性化しやすいとAGR刺激に強化されたカルシウム応答を示す。それにもかかわらず、DRAK2を欠損したマウスが故障している自己反応性T細胞の生存に起因する臓器特異的自己免疫疾患に耐性である。 DRAK2キナーゼ活性はAGRシグナリングによって誘導し、本研究で我々はDRAK2活性の誘導がOrai1サブユニットから形成されるのCa（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）チャネルを介してCa（2 +）の流入が必要であることを示しています。構成的に活性な変異体はPKD DRAK2機能を促進する一方、プロテインキナーゼD（PKD）阻害剤Gö6976またはキナーゼデッドPKD変異体の発現とDRAK2活性の遮断は、DRAK2の活性化を抑制した。 T細胞におけるPKDのノックダウンが強くCa（2 +）の流入によってDRAK2の活性化に必須の中間体としてPKDが関与しTCRライゲーション後に内因性のDRAK2活性化をブロックされています。さらに、我々はPKDの新規基質としてDRAK2を識別し、DRAK2とPKDが物理的にPKDを有効な条件下で相互作用することを示している。反応性酸素中間体のミトコンドリアの生成が必要とCa（2 +）の流入に対応してDRAK2活性化のために十分であった。 T細胞活性化後にカルシウムの恒常性を制御する新規のシグナル伝達モジュールはDRAK2とPKD形式、一緒になって。

Immunoimagingのために移入と細胞標識に一般的なアプローチ

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285265

イメージング抗原提示細胞/ T細胞相互作用の免疫応答の誘導

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285266

その場リンパ節イメージングで

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285267

生体内リンパ節イメージングで

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285268

Immunoimaging：二光子顕微鏡を用いた免疫系のダイナミクスを研究する

Cold Spring Harbor Protocols. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21285279

イメージング移植拒絶反応：新規ビュー

Nature Medicine. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21647143

その場およびin Vitroで撮像されたナチュラルキラー細胞の一過性の移行挙動の解析

Integrative Biology : Quantitative Biosciences from Nano to Macro. Jul, 2011  |  Pubmed ID: 21687858

我々は、タイムラプス蛍光顕微鏡データからのリンパ球遊走の迅速かつ自動特性評価するための単純な手法を提案する。タイムラプスin vitroおよびin situでナチュラルキラー（NK）細胞のイメージングは​​、両方の個々の細胞は一過性の移行挙動を変更することが明らかになった。一般的に、NK細胞は、低速の移行またはほぼ完全に逮捕の過渡期間によって中断され、高い運動性の期間を示した。 in vitroデータの分析は、これらの期間は頻繁に、時には細胞溶解をターゲットにつながる、標的細胞との接触と一致することを示した。しかし、NK細胞はまた、一般的に他の細胞とは独立の接触を停止することが観察された。客観的にNK細胞の遊走を特徴づけるために、我々は、NK細胞は、低運動能を停止したり、持っている場合を区別するための単純なメソッドを実装し、監督の移行期間を持っているか、ランダムな動きを受けています。これは、スライディングウィンドウアプローチを用いて、時間をかけて個々のNK細胞からの軌跡に沿って移行係数とMSD曲率を評価するために、平均二乗変位（MSD）を評価し実現しました。ここで紹介する方法は、迅速かつ定量的にアンサンブル内の個々の細胞のダイナミクスと同様に不均一性を評価するために使用することができます。さらに、それはまた、自動的に免疫シナプス、細胞分裂や細胞死の形成に起因する過渡停止を検出するためのツールと​​して使用することができます。我々は、これはほとんどの細胞と同様に、細胞外マトリックスは、通常、非標識ので、目に見えないされている現場タイムラプス蛍光イメージングデータの解析に特に有用であることを示している。

Orai1膜貫通領域の変異アルギニン91時Orai1グリシン98でチャネルおよびチャネルの閉鎖の1原因STIM1依存しないアクティベーション

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21987804

スティミュラスと往来するタンパク質は、Ca（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）チャネルの分子機構を構成しています。 Orai1チャネルのゲーティングを理解するためのアプローチとして、我々は最初の膜貫通セグメント（TM1）の2つの保存されたサイトで選択された変異の影響を調べた：アルギニン91 TM1の中央付近に、TM1およびグリシン98の細胞質ゾルの終わり近くに位置しています。 STIM1と共発現Orai1 R91Cは、Ca（2 +）のストアの枯渇により正常に活性化された。ジアミド、チオール酸化剤、隣接したOrai1ユニットでR91C残基と急速にブロックされたSTIM1-作動性Ca（2 +）電流との間​​のジスルフィド結合の形成誘導による治療。ジアミド誘発ブロッキングはジスルフィド結合還元剤によって逆転した。これらの結果は、R91は、細胞質側で行って細孔の非常に狭い部分を形成することを示しています。 G98のアラニン置換は、STIM1誘起チャネル活性を抑制した。興味深いことに、アスパラギン酸（G98D）またはプロリン（G98P）に変異がSTIM1に依存しない方法で構成チャネルの活性化を引き起こした。両方Orai1 G98変異体は、非選択性のCa（2 +）透過性のGd（3 +）で遮断することは比較的耐性であったコンダクタンスを形成した。二重変異体R91W/G98Dは、重症複合免疫不全（SCID）と一部の患者で見つかった91の位置にトリプトファンによるチャネル活性の正常な抑制を克服し、また構成的に活性であり、二重変異体R91C/G98Dはジアミドブロックに耐性であった。これらのデータは、チャネル孔が拡大され、イオン選択性は、その可能性摂動α-ヘリックス構造G98のサイトでの変異によって変更されることを示唆している。我々は、チャネルの狭い内側の口の中で物理的なゲートの一環として、ゲートのヒンジとしてG98とR91のための異なった機能的な役割を提案する。

閉じた状態と開いた状態における人間のOrai1とOrai3チャネルのサブユニットの化学量論

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21987805

我々はEGFPでタグ付けされ、哺乳動物細胞で発現したヒトOrai1とOrai3チャンネルの化学量論を調査するために退色単一分子を適用した。 Orai1は、安静時の条件下で二量体としてのCa（2 +）の流入を有効にするにはC-STIM1と共発現量体として主に検出されました。 Orai1は、STIM1と共発現させ、次の固定を評価されたときに四量体であることが判明した。我々は、固定が急速のCa（2 +）、細胞膜にSTIM1の再配布、およびSTIM1/Orai1涙点形成の放出を引き起こす示し、チャネルが活性化状態になることがあります。この可能性と一貫性、Orai1は、安静時の条件の下で生きている細胞でSTIM1と共発現量体として主に発見されました。我々はさらにOrai3は、Orai1のように、安静時の条件の下で二量体であり、C-STIM1によって活性化されると主に四量体であることを示している。興味深いことに、二量体Orai3化学量論は、そのSTIM1独立モードでの非選択性陽イオンコンダクタンスを有効にするには、2 aminoethyldiphenylホウ酸（2-APB）の適用前と中の両方で発見されました。我々は、人間のOrai1とOrai3チャネルが2-APBによる活性化時の二量体の非選択性陽イオン空孔ストア作動アクティベーション時とOrai3形成することのCa（2 +） - 選択的な細孔を形成する二量体から四量体遷移を受けると結論付けている。

CD95トリガーOrai1媒介ローカライズされたCa2 +流入は、プロテインキナーゼCの募集（PKC）β2を調節し、死誘導シグナル複合体形成を防止

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Nov, 2011  |  Pubmed ID: 22065776

死の受容体CD95は、免疫監視や免疫寛容に重要な役割を果たしている。ターン集約におけるカスパーゼ-8およびカスパーゼ-10アダプタータンパク質Fas関連デスドメインタンパク質（FADD）の募集にCD95リードにCD95Lの結合。死誘導シグナル複合体（DISC）として知られているCD95/FADD/caspase複合体の効率的な形成は、アポトーシスの誘導で最高潮に達します。我々は、CD95Lに曝された細胞は、Ca（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）チャネルOrai1と小胞体常駐活性化間質相互作用の分子1にCD95と共局在するマイクロプラズマ膜の再編成を受けることを示しているチャネルは、カルシウムの偏エントリを誘発したサイズのクラスタ。ドミナントネガティブ構築物（Orai1E106A）のOrai1ノックダウンと式（2 +）CD95婚約、Orai1ドリブンローカライズされたCa（2 +）の流入はCaを募集しての基本であることを明らかにした依存性プロテインキナーゼC（PKC）のβ2 DISC。順番にPKCβ2は、一時的にカスパーゼの活性化とアポトーシスシグナルの伝達を防止するため、非アクティブな状態での複合体を保持しています。本研究ではCD95シグナルの初期段階の遅れ位相を導入し、Caの生物学的役割（2 +）と一時的な負帰還ループを駆動Orai1チャネルを識別します。我々は、これらのローカライズされたイベントは、偶発的細胞死を防ぐために、意思決定の時間を提供することをお勧めします。