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Articles by Michael Petrascheck in JoVE
JoVE General
Misura Caenorhabditis elegans Life Span in 96 piastre per microtitolazione Bene
1Department of Chemical Physiology, The Scripps Research Institute, 2Department of Molecular and Experimental Medicine, The Scripps Research Institute
In questo protocollo vi presentiamo un metodo per misurare
Other articles by Michael Petrascheck on PubMed
Polarità Di Organo in Arabidopsis. UGELLO Interagisce Fisicamente Con I Membri Della Famiglia YABBY
Pianta organi laterali presentano polarità adassiale abbagliai e prossimale-distale. In Arabidopsis, destino abbagliai cella è regolata in parte da fattori di trascrizione putativo della famiglia YABBY, come fiore FILAMENTOSE (FIL) e INNER NO esterno (INO), con un meccanismo che attualmente non è pienamente compresa. UGELLO (NZZ) codifica per una proteina nucleare impianto specifico. Prove genetiche ha dimostrato che la NZZ è coinvolto nella regolazione feedback positivo di INO, quindi agisce sia come un repressore spaziale e temporale della trascrizione di INO. Questo meccanismo consente i primordi ovulo completare la sua organizzazione prossimale-distale, prima dell'inizio dello sviluppo adassiale abbagliai nella Calaza. Durante il nostro studio, abbiamo isolato il FIL in una schermata del due-ibrido lievito utilizzando NZZ come esca. Esperimenti di pull-down in vitro hanno confermato l'interazione NZZ-FIL. NZZ legato anche INO e YABBY3, suggerendo che la NZZ generalmente interagisce con proteine YABBY in vitro. La regione polare carica della NZZ era necessaria e sufficiente per associare a zinc finger di INO e di interagire con capolinea C che trasportano il dominio come gruppo ad alta mobilità. Suggeriamo che NZZ coordinate patterning prossimale-distale e polarità adassiale abbagliai istituzione nell'ovulo sviluppo legandosi direttamente a INO.
Tempra Accumulo Di Galattosio-1-fosfato Tossico Come Un Sistema Per Selezionare Interruzione Delle Interazioni Della Proteina-proteina in Vivo
Il sistema di due-ibrido inverso è stato sviluppato per identificare prontamente molecole o mutazioni che possono disturbare le interazioni della proteina-proteina in vivo. Questo sistema è generalmente basato sull'attivazione di un gene reporter, cui prodotto inibisce la crescita della cellula lievito ingegnerizzato interazione-dipendente. Così, perturbazione dell'interazione tra le proteine ibride può essere positivamente selezionati perché, riducendo l'espressione del gene marcatore negativo, permette una crescita cellulare. Sebbene diversi geni marcatori counter-selectable sono attualmente disponibili, loro applicazione nel sistema due-ibrido inverso generalmente si confronta con i problemi tecnici e pratici quali bassa selettività e relativamente complesse procedure sperimentali. Così, la caratterizzazione dei saggi counter-selection più affidabile e semplice per il sistema di due-ibrido inverso continua ad essere di interesse. Abbiamo sviluppato un saggio counter-selection romanzo basato sulla tossicità del intracellulare galattosio-1-fosfato, che si accumula sulla espressione di un gene del reporter GAL1 codifica galattochinasi in assenza di attività trasferasi. Ridotta espressione del gene GAL1 sulla dissociazione delle proteine interagenti provoca riduzione delle concentrazioni di galattosio-1-fosfato intracellulare, permettendo così la crescita delle cellule in condizioni selettive.
Ciclo Del DNA Indotta Da Un Rinforzatore Di Transcriptional in Vivo
Rinforzatori sono sequenze di DNA che possono attivare la trascrizione del gene da posizioni remote. In lievito, sequenze regolatrici che sono funzionalmente equivalenti per i rinforzatori metazoi sono chiamati sequenze di attivazione a Monte (UASs). UASs mostrano un basso grado di flessibilità rispetto ai loro omologhi di metazoi, ma tuttavia può attivare la trascrizione da una distanza di > 1000 bp dal promotore. Uno dei vari modelli per il meccanismo d'azione dei rinforzatori transcriptional propone che associato a enhancer attivante proteine fattori di trascrizione associati a promotore di contattare e quindi ottenere in prossimità della regione del promotore con looping concomitante del DNA frapposizione. Abbiamo testato la modalità dell'attività enhancer in lievito. Un gene della polimerasi II-trascritto è stato accoppiato con un rinforzatore remoto, viscoelastico. Accanto al promotore per monitorare le potenziali modalità di attività enhancer è stato inserito un sistema di reporter indipendente. I nostri risultati mostrano che il rinforzatore attivato il sistema di reporter solo in presenza di un promotore funzionale. Abbiamo anche dimostrare che l'espressione eterologa di GAGA, un fattore noto per facilitare la formazione di loop di DNA, permette d'azione enhancer in lievito sopra una distanza di 3000 bp.
Un Antidepressivo Che Estende La Durata Della Vita in Adulti Caenorhabditis Elegans
I meccanismi che determinano la durata della vita di un organismo sono ancora in gran parte un mistero. Un gol di invecchiamento della ricerca è quello di trovare farmaci che aumentano la durata e la vitalità quando somministrato ad un animale adulto. A tal fine, abbiamo testato 88.000 prodotti chimici per la capacità di estendere la durata della vita dell'adulti Caenorhabditis elegans nematodi. Qui riportiamo che un farmaco usato come antidepressivo in esseri umani aumenta la durata della vita di c. elegans. Negli esseri umani, questo farmaco blocca segnalazione neuronale di serotonina. In c. elegans, l'effetto del farmaco sulla durata della vita è ridotto o sradicato da mutazioni che influenzano la sintesi di serotonina, re-uptake della serotonina a sinapsi o uno dei due recettori accoppiati a proteine G: uno che riconosce la serotonina e l'altra che rileva un altro neurotrasmettitore, octopamina. Studi in vitro dimostrano che il farmaco agisce come antagonista a entrambi i recettori. Test della droga su animali con restrizioni dietetiche o con mutazioni che influiscono sulla durata della vita indica che l'effetto sulla durata della vita coinvolge meccanismi associati con estensione della durata della vita di restrizione dietetica. Questi studi indicano che tale durata può essere estesa bloccando alcuni tipi di neurotrasmettitori implicati nel cibo di rilevamento nell'animale adulto, possibilmente conducendo ad uno stato di percepito, anche se non reale, inedia.
Uno Schermo Ad Alta Velocità Per Le Sostanze Chimiche Che Aumentano La Durata Della Vita Di Caenorhabditis Elegans
Un obiettivo a lungo termine di ricerca di invecchiamento è quello di trovare farmaci che possono ritardare l'invecchiamento e l'insorgenza di malattie associate all'età. Con questo in mente, abbiamo proiettato 88.000 prodotti chimici per la capacità di aumentare la durata della vita di Caenorhabditis elegans nematodi. Abbiamo trovato che mianserin, un antagonista del recettore della serotonina usato come antidepressivo in esseri umani, può aumentare la durata di c. elegans quando somministrato solo durante l'età adulta. Questo effetto è ridotto o abolito da mutazioni che influenzano la sintesi di serotonina o della ricaptazione della serotonina alle sinapsi. Si richiede inoltre un recettore della serotonina e un recettore octopamina, entrambi i quali sono inibiti dalla droga. Mianserin non ha alcun effetto sulla durata di vita degli animali con maggiore longevità a causa di restrizioni alimentari o con una mutazione che riduce l'assunzione di cibo, indicante che il farmaco estende la durata della vita attraverso meccanismi legati alla restrizione dietetica. Questi studi indicano che tale durata può essere aumentata inibendo certi tipi di neurotrasmissione in precedenza implicato nel cibo di rilevamento, forse imitando uno stato fisiologico associato a restrizione dietetica.
