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Articles by Minetaro Arita in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Poliovirus 식별을위한 입자 응집 방법
1Department of Virology II, National Institute of Infectious Diseases, 2New Product Design Department, Fujirebio Inc.
바이러스 수용체 분자를 이용한 최근에 개발된 새로운 입자 응집 (PA) 분석은 poliovirus (PV)의 신속하고 쉬운 식별을 허용했다. 이 문서에서는, 우리는 PV 식별을 위해 PA 분석을위한 절차를 표시합니다.
Other articles by Minetaro Arita on PubMed
소아마비 147S 입자의 특성 분석: 소아마비 Uncoating에 대 한 새로운 통찰력
세이 빈 1 스트레인 소아마비 (태양광 발전) 돌연변이, S1(2Y-1I), VP2(142) 아미노산 위치의 Tyr와 VP1(160), 위치의 Ile 들고 형 간염-2c 셀에서 지속적 감염을 설정할 수 있습니다. 이 돌연변이 PV 수용 체 (PVR) CD155 또는 PVR 힌지와 마우스 Igg2a의 Fc 부분이 세포 외 moiety 이루어진 chimeric 분자 PVR IgG2a 표현 어느 셀과 0도 C에서 상호 작용에 따라 비정형 147S 입자를 형성 한다. 37도 C에서 PVR 상호 작용에 따라 S1(2Y-1I), 부모의 부담을 비슷한 두 135S A 입자를 형성 하 고 80 년대 빈 capsids. 0도 C에서 놀랍게도, 농도에 동등 5 이상 nM, PVR IgG2a VP4 S1(2Y-1I) capsid 80 년대 입자의 형성에서의 두 돌출을 유발 합니다. 동일한 전환 40 부모의 긴장과 세이 빈 1 0도 C에서 관찰 됐다 PVR IgG2a nM. 따라서, 80 년대 입자 형성 태양광 uncoating의 단계 중 하나로 간주 VP4 압출 온도 독립적인 수 높은 PVR 농도에서. 이 PV capsid의 구조적인 변화 저온에서 흡착에 따라 발생 한 의미 합니다.
소아마비의 생체 외 및 생체 조건 고기의 감소 된 바이러스 성 단백질 합성 활동 1 돌연변이 입력 합니다
소아마비 (태양광 발전)의 세이 빈 백신 변종을 포함 내부 ribosomal 항목 사이트 (IRES) 바이러스 성 단백질 합성을 지시 하는 영역에서에서 주요 감쇄 결정 요인. 태양광 발전 neurovirulence에 감소 된 바이러스 성 단백질 합성의 효과 검사 하는 IRES 감소 된 바이러스 성 단백질 합성 PV 돌연변이 결과 바이러스 성 polyprotein의 개시 codon 사이 공백 시퀀스, 다른 길이의 짧은 열려있는 독서 프레임으로 구성 된 도입 되었다. 이러한 태양광 발전 돌연변이 HeLa S3 세포에서 바이러스 성 단백질 합성 활동 8.8-55%를 부모의 Mahoney 스트레인 측정 했다. 야생-타입 활동의 28% 이상의 바이러스만 그대로 공백 시퀀스 플 라크 정화를 수행 했다. 17% 나 야생-타입 활동의 21%는 돌연변이 안정 되었고 8.8%와 돌연변이 치명적인. PV 돌연변이 neurovirulence 인간의 PV 수용 체 유전자를 운반 하는 유전자 변형 쥐에 평가 받았다. 이 테스트에서는 야생-타입 활동의 28% 이상의 돌연변이 야생-타입 활동의 17%와 돌연변이 부분적으로 감쇠 형을 전시 하는 동안 neurovirulent, 유지. 이 돌연변이 안정적 예약 복제 된 척수; 그러나, 안정성 심각 척수에 뇌에서 바이러스 감염의 과정에서 영향을 받았습니다. 이 결과 감소 된 바이러스 성 단백질 합성 활동 배양된 세포 (야생 형 활동의 17-55%)에서 측정 된 태양광 감쇄의 주요 결정자 아니다는 것이 좋습니다.
2001 년에서 필리핀에서 1 형 백신 파생 된 소아마비의 순환
2001 년, 고도로 진화 유형 1 순환 백신 파생 된 소아마비 (cVDPV)는 세 급성 이완 된 마비 환자와 필리핀에서 3 명의 별도 지역 사회에서 하나의 접촉 으로부터 격리. 이러한 4 개의 cVDPV 격리의 완전 한 게놈 시퀀싱 밝혀 capsid 지역 1 세이 빈 백신 변형 율에서 파생 되었다 하지만 noncapsid 영역의 대부분 구강 소아마비 백신 (OPV) 긴장 관계 없는 정체 불명된 엔테로바이러스에서 파생 되었다. CVDPV 격리의 시퀀스 서로 밀접 하 게 관련이 있었다 고를 격리 했다 일반적인 재조합 사이트. 대부분의 cVDPV 격리 유전 및 생물 학적 속성 그 야생 소아마비에서 구별할 수 있었다. 그러나 건강 한 접촉에서 가장 최근에 확인 된 cVDPV 분리 유지 온도 감도 및 부분 감쇄 고기. 격리 및 세이 빈 1 간의 순서 관계 1998 1999 년과 그 cVDPV 전송의 좁은 체인 유통에 OPV 복용량에서 유래 그 Cvdpv을 제안 했다. 타입-1 Cvdpv는 2001 년 9 월 필리핀에서 검색 마지막 그리고 인구 면역 소아마비에 광범위 한 OPV 캠페인에 의해 지난 2001 년과 2002 년 초에 올렸다.
엔테로바이러스 71의 온도 민감한 돌연변이 Cynomolgus 원숭이에서 감쇠를 보여줍니다
엔테로바이러스 71 (EV71) 손, 발 및 구강 질환의 원인이 되는 주요 에이전트 중 하나 이며, 때로는 심각한 신경 장애와 관련 된. 이 연구에서는 EV71 감쇄 원숭이 감염 모델에서 neurovirulence의 분자 결정 요인 식별는 시도. BrCr 건설 되었다; EV71 프로토타입의 악성 긴장의 전염 성 cDNA 클론 EV71 또는 소아마비 (태양광 발전) 세이 빈 백신 긴장의 감쇠 스트레인의 온도 (ts)에 민감한 돌연변이 다음 전염 성 클론에 도입 되었다. 보호자 및 돌연변이 바이러스의 생체 외 및 생체 조건 고기 배양된 세포 및 cynomolgus 원숭이 각각 분석 했다. 3D 효소에 돌연변이 (3d(pol))에서 3' 비 번역 영역 (NTR), 세이 빈 1 ts 결정 요인에 해당 EV71 뚜렷한 온도 감도 수 여 하 고 있습니다. [EV71(S1-3')]로에 5' NTR, 돌연변이 들고 EV71 돌연변이 3d(pol)는 3 ' NTR 감쇠 neurovirulence 했다, 원숭이의 중앙 신경 시스템에 바이러스의 확산을 제한에 결과. 이러한 결과 ev71와 PV1 그들의 원래 pathogenesis의 고유한 속성에도 불구 하 고 원숭이에 neurovirulence의 일반적인 유전 결정 요인 공유 나타냅니다.
세이 빈 3 파생 된 소아마비 재조합 시퀀스 동종 토착 인간의 엔테로바이러스 종 C 지역 코딩 바이러스 효소에 포함 된
소아마비 백신 파생 (cVDPVs) 순환으로 인 한 소아마비의 발생 지역 토착 야생 소아마비 (증후군) 예방 접종에 의해 탈락 했다 보고 되었습니다. 대부분 이러한 Cvdpvs의 재조합 인간 엔테로바이러스 종 C (HEV C)에서 파생 될 여겨졌다는 미확인된 시퀀스 nonstructural 단백질 코딩 영역에 포함 된. 이 연구에서 우리는 2002 년에서 캄보디아에서 급성 이완 된 마비 (afp = 연합 뉴스) 사건에서 세이 빈 3 파생 된 PV 재조합 (캄보디아-02)의 절연을 보고합니다. 우리 nonpolio 엔테로바이러스 격리 2003으로 1999 년부터 캄보디아에 AFP 케이스에서의 시퀀스 분석에 의해 캄보디아-02 상 재조합 부 본을 식별 하려고 했습니다. Pvs의 이전에 예상된 진화 속도 바탕으로, 캄보디아-02에서 재조합 이벤트 구강 PV 백신 (99.3% 뉴클레오티드 정체성 VP1 지역) 관리 후 6 개월 이내에 발생 한 것으로 추정 됐다. 2Bc와 3D(pol) 캄보디아-02의 지역 코딩 원주민 콕 사키 바이러스 유형 17 (CAV17)의 유전자 클러스터로 그룹화 된 (가장 높은 [87.1%] 뉴클레오티드 id) HEV C의 phylogenic 분석에 의해 원주민 CAV13-CAV18 (가장 높은 [94.9%] 뉴클레오티드 정체성)의 클러스터를 각각 2002 년, 격리 하 고. CAV13-CAV18 및 CAV17 2002 년에서 하지만 2001 년에 하지와 2003 년에서 지배적인 HEV C serotypes 했다. CAV17 분리의 3CD(pro) 코딩 영역의 putative 재조합을 CAV13 cav18와 CAV17 사이 찾았습니다. 이러한 결과 3D(pol) pv3(cambodia-02)의 지역 코딩의 일부 HEV C 변형 유전자 원주민 CAV13 CAV18 변종 2002 년에서 캄보디아에 관련에서 파생 된 제안 했다.
소아마비 Replicon에 의해 유도 된 쥐에 있는 소아마비 같은 마비의 정량 분석
소아마비 (태양광 발전) 감염 척수의 운동 뉴런의 파괴에 의해 일반적으로, 다리의 심각한 마비를 발생합니다. 이 연구에서 척수 운동 신경 및 소아마비 같은 마비 손상에서에서 PV 복제 사이의 관계는 인간의 PV 수용 체 (TgPVR21)을 표현 하는 유전자 변형 생쥐에서 분석. 첫째, 태양광 replicon capsid 유전자 (PV Fluc mc) 대신 개 똥 벌레 루시페라아제 인코딩 293T 세포에 트랜스-encapsidated 이었고 트랜스 encapsidated PV Fluc mc (테-PV-Fluc mc) 다음 TgPVR21 쥐의 척수에 주사 했다. 테-PV-Fluc mc 10(7) 전염 성 단위 ml(-1) x 6.3 titre와 복구 PV1 긴장의 그들에 비교 되었다. TgPVR21 쥐 주사 테-PV-Fluc 엠씨 심각도 이완 된 마비 완료 그립 강도 감소에서 배열 hindlimbs의 비-치명적인 마비를 보여주었다. 척수에 테-PV-Fluc mc의 복제 10 h post-inoculation (탐정)에서 최고 수준에 도달, 뒤에로 서 마비의 모양을 12 h 탐정, 16h 탐정 조직학 분석 고원에 도달로 초기 병 변 및 임상 증상의 심각도 사이 상관 관계가 대부분의 마우스에. 그러나, 심한 마비도 관찰 될 수 있었다 확실히 낮은 병 변 점수로 몇으로 10(2) 모터 뉴런 (요 추 코드에 감염 될 셀의 1.4%) x 5.3 테-PV-Fluc 엠씨에 의해 감염 됐다. 이러한 결과 모터 신경 세포의 작은 인구에 있는 PV 복제는 TgPVR21 마우스에 심한 잔류 소아마비 같은 마비에 대 한 중요 한 나타냅니다.
RNA 바이러스의 급속 한 게놈 시퀀싱 합니다
우리는 그것에 의하여 게놈 시퀀스는 플라스 미드 벡터에 subcloning 없이 교양된 바이러스 격리에서 얻은 바이러스 성 RNA 순서의 신속한 결정을 위한 시스템을 개발. 이 방법은 알 수 없거나 untypeable 신흥 바이러스의 과제를 해결 하기 위해 새로운 기회를 준다.
엔테로바이러스 71 보였다는 유전자 형에 속하는의 감쇠 스트레인 Antigenicity Cynomolgus 원숭이 감쇠 Neurovirulence와의 광범위 한 스펙트럼
엔테로바이러스 71 (EV71) 손과 발, 입 병의 원인이 되는 에이전트 이며 때로는 또한 심각한 신경 장애와 관련 된다. 이 연구에서 우리가 특징 ev71의 감쇠 스트레인 antigenicity 및 조직 특이성 유전자 형 A, 원숭이 감염 모델에 속해 있는 [EV71(S1-3')]. 3 Cynomolgus 원숭이 EV71(S1-3'), 부모의 악성 스트레인 ev71(brcr-tr)와 치명적인 도전 정 맥 경로 통해 하루 45 postinoculation EV71(S1-3')의에 이어서 함께 주사 했다. 원숭이와 EV71(S1-3') 주사 증상의 악화 없이 악성 ev71(brcr-tr)에 의해 살아남은 치명적인 도전 하지만 가벼운 신경학 적인 증상 (떨림)으로 나타났다. 면역된 원숭이 세라 중화 genotypes A, B1, B4, c 2와 c 4를 포함 하 여 다른 genotypes EV71의 대 한 활동의 광범위 한 스펙트럼을 보여주었다. 검사를 하는 변종에 대 한는 세라 homotype (유전자 형 A)에 대 한 가장 높은 중화 작업 유전자 형 c 2에 대 한 최저 중화 작업을 보였다. 감소 하는 세라의 무력화 활동의 순서는 다음과 같습니다: A > b 1 > c 4 > b 4 > c 2. EV71(S1-3')의 조직 특이성 검사 두 원숭이 정 맥 EV71(S1-3'), 뒤에 중앙 신경 시스템 (CNS)와 extraneural 조직에서 바이러스 메일의 검사와 주사 했다. CNS, EV71(S1-3') 척수만 분리 했다. 이러한 결과이 감쇠 긴장은 여전히 정 맥 경로 통해 주사 할 때 neurotropic EV71(S1-3') 효과적인 항 원 역할을 나타냅니다.
소아마비 사 1 변형에서 파생 된 감쇠 결정 요인의 협력 효과 엔테로바이러스 71 끄 덕/SCID 마우스 감염 모델에서의 감쇄에 대 한 필수적입니다
엔테로바이러스 71 (EV71) 손과 발, 입 병의 원인이 되는 에이전트 이며 또한 심각한 신경 장애와 관련 된다. 감쇠 EV71 스트레인 [EV71(S1-3')] cynomolgus 원숭이 감염 모델;에 설립 되었습니다. 이 스트레인 유형 1 소아마비 백신 스트레인, 세이 빈 1 [PV1(Sabin)] 5' nontranslated (NTR), 3D 효소 지역과 3' NTR에서 파생 된 감쇠 결정 요인을 포함 되어 있습니다. 이 연구에서 우리는 끄 덕/SCID 마우스 감염 모델에서 EV71 감염에 pv1(sabin)의 감쇠 결정 요인의 효과 분석. 우리는 마우스 적응 EV71 스트레인 [EV71(NOD/SCID)] 끄 덕/SCID 쥐의 두뇌에 치명적인 EV71(Nagoya) 긴장의 적응에 의해 3 월에 4 주 된 끄 덕/SCID 쥐 뒷 다리 사지의 마비를 일으키는 격리. Capsid 단백질 vp1가 아미노산 변경 (글루탐산을 145 위치의 글리신의 변화) 뉴클레오티드 2876에서 단일 돌연변이 끄 덕 임/SCID 쥐에서 마우스 적응 표현 형에 대 한 필수. 다음으로, 우리는 감쇠 결정 요인 EV71(Nagoya) 게놈으로 마우스 적응 변이 함께 pv1(sabin)에서 파생 된 도입. 4 주 오래 된 생쥐에서 3D 효소와 3' NTR, 주요 온도 민감한 결정을 결정 요인 감쇠에 강한 영향을 미쳤다. 반면, 개별 요인의 효과 3 주 된 끄 덕/SCID 쥐에 약한 하 고 모든 결정이 상당한 감쇄에 대 한 필요 했다. 이러한 결과 pv1(sabin)의 감쇠 결정 요인의 협력 효과 ev71의 감쇠 neurovirulence을 위해 필수적입니다 것이 좋습니다.
소아마비 바이러스와 엔테로바이러스 71 Infectivity 억제 Pharmacologically 활성 화합물의 특성 분석
소아마비 (태양광 발전)와 엔테로바이러스 71 (EV71) 자신의 중앙 신경 조직 감염에 심각한 신경학 상 증 후를 일으킬. 내성 돌연변이의 출현을 허용 하지 것 이라고 하는 활동에 안티-태양광 발전 및 안티-EV71 화합물을 식별 하기 위해 우리가 수행 약물 검사 대상으로 태양광 발전 및 EV71 pseudoviruses와 셀룰러 요인 pharmacologically 활성 화합물 라이브러리를 활용 하 여 해당 encapsidated replicons 루시페라아제 인코딩. 우리는 metrifudil으로 나타났습니다 (N-[2-methylphenyl]methyl)-adenosine) (길 항는 A2 아데노신 수용 체 제), N (6)-benzyladenosine (길 항는 A1 아데노신 수용 체 제) 및 NF449 (4, 4 ', 4 ', 4 ' '-[[imino 5,1,3 benzenetriyl bis(carbonyl-imino)] carbonylbis] tetrakis (disulfonic-1, 3-벤젠 산) octasodium 소금) (Gs-알파 억제제) 안티 EV71 활동, 그리고 그 GW5074 (3-(3, 5-dibromo-4-hydroxybenzylidine-5-iodo-1,3-dihydro-indol-2-one)) (영국 공군-1 억제제)는 안티-태양광 발전 및 안티-EV71 활동. EV71 돌연변이 metrifudil, N (6)-benzyladenosine과 nf449를 방지 이러한 화합물의 존재는 구절 후 고립 됐다 하지만 돌연변이 gw5074에 강한 태양광 발전 및 EV71 고립 됐다. Gw5074의 억제 효과 센다이 바이러스 감염에서 관찰 되지 않는 고 치료 oas1와 stat1의 식을 유도 하지 않았다 mRNA. 작은 방해 RNA 치료의 GW5074, 상 세포 표적에 대 한 B-영국 공군, 영국 공군 1 Pim-1를 포함 하 여-2 및-3, HIPK2, GAK, MST2, ATF 3 않았다 일관 되 게 표시 PV 복제 합니다. 또한, 영국 공군 1 및 B-영국 공군 downregulation gw5074의 억제 효과를 세포 RD의 감도 영향을 주지 않았다. 이러한 결과 GW5074 보존된 대상 인터페론 응답 독립적으로 감염에 억제 함으로써 태양광 발전 및 EV71 복제에 대 한 강력 하 고 선택적인 억제 효과 좋습니다.
셀룰러 Kinase 억제제 엔테로바이러스 복제를 억제 하는 바이러스 성 단백질 3a Enviroxime와 비슷한 보존된 대상이 있다
이전에, 우리는 목표를 알 수 없는 남아 있다 비록 소아마비 (태양광 발전)와 엔테로바이러스 71 복제를 강력 하 게 억제 하는 GW5074 셀룰러 kinase 억제제 발견. 우리 셀룰러 키에 대 한 검색 GW5074 대상 식별, 유사 하거나 관련 된 gw5074의 anti-enterovirus 활동 억제제. 이 목표로, 우리는 gw5074와 협력 또는 종합적으로 gw5074의 부재에서 PV 복제를 억제 수 있는 셀룰러 kinase 억제제를 식별 하는 검사 수행. MEK1/2 저 해제와 AG1478 MEK1/2 저 해제 (SL327 및 U0126), EGFR 억제제 (AG1478)와 GW5074, 함께 협동 억제 효과 가진 화합물으로 phosphatidylinositol 3-kinase 억제제 (wortmannin) Akt1/2 억제제 (Akt 억제제 8 세) 합성 억제 효과 가진 화합물으로 식별 합니다. 확인 된 kinase 억제제와 개별 치료 크게, PV 복제 영향을 미치지 않았다 하지만 MEK1/2 억제제, ag1478로 치료를 결합 하 고 Akt1/2 억제제 종합적 복제를 억제. 이 합성 저해에 ag1478의 효과 다른 수용 체 티로신 키 니 아 제 억제제 (IGF-1R 억제제 II 및 Flt3 억제제 II)에 의해 보상 됩니다. 우리 뮤턴트 Flt3 억제제에 강한 절연 II 및 GW5074 발견 이러한 돌연변이 cross-resistance 각 치료를 했다. 이러한 돌연변이 바이러스 성 단백질 3a는 결과: 아미노산 돌연변이 내성 강력한 anti-enterovirus 화합물, enviroxime에서 이전에 확인 된 돌연변이 70 (Ala Thr), 위치의 변경에 일반적인 돌연변이 했다. 이러한 결과 셀룰러 kinase 억제제 및 enviroxime 있는 보존된 대상 바이러스 성 단백질 3A 엔테로바이러스 복제 표시 하지 않으려면 좋습니다.
급성 이완 된 마비의 경우 대변 샘플에서 엔테로바이러스의 고감도 검출을 위한 역방향 전사 루프 중재 등온 증폭 (RT-램프) 시스템 개발
소아마비 박멸 글로벌 프로그램에서 실험실 진단 급성 이완 된 마비 (afp = 연합 뉴스) 경우의 대변 샘플에서 소아마비 (PV)를 격리 하 여 중요 한 역할을 한다. 이 연구에서 우리는 엔테로바이러스 대변 샘플 긍정적인 엔테로바이러스 등 태양광 발전에 대 한 식별 하는 태양광 등의 신속 하 고 매우 민감한 검출을 위한 역방향 전사 루프 중재 등온 증폭 (RT-램프) 시스템을 개발.
소아마비의 식별을 위해 수용 성 바이러스 수용 체와 입자 융합 들 방법의 개발
글로벌 소아마비 박멸 이니셔티브에서 실험실 진단 급성 이완 된 마비 (afp = 연합 뉴스) 환자의 대변 샘플에서 분리 하 고 소아마비 (PV)를 식별 하 여 중요 한 역할을 한다. 이 연구에서 우리가 PV의 간단 하 고 신속 하 게 식별에는 immunoadhesin (PVR IgG2a)의 형태로 용 해 인간의 PV 수용 체 (hPVR)와 입자 융합 (PA) 들 방법을 개발. PVR IgG2a 민감하게 젤라틴 입자 1 단계 절차에서 반응의 2 h 이내 PV에 감염 된 세포의 문화 액체와 특정 융합 들을 보여주었다. 유형 1, 2, 및 3 PV(Sabin) 변종에 대 한 검출 한계 1.5 x 시민권이 50% 셀 문화 전염 성 복용 했다 (CCID(50)), 10(5) CCID(50), 그리고 CCID(50), 9.1 x 10(5) x 5.3 각각. 야생-타입 증후군 및 태양광 검사의 경우 태양광 발전의 작은 인구를 감지 하지 못했습니다 증후군의 다른 serotypes 혼합 일부 샘플을 제외 하 고 파 이렇게 함께 올바르게 확인 된 급성 이완 된 마비에서 분리 합니다. 이 결과 감도 충분히 높은 태양광 발전의 작은 인구를 감지 하는 있지만이 PA 메서드는 PV, 간단 하 고 신속 하 게 식별 하는 데 유용 제안 (< 주요 인구의 1/10) 혼합된 증후군 중에서.
복제와 엔테로바이러스 71 감염의 초기 단계를 억제 하는 Bifunctional Anti-enterovirus 화합물
Enviroxime은 anti-enterovirus 화합물을 대상으로 바이러스 성 단백질 3A 또는 3AB 고 알 수 없는 메커니즘에 의해 엔테로바이러스의 복제 단계를 표시 하지 않습니다. 날짜 하려면, enviroxime 약간 구조적 유사성 하지만 3A 인코딩 영역에서 일반적인 저항 돌연변이 유발 하는 anti-enterovirus 화합물의 수 확인 되었습니다. 현재의 연구 기능적으로 enviroxime와 같은 화합물, AN 12 H5 소설 유형을 식별합니다. 이 화합물 enviroxime 또는 TTP-8307, Flt3 억제제 II, GW5074 등 알려진된 enviroxime 같은 화합물 구조 유사성 아니 했다. 이들이 혼합물에 소아마비 (태양광 발전) 저항 형 guanidine 염을 저항 변이 아니라 PV (G5318A, 3A Ala70Thr)의 주요 enviroxime 저항 돌연변이 의해 수 여 했다 및 brefeldin A. AN-12-H5 f는 anti-enterovirus 71 (EV71) 복합 AN-23-6와 공통 구조 했다. AN-12-h5와 AN-23-F6 셀 바이러스 바인딩 후 EV71 감염의 초기 단계를 저해. (G3112A, VP1 Ala224Thr 및 G2396A, VP3 Arg227Lys 돌연변이) capsid 단백질에 돌연변이 EV71 감염의 초기 단계에 내성 돌연변이 AN-12-h5와 AN-23-f6 키로 결정 했다. 이러한 결과 AN-12-H5 enviroxime 같은 화합물의 소설 클래스에 속한 복제 단계 및 EV71 감염의 초기 단계를 대상으로 bifunctional anti-enterovirus 화합물은 좋습니다.
Phosphatidylinositol 4-니 III 베타 Antipoliovirus 활동에 대 한 Enviroxime와 같은 화합물의 대상입니다
Enviroxime는 antienterovirus 복합 그 대상 바이러스 성 단백질 3A 또는 3AB 이며 알 수 없는 메커니즘에 의해 엔테로바이러스 복제에 단계를 표시 하지 않습니다. 까지, 4 개의 antienterovirus 화합물 즉, GW5074, Flt3 억제제 II, TTP-8307, 그리고 AN-12-H5 알려져 있습니다 유사한 돌연변이 3A 단백질 인코딩 지역의 enviroxime에 대 한 저항을 일으키는 (는 G5318A [3A-Ala70Thr] 돌연변이 소아마비 [PV]) 및 enviroxime 같은 화합물으로 간주 됩니다. 최근에 phosphatidylinositol 4 니 III 베타 (PI4KB) 억제제, PIK93, antienterovirus 활동 보고, antienterovirus 화합물에 의해 pi4kb는 타겟을 중요 호스트 요소 제안 (명. Y. Hsu 외. 셀 141:799-811, 2010). 이 연구에서 우리는 (GW5074 및 AN-12-H5) 이전에 확인 된 enviroxime 같은 화합물 및 화합물, 새로 확인된 된 antienterovirus의 억제 효과 분석 T-00127-HEV1, phosphoinositide (PI) kinases에. T-00127-HEV1 GW5074 PI kinases에 대 한 광범위 한 특이성을 했던 반면 다른 PI kinases 보다 높은 특이성으로 PI4KB 활동을 저해를 찾았습니다. 반면, AN 12 H5 PI4KB 활동에 억제 효과가 없습니다 및 PI 3 키 니 아 제 활동에만 적당 한 억제 효과 보였다. 작은 간섭 RNA (siRNA) 식별 대상 PI kinases 상영 PI4KB GW5074 및 T-00127-HEV1, 하지만 AN-12-H5, 안티-태양광 발전 활동에 대 한 대상입니다. 흥미롭게도, T-00127-HEV1 및 GW5074 AN-12-h5의 강력한 억제 효과 달리 C 형 간염 바이러스 (HCV) 복제를 억제 하지 않았다. 이러한 결과 pi4kb은 엔테로바이러스 특정 호스트 요소가 복제 프로세스에 필요한 일부 enviroxime와 같은 화합물 (T-00127-HEV1 및 GW5074)의 대상 및 enviroxime 같은 화합물 이외에 그들의 항 바이러스 효과 대 한 PI kinases 대상이 있을 수 있습니다 제안 했다.
엔테로바이러스 71 3D RNA 중 합 효소의 생 화 학적 특성 분석입니다
특이 한 엔테로바이러스 71 (EV71) 유행 2008 년 중국에서 시작 했다. EV71 RNA 폴 (3d(pol))는 mn(2+)와 효소 활동을 보여주었다. 작은 활동 Co(2+), 발견 되었습니다와 Mg(2+), Ca(2+), Cu(2+), Ni(2+), Cd(2+), 또는 zn(2+)와 함께 활동이 감지 되었습니다. 뇌관 종속 효소 이며 효소 두 디와 10 뉴클레오티드 RNA 뇌관으로 작용 했다. DNA 뇌관, dT15, 뇌관, 다른 엔테로바이러스 3d(pol)와 비슷한 활동을 증가 했다. 그러나, EV71 3D(pol) poly(C) 템플릿과 게놈 RNA와 드 노 보 필 사 시작. RNA 바인딩 활동 약한 했다입니다. 터미널 nucleotidyl과 역전사 활동 감지 하지 했다. 클래식 Lineweaver-버크 플롯에서 Km와 Vmax EV71 3d(pol)에 대 한 계산. Km 값 2.35±0.05 (ATP), 5.40±0.93 (CTP), 1.12±0.10 (GTP) 및 2.81±0.31 (UTP) 되었고 Vmax 값은 0.00078±0.00005/min (ATP), 0.011±0.0017/min (CTP), 0.050±0.0043/min (GTP) 및 0.0027±0.0005/min (UTP). EV71 킬로미터 3d(pol)의 발과 입 질병 바이러스와 rhinovirus 비슷 했다. BrCr TR 스트레인 및 스트레인 2008 베이징, 임상 분리에서의 효소 활동 유사, 항 바이러스 약물 대상으로 3d(pol)에 대 한 가능성을 나타내는 했다.
소아마비 중립화의 개발 소아마비 Pseudovirus의 중화 인간의 혈 청에 항 체 Titer 측정을 위한 테스트 합니다
글로벌 소아마비 박멸 이니셔티브에서 실험실 진단 급성 이완 된 마비 (afp = 연합 뉴스) 사례에서 대변 샘플에서 분리 하 고 소아마비 (PV)를 식별 하 여 중요 한 역할을 한다. 최근 몇 년 동안에서 태양광 발전 제거 이전에 국가에서 태양광 발전 순환의 회복 가난한 예방 접종 범위 인해 감소 무리 내성 때문에 발생 했습니다. 태양광 순환에 국가의 취약점 모니터링 취약 인구에 태양광 발전에 대 한 중화 항 체 titers 감시 소아마비 박멸 프로그램의 최종 경기에서 필수적 이다. 이 연구에서는 인간의 혈 청 샘플에서 태양광 발전에 대 한 중화 항 체 titer 결정 유형 1, 2, 및 3 PV pseudoviruses PV 중화 테스트를 개발 했습니다. 이 테스트와 태양광 발전에 대 한 중화 항 체 titer 결정 못했습니다 2 일 이내 루시페라아제 신호의 자동된 해석 하 여 전염 성 PV 종자를 사용 하지 않고. 우리 다양 한 연령 그룹에서에서 수집 된 131 인간의 혈 청 샘플 pseudovirus PV 중화 테스트의 유효성을 검사 (나이를 1 > 60 년) 종래의 중화 테스트를 비교해보면. 우리는 중화 항 체 titers 이러한 테스트에 의해 결정에 좋은 상관 관계를 발견. 이러한 결과 pseudovirus PV 중화 테스트 태양광 발전에 대 한 중화 항 체 titer 측정에 대 한 안전 하 고 간단한 절차로 섬 겨 좋습니다.
ACBD3 중재 채용 Pi4kb의 Picornavirus RNA 복제 사이트
Phosphatidylinositol 4 키 IIIβ (PI4KB) Picornaviridae 가족에 속하는 게놈 RNA 복제 enteroviruses, 작은 비 싸여 바이러스에 필요한 호스트 요소 이다. 여기, 우리는 PI4KB 또한 다른 picornavirus, 아이치 현 (AiV) 바이러스의 게놈 복제에 필수적 이다 하지만 enteroviruses 널리 사용에서 다른 전략으로 게놈 복제 사이트에 모집 시연. AiV 비 구조 단백질, 2B, 2BC, 2c, 3A, 및 3AB, acyl 코엔자임 3 (ACBD3)를 포함 하는 바인딩 도메인 Golgi 단백질 상호 작용. 또한, ACBD3 및 pi4kb의 Golgi 모집의 새로운 방식으로 제공 하는 pi4kb는 이전에 알려지지 않은 상호작용 파악. ACBD3 또는 pi4kb의 최저의 AiV RNA 복제 억제. 바이러스 성 단백질, ACBD3, PI4KB, 및 phophatidylinositol-4-인산 (PI4P) 바이러스 성 RNA 복제 사이트를 지역화 합니다. AiV 복제 및 RNA 복제 사이트에 pi4kb의 채용은 엔테로바이러스 감염에 대조적으로, brefeldin에 의해 영향을 받지 않습니다. 이러한 결과 바이러스 성 단백질/ACBD3/PI4KB 복잡 한 AiV RNA 복제 사이트에 PI4P 합성 형성은 바이러스 성 RNA 복제에 필수적인 역할을 나타냅니다.
