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Articles by Nazim El-Andaloussi in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Efficacité de la production Parvovirus recombinant avec l'aide d'adénovirus dérivés Systems
1Tumour Virology Division F010, German Cancer Research Center (DKFZ), 2Inserm Unit 701, German Cancer Research Center (DKFZ)
Nous décrivons ici un protocole basé uniquement sur l'infection des cellules, ce qui améliore l'efficacité de la production parvovirus recombinant de plus de 100 fois par rapport à d'autres protocoles en cours d'utilisation. Ce protocole basé sur l'utilisation d'un adénovirus 5 nouvelle base auxiliaire contenant l'unité de transcription parvovirus VP (Ad-VP).
Other articles by Nazim El-Andaloussi on PubMed
Acétylation Régule L'activité De Suppression De La Fin De L'ADN De L'ADN Polymérase Bêta
Les auteurs décrivent un nouveau mécanisme de régulation pour l'ADN polymérase beta (Polbeta), une protéine impliquée dans la réparation de l'ADN excision de base (BER). Polbeta épididymaire in vivo et forment un complexe avec le p300 co-activateur transcriptionnel. P300 interagissait avec Polbeta par le biais de domaines distincts et acétylés Polbeta in vitro. En outre, acétylation de Polbeta a été observée in vivo. 72 La lysine de Polbeta a été identifiée comme la principale cible de l'acétylation par p300. Fait intéressant, Polbeta acétylé montre une capacité forte baisse à participer à un essai BER reconstitué. Cela était dû à une altération de l'activité de dRP-lyase de Polbeta. L'acétylation du Polbeta donc agit comme un mécanisme de réglementation intranucléaire et implique que p300 joue un rôle de réglementation critique dans BER.
La Pince De Capteur De Dommages Rad9/Rad1/Hus1 Humaine Interagit Avec L'ADN Polymérase Bêta Et Augmente L'efficacité De L'utilisation De Substrat ADN : Implications Pour L'ADN Réparent
Dans les cellules eucaryotes, les points de contrôle sont activés en réponse aux dommages à l'ADN. Cela nécessite l'action de capteurs de dommages de l'ADN telles que les protéines de la famille Rad. Les trois protéines humaines Rad9, Rad1 et Hus1 forment un complexe hétérotrimérique (appelé le 9-1-1 complexe) qui est recruté dans l'ADN, dommage. Dommages à l'ADN déclenche également le recrutement des protéines de réparation de l'ADN sur la lésion, y compris des ADN polymérases. Dans ce travail, nous avons démontré que le 9-1-1 complexe peut interagir physiquement avec la bêta de la polymérase de l'ADN in vitro. Analyse fonctionnelle a révélé que le 9-1-1 complexe a un effet stimulant sur l'activité bêta de l'ADN polymérase. Toutefois, la présence de 9-1-1 complexe ni touchés lambda de l'ADN polymérase, autre X famille ADN polymérase, ni les deux réplicative ADN polymérases alpha et delta. Stimulation de l'ADN polymérase bêta résulte d'une augmentation de son affinité pour le modèle de l'apprêt et l'interaction avec le 9-1-1 misincorporation complexe de désoxyribonucléotides stimulée par l'ADN polymérase bêta. En outre, le 9-1-1 complexe agrémenté synthèse de déplacement de brin de l'ADN polymérase ADN bêta sur un substrat de l'ADN de gap nt 1. Nos résultats soulèvent la possibilité que le 9-1-1 complexe pourrait attirer l'ADN polymérase bêta aux sites de dommages de l'ADN, reliant ainsi directement la réparent de l'ADN et les points de contrôle.
A Atténué Corticostérone Réponse à Une Stimulation ACTH Chronique Chez Les Souris Déficientes En Lipase Hépatiques : évidence Pour Un Rôle Pour La Lipase Hépatique En Physiologie De La Surrénale
Lipase hépatique (HL), une enzyme lipolytique foie-exprimé, hydrolyse les triglycérides et les phospholipides dans les lipoprotéines et favorise la prestation de cholestérol au moyen de la particule entière médiée par les récepteurs et l'absorption sélective de cholestérol. Activité HL se produit également dans les glandes surrénales, qui utilisent la lipoprotéine-cholestérol pour synthétiser des glucocorticoïdes en réponse à hypophysaire ACTH. Il est probable que le rôle des surrénal HL est de faciliter la livraison de cholestérol exogène pour la synthèse des glucocorticoïdes. Sur cette base, nous avons émis l'hypothèse que HL carence s'émousser la réponse de glucocorticoïdes à l'ACTH. En outre, parce que le cholestérol exogène provient aussi de la voie du récepteur (LDLR) LDL, nous avons supposé que LDLR carence s'émousser la réponse à l'ACTH. Pour tester ces hypothèses, nous avons comparé la réponse de corticostérone à huit injections quotidiennes d'ACTH en HL-deficient (hl-/-), LDLR déficiente (Ldlr-/-) et HL - et LDLR-doublement déficient (Ldlr-/ - hl-/-) souris que chez les souris de type sauvage (WT). Taux de corticostérone plasmatique ont été mesurés sur 2, 5 et 8 jours. Différences dans les taux de corticostérone plasmatique entre génotypes ont été analysés par ANOVA à Kruskal-Wallis sur les rangs et pairwise comparaisons multiples par test de Dunn. Nos résultats démontrent une tendance à la réduction des taux de corticostérone plasmatique au jour 2 et des réductions importantes le jour 5 et jour 8 dans les modèles knock-out. Ainsi, le jour 5, taux de corticostérone plasmatique ont été réduits de 57, 70 et 73 % (tous les P 0,05 <) et sur 8 jours par 76, 59 et 63 % (tous P 0,05 <) en hl-/-, Ldlr-/-et Ldlr souris-/-hl-/-, respectivement. Ces résultats démontrent que déficit de HL, comme carence LDLR, émousse la réponse surrénalienne chronique stimulation de l'ACTH et suggèrent un rôle nouveau pour HL en physiologie de la surrénale.
Méthylation De L'arginine Réglemente L'ADN Polymérase Bêta
Altérations de l'ADN réparation conduisent à l'instabilité génomique et un risque accru de cancer. ADN base excision repair (BER) corrige les bases endommagées, les sites apuriniques et cassures de l'ADN monocaténaire. Ici, un mécanisme de réglementation pour l'ADN polymérase bêta (bêta Pol) est décrite. Pol bêta a été trouvé pour former un complexe avec la protéine arginine méthyltransférase 6 (PRMT6) et a été spécifiquement méthylé in vitro et in vivo. Méthylation de beta Pol de PRMT6 a fortement stimulé l'activité ADN polymérase en améliorant la liaison de l'ADN et processivité, tandis que l'insertion de nucléotide et activité dRP-lyase n'affecta pas. Deux résidus, R83 et R152, ont été identifiés en version bêta Pol que les sites de la méthylation par PRMT6. Complémentation génétique des cellules bêta du knock-out Pol avec mutant R83/152 K ont révélé l'importance de ces résidus pour la résistance cellulaire à l'agent alkylant ADN. D'après nos constatations, nous proposons que la PRMT6 joue un rôle régulateur des BER.
La Méthylation De L'ADN Polymérase Bêta Par La Protéine Arginine Méthyltransférase 1 Régule Sa Liaison à L'antigène Nucléaire De Prolifération Cellulaire
ADN polymérase bêta (bêta pol) est un acteur clé dans l'ADN base excision repair (BER). Nous décrivons ici la formation d'un complexe de beta pol avec la protéine arginine méthyltransférase 1 (PRMT1). PRMT1 méthylés spécifiquement bêta pol in vitro et in vivo. Arginine 137 a été identifié en version bêta pol comme une cible importante pour la méthylation par PRMT1. La polymérase ni les activités de dRP-lyase de beta pol furent affectées par méthylation de le PRMT1. Toutefois, cette modification a aboli l'interaction de beta pol avec l'antigène nucléaire de prolifération cellulaire (PCNA). Ensemble, nos résultats prouvent que PRMT1 méthylation de beta pol pourrait jouer un rôle régulateur dans BER en empêchant la participation de beta pol en événements métaboliques PCNA-dependent DNA.
Grâce à Son Protéine Non Structurale NS1, Le Parvovirus H-1 Induit L'apoptose Par L'accumulation Des Espèces Réactives De L'oxygène
Le parvovirus du rat H-1 (H-1PV) attire une grande attention en tant qu'agent anticancéreux, car il n'est pas pathogène pour l'homme et possède des propriétés oncotropic et oncosuppressive. La protéine non structurale NS1 virale est pensé pour servir de médiateur H-1PV cytotoxicité, mais sa contribution exacte à ce processus n'est pas encore défini. Dans cette étude, nous avons analysé les effets de la H-1PV protéine NS1 sur la prolifération cellulaire humaine et la viabilité cellulaire. Nous montrons que la protéine NS1 expression est suffisante pour induire l'accumulation de cellules dans G (2) de phase, l'apoptose via la caspase 9 et 3 activation, et la lyse cellulaire. De même, les cellules infectées par le type sauvage H-1PV arrestation en G (2) de phase et l'apoptose. En outre, nous montrons aussi que la fois l'expression de la protéine NS1 et le plomb infection H-1PV à des niveaux plus élevés de intracellulaires espèces réactives de l'oxygène (ROS), associée à l'ADN double-brin. Traitement antioxydant réduit les niveaux de ROS et diminue fortement dommages à l'ADN NS1 et induite par le virus, arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose, ce qui indique que la protéine NS1 induit ROS sont des médiateurs importants de H-1PV cytotoxicité.
Reciblage Du Parvovirus H-Rat 1PV à Cellules Cancéreuses Par Le Génie Génétique De La Capside Virale
Le parvovirus du rat H-1PV est un agent anticancéreux prometteur compte tenu de ses propriétés oncosuppressive et l'absence d'effets secondaires connus chez les humains. H-1PV réplique préférentiellement dans les cellules transformées, mais le virus peut pénétrer à la fois normale et les cellules cancéreuses. L'absorption par les cellules normales séquestre une partie importante de la dose administrée virale loin de la cible tumorale. Par conséquent, le ciblage H-1PV entrée spécifiquement aux cellules tumorales est important d'augmenter l'efficacité de traitements à base de parvovirus. Dans cette étude, nous avons d'abord constaté que l'acide sialique joue un rôle clé dans la H-1PV entrée. Nous avons ensuite génétiquement la capside H-1PV pour améliorer son affinité pour les cellules tumorales humaines. Par analogie avec la structure cristalline résolue du virus minute parvovirus étroitement lié de souris, nous avons développé un modèle in silico en trois dimensions (3D) de la H-1PV de type sauvage capside. Basé sur ce modèle, nous avons identifié putatifs des acides aminés impliqués dans la reconnaissance membrane cellulaire et l'entrée du virus au niveau de l'axe 2-fois de la symétrie de la capside, dans la région fossette dite. En mutagenèse in situ de ces résidus considérablement réduit la liaison et l'entrée de la H-1PV dans les cellules permissives. On puis conçu une capside virale entrée de déficience de et inséré une cyclique RGD-4C peptide au niveau de son pic axe 3 fois. Ce peptide se lie α (v) β (3) et α (v) β (5) intégrines, qui sont surexprimées dans les cellules cancéreuses et les vaisseaux sanguins en croissance. L'insertion du peptide sauvé infectivité virale vers les cellules surexprimant α (v) β (5) les intégrines, qui entraîne la mort efficace de ces cellules par le virus remanié. Ce travail démontre que H-1PV peuvent être génétiquement réorientées par la modification de sa capside, semble très prometteur pour une utilisation plus efficace de ce virus dans le traitement du cancer.
