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Articles by Neela Zareen in JoVE
JoVE General
ラット上頚神経節（SCG）から培養交感神経のためのプロトコル
1Department of Biology, Columbia University, 2Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University
これは、新生児ラットの仔の上頚神経節（SCG）からプライマリ交感神経ニューロンを分離して培養する方法を説明するプロトコルです。
Other articles by Neela Zareen on PubMed
保存された触媒の機能彼フルーツ フライ TRNase Z のドメインがない基質認識またはバインディングに関与しているの残留。
トランスファー Rna 両方、5' と 3' 端の拡張子を持つ前駆体として転写されます。リボヌクレアーゼ P endonucleolytically 5' 最後の引出線を削除します。tRNase Z endonucleolytically 3' 終わりトレーラーは tRNA の成熟に必要なステップとして削除できます。CCA は発現調節真核生物、古細菌、いくつかの細菌の Trna にエンコードされていないと、CCA 付加酵素により除去後の 3' 終わりトレーラー追加必要があります。tRNase Z 金属依存性は、加水分解酵素署名シーケンスは、節約されたヒスチジン クラスター (HxHxDH) はアクティビティの不可欠の β-ラクタマーゼの家族の一員です。バキュロ ウイルス発現フルーツ フライ tRNase Z を開始、我々 は、彼の 18 残渣 Ala スキャンを完了クラスター機能の風景のこの重要な領域を分析します。残基のと、彼の周りクラスター秋処理効率に置換の効果に基づいて 3 つのカテゴリに： 8 アミノ酸残基の置換はほとんど影響を持って、5 置換は、適度に効率を減らす (約 5 〜 50 倍）、5 保存残基 1 つセリン、3 つのヒスチジン、1 つのアスパラギン酸で置換しながら深刻な効率 (約 500-5000 倍） を減らします。ゲルのシフトを使用して決定野生型と変異型の解離定数 （Kd 値）、かなりの違いも表示されず、kM （2 20 nM） と同じ順序であった。置換、彼から生じる効率の低い処理ドメインはほぼ完全に削減 kcat 値ため;保存された、機能的に重要な残基、彼内クラスター tRNase Z の触媒反応に関与しているこのようにと基質認識・ バインディング機能する必要があります蛋白質の他の場所に存在します。
自然発生する人間のミトコンドリア Pre-tRNASer(UCN) 変異は、基板の二次構造と処理動態, 転送リボヌクレアーゼ Z 胸の谷間のサイトに影響します。
Trna は 5' 端リーダーと 3' 終わりトレーラーの前駆体として転写されます。5' 端リーダー RNase P によって処理され、ほとんどの生物ですべての 3 つの王国では、転送リボヌクレアーゼ (tRNase) Z endonucleolytically 削除 3' 終わりトレーラーすることができます。ロング ((L)) とショート ((S)) フォーム tRNase Z 遺伝子のゲノムに存在しています。tRNase Z(L) 核エンコード pre-tRNA 約 1600-fold tRNase Z (S) より効率的に処理、信号は強力なミトコンドリア輸送に予測されています。tRNase Z(L) 可能性があります、したがって、両方の核処理- と pre-tRNAs mitochondrially エンコードします。以上 150 病態関連変異ミトコンドリアのゲノム 22 mitochondrially エンコードされた Trna にそれらのほとんどに発見されています。人間のミトコンドリアの tRNA(Ser(UCN)) で検討した突然変異処理効率に影響を与えるし、いくつかの切断部位と二次構造に影響を与えます。これらの変更は、おそらくミトコンドリア病に貢献する突然変異体の pre-tRNAs の tRNase Z 処理に影響可能性があります。
2 つの相同性ブロック アミノ酸側 TRNase Z 彼ドメイン中の残留が突然 Pre-tRNA 3' 端処理に貢献しています。
tRNase Z は、削除することができます endonucleolytically pre-tRNA 3'-トレーラーを終了、署名を所有している彼のドメイン （HxHxDH;モチーフ II) 金属に依存する加水分解酵素の β-ラクタマーゼの家族の。モチーフ II モチーフ III-V と触媒のコアを構成する 2 つの 2価金属イオンを調整するにはそのカルボキシ側に組み合わせたものです。PxKxRN ループと Motif モチーフ II のアミノ酸の側私は成熟 tRNA の CCA の anti-determinant 効果を含む、tRNase Z の活動を調節するために提案されています。Ala 散策これら二つの相同性ブロック触媒の効率を置換が予期せず減らす残基を明らかにします。K（m） に影響を与えず k(cat) モチーフ II の置換が大幅に影響することができますが、k（m） の 5 〜 15 倍増加が観察をモチーフと PxKxRN ループでいくつかの保存残基の置換は。これらの増加 k（m） の基質結合のためのモデルを提案します。表現 tRNase Z プロセス成熟 tRNA の 3' 終わりに cca の 3' 自然のシーケンスを有する pre-tRNA 約 80 倍より少なく効率的に-終わりのトレーラーは、削減の k(cat) k（m）、この酵素の特性のように anti-determinant、CCA を表示中に影響を与えないため。
