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Articles by Niva Russek-Blum in JoVE
JoVE General
Due-Photon-Based fotoattivazione in Live embrioni di zebrafish
Molecular Cell Biology, Weizmann Institute of Science
Microscopia multiphoton permette il controllo di fotoni a bassa energia con profonda penetrazione ottica e fototossicità ridotto. Descriviamo l'uso di questa tecnologia per l'etichettatura delle cellule vive in embrioni di zebrafish. Questo protocollo può essere facilmente adattato per foto-induzione di varie molecole di luce-sensibile.
Other articles by Niva Russek-Blum on PubMed
Dimensione Dei Cluster Di Un Neurone Dopaminergico è Determinato Durante Primi Patterning Proencefalo
Abbiamo esplorato gli effetti della robusta piastra neurale creazione di serie di segnali, come ad esempio Wnt canonico, la differenziazione e la configurazione dei sottotipi neuronali nel diencefalo zebrafish a cella singola risoluzione. Sorprendentemente, perturbazione di segnalazione Wnt non ha avuto un effetto complessivo sulla specifica dei destini Diencefalica, ma colpite selettivamente il numero di Neuroni dopaminergici (DA). Abbiamo individuato la zona di progenitore DA nel anlage Diencefalica della piastra neurale utilizzando un metodo uncaging basati su due-fotone e ha mostrato che il numero di neuroni non-DA derivati da questa zona progenitore non è alterato da Wnt attenuazione. Utilizzando l'analisi birthdating, abbiamo determinato i tempi della divisione cellulare ultimo DA progenitori e ha rivelato che il cambiamento nella inibizione seguente Wnt DA cellulare numero non è a causa di cambiamenti nel ciclo cellulare uscita cinetica. Inibizione condizionale di Wnt e della proliferazione cellulare hanno dimostrato che Wnt limita il numero di progenitori DA durante una finestra di plasticità, che si verifica nella neurogenesi primaria. Infine, abbiamo dimostrato che la Wnt8b è un modulatore del numero di cellule DA che agisce attraverso il Fz8a di fattore recettore (Fzd8a) e suoi effettori a valle Lef1, e che richiede l'attività della trascrizione Fezl (Fezf2) per questo processo. I nostri dati mostrano che la risposta differenziale delle distinte popolazioni neuronali del segnale Wnt non è una semplice interpretazione della loro posizione relativa anteroposteriore. Questo studio mostra anche, per la prima volta, che la dimensione della popolazione DA Diencefalica è modulata all'interno della piastra neurale molto prima del previsto, concomitante con eventi patterning regionale Wnt-mediata.
Mappa Di Destino Ad Alta Risoluzione Del Diencefalo Zebrafish
Diencefalo è una delle strutture più elaborate nel cervello vertebrato e agisce come un sito interattivo tra i sistemi sensoriali, centrali e sistema endocrini. Per comprendere meglio lo sviluppo embrionale e la morfogenesi del diencefalo, abbiamo sviluppato un photoactivation migliorata (uncaging)-basato su strategia di tracciatura di lignaggio. Per determinare la posizione esatta di un dominio dato progenitore Diencefalica, abbiamo utilizzato una linea transgenica guida proteina fluorescente verde (GFP) in cellule che esprimono la proteina proneural, Neurogenin1 (Neurog1), che è stato usato come punto di riferimento visibile piastra neurale. Questo approccio facilitato etichettatura precisa di gruppi definiti di cellule nel diencefalo prospettico della piastra neurale zebrafish. In questo modo, abbiamo etichettato più aree sovrapposte del diencefalo, garantendo precisione e la riproducibilità della nostra analisi di lineage indipendentemente i cambiamenti dinamici della piastra neurale in via di sviluppo. Vi presentiamo una mappa del destino del diencefalo zebrafish con una risoluzione spaziale superiore quanto descritto in precedenza.
