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Articles by Norman Atkins in JoVE
JoVE Neuroscience
Sin láser y de captura de enfoque de Microscopía de la microdisección de regiones discretas del cerebro del ratón para el aislamiento de ARN total y Downstream secuenciación de próxima generación y de perfiles de expresión génica
Center for Sleep and Circadian Biology, Northwestern University
Other articles by Norman Atkins on PubMed
Espectrometría De Masa Basada En El Descubrimiento De Péptidos Circadianos
Un reto importante a los sistemas de comprensión dinámica y heterogénea del cerebro se encuentra en la complejidad química de secretadas mensajeros intercelulares que cambian rápidamente con el espacio y el tiempo. Dos estrategias de cobranza de extracción en fase sólida se presentan que se relacionan con la hora y el lugar de la liberación de péptidos con caracterización de espectrometría de masa. Aquí, suites complejos de moléculas de señalización de célula a célula péptido-basada se caracterizan desde el núcleo supraquiasmático mamíferos (SCN), sitio del reloj circadiano maestro. Observado SCN releasates son péptidos ricos y demuestran la coedición de neuropéptidos circadiano establecido y péptidos con funciones desconocidas en los ritmos circadianos. Además, el contenido de SCN releasate es específica de estimulación. Paradigmas de estimulación reportadas por alterar la sincronización de reloj, incluyendo la estimulación eléctrica del tracto retinohypothalamic, producen espectros de masas releasate que difieren notablemente de los espectros de compuestos secretados endógeno a lo largo del ciclo de 24 horas. Además de péptidos establecidos en SCN, divulgamos la presencia de péptidos proSAAS en releasates. Uno de estos péptidos, poco SAAS, exhibe retinohypothalamic robusto tracto-estimulado liberación de la SCN y aplicación exógena de SAAS poco induce un retraso de fase constante con regulación circadiana sincronización de señales mediada por luz. Estos análisis de espectrometría de masa basada en ofrecen una nueva perspectiva en peptidérgicos señalización dentro de la escena y demuestran que la integración de compuestos secretados con información relacionada con la hora y el lugar de liberación genera nuevas penetraciones en la señalización intercelular en el cerebro.
Descubrimiento De Péptidos Endógenos Del Reloj Circadiano Rata: Un Estudio Centrado Del Núcleo Supraquiasmático Por Espectrometría De Masa De Tándem De Ultra Alta Performance
Entender cómo una región pequeña del cerebro, el núcleo supraquiasmático (SCN), puede sincronizar los ritmos circadianos del cuerpo es un área de investigación en curso. Este importante sistema de mantenimiento de tiempo requiere un complejo conjunto de hormonas peptídicas y transmisores que siguen siendo incompleto caracterizados. Aquí, la cromatografía líquida capilar y FTM ha sido junto con software a medida para el análisis de péptidos endógenos presentes en la escena del cerebro de la rata. Después de ex vivo procesamiento de rebanadas de cerebro, extracción de péptido, identificación y caracterización de datos FTM de tándem con < exactitud total 5-ppm produjo una lista de hyperconfident de 102 péptidos endógenos, incluyendo 33 previamente no identificados péptidos y 12 péptidos postraduccional modificadas con acetilación, fosforilación, pyroglutamylation o Ammidación. Esta caracterización de péptidos endógenos de la SCN ayudará a comprender los mecanismos moleculares que median comportamientos rítmicas en mamíferos.
Circadiana Integración De Señales Glutamatérgica Por Poco SAAS En Supraquiasmático Nuevos Circuitos
Neuropéptidos son elementos críticos integradoras dentro del reloj circadiano central en el núcleo supraquiasmático (SCN), donde ellos median tanto sincronización de célula a célula y ajustes de fase causantes de arrastre ligero. Peptidomics adelante identificado poco SAAS, derivado de la proSAAS prohormona, entre péptidos SCN novela, pero su papel en el SCN es mal entendida.
Directa Peptidomics Celulares De Las Neuronas Hipotalámicas
La complejidad química de comunicación de célula a célula se ha convertido en un reto fundamental para entender los sistemas cerebrales. Esto es especialmente cierto para el hipotálamo, donde las señales de neuropéptido son heterogéneos, localizada y dinámico. Hasta el momento, más hipotalámicos peptidomic estudios se han centrado en toda la estructura; sin embargo, los avances recientes en estrategias de cobranza y tecnologías analíticas han permitido perfiles de peptidomic directa, alta resolución, centrados en dos regiones de núcleos de interés, supraquiasmático y supraóptico, incluyendo sus subregiones y células individuales. Suites de péptidos ahora pueden ser identificados y sondeados para la función. Alta sensibilidad analítica y espacial revela que discreta núcleos hipotalámicos tienen distintas peptidomic firmas. Peptidomic descubrimiento no sólo revela la complejidad inesperada, pero también desconocidos de péptidos que actúan como componentes clave del circuito. Análisis de tejido releasates identifican péptidos secretadas en el medio extracelular y disponibles para la transmisión de señales intercelulares. Técnicas de muestreo directo definen perfiles de péptido-releasate en los patrones espaciales, temporales y eventos-dependiente. Estos enfoques ofrecen notables nuevas penetraciones en la complejidad de la señalización de célula a célula de neuropeptidergic central a neuroendocrino fisiología.
