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In JoVE (2)
- Un modèle Optic Nerve Crush blessures murins pour étudier la rétine de survie des cellules ganglionnaires
- Un modèle murin de l'Assay Pocket cornée pour l'étude de l'angiogenèse
Other Publications (10)
- Frontiers in Bioscience : a Journal and Virtual Library
- Journal of Medicinal Chemistry
- Cellular and Molecular Neurobiology
- Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America
- Chemical Research in Toxicology
- Cell Adhesion & Migration
- Arthritis Research & Therapy
- The Journal of Biological Chemistry
- The Journal of Experimental Medicine
- Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America
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Articles by Pachiappan Arjunan in JoVE
JoVE Neuroscience
Un modèle Optic Nerve Crush blessures murins pour étudier la rétine de survie des cellules ganglionnaires
1National Eye Institute, NIH, 2Ophthalmology Department, The Second Hospital of Harbin Medical University
Ce protocole montre comment rétrograde marquer les cellules ganglionnaires de la rétine, et la façon de faire ultérieurement une lésion du nerf optique écraser dans le but d'analyser la rétine survie des cellules ganglionnaires et l'apoptose. Il s'agit d'un modèle de maladie expérimentale pour différents types de neuropathie optique, notamment un glaucome.
JoVE Clinical and Translational Medicine
Un modèle murin de l'Assay Pocket cornée pour l'étude de l'angiogenèse
La cornée est unique en ce qu'il manque les tissus vasculaires. Cependant, une forte croissance des vaisseaux sanguins et la survie peut être induite dans la cornée par de puissants facteurs angiogéniques. Par conséquent, la cornée peut fournir avec nous un outil précieux pour les études de l'angiogenèse. Ce protocole montre comment effectuer le modèle de souris de dosage poche cornée et la façon d'évaluer l'angiogenèse induite par des facteurs angiogéniques en utilisant ce modèle.
Other articles by Pachiappan Arjunan on PubMed
Profilage Des Protéines Hépatocellulaires Par 1 D PAGE-MALDI/SM/SM Dans Un Modèle De Stress De Chaleur De Rat
Chaleur induit des complications cause une augmentation d'un grand nombre de protéines qui jouent un rôle dans les diverses voies durant le choc thermique. Une caractérisation détaillée de ces protéines est essentielle pour comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le coup de chaleur. Dans le présent rapport, les protéines présentes dans le foie de rat ont été comparés à 37 degrés C (contrôle) et à la température centrale (Tc) 42 degrés C (stress thermique) par 1D PAGE et MALDI/MS/MS. Parmi les protéines identifiées dans l'échantillon après un stress thermique sont dimethyglycine déshydrogénase, transcétolase, ester carboxylique hydrolase, pyruvate kinase, pyruvate kinase de type L, arginosuccinate synthétase ; fumarylacetoacetate hydrolase et peptidylpropyl isomérase A. Ces résultats montrent que l'analyse des protéines à grande échelle par MALDI/SM/SM fournit une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires associés à un choc thermique. La résolution des protéines étudiée par 1D-PAGE était inférieure à celle obtenue avec la 2D-PAGE. Plus précisément, 2D-PAGE permet de mieux identifier les protéines de faible poids moléculaire qui ne peuvent pas être résolus en 1D-PAGE.
Inhibiteurs De Nouveau Peptide D'humaine Sécrétoire Phospholipase A2 Avec Une Activité Anti-inflammatoire : Structure De La Solution Et Modélisation Moléculaire
Sécrétoire phospholipase A2 (sPLA2) metallopreoteinases de matrice (MMP) sont des enzymes clés impliqués dans la polyarthrite rhumatoïde (PR) et leur modulation représente donc une option thérapeutique potentielle. Sur la base d'Escherichia coli allates, peptides synthétiques ont été conçues et testées pour sPLA2 inhibition. Le peptide linéaire, 10f (PIP-18), inhibe l'activité de sPLA2 de synovial humain recombinant avec une IC50 de 1,19 microM. Non seulement avez-vous le peptide interfèrent avec la fonction de sPLA2, mais il est également apparu à inhibent l'expression des ARNm de sPLA2 et divers MMPs dans les cultures de fibroblastes synoviaux (RASF) stimulée par IL-1beta RA et, par conséquent la production de protéines correspondantes (> inhibition de 80 %). Par résonance magnétique nucléaire (RMN), modélisation et l'amarrage des études indiquent que, en solution, le peptide présente un bêta de tour aux résidus Trp-Asp-Gly-Val et éventuellement se lie à la chaîne hydrophobe de sPLA2. Les résultats suggèrent fortement que l'action modulatrice de peptide 10f peut jouer un rôle majeur dans la lutte contre le développement de RA.
Transcriptome Profilage De La Cellule Du Modèle Neuronal PC12 De Phéochromocytome De Rat
GeneChip microarray est une technologie de pointe utilisée pour étudier les profils d'expression des gènes dans un type particulier de cellules. Dans cette étude, la Affymetrix RAE230A plate-forme servait à profil stablement exprimé transcription ARNm des cellules PC12 au passage 5 et 15. Le transcriptome PC12 de cellules entières ont révélé qu'un total de 7 531 transcriptions stables (P 0,05 <), correspondant à 6 785 gènes, ont été trouvés à être constamment exprimé entre passage 5 et 15. L'analyse des données a révélé 3 080 protéines fonctionnelles, appartenant à 13 familles, qui indiquent qu'environ 65 % des protéines exprimées dans les cellules PC12 sont indéterminés. En utilisant notre base de données de génome de référence neuronale rat sur mesure, nous avons cartographié exprimées de façon endogène stables transcriptions neuronales de cellules PC12 comprenant environ 765 gènes responsables de la maladie et de la fonction neuronale. Ces transcriptions neuronales ont été analysées plus loin afin de fournir un code génétique qui peut être utilisé par le neurobiologiste à élucider les mécanismes cellulaires et moléculaires complexes qui sous-tendent les fonctions biologiques et leurs réseaux de signalisation associée aux maladies affectant le système nerveux.
VEGF-B N'est Pas Indispensable Pour Croissance Des Vaisseaux Sanguins, Mais Essentiels à Leur Survie, Et Le VEGF-B Inhibe L'angiogenèse Pathologique Ciblage
VEGF-B, un homologue du VEGF a découvert il ya longtemps, n'a pas été considéré comme une cible importante dans la thérapie anti-angiogénique. Au lieu de cela, il a reçu peu d'attention sur le terrain. Dans cette étude, en utilisant différents modèles animaux et de multiples types de cellules vasculaires, nous a révélé que, bien que le VEGF-B n'est pas indispensable pour la croissance des vaisseaux sanguins, il est essentiel pour leur survie. Il est important, l'effet de survie du VEGF-B n'est pas seulement sur les cellules endothéliales vasculaires, mais aussi sur les péricytes, cellules musculaires lisses vasculaires et cellules souches / progénitrices. In vivo, le VEGF-B inhibe à la fois le ciblage néovascularisation choroïdienne et rétinienne. Mécaniquement, nous avons constaté que l'effet de survie vasculaire du VEGF-B est obtenue en régulant l'expression de nombreux gènes vasculaires prosurvival via le NP-1 et VEGFR-1. Notre travail indique donc que la fonction du VEGF-B dans le système vasculaire est d'agir comme un «survie», plutôt que d'un "angiogénique" facteur et que l'inhibition du VEGF-B peut offrir de nouvelles possibilités thérapeutiques pour traiter les maladies néovasculaires.
Réglage Voie De Signalisation Neurodégénératives ETS2 Des Neurones Humains (SH-SY5Y) Des Cellules Exposée à Uniques Et Répétées Minidosés Sarin (GB)
L'interprétation mécaniste de bas niveau neurotoxicité induite par le sarin après des doses uniques ou répétées doit encore être explorées au niveau cellulaire. À l'aide de la transcription de microarray (Affymetrix-GeneChips) approche de profilage, la présente étude a examiné l'expression des gènes dans les cellules SH-SY5Y humaines exposées à simple (3 et 24 h) ou de doses répétées (2 x 24 h) de sarin (5 microg/mL) pour délimiter le mécanisme possible. Deux cent vingt - quatre gènes dont l'expression était significativement (P < 0,01) altérée par au moins 3 fois ont été sélectionnés par l'analyse GeneSpringGX. Les données d'expression de gène comparative a confirmé les changements transcriptionnelles liée à la dose et l'exposition de temps de sarin. L'effet d'une dose unique de sarin photo-effet sur la transcription du gène était variable, tandis que répétée de doses sur une période de 48 h avec persistance diminuées des gènes liés à des mécanismes de neurodégénératives. Trente gènes constamment modifiés ont été validés à l'aide en temps réel quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (qRT-PCR). Des profils similaires de qRT-PCR obtenus dans les cellules SH-SY5Y et HCN-1 a traitées sarin a confirmé les altérations cellulaires indépendants dans les niveaux d'expression. Gènes (ETS2 APOE, PSEN1, DDC et CD9) interviennent principalement dans la régulation de la neuropathogenesis induite par le sarin ont été confirmées par Western blot et dosages de double-immunofluorescence. La voie du régulome suggère un nouveau mécanisme possible par quelle expression d'augmentations ETS2 sarin et prend le contrôle sur les autres gènes impliqués dans la voie de neurodegenerative. L'ensemble des données délimitent un modèle in vitro d'expérimental pour l'étude de la neuropathologie des cellules et peuvent donner un aperçu roman des interventions thérapeutiques.
VEGF-B: Un Taux De Survie, Ou D'un Facteur Angiogénique?
Malgré sa découverte précoce et forte homologie de séquence pour les autres membres de la famille du VEGF, la fonction biologique du VEGF-B est resté discutable pour une longue période, et le VEGF-B a reçu peu d'attention à partir du champ à ce jour. Récemment, nous et d'autres ont trouvé que (1) VEGF-B est un facteur de survie puissant pour différents types de cellules par inhibition de l'apoptose via la suppression de l'expression de BH3-seulement de protéines et d'autres apoptotiques / mort cellulaire des gènes liés à. (2) VEGF-B a un rôle non négligeable dans l'induction de la croissance des vaisseaux sanguins dans la plupart des organes. Au lieu de cela, il est critique nécessaire à la survie des vaisseaux sanguins. VEGF-B ciblage inhibé l'angiogenèse pathologique par la suppression de la survie des vaisseaux sanguins dans différents modèles animaux. (3) En utilisant différents types de blessures neuro-et les modèles de maladies neurodégénératives, le VEGF-B de traitement protégée en voie de disparition de l'apoptose des neurones sans induire indésirable croissance des vaisseaux sanguins ou de la perméabilité. Ainsi, le VEGF-B est le premier membre de la famille du VEGF qui a un taux de survie puissant / effet anti-apoptotique, tout en manquant une activité angiogénique générale. Notre travail préconise donc que la fonction principale du VEGF-B est d'agir comme un «survie», plutôt que d'un "angiogénique" facteur et implique un potentiel thérapeutique de VEGF-B dans le traitement de différents types de maladies vasculaires et neurodégénératives.
Effet Suppresseur Du Peptide Inhibiteur Sécrétoire Phospholipase A2 Sur La Production De Métalloprotéinase Matricielle Induite Par L'interleukine-1beta Dans Les Fibroblastes Synoviaux Polyarthrite Rhumatoïdes Et Son Activité Effectuée Chez La Souris HTNFtg
Sécrétoire phospholipase A2 (sPLA2) et les inhibiteurs des métalloprotéinases (MMP) matrice sont puissants modulateurs d'inflammation avec potentiel thérapeutique, mais ont limité l'efficacité dans la polyarthrite rhumatoïde (PR). L'objectif de cette étude était de comprendre le mécanisme inhibiteur d'inhibiteur de la phospholipase de peptide-18 python (PIP) dans des fibroblastes synoviaux (SF) et d'évaluer son potentiel thérapeutique dans un facteur de nécrose de tumeur humain (hTNF)-moteur de modèle de souris transgénique (Tg197) de l'arthrite.
Dérivé Des Plaquettes Growth Factor-DD Ciblage Angiogenèse Pathologique Arrestations Par Glycogen Synthase Kinase-modulant 3beta Phosphorylation
Dérivé des plaquettes du facteur de croissance-DD (PDGF-DD) est un membre récemment découvert de la famille PDGF. Le rôle de PDGF-DD dans l'angiogenèse pathologique et les mécanismes cellulaires et moléculaires sous-jacents restent encore largement inexploré. Dans cette étude, en utilisant différents modèles animaux, nous avons montré que le PDGF-DD expression était régulée à la hausse durant l'angiogenèse pathologique, et l'inhibition de PDGF-DD supprimé à la fois une néovascularisation choroïdienne et rétinienne. Nous avons également démontré un nouveau mécanisme de médiation de la fonction de PDGF-DD. PDGF-DD glycogène synthase kinase-induite 3beta (GSK3bêta) Ser (9) la phosphorylation et de Tyr (216) déphosphorylation in vitro et in vivo, ce qui conduit à la survie cellulaire accrue. Constamment, l'activité a été GSK3bêta nécessaire pour l'effet anti-angiogénique du PDGF-DD ciblage. En outre, le PDGF-DD réglementé l'expression de GSK3bêta et beaucoup d'autres gènes importants pour l'angiogenèse et l'apoptose. Ainsi, nous avons identifié PDGF-DD comme un gène cible importante pour la thérapie anti-angiogénique en raison de ses effets pléiotropiques sur les cellules vasculaires et non vasculaires. PDGF-DD inhibition peut offrir de nouvelles options thérapeutiques pour traiter des maladies néovasculaires.
Effet De Survie De PDGF-CC Rescues Neurones De L'apoptose Dans Le Cerveau Et La Rétine Par La Réglementation Phosphorylation GSK3bêta
Dérivé des plaquettes CC facteur de croissance (PDGF-CC) est le troisième membre de la famille PDGF découvert après plus de deux décennies d'études sur les membres originaux de la famille, PDGF-AA et PDGF-BB. La fonction biologique de PDGF-CC reste largement à explorer. Nous rapportons une nouvelle découverte que le PDGF-CC est un puissant facteur neuroprotecteur qui agit en modulant la glycogène synthase kinase 3beta (GSK3bêta) l'activité. Dans plusieurs différents modèles animaux de lésions neuronales, comme axotomie la mort neuronale induite, neurotoxine induit une lésion neuronale, la 6-hydroxydopamine induite par la maladie de Parkinson mort dopaminergique neuronal, et l'ischémie induite par accident vasculaire cérébral, PDGF-CC délivrance de protéines ou des gènes protégés différents types de neurones de l'apoptose dans les deux la rétine et le cerveau. D'autre part, la perte de fonction des dosages en utilisant PDGF-C chez la souris nulles, des anticorps neutralisants, ou en épingle à cheveux courts ARN a montré que le PDGF-CC déficit / l'inhibition exacerbée mort neuronale dans différents tissus neuronaux in vivo. Mécaniquement, nous a révélé que l'effet neuroprotecteur de PDGF-CC a été réalisé par la réglementation de la phosphorylation GSK3bêta et d'expression. Nos données démontrent que le PDGF-CC est critique nécessaire à la survie neuronale et peut potentiellement être utilisé pour traiter des maladies neurodégénératives. L'inhibition de la voie du récepteur PDGF-CC-PDGF à différentes fins cliniques devraient être menées avec prudence afin de préserver les fonctions normales des neurones.
PDGF-CC Inhibe L'angiogenèse Pathologique Blocus Par Intérim Sur Les Multiples Cibles Cellulaires Et Moléculaires
L'importance d'identifier des voies indépendantes du VEGF dans l'angiogenèse pathologique est de plus en plus reconnu comme un résultat de la résistance aux médicaments émergents à des thérapies anti-VEGF. PDGF-CC est le troisième membre de la famille PDGF découvert après plus de deux décennies d'études sur le PDGF-AA et PDGF-BB. La fonction biologique de PDGF-CC et les mécanismes cellulaires et moléculaires sous-jacents restent encore largement inexploré. Ici, en utilisant différents modèles animaux, nous déclarons que PDGF-CC inhibition par anticorps neutralisants, shRNA, ou la suppression génétique supprimé néovascularisation de la choroïde et la rétine à la fois. Surtout, nous a révélé que le PDGF-CC ciblage agi non seulement sur plusieurs types de cellules importantes pour l'angiogenèse pathologique, tels que peinture murale et les cellules endothéliales vasculaires, les macrophages, les fibroblastes et les cellules choroïdiennes l'épithélium pigmentaire rétinien, mais aussi sur l'expression de gènes angiogéniques autres importantes, tels que le PDGF-BB et les récepteurs de PDGF. Au niveau moléculaire, nous avons trouvé que le PDGF-CC régulé la glycogène synthase kinase (GSK)-3beta phosphorylation et l'expression à la fois in vitro et in vivo. L'activation de GSK3bêta avec facultés affaiblies PDGF-CC-angiogenèse induite, et l'inhibition de GSK3bêta abolit l'effet anti-angiogénique du PDGF-CC blocus. Ainsi, nous avons identifié PDGF-CC comme un gène cible candidat important pour la thérapie anti-angiogénique, et PDGF-CC inhibition peut avoir une valeur thérapeutique dans le traitement de maladies néovasculaires.
