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Articles by Peer Wulff in JoVE
JoVE Immunology and Infection
重组腺相关病毒载体的生产和滴定
1School of Medical Sciences, College of Life Sciences and Medicine, University of Aberdeen, 2Translational Neuroscience Facility and Department of Physiology, School of Medical Sciences, University of New South Wales, 3Department of Biochemistry and Molecular Biophysics, Columbia University
重组腺相关病毒（rAAVs）载体正变得越来越有价值的
Other articles by Peer Wulff on PubMed
Sgk1 基因敲除小鼠受损肾 Na(+) 保留。
血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 (sgk1) 引起血和上调反过来，这两种基因表达非洲爪蟾卵母细胞在肾上皮 Na(+) 通道张震) 活动。因此，Sgk1 被视为调解 mineralocorticoid 刺激肾因活动和 antinatriuresis。在这里我们表明在标准的盐摄入量，肾水和电解质排泄是区分在 sgk1 挖空 （sgk1(-/-)) 小鼠和 (sgk1(+/+)) 野生型小鼠。相比之下，膳食盐限制显示 sgk1(-/-) 小鼠受损的能够充分降低的 Na(+) 尽管排泄增加血浆醛固酮水平和近端肾小管 Na(+) 和流体的重吸收，以及降低血压和肾小球滤过率。
肾 K + 消除 Sgk1 基因敲除小鼠受损的调节。
血清和糖皮质激素调节激酶 1 （Sgk1） 有助于区分醛固酮的远端肾单位 Na + 重吸收。Sgk1 挖空 （sgk1-/-) 和 littermate 野生型小鼠 (sgk1 + / +) 用于在肾消除 K + 测试 Sgk1 的重要性。1.3 至 1.4 毫米的两个 sgk1-K + 麻醉下负载的静脉应用增加血浆 K + /-（n = 6） 和 sgkl + / + (n = 7) 小鼠。然而，绝对和小数部分组成的肾 K + 排泄增加见于 sgk1 + + sgk1/动物大大缓解。这两组小鼠的减少或增加肾 K + 排泄类似程度后低 （< 0.03%) 或高 (5%)K + 6 d，分别饮食。在 sgk1 + + 高或低 K + 饮食不大大修改血浆 K + 浓度。在 sgk1-/-，然而，高 K + 饮食由约 1.6 m m，尽管达到了约 6 倍高于 sgk1 值的血浆醛固酮浓度过度增加增强血浆 K + + +。下高 K + 饮食的神经电生理学及免疫组织化学研究表明，减少上皮 Na + 通道因和/或 Na + / K +-ATPase 活性中醛固酮敏感远端肾单位占 sgk1 在受损的反应-/-和增强的心尖丰富的肾外髓 K + 通道 ROMK 一定程度上弥补缺陷。急性和慢性肾 K + 消除监管涉及 Sgk1。
各种苯二氮卓类网站在小鼠中配体点突变的 GABA(A) 受体 Gamma2 亚基的亲和力。
GABA(A) 受体的苯二氮卓类绑定站点位于 α-和 γ 亚基接口。已证明这些亚基在某些点突变，显著降低了这些受体的苯二氮卓类绑定站点配体的亲和力。最近，小鼠中生成了与 GABA(A) 受体的位置 77 gamma2 亚单位中的异亮氨酸 （I） 替代苯丙氨酸 (F)。在这里我们测试 24 苯二氮卓类绑定站点配体从 16 不同结构类抑制 [H (3)] 氟硝绑定到这些 gamma2F77I 小鼠脑细胞膜的效能。结果表明古典 1，4-苯、 1，4-thienodiazepine clotiazepam、 1.5-苯二氮卓类 clobazam，或 pyrazoloquinoline CGS 9896 效价是只有 2-7 折下调此 gamma2F77I 点突变。Ru 32698、 Ru 33203 和钌 33356，汝 31719，imidazoquinoline 的 imidazopyrimidines 或 pyrazolopyridine CGS 20625 是效能降低 10-20 倍，而一些 imidazobenzodiazepines、 β-咔啉、 cyclopyrrolones、 imidazopyridines、 triazolopyridazines 或喹啉的效价是 100-1000年倍减少。有趣的是，gamma2F77I 点突变所致的效能削减幅度内的结构类化合物的各不相同。结果支持，并大大延长以前的意见表明残留 gamma2F77 重要的部分，但不是所有苯二氮卓类站点配体的高亲和性结合。
凯斯特雷尔来标识 NDRG 家庭成员为生理基板 SGK1 和 GSK3 剥削。
我们检测到一种蛋白质由 SGK1 迅速磷酸的兔骨骼肌提取中 (血清和糖皮质激素诱导激酶 1），而不是由蛋白激酶广管局，并把它确定为 NDRG2 (N-myc 下游调节基因 2）。SGK1 磷酸化 NDRG2 在 Thr330、 Ser332 和 Thr348 体外。所有三个残留了骨骼肌细胞来自野生型小鼠，但不是能从小鼠不表示 SGK1 磷酸化。SGK1 还磷酸化相关的 NDRG1 异构体，在 Thr328、 Ser330 和 Thr346 （相当于 Thr330、 Ser332 和 Thr348 的 NDRG2），以及 Thr356 和 Thr366.残留 Thr346、 Thr356 和 Thr366 都位于序列相同的 decapeptide GTRSRSHTSE，在 NDRG1 中重复三次。这些 threonines 是在 NDRG1 在肝、 肺、 脾、 野生型小鼠骨骼肌中的但不是在 SGK1/小鼠磷酸化。撞 SGK1 在癌细胞还使用小分子干扰 RNA 抑制磷酸化苏氨酸残留的 NDRG1 的重复区域中。由 SGK1 NDRG1 的磷酸化变成它的优良基板的 GSK3 （糖原合成酶激酶 3），其中可以然后 phosphorylate Ser342、 Ser352 和 Ser362 在重复区域中的。孵化的癌细胞与特定 GSK3 抑制剂 CT 99021 NDRG1 在 HeLa 细胞中表明这种蛋白质由细胞中 GSK3 磷酸化电泳流动日益增多。我们的研究结果确定 NDRG1 和 NDRG2 为生理基板 SGK1，并证明该磷酸化由 SGK1 NDRG1 素数它为 GSK3 的磷酸化。
在盐、 钾稳态 Sgk1 的作用。
醛固酮作用关键在 NaCl 和 K(+) 稳态的重吸收 Na(+) 和 K(+) 分泌醛固酮敏感远端肾单位 (ASDN） 的刺激。最近的研究表明血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 1 (Sgk1) 诱导 ASDN 醛固酮和激酶基因多态性关联动脉血压血压正常的科目。这一审查讨论 Sgk1 在 NaCl 和 K(+) 稳态的作用在体内研究，其中包括那些在 Sgk1 缺陷小鼠中可见一斑。研究表明 Sgk1 不是绝对必需的重吸收 Na(+) 和 K(+) 分泌 ASDN 的要求。节食标准 NaCl 和 K(+)，小幅提高的血浆醛固酮浓度出现足以补偿表型 Sgk1 缺席。激酶是必要的但是，对于上调 ASDN 经 caco-2 Na(+) 重吸收。这可能涉及 Sgk1 介导刺激的基底外侧 Na (+)-K (+)-ATPase，以及保留上皮 Na(+) 通道，因，在顶端的膜。这种上调是 1） 肾盐重新吸收期间限制的氯化钠摄入，以及响应增强 K(+) 摄入 2） K(+) 分泌的充分适应的先决条件。因此 Sgk1 增益的函数突变预计将导致肾氯化钠保留和增强的 K(+) 分泌。需要进一步的研究来澄清肾功能和肾脏醛固酮所致影响的 Sgk1，其他 Sgk1 激活剂的作用以及 Sgk1 基因多态性与动脉高血压在人类中的链接。
成纤维细胞小鼠缺乏血清和糖皮质激素诱导激酶 SGK1 错乱的 Kv 航道整治。
共表达的血清和糖皮质激素诱导激酶 1 （SGK1） 向上调节 Kv 通道在非洲爪蟾卵母细胞和人类胚肾细胞的活动。若要调查 SGK1 依赖 Kv 通道调节的生理影响，我们录全细胞电流从 SGK1 基因敲除小鼠肺成纤维细胞 (sgk1-/-) 和野生型 littermates (sgk1 + / +)。肺成纤维细胞血清增加鼠标 （多边基金） 从这两种基因型展出电压门控性外向整流 K (+)-与依赖于时间激活 (tau(act) 大约 3 毫秒)、 慢灭活 (tau(inact) 大约 700 毫秒)、 依赖于使用的灭活和 K(+) (部分) 抑制电流通道阻滞剂茶，4-AP 和 margatoxin。增加多边基金的血清峰值 Kv 电流密度在 + 100 mV 是很低的 sgk1-/-（14 + /-2 pA/pF，n = 13） 比 sgk1 在 + + （31 + /-4 pA/pF，n = 16)。PCR 扩增的小鼠成纤维细胞从不同的 Kv1 和 Kv3 亚基表现出表达的 Kv1.1-1.7，Kv3.1 和 Kv3.3 这两个 sgk1 在 mRNA + / + 和 sgk1/单元格。后血清剥夺 Kv 电流几乎消失在 sgk1 + + (4 + /-1 pA/pF，n = 11) 但不是在 sgk1-/-(10 + /-1 pA/pF，n = 6) 多边基金。因此后血清剥夺 Kv 电流密度, 是很低的 sgk1 + + 比在 sgk1-/-。地塞米松 （敏捷） （1 microM，1 天），胰岛素样生长因子-1 4-6 h 6.7 microM） 或两者，血清枯竭细胞刺激大大激活 Kv 电流的 sgk1 + + 但不是在 sgk1/多边基金。同时，敏捷和胰岛素样生长因子-1、 Kv 电流密度是大 sgk1 在 + / + (27 + /-3 pA/pF，n = 12) 比在 sgk1-/-(13 + /-3 pA/pF，n = 10) 细胞。类似于多边基金，Kv 电流都明显高于第 sgk1 + + 鼠标尾成纤维细胞 (MTF)。在 sgk1 + + 但不是 sgk1-/-MTF Kv 电流被抑制后血清剥夺和 reincreased 后血清刺激被剥夺 MTF 与敏捷 (1 microM，1 天） 和胰岛素样生长因子-1 （6.7 microM，4-6 h） 之后。Fura-2-荧光容量经条目是低 sgk1-/-MTF 相比 sgk1 + + MTF。血清剥夺容量经入境 sgk1 在大幅下跌后 + + 但不是在 sgk1/MTF。贫化细胞与敏捷 (1 microM，1 天） 和胰岛素样生长因子-1 （6.7 microM，4-6 h） 事后刺激 reincreased 容量经条目中 sgk1 + + MTF，而它在 sgk1/单元格仍保持不变。最后，缺乏 SGK1 不能废除 Kv 通道活动，但废除这些频道的血清、 糖皮质激素和胰岛素样生长因子-1，影响容量经进入效果的调节。
通过结合遗传学和药理学的夹层神经电路。
系统神经科学进展往往来自于大脑区域的毁损和可逆抑制作用。夹层线路的地区在概念上涉及相同的方法-停止细胞的射击动作电位或使单元格火更，然后推断出这些组件如何影响性能的电路和动物行为的类。若要执行这些特定于类型的单元格的和可逆罚款尺度分析，并快速讯号 （毫秒到秒），时间刻度上这样做是大脑的电路的在哺乳动物中具有挑战性的。目前正在为实现这一目标巧妙和各种不同的方法。这些新工具将鼓励进一步的分子生物学家、 系统神经学家和 electrophysiologists 之间的协同作用。
兴奋性氨基酸转运 EAAT5 SGK1 和 SGK3 的血清和糖皮质激素的依赖激酶的调节。
在哺乳动物的视网膜上，再摄取谷氨酸被介导的钠依赖 cotransport 系统 EAAT1-5 因此终止神经元励磁和防止 neuroexcitotoxicity。在视网膜无长突和神经节细胞，EAAT5 是 colocalized 与血清和糖皮质激素诱导激酶 SGK1，已知规管运输丝氨酸/苏氨酸激酶。研究探索 EAAT5 可能规管由 SGK1，SGK3，其异构体和密切相关的蛋白激酶 B.EAAT5 在非洲爪蟾卵母细胞或各自的激酶不 coexpressed。运输活动量化的电生理和细胞表面的表达由化学发光。EAAT5 介导电流和 EAAT5 在细胞表面的蛋白丰度增加了 SGK1 或 SGK3 的共表达但不是以下共表达的 PKB 后 1.5-2 倍。最后，SGK1 和 SGK3 的激酶增加 EAAT5 活动增加细胞表面丰度的承运人。
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 (SGK1) 介导糖皮质激素诱导的胰岛素分泌的抑制作用。
糖皮质激素过剩发展糖尿病，至少一部分通过胰岛素分泌障碍的罪魁祸首。基础机制仍然难以捉摸。我们在这里展示地塞米松上调转录和表达的血清和糖皮质激素诱导激酶 1 (SGK1) 在胰岛素分泌细胞，扭转了米非司酮 (RU486) 核糖皮质激素受体拮抗剂的作用。Coexpressed 在非洲爪蟾卵母细胞中，当 SGK1 增加电压门控通道 K(+) (v) 1.5 K 的活动。INS-1 的单元格中，地塞米松刺激转录的 K (v) 1.5，增加了 repolarizing 的向外的电流，降低高峰值 [Ca(2+)](i) 振荡和减少葡萄糖诱导的胰岛素释放。后者效果被相反的 K(+) 通道阻滞剂 4-氨基吡啶和乙基和更具选择性的 K (v) 1.5 通道抑制剂 MSD D.地塞米松也增加 K (v) 1.5 鼠标胰岛细胞中的表达，并减少葡萄糖诱导的胰岛素分泌，MSD D.扭转效果从野生型但不是 SGK1 基因敲除小鼠胰岛中地塞米松大大钝葡萄糖、 眼压升高和佛波肉豆蔻酸诱导的胰岛素释放。最后，地塞米松刺激转录的 SGK1，这反过来又上调电压门控 K(+) 渠道的活动。K(+) 通道活动的增加减少了通过电压门控性经渠道和胰岛素释放经条目。
SGK1 作为肾功能和响应 Mineralocorticoid 过量的盐摄入量的一个决定因素。
血刺激盐摄入量和抑制盐丢失修改水盐平衡。肾盐潴留被通过上调的重吸收，部分介导血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 (SGK1) 效应。本研究探讨了期间 mineralocorticoid 过剩的肾功能、 盐的摄入量与血压调节 SGK1 的贡献。DOCA/1%氯化钠治疗增加血压及肌酐 SGK1 缺 sgk1(-/-) 和 sgk1(+/+) 野生型小鼠但更为突出的增加蛋白尿的 sgk1(+/+) 比 sgk1(-/-) 小鼠 （通过 + /-89 %474) 小鼠 (+ /-31 %154） 的类似程度。DOCA/1%氯化钠治疗导致的肾重量 (由 24%） 显著增加和只在 sgk1(+/+) 小鼠 （从 3.9 + /-0.1 到 2.7 + /-0.1 血液/l） 低钾血症。治疗增强肾 Na(+) 排泄明显更多 sgk1(+/+) 小鼠 （从 3 + /-1 到 134 + /-32 micromol.24 h(-1).g 身体 wt(-1)) 比 sgk1(-/-) 小鼠 （从 4 + 1 到 49 + /-8 micromol.24 h(-1).g 机构 wt(-1))，指向 SGK1 依赖刺激的盐摄入量。获得两个饮水瓶含有 1%氯化钠或水、 DOCA 治疗并不明显影响进水中任一基因型，但增加 1%氯化钠摄入量 sgk1(+/+) 小鼠 （从 3.5 + 0.9 至 16.5 + 2.4 毫升/天 /-/-9 天） 内符合诱导 DOCA 盐胃口。这种反应是 sgk1(-/-) （从 2.6 + /-0.6 至 5.9 + /-0.9 毫升/天） 的小鼠大大削弱了。因此 SGK1 有助于盐摄入量、 肾生长、 蛋白尿、 肾 K(+) 排泄期间 mineralocorticoid 过剩的刺激。
钝高血压疗效联合的果糖和高盐饮食中缺乏功能血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 SGK1 针对基因的小鼠。
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 (SGK1) 是介导上调血和激活的胰岛素。激酶激发肾上皮 Na(+) 通道，并因此可能参与血压调节。高胰岛素血症是由饮食果糖，觉悟的盐摄入量血压触发的。在联合的果糖和高盐摄入高血压影响的 SGK1 作用从而探讨了 SGK1 基因敲除小鼠 （sgk1(-/-)) 和其野生型 littermates (sgk1(+/+))。Sgk1(+/+) 小鼠的肾脏 SGK1 谈话内容水平被大大提升后果糖饮食。根据控制饮食、 液体摄入、 尿流率、 尿、 Na(+)、 K(+) 和 Cl(-) 排泄和血压是类似 sgk1(-/-) 和 sgk1(+/+) 的小鼠。另外 10%果糖饮水增加液体摄入和这两种基因型，尿流率和并没有显著改变任一基因型的尿 Na(+)、 K(+) 和 Cl(-) 输出。额外高盐饮食 （4%氯化钠) 并没有显著改变流体的摄入量和尿量，但明显增加尿输出的 Na(+) 和 Cl(-)，大大接近值 (P < 0.05) sgk1(+/+) 小鼠比 sgk1(-/-) 更大 (Na(+): 2,572 + 1,428 + /-236 ； 与 462Cl(-): 2,364 + 1,379 + /-225 的摩尔/24 h 与 388)。血压是类似 sgk1(+/+) 和 sgk1(-/-) 控制饮食或果糖不单只增加 sgk1(+/+) 小鼠 (+ /-1 与 + /-0.7 毫米汞柱，P 103 115 < 0.05） 后联合的果糖和高盐摄入量。急性静脉胰岛素输注 (葡萄糖钳) 造成 antinatriuresis sgk1(+/+) 小鼠明显钝 sgk1(-/-) 小鼠的影响。观察结果表明 SGK1 在胰岛素介导钠潴留中的关键作用和盐敏感高血压疗效高果糖摄入量。
缺乏血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 的基因靶向小鼠肠道功能。
体外实验表明血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 (SGK1) 的能力，以刺激肠道 Na (+)-耦合葡萄糖枸橼酸转运蛋白基因 1 (SGLT1) 和肠道 Na(+)/H(+) 换 3 (NHE3)。本研究探讨了体内的肠道运输的规管 SGK1 的贡献。SGK1 谈话内容水平被定的实时荧光定量 PCR 和葡萄糖诱导电流 (I(g)) 中的进展室实验反映 SGLT1 活动。BCECF 荧光用于测定钠 (+)-依赖 ph 值恢复从铵脉冲 (DeltapH(NHE)) 反映钠氢交换体活动。其结果是，肠道 SGK1 誊本级别都大大加强了 10 microg.mg 机构 wt(-1).day(-1) 地塞米松 （敏捷） 4 天治疗。I(g) 是在控制条件下，几乎完全相同的 sgk1 基因敲除小鼠 （sgk1(-/-)) 和其野生型 littermates (sgk1(+/+))。4 天治疗与敏捷，然而，增加 I(g) 大约三倍 sgk1(+/+) 小鼠中但不是在 sgk1(-/-) 小鼠。DeltapH(NHE) 是在治疗前的 sgk1(-/-) 和 sgk1(+/+) 小鼠相似。敏捷增加 DeltapH(NHE) 大约三倍 sgk1(+/+) 小鼠和大约分为两个 sgk1 (-/-) 小鼠，效果显著钝下具体 NHE3 阻滞剂 S 3226 (10 microM）。根据印迹分析，敏捷大大增强画笔边框膜 sgk1(+/+) 小鼠的而不是 sgk1 SGLT1 和 NHE3 蛋白丰度 (-/-) 小鼠。最后，在小肠 SGLT1 和 NHE3 的基本功能不需要由 SGK1 刺激。不过，SGLT1 对糖皮质激素的影响是完全，而且 NHE3 部分，依赖于 SGK1。
缺乏 SGK1 和 SGK3 基因靶向小鼠肾功能。
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 (SGK) 1 和 SGK3 分享到长期能力几个离子通道，包括上皮的 Na(+) 通道。而 SGK1 是基因组的血和糖皮质激素的控制下，SGK3 是一对表示。SKG1 基因敲除 （当它饮食标准，但它能够保留氯化钠是受损，当它喂盐缺粮 sgk1(-/-)) 鼠标是貌似正常。在 SGK3-挖空 （sgk3(-/-)) 鼠标粮标准和盐不足、 毛发生长惊人地推迟但盐排泄是正常的。因此有可能被认为 SGK1 和 SGK3 可以相互取代对方，从而防止严重氯化钠小鼠丢失的 sgk1(-/-) 和 sgk3(-/-)。我们越过 SGK1 和 SGK3 基因敲除小鼠和相比肾功能电解质排泄的双突变体 （sgk1(-/-)/sgk3(-/-))，其野生型 littermates (sgk1(+/+)/sgk3(+/+)）。类似于 sgk3(-/-) 小鼠，sgk1(-/-)/sgk3(-/-) 小鼠显示延迟的毛发生长。血压是略，但明显 (P < 0.03），低于在 sgk1(-/-)/sgk3(-/-) （102 + /-4 毫米汞柱) sgk1(+/+)/sgk3(+/+) (+ /-3 毫米汞柱 114) 小鼠维持小鼠的差异美联储低和高盐饮食。血浆醛固酮浓度有显著 (P < 0.01) 高于 sgk1(-/-)/sgk3(-/-) sgk1(+/+)sgk3(+/+) 在小鼠喂食控制 (+ /-与 + /-32 pg/ml 143 143 511) 和低盐 (1,325 + /-199 与 362 + /-145 pg/ml) 饮食。在盐耗竭，期间绝对和小数部分组成的 Na(+) 的分泌物是大大 (P < 0.01) sgk1(-/-)/sgk3(-/-) (+ /-0.2 摩尔/24 h g 身体 wt 1.2、 0.12 + /-0.03%) 比 sgk1(+/+)/sgk3(+/+) + /-0.01 %0.04 0.4 + /-0.1 摩尔/24 h g 身体 wt） 小鼠中较高。Sgk1(-/-)/sgk3(-/-) 小鼠与 sgk3(-/-) 小鼠和 sgk1(-/-) 小鼠与轻微受损的肾盐保留共享延迟的头发生长。鼻息肉激酶额外缺乏不会大幅度复合任一属性表型。
SGK1 依赖于心脏的结缔组织生长因子形成和纤维化的实验性高血压治疗后。
血醛固酮和去氧皮质酮醋酸酯 (DOCA) 刺激肾小管盐重新吸收、 盐食欲大增、 诱导胞外卷扩展和提升血压。血的心脏效应包括基质蛋白沉积导致心脏纤维化，这至少部分是由于对心脏细胞激素的直接行动的刺激。到目前为止仍难以调解 mineralocorticoid 诱导心脏纤维化的信号转导机制。血已显示出长期血清和糖皮质激素诱导激酶 1 (SGK1)，参加了对肾小管 Na + 重吸收和盐胃口血的影响。探索 SGK1 参与诱导 mineralocorticoid SGK1 基因敲除小鼠心脏纤维化的发病机制 （sgk1-/-) 和野生型 littermates (sgk1 + / +) 被植入一个 21 天释放 50 毫克 DOCA 球和附带 1%氯化钠为期 18 天的饮用水中。这种实验性高血压高盐治疗增加血压的这两种基因型，但导致重大心脏纤维化只在 sgk1 + + 但不是在 sgk1/小鼠。根据实时聚合酶链反应和免疫印迹，DOCA 高盐治疗增强谈话内容级别和蛋白表达的心肌结缔组织生长因子 （CTGF） 只在 sgk1 + + 但不是在 sgk1/小鼠。此外，DOCA (10 microM) 上调结缔组织生长因子表达与肺成纤维细胞增强结缔组织生长因子启动子活性分离 sgk1 + + 但不是从 sgk1/小鼠影响涉及 mineralocorticoid 螺内酯敏感受体和激活的核因子 kappaB (NFkappaB)。我们的研究结果表明 SGK1 mineralocorticoid 诱导结缔组织生长因子的表达及心肌纤维化中发挥着决定性的作用。
肾 Ca2 + Sgk1 敲除小鼠的处理。
在非洲爪蟾卵母细胞中的共表达研究表明刺激肾上皮经通道 TRPV5 血清和糖皮质激素诱导激酶 1 (SGK1) 的能力。SGK1 增加血浆膜，需要的 Na(+)/H(+) 换热器调节因子 2 (NHERF2) 参与影响通道蛋白的丰度。本研究报告被执行以研究 SGK1 在体内肾经处理的规管方面的作用。到此结束、 TRPV5、 calbindin D-28 K 丰度和肾经排泄分析缺乏功能性 SGK1 针对基因的小鼠 (sgk1 (-/-)) 和其年龄和性别匹配的 littermates (sgk1 (+ +))。免疫组化显示低丰度的 TRPV5 和 calbindin sgk1 D-28 K 蛋白 (-/-) 比 sgk1 在小鼠 (+ / +) 小鼠，两者都厌倦控制饮食。标记 ly Ca(2+) 缺饮食喂养小鼠增加 TRPV5 蛋白丰度的这两种基因型。肾经排泄下控制饮食是在 sgk1 （-/-） 比大大低于 sgk1 (+ / +) 小鼠。Ca(2+) 缺饮食减少经这两个表型的相同水平的肾排泄。呋塞米增加经排泄分数和消散表型之间的差异。我们的结论缺乏 SGK1 可能会导致减少 TRPV5 丰度的连接管，但不能废除 TRPV5 调控。TRPV5 在连接管 sgk1 丰度的减少 (-/-) 小鼠大概赔偿由上游肾单位部门，例如循环的 Henle，可能间接产生的醛固酮敏感远端肾单位、 盐损失，和增强的 Na(+) 受损 SGK1 依赖 Na(+) 重吸收增强的经重吸收 （和 Ca(2+)) 重新吸纳这些上游肾单位各阶层中的。
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 介导糖耐量的盐的敏感性。
多余的盐摄入量减少外围葡萄糖的摄取，从而损害糖耐量。刺激细胞葡萄糖摄取的涉及 phosphatidylinositide-3-激酶 (PI-3 K)-依存激活蛋白激酶 B/Akt。下游进一步激酶 PI-3 K 是血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 (SGK） 1，这是血的增高，因此，编码的盐摄入量。探索 SGK1 在盐依赖葡萄糖吸收的作用 SGK1 基因敲除小鼠 （sgk1(-/-)) 和其野生型 littermates (sgk1(+/+)) 被允许自由进入自来水 （控制） 或 1%盐水 (高盐)。根据免疫印迹，减少高盐和去氧皮质酮醋酸酯 (DOCA ； 35 毫克/公斤身体 wt) 增加骨骼肌肉和脂肪组织的 sgk1(+/+) 小鼠 SGK1 蛋白丰度。葡萄糖 (3 g/k g 身体 wt) 到 sgk1(+/+) 小鼠的腹腔注射短暂升高血浆葡萄糖浓度控制 (164 + /-23 毫克/分升) 动物比接近显著较高的值最大值 [血糖] p） 高盐 (+ /-39 毫克/分升 281) 中。DOCA 没有大幅度修改 [血糖] p，控制 sgk1(+/+) 小鼠但大大减少 [血糖] p、 高盐 sgk1(+/+) 小鼠的最大、 安体舒通 (50 毫克/公斤身体 wt) 扭转影响最大。[血糖] p，最大值是不敏感的高盐和明显高于对照组小鼠 sgk1(+/+) sgk1(-/-) 小鼠。吸收 2-脱氧-d-[1，2-H (3)] 到骨骼肌肉和脂肪组织葡萄糖是小了很多 sgk1(-/-) 小鼠比 sgk1(+/+) 小鼠和下跌 sgk1(+/+) 小鼠高盐。曼浦汉克 293 转染细胞活动 (S422D) SGK1，但不处于非活动状态 (K127N) SGK，刺激 phloretin 灵敏葡萄糖吸收。最后，高盐减少 SGK1 依赖细胞葡萄糖摄取。SGK1 因此参加盐摄入量与糖耐量之间的联系。
迟钝的 DOCA/高盐致蛋白尿和缺乏 SGK1 针对基因的小鼠肾小管间质损害。
血刺激肾小管 Na(+) 重新吸收、 提高盐食欲、 增加血压，和青睐肾纤维化的发展。对肾小管 Na(+) 重吸收和盐胃口的血影响涉及血清和糖皮质激素诱导激酶 1 (SGK1)。激酶高是在纤维化组织中表达的。因此本实验探讨 SGK1 参与肾纤维化。为此目的，SGK1 基因敲除小鼠 (sgk1 (-/-)) 和其野生型 littermates (sgk1 (+ / +)) 被植入 desoxycorticosterone 醋酸 (DOCA)-释放微丸和提供的 1%盐水作为饮用水 12 个星期。治疗导致显著上升流体和 Na(+) 摄入量和尿输出的流体和 sgk1 在 Na(+) (+ / +) 小鼠、 sgk1 在钝的影响 (-/-) 小鼠。这两种基因型的相似程度在第 7 周内血压上升，但在未来 5 周内，它进一步增加只在 sgk1 (+ / +) 小鼠。肌酐变化不大，但蛋白尿在 sgk1 急剧增加 (+ / +) 小鼠、 效果显著钝 sgk1 在 (-/-) 小鼠。显示 12 个星期治疗后的组织学标记与肺间质纤维化及炎症 sgk1 从肾脏的肾小球硬化及肾小管间质损害 (+ / +) 小鼠，但不是能从 sgk1 (-/-) 小鼠。最后，缺乏 SGK1 可防止 DOCA/高-盐致蛋白尿和肾纤维化。
电阻的缺乏血清和糖皮质激素诱导激酶 SGK1 对盐敏感高血压高脂肪饮食诱导的小鼠。
血提高表达和胰岛素刺激激酶活性的血清和糖皮质激素诱导 SGK1，其激活肾上皮 Na +) 通道张震）。下盐缺粮，SGK1 基因敲除小鼠 （sgk1-/-) 排泄比其野生型 littermates 大得多的氯化钠 (sgk1 + / +) 和成为降压。本实验探讨是否 SGK1 参加高血压高脂肪饮食和高盐摄入量的影响。肾 SGK1 蛋白质丰富的 sgk1 + + 高脂肪饮食后小鼠被大大提升。根据控制饮食、 液体摄入、 血压、 尿流率和尿 Na +，K + 和 Cl-排泄都类似于 sgk1-/-和 sgk1 + + 小鼠。下一个标准的饮食，高盐 （1%氯化钠中喝水 25 天） 增加液体摄入、 尿流率和尿 Na +、 K + 和 Cl-排泄同样在 sgk1-/-和 sgk1 + + 而不会显著改变血压的小鼠。液体摄入、 尿流率、 尿 Na +、 K + 或 Cl-排泄，或血浆醛固酮水平，但增加的血浆胰岛素、 总胆固醇、 甘油三酯的浓度和这两种基因型相同程度的收缩期血压高脂肪饮食单 （17 wk) 并没有显著改变。额外的盐摄入量 （1%氯化钠中喝水 25 天） 上高脂肪饮食不影响高胰岛素血症或高脂血症，但增加液体摄入、 尿流率和氯化钠尿中 sgk1-更多 /-比 sgk1 在 + / + 小鼠。此外，在接收高脂肪食物的动物，额外的盐摄入量增加血压只有在 sgk1 + + 老鼠 (132 + /-3 毫米汞柱) 但不是在 sgk1-/-小鼠 (120 + /-4 毫米汞柱)。因此缺乏 SGK1 防止高血压合并高脂肪高盐饮食的影响。
从行为到突触： 快速调制的定义与工程 GABAA 受体的神经细胞类型。
哺乳动物，确定特定神经元或网络行为的贡献是一个关键的挑战。我们在这里介绍通过启用定义的细胞群体中的突触抑制快速调制简化这一过程的方法。唑吡坦、 具有系统重要性积极的变构调制器，增强了功能的 GABAA 受体，绑定需要 gamma2 亚单位中的苯丙氨酸残留物 （Phe77）。此渣变为异亮氨酸的老鼠是对唑吡坦不敏感。由 Cre 重组酶诱导换 gamma2 亚单位 （即，交换 Phe77 Ile77），旦灵敏度可以还原到 GABAA 受体在选中的单元格类型。我们证明此方法在小脑，凡旦迅速诱导重大电机赤字浦肯野细胞进行对其行动唯一敏感时的力量。这种加分子和药理技术已超过目标单元格消融的明显优势，将宝贵的调查很多神经元电路。
血清和糖皮质激素诱导激酶 SGK1 在糖皮质激素刺激胃酸分泌的作用。
糖皮质激素刺激胃酸的分泌，有利于消化性溃疡的发展的影响。假定机制涉及包括血清和糖皮质激素诱导激酶 (SGK1)，刺激上皮通道和转运多种。本研究探讨了 SGK1 的贡献对胃酸分泌糖皮质激素的影响。在隔离从缺乏功能性 SGK1 针对基因的小鼠胃腺体 (sgk1 (-/-)) 和其野生型 littermates (sgk1 (+ / +)），H (+)-分泌 （DeltapH/min) 决心利用 2'，7'-双 (carboxyethyl)-5 (6)-carboxyfluorescein (BCECF)-荧光、 SGK1 誊本级别的原位 hybdridization 和 KCNQ1 通道的实时聚合酶链反应和免疫组化表达。SGK1 誊本级别加强了 10 杯/g 体重 (BW) 4 天治疗 / 天地塞米松 （敏捷）。前处理、 DeltapH/min 是类似 sgk1 在 (-/-) 和 sgk1 (+ / +) 小鼠。敏捷增加 DeltapH/min 约四倍 sgk1 在 (+ / +) 小鼠和大约分为两个 sgk1 (-/-) 小鼠，影响存在 /H K (+) (+) 下废除 ATPase 抑制剂奥美拉唑 (50 microM）。至 35 毫米的地方 K(+) 浓度增加 (取代 Na(+)) 增强 DeltapH/min，不能进一步以敏捷的刺激并不是 sgk1 之间显著不同 (-/-) 和 sgk1 (+ / +) 小鼠。胆碱 （100 microM） 和眼压升高 (5 microM） 刺激胃酸分泌 sgk1 在类似程度 (-/-) 和 sgk1 (+ / +) 小鼠。最后，SGK1 对于基底和环磷酸腺苷刺激胃 H(+) 分泌不是必需，但参与胃 H(+) 分泌刺激的糖皮质激素。糖皮质激素和 SGK1 的影响添加剂的胞外 K(+) 浓度增加并不因此可能涉及的 K(+) 频道的刺激。
海马 Theta 节奏和其耦合伽玛振荡与需要快速抑制到小白蛋白抗体阳性 Interneurons 上。
海马 theta (5-10 Hz) 和伽玛 （35-85 Hz） 振荡取决于安基 interneurons 抑制网络。然而，直接和特定于类型的单元格-干扰抑制方法的缺乏，无法帮助链接突触和细胞属性具有网络功能的更好的见解。在这里，我们生成转基因的小鼠 （PV-Deltagamma(2)) 中的突触抑制被烧蚀中小白蛋白抗体阳性 (PV +) interneurons。潜在的海马本地字段和单位录制的自由表现小鼠 CA1 区发现该 theta 节奏强烈减少这些小鼠。Θ 和伽玛振荡的特征耦合 PV-Deltagamma(2) 小鼠强烈改变了多只 theta 节奏的减幅可能占的。奇怪的是，伽马振荡是不会改变。这些数据表明到光伏 + interneurons 的突触抑制 θ-和不可或缺的耦合到伽玛振荡而不是海马的节奏伽玛活动。节奏活动类似的更改是在模仿的遗传修饰，暗示 intrahippocampal 网络可能有助于这些影响计算海马网络模型获得的。
突触抑制浦肯野细胞介导 Vestibulo 小脑的运动学习巩固。
虽然前馈抑制浦肯野细胞上的首次记录了 40 多年前，我们一点理解如何抑制 interneurons 的贡献在表现动物的小脑功能。使用鼠标线 （PC Deltagamma2) 在中的 GABA(A) 受体介导的突触抑制有选择性地删除浦肯野细胞，我们审查了前馈抑制作用的分子层 interneurons 如何规管的 vestibulo 眼反射的适应。虽然相对温和的基线电机性能受损，适应的阶段 vestibulo 眼动反射和巩固增益适应能力强烈受到影响。浦肯野细胞显示异常模式简单的峰值，期间和在没有诱发补偿性眼球运动。根据我们实验的数据建模，我们建议前馈抑制，通过控制小尺度模式的浦肯野细胞活性，使诱导的小脑和前庭核神经元可塑性。
研究小脑电路由 GABA(A) 受体神经元所选类型的远程控制。
虽然 GABA(A) 受体介导抑制分子层 interneurons (多边) 小脑浦肯野细胞已被激烈细胞水平研究，但它仍不清楚这项抑制如何规管在小脑依赖行为。我们执行了两个补充办法调查 MLI 浦肯野细胞突触在行为上的作用。在第一种方法我们永久地打乱了突触后 GABA(A) 受体基因去除浦肯野细胞 (PC Deltagamma2 小鼠) 在突触后抑制快速突触传递。我们发现慢性中断 MLI 浦肯野细胞突触的强烈损害小脑学习的前庭眼表反射 (VOR) 大概是扰乱浦肯野细胞活性的时间规律。不过，PC Deltagamma2 小鼠的基线 VOR 反射只有轻度影响的 ；确实 PC Deltagamma2 小鼠显示无共济失调或步态异常，暗示浦肯野细胞活性 MLI 控制是不参与电机进行中的任务或系统补偿其损失。调查我们开发了一种替代性的遗传技术 ； 第二种可能性我们取得 synapse MLI 浦肯野细胞有选择性地敏感迅速操纵与 GABA(A) 受体调制器旦 （PC gamma2 插拔老鼠）。分钟后腹腔唑吡坦注射，这些 PC gamma2 插拔小鼠到实时电机控制突触发达重型电机异常，揭示 MLI 浦肯野细胞作出了重大贡献。单元格类型选择性永久的挖空突触后膜上输入和安基输入相同的突触在快速可逆调制说明如何追求这两个战略提供更全面的视图。
安基定量组织突触中鼠标小脑皮质的分子层。
小脑皮层，分子层的 interneurons (星状和篮单元格） 提供安基输入浦肯野细胞，并对彼此和可能的其他 interneurons。主要是在向浦肯野细胞突触 interneuron 调查了丁酸抑制分子层中。在此研究中，我们用补充消减战略来定量评估安基突触与 interneurons 浦肯野细胞树突上的比例。我们生成的 GABAA 受体 1 受体及其亚基 (GABAARalpha1) 有选择性地从浦肯野细胞使用 Cre/loxp 序列重组系统删除小鼠模型。1 受体及其亚单位删除导致从浦肯野细胞，使我们能够确定的密度 GABAAR 集群中 interneurons GABAAR 聚合完全丧失。在一种补充做法，我们已确定浦肯野细胞作为抑制突触后站点的特定标记使用 alpha 肌上撞击的 GABA 神经突触的密度。结合这些逆的方法，我们发现神经突触收到 interneurons 的代表约 40%的所有安基突触的分子层。值得注意的是，这一比例是稳定在产后开发期间，指示同步突触形成。基于纯的安基到 interneurons 上的神经突触数量，我们建议相互抑制作用必须发挥重要的是，尚未很大程度上被忽视、 计算作用小脑皮质中。
Ro 15 4513 拮抗酒精引起镇静小鼠通过 αβγ2 型 GABA(A) 受体。
酒精 (乙醇) 在中枢神经系统中有许多分子的目标，其效能低这些地点相比的镇静药物。这使得难以发现乙醇的绑定站点。有两个假定绑定站点在 γ-氨基 Ro 15 4513 拟议的乙醇拮抗剂、 既定 γ 2 依赖亚基的苯二氮卓类网站，最近报道的 δ 亚基依赖 Ro 15-4513/乙醇绑定站点 (GABA) 酸 A 型受体亚型。在这里，我们旨在澄清的 Ro 15-4513 两个地点在体内作用。我们发现的拮抗作用的乙醇 tn 野毒小鼠 Ro 15 4513 采取的行动是取决于测试： 开放现场试验表明 1.5-1.8 g/k g 乙醇所致的轻镇静敏感的 Ro 15-4513，而乙醇诱导焦虑影响几项测试表明乙醇诱导的影响对 Ro 15 4513 不敏感。Ro 15 4513 乙醇诱导镇静的拮抗作用是 GABA(A) 受体 δ 亚基基因敲除小鼠中不受影响。相比之下，当测试 GABA(A) 受体 γ 2 亚基 F77I 敲入鼠标线 （γ2I77 老鼠） 与苯二氮卓类站点及其强烈减少亲和力 Ro 15-4513，我们发现乙醇诱导镇静作用不再不悦的 Ro 15 4513。事实上，γ2I77 小鼠已只有一小部分的高亲和性结合的 [H (3)] Ro 15 4513 左比 tn 野毒老鼠，尤其是在尾壳和间隔的地区，但这些残余网站显然没有参与乙醇拮抗作用。最后，我们发现 Ro 15 4513 γ 2 依赖亚基的苯二氮卓类网站上的某个操作取消乙醇的镇静效果。
小白蛋白抗体阳性 CA1 Interneurons 所需的空间工作，而不是引用内存。
皮质电路中的小白蛋白抗体阳性安基 interneurons 被虚拟控制认知功能。若要测试这个想法直接，我们功能小白蛋白抗体阳性 interneurons 有选择性地从中删除小鼠海马 CA1。我们发现小白蛋白抗体阳性 interneurons 是可有可无的空间参考，但对于空间工作记忆至关重要。
两个通过非 γ 2 依赖调制调解的 GABAA 受体苯二氮卓类站点配体的行动。
强效镇静催眠旦和惊厥 methyl-6,7-dimethoxy-4-ethyl-β-carboline-3-carboxylate (DMCM) 法主要是通过绑定到的苯二氮卓类网站主要的抑制神经递质受体，pentameric γ-氨基丁酸型受体 (GABA(A))。此绑定关键取决于野生型 F77 残留的 GABA(A) 受体 γ 2 亚基。Γ 2 亚基 F77I 点突变 （γ2I77 鼠标线） 与小鼠失去这些配体，以及其最强健的行为行动，在低剂量的高亲和力 nanomolar 绑定。有趣的是，γ2I77 小鼠提供一种工具来研究这些物质通过其他可能的绑定站点 GABA(A) 受体介导的行动。在配体放射自显影实验中，我们 γ2I77 鼠标大脑各节中发现了大量的丰富的纹状体和隔的残余非 γ 2 依赖亚基的苯二氮卓类站点绑定。唑吡坦只弱受影响这残余的绑定，在 micromolar 的浓度和只高旦剂量 (≥ 40 毫克/千克) 在电机协调 γ2I77 小鼠引起镇静和赤字。DMCM 通过 GABA(A) 的 γ2I77 小鼠前脑受体中学、 低亲和力非苯二氮卓类绑定网站了卡巴的行动，这种药物还充分流离失所残余的苯二氮卓类网站标签。在行为测试中，高剂量 （20 毫克/千克） 的 DMCM 是镇静和调制的恐惧学习。DMCM，但不是旦担任研究使用配体绑定和电生理检测重组 GABA(A) α1/6β3 受体激动剂。我们的研究结果突出显示的知名度较低的 DMCM 和旦不通过 γ 2 亚基含有苯二氮卓类网站 GABA(A) 受体介导的高剂量的行动。
GABA(A) 受体 γ 2 亚基从小白蛋白神经元删除导致广泛的行为改变。
我们调查快速突触抑制行为的意义 αβγ2 型 GABA(A) 受体在小白 (Pv) 蛋白细胞。GABA(A) 受体 γ 2 亚基基因是有选择性地灭活光伏阳性神经元的 Cre/loxp 序列重组重组。由此产生的 Pv Δγ2 小鼠是相对健康在产后第一周 ；但然后 Cre 开始表示，小鼠逐步发展广泛表型改变包括低体重、 电机赤字和震颤，减少的焦虑水平，声惊吓反射和受损空间学习减少的疼痛的敏感性和缺惊抑制。不过，删除不是致命的和小鼠并没有显示甚至一年后的死亡率增加。放射自显影与 t-butylbicyclophosphoro [(35) S] thionate 建议 GABA(A) 受体与载有高水平的小白蛋白神经元的中枢神经系统区域唯一 α 和 β 亚基的增加的量。我们使用 BAC 转基因技术，减少一些光伏 Δγ2 表型有选择性地 re-expressing 回一些光伏电池 （网状丘脑神经元和小脑光伏阳性神经元） 的野生型 γ 2 亚基。这产生了那么严重损伤的运动技能和相比光伏 Δγ2 小鼠空间学习但仍然是所有其他赤字。我们的研究结果揭示快速丁酸抑制到各种不同的行为模式，如电机协调、 感觉运动一体化、 情感行为和痛的光伏阳性神经元上的普遍意义。
化学遗传学： 受体-配体对神经元的活动迅速操纵的。
神经元电路功能的夹层，走向新的遗传工具已制定若干，使快速和可逆操纵基因定义神经元亚型完好的哺乳动物脑电路中。旁边的光遗传学技术的突破，受体-配体对提供补充的方法来调节使用化学遗传学的神经元活动。
