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In JoVE (1)

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Articles by Qiang Feng in JoVE

 JoVE Biology

Génération de cellules souches pluripotentes induites par la reprogrammation des fibroblastes embryonnaires de souris avec un facteur de transcription Quatre, doxycycline inductible système de transduction lentiviraux

1Stemgent, 2Whitehead Institute for Biomedical Research, MIT - Massachusetts Institute of Technology


JoVE 1447

Inductible Stemgent Dox souris Lentivirus TF Set peut reprogrammer des fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) pour souches pluripotentes induites (iPS). Ici nous démontrons le protocole de DOX-expression inductible de facteurs de transcription de souris reprogrammation Oct4, Sox2, Klf4 et c-Myc pour générer des colonies iPS qui expriment des marqueurs communs MES pluripotence.

Other articles by Qiang Feng on PubMed

[Corrélation De La Longueur Du Segment Vasculaire in Vitro Avec Le Métabolisme De L'endothéline-1, Des Cellules Endothéliales--étude Sur L'effet Cumulatif De La Contrainte De Traction Dans La Membrane De Cellules Endothéliale Supérieure. III]

Quelques-unes des expériences de flux ont été utilisés pour vérifier une hypothèse théorique proposée par Fung et collègue qui a montré que la contrainte de traction dans la membrane de la cellule supérieure de l'endothélium vasculaire pourrait s'accumuler en amont dans le sens de la circulation sanguine. Les cellules endothéliales de répliquent le segment de veine ombilicale humaine (HUVSEC) in vitro avec une longueur de 11 cm et 21 cm ont été exposés à la même pulsatile contraintes de cisaillement laminaires en moyenne de 0,12 N/m2 pour les 42 heures. Le taux de production moyen de endothelin-1(ET-1), au segment de 11 cm est 50 % inférieur à celui au segment de 21 cm (16,93 +/-0,89) vs (26.13 +/-1,79) pg/cm2.h respectivement. Le taux de production moyen d'ET-1 dans un écoulement laminaire pulsatile était significativement plus élevé que celle sous écoulement laminaire stationnaire. Il a montré que, forte corrélation de la longueur des HUVSEC avec leur métabolisme ET-1 existe, ce qui suggère que la contrainte de traction dans la membrane de cellules endothéliale supérieure pourrait s'accumuler.

[Perfusion Continue Culture Hybridomes Pour La Production D'anticorps Monoclonaux]

Hybridomes ont été cultivées par perfusion continue de Fibra-Cel de bioréacteur de garnissage de 5 L pour 22 jours d'un milieu exempt de sérum ou de taux sérique. Les acides aminés correspondait ont été nourris et concentration sérique a été diminuée par l'analyse de la concentration de glucose, taux d'absorption de l'oxygène, quantité d'anticorps secrétaire et concentration d'acides aminés dans le surnageant de culture. En comparant avec la culture de perfusion continue acides aminés non nourris, quantité d'anticorps de la production a augmenté environ 2 - 3 fois. La densité de cellules inoculées était de 2,5 x 10 5 cellules/mL, alors que la densité cellulaire finale était 8,79 x 10 cellules/mL. Production d'anticorps a atteint 295 mg/L/d au niveau moyen et le niveau le plus élevé a été atteint 532 mg/L/d. Ces résultats fournissent un mode principal de la culture de l'agrandir pour l'industrialisation de l'anticorps monoclonal.

[Contrôle En Ligne Des Taux D'absorption D'oxygène Et Son Application Dans La Culture De L'hybridome]

Contrôle et analyse en ligne sont essentiels pour l'optimisation des rendements dans la culture de cellules animales. Le moniteur proche du nombre de cellules viables aide à mieux comprendre dans le métabolisme et d'affiner la stratégie sur la culture. Dans cette étude, nous utilisons le taux d'absorption de l'oxygène (notre) pour estimer le nombre de cellules viables et la stratégie de contrôle de feed-back basé sur notre nutriments alimentation pour améliorer l'efficacité de la culture cellulaire. Une cellule d'hybridome (HAb18) a été la culture fed-batch et perfusion modèle à l'aide d'un milieu sans sérum en bioréacteur de L CelliGen Plus 5 (NBS Co., American) et 5 bioréacteur L Biostat B (Braun Co., Allemagne). Le système et la méthode pour en ligne notre surveillance dans des bioréacteurs, basée sur la mesure dynamique d'oxygène dissous (OD), ont été élaborés. La méthode d'estimation de concentration cellulaire en ligne avait été fondée sur la relation entre la croissance de l'hybridome et le taux d'absorption d'oxygène. Cette méthode a été ensuite utilisé pour déterminer notre et les concentrations de cellule, anticorps, glucose, lactate, de glutamine et d'ammoniac dans les bioréacteurs à donné fois. La relation entre les éléments nutritifs et notre métabolisme était contrôle de contre-réaction étudiés et basée sur notre stratégie, qui a utilisé le deltaOUR de l'État = 0 comme point de règlement, a été créé et utilisé pour contrôler les taux de nutriments ou moyen taux d'alimentation dans la culture de la perfusion. Les résultats ont montré qu'il existait une relation étroite entre notre, concentration de cellules vivantes, de la productivité des anticorps et la consommation de glutamine. La baisse soudaine de notre peut être causée par l'appauvrissement de la glutamine, et avec des délais différents, la productivité de concentration et d'anticorps des cellules viables a également diminué. L'analyse révèle la relation linéaire entre le notre et la densité de cellules vivantes dans la phase de croissance exponentielle comme QNotre = (0,103 +/-0,028) x 10(-12) mol/cellule/h. Ces résultats peuvent servir à la détection en ligne de la densité de cellules vivantes. Notre étude a également indiqué que, en ajustant le taux de perfusion avec stratégie basée sur notre retour, il est possible d'augmenter continuellement en concentration de densité et des anticorps de cellules viables dans la culture de la perfusion.

[Expression D'entérotoxine Thermolabile Et La Stratégie De Purification Et De Stockage]

L'entérotoxine thermolabile (LT) d'Escherichia coli est une toxine protéine bactérienne avec une structure de hexamère AB5. LT est un puissant adjuvant muqueux lorsqu'administrés en concomitance avec des antigènes solubles. Toutefois, son utilisation dans l'immunité des muqueuses est gênante en raison de son faible rendement et de la dépolymérisation pendant le stockage à long terme dans des conditions normales. Dans cette étude, nous signaler un système d'expression efficace et optimisé la stratégie de purification et de stockage de LT. Un gène codant pour le LT a été cloné dans le vecteur pET11c et transformé en e. coli BL21 (DE3). En cultivant cette souche sur milieu modifié M9-CAA, LT a été exprimée efficacement. Environ 46 mg/L LT pourrait être purifiée à partir du surnageant de lysat de bactéries. À l'aide de D (+)-colonne de galactose immobilisée, LT pourrait être purifié à une large gamme de pH avec différents tampons d'élution. Les tampons d'élution optimisés sont TEAN (pH 7,3) contenant 0.3mol / L galactose et carbonate de tampon (pH 10.4) contenant 0.3mol / galactose L. Après avoir séché par gel et placé à 4 degrés C, LT dissous dans TEAN (pH 7,3) et tampon de carbonate (pH 10.4) ont été analysés par HPLC. Les résultats indiquent que l'intégrité du AB5 hexamère a été bien conservée. LT pourrait subir un stockage à long terme en vertu de cette condition. Cela a été prouvé une stratégie optimisée du stockage LT. Les résultats de GM1, contraignant l'essai et l'essai de toxicité sur a montrent que le LT recombinante purifiée caractère biologique normal.

Effets Différentiels De La Fibronectine Cellulaire Et La Fibronectine Plasmatique Sur L'adhérence De Cellules De Cancer De L'ovaire, Migration Et Invasion

La principale forme de la fibronectine (FN) produite par les cellules tumorales in vivo est FN cellulaire (cFN), qui diffère du plasma utilisé FN (pFN) structurellement et fonctionnellement. Nous avons comparé les effets du cFN et pFN sur les lignes d'un carcinome ovarien OVCAR-3 et SKOV-3 et sur les cultures de l'épithélium de revêtement ovarien normal, qui est le précurseur des carcinomes ovariens épithéliaux. Cellules épithéliales de surface ovariennes et SKOV-3 cellules attaché et se propager plus rapidement sur l'art que le pFN. Le cFN, SKOV-3 migration a été améliorée par rapport aux pFN ou plastique. Dans un essai de transfilter de matrigel, cFN fortement inhibée SKOV-3 invasion, contrairement aux pFN. Contrairement aux SKOV-3, cellules OVCAR-3 ont adhéré plus vite sur FN que le plastique, mais n'aucune distinction entre cFN et pFN, et ils ont fait pas migrer ou envahir le matrigel avec ou sans le FN. Dans les deux lignées de carcinome, prolifération influa soit FN. Les résultats montrent des divergences profondes dans les réponses au cFN et pFN par deux lignes de carcinome invasif de l'ovaire. Parce que l'art est le type principal que cancer cells in vivo rencontre, extrapolations à partir de données de culture aux événements in vivo devraient préférablement être après les études utilisant cette forme de FN.

Cuivre Effet Sur L'expression De 70 De Protéine Du Choc Thermique Et L'apoptose Dans Les Hépatocytes De Truite Arc-en-ciel

L'hépatotoxicité de cuivre sous-jacente de mécanisme a été étudiée dans des cultures primaires d'hépatocytes de truite arc-en-ciel maintenus en milieu Leibovitz-15. Traitement de CuSO4 (0, 25, 50, 100 et 200 microM) a entraîné une augmentation dose-dépendante dans expression de choc thermique protéine 70 (hsp70) à 24 et 48 h après l'exposition. Il y a eu aucun effet de cuivre (CuSO4 de 200 microM) sur l'hépatotoxicité après 24 h, considérant que des expositions plus longues (48 h) conduit à la fuite d'une augmentation de lactate déshydrogénase (LDH) et l'apoptose, démontrée par la coloration nucléaire de fluorescence et de la fragmentation de l'ADN. Vitamine C (1 mM), un piégeur de radicaux libres, inhibe cette apoptose induite par le cuivre ce qui implique un rôle pour les espèces réactives de l'oxygène dans la toxicité du cuivre. Toutefois, aucune inhibition parallèle d'expression de protéine de fuite ou hsp70 soit LDH a été observée avec la vitamine C, ce qui laisse supposer qu'au moins deux mécanismes indépendants sont impliqués dans la réponse cellulaire au cuivre. Aussi, cuivre exposées (24 h) des cellules ont été incapables de mettre en place une réponse hsp70 à un choc de chaleur normalisés (+ 15 degrés C pendant 1 h), même en présence de vitamine C. ensemble, ces résultats suggèrent que l'hépatotoxicité du cuivre comprend l'altération de hsp70 réponse aux facteurs de stress suivants et/ou de signaux, ce qui est crucial pour la protection des cellules de protéotoxicité.

Expression Et Régulation Des Activateurs Du Plasminogène, Inhibiteur D'activateur Du Plasminogène Type-1 Et Stéroïdogène Protéine Régulatrice Aiguë Dans Le Corpus Luteum De Singe Rhésus

Le corpus luteum (CL) est un organe endocrine transitoire qui sécrète de la progestérone pour prendre en charge les grossesses précoces. En utilisant des matériaux de primates de singes rhésus, nous avons dans cette étude étudié l'expression et la régulation des activateurs du plasminogène (SAP) et PA inhibiteur de type 1 (PAI-1) lors du développement de CL et de régression. Des singes rhésus femelles adultes (5-7 ans) ont été traités avec la jument gravide sérum gonadotrophine humaine gonadotrophine chorionique pour induire l'ovulation et luteinization folliculaire. À divers stades de développement lutéales, CL ou ovaires entiers ont été obtenues pour la préparation de cellules lutéales, Northern blot, hybridation in situ et immunohistochimie. Nous avons démontré que des cellules lutéales de singe rhésus ont été en mesure de produire le type de tissu PA (tPA) et de type urokinase PA, ainsi que le PAI-1 physiologique. Pendant le développement lutéale chez le singe, type urokinase PA a été la principale espèce de PA prenant part à l'angiogenèse active et remodelage des processus dans le CL formant des tissus. Cependant, l'ARNm ainsi que les niveaux d'activité enzymatique de l'APT a augmenté considérablement en singe CL avec l'avènement de la lutéolyse. Ce changement dans les niveaux tPA était dans une coordination temporelle avec la régulation de l'expression de PAI-1, ce qui entraînera une augmentation de l'activité tPA à l'ouverture de la lutéolyse. Par conséquent, nous suggérons que le tPA pourrait être un facteur de lutéolytiques au singe CL. Un PAI-1 modulée tPA activité pourrait s'avérer importante pour l'initiation de la lutéolyse chez le singe. En outre, nous avons aussi démontré que l'expression de la protéine de régulation stéroïdogène aiguë chez le singe CL a été conformément aux changements de la production de progestérone, ce qui suggère que l'expression des protéines de régulation aiguë stéroïdogènes peut être considérée comme un marqueur fiable pour fonction CL chez les primates.

[DMSO Arrêté Hybridomes Pour La Production D'anticorps Accrue]

Le diméthylsulfoxyde (DMSO), un inducteur de la différenciation bien connu dans plusieurs cellules myéloïdes, induit un arrêt en phase G1 dans plusieurs lignées cellulaires. Dans cette étude, nous avons étudié la possibilité d'utiliser le DMSO à arrêter H18 hybridomes à la phase G1 et de vérifier si l'arrestation améliore la production d'anticorps. Nous avons montré que le DMSO en concentration comprise entre 0,3 % et 0,6 % efficacement arrêté les hybridomes H18 en phase G1. Dans notre expérience, > 80 % des cellules cultivées pendant 36 h en présence de la DMSO de 0,6 %, ont été arrêtés en phase G1. En outre, les niveaux d'expression de P27 étaient pli de remorquage régulée au cours de la phase G1. Cytotoxicité entraîne une concentration plus élevée de DMSO à 0,9 %. Ici, nous montrons un simple moyen, un processus en deux étapes pour la production d'anticorps, qui comprend une phase de prolifération, conduisant à la densité de la cellule souhaitée, suivie d'une phase de production prolongée au cours de laquelle les cellules demeurent à la phase G1. Notre observation que l'addition du DMSO résulte en une augmentation de la production d'anticorps est d'importance à l'utilisation ultérieure des hybridomes en culture cellulaire de haute densité à grande échelle.

Caspase-1zeta, Une Nouvelle Variante D'épissage Du Gène Caspase-1

Cinq alternativement épissées isoformes de l'ARNm de la caspase-1 ont été identifiés précédemment, et les auteurs rapportent le clonage d'une nouvelle isoforme, nommée CASP1 zeta (zeta), du cDNA de cellule épithéliale surface ovarienne humaine. La nouvelle fonction zêta isoforme est identique à l'isoforme alpha, mais manque de 79 nucléotides dans la région codante de la prodomain de procaspase-1. Analyse de la séquence d'ADNc de l'isoforme de zeta a révélé un ORF d'une protéine plus courte, manque de 39 acides aminés à l'aminé terminal de procaspase-1alpha, qui comprend l'important caspase activation domaine de recrutement (cartes), qui est nécessaire pour les interactions entre les caspases et d'autres protéines. Analyse de la structure secondaire de procaspase-1 carte prédit l'abrégement de l'alpha1 alpha2 et la partie de l'hélice alpha3 dans l'isoforme zeta en comparaison de l'isoforme alpha sur toute la longueur. La nouvelle isoforme de zeta a été exprimée dans les tissus humains adultes beaucoup, mais pas toutes, par RT-PCR. Dans les cellules HEK293, surexpression transitoire de type sauvage caspase-1zeta induit l'apoptose à des niveaux semblables à ceux de la caspase-1alpha. Toutefois, changement mutationnel au centre actif de la 246 Cys de caspase-1zeta, ainsi que 285 Cys de caspase-1alpha, caspase-1 abolit complètement leur activité apoptotique. Nos résultats suggèrent que caspase-1zeta est une isoforme généralisée, de nouveaux pro-apoptotique de la caspase-1. Ils démontrent également que les 39 premiers acides aminés du N-terminal de la carte de procaspase-1 ne sont pas nécessaires à son activité apoptotique.

[Traitement De La Dysfonction érectile Patients Atteints Du Syndrome D'apnées Obstructives Du Sommeil Par Pression Positive Continue Nasale]

Pour étudier l'influence de la pression positive continue nasale (PPCn) sur la fonction érectile des personnes souffrant de la dysfonction érectile (ED) syndrome(OSAS) de l'apnée obstructive du sommeil.

Expression Inductible De Bcl-XL Inhibe L'apoptose Induite Par Butyrate De Sodium Hybridome, Entraînant La Production D'anticorps Accrue

Le butyrate de sodium (NaBu) peut augmenter le taux de production de Mab spécifique des hybridomes en améliorant les histones hyperacétylation et qui influent sur le cycle cellulaire, mais il peut aussi inhiber la croissance des cellules et induisent l'apoptose. Ainsi, l'effet bénéfique du NaBu sur la sécrétion de Mab est compromise par son effet cytotoxique. Dans la présente étude, l'expression de la protéine anti-apoptotique Bcl-XL humaine a été effectuée inductible hybridome H18 à surmonter l'effet cytotoxique de la NaBu, contourner les effets néfastes de l'expression constitutive de haut niveau. Nous avons construit un vecteur d'expression dans laquelle le promoteur d'un gène de la métallothionéine chez les mammifères (MT) a conduit à l'expression de bcl-XL en réponse à l'exposition aux métaux. Le vecteur a été ensuite utilisé pour exogène contrôler l'expression de bcl-XL dans les hybridomes H18. Nos résultats ont montré que stablement transfectés H18.D4 cellules expriment des niveaux élevés de Bcl-X(L), qui a été induite dans les 24h d'addition de ZnSO4. Production d'anticorps de NaBu (0,4 mM) a augmenté de plus de 3 fois H18 in.D4. Cet effet résulte de la suppression de l'apoptose induite par le NaBu, permettant la H18.D4 cellules de se développer au plus élevé de viabilité et de prolonger la longévité de la culture de > 3 jours.

Activateur Tissulaire Du Plasminogène Et Son Inhibiteur Du Plasminogène Activateur Inhibiteur De Type 1 Sont Coordonnée Exprimés Lors De L'ovulation Chez Le Singe Rhésus

L'ovulation est un processus contrôlé par gonadotrophines qui est essentiel pour la propagation de toutes les espèces de mammifères. Dans la présente étude, nous avons utilisé une jument gravide sérum gonodotropin/chorionique gonadotrophine (hCG)-induite, synchronisé modèle l'ovulation chez des singes rhésus et systématiquement étudié les rôles du système plasminogène activateur (PA) dans le processus ovulatoire du primate. À différents stades de développement folliculaires tout au long de la période périovulatoire, des ovaires, des cellules de la granulosa et les cellules interstitielles-thèque ainsis que le liquide folliculaire ont été prélevés des échantillons et niveaux de PA PA inhibiteur type-1 (PAI-1) ont été évalués par la superposition de la fibrine, superposition de fibrine inverse, analyse par Northern blot et hybridation in situ, respectivement. Nous avons montré que, en réponse à une injection de hCG de déclenchement de l'ovulation, qui imite le préovulatoire de LH dans la circulation, la granulosa PA culture cellulaire de type tissulaire (tPA) était considérablement élevée dans les follicules préovulatoires et a atteint son niveau maximum, juste avant l'ovulation. Bien que culture cellulaire interstitielle-thèque PAI-1 est également stimulée par des traitements gonodotropin et hCG sérique de jument gravide, toutefois, le niveau maximal de PAI-1 apparaît 12 h plus tôt que celle de l'APT. Quand l'ovulation s'est approché, accompagnant le plus haut niveau de tPA dans les follicules préovulatoires, le niveau de PAI-1 folliculaire chuté à sa valeur minimale. De plus, nos données sur l'expression de folliculaire PA et PAI-1 au cours de la période périovulatoire sont renforcées par les résultats obtenus au niveau de l'ARNm. Nos résultats suggèrent que l'expression coordonnée des tPA et PAI-1 peut avoir une importance pour le processus de rupture folliculaire pendant l'ovulation chez les primates.

Caspase-1alpha Est Diminuées Dans Les Cellules De Cancer De L'ovaire Humain Et La Surexpression De Caspase-1alpha Induit L'apoptose

Caspase-1 joue un rôle clé dans la transformation des cytokines et l'apoptose des neurones et des macrophages. Si elle provoque également l'apoptose des cellules cancéreuses a été peu claire. Dans cette étude, nous avons projeté un tableau des protéines liées à l'apoptose dans les lignées cellulaires de cancer ovarien et leur tissu d'origine, l'épithélium de surface ovarienne (OSE). Protéine caspase-1alpha était abondant dans OSE et OSE tumorigéniques avec longévité prolongée mais limitée (immortalisée OSE), mais a diminué chez les lignées cancéreuses A2780 et OVCAR10. Par Western blot et immunofluorescence, caspase-1alpha niveaux ont été considérablement réduits dans six des huit lignées de cancer ovarien comparées avec OSE. Par transcription inverse-PCR en temps réel, transcription de stationnaire du gène CASP1 était proportionnelles aux concentrations de protéines. Surexpression de la caspase-1alpha causé l'apoptosis significatif, mais la surexpression d'un mutant de caspase-1alpha sans activité catalytique n'a pas, confirmant que l'effet était caspase-1alpha spécifiques. Immunofluorescence de caspase-1alpha et terminal nucleotidyl transferase-mediated dUTP-X nick fin étiquetage colocalisation a clairement établi un lien entre l'expression de l'apoptose et de la caspase-1alpha. Caspase-9 et la caspase-3 ont été activés en caspase-1alpha surexprimant A2780 cellules, ce qui suggère l'implication d'une voie apoptotique intrinsèque. Surexpression de la caspase-1alpha ne modifiait pas l'effet apoptotique de la cisplatine dans les cellules A2780 et OVCAR10, ce qui laisse supposer que cet agent active une voie différente. Immunohistochimique, caspase-1 était plus faible dans les carcinomes séreuses ovariens que OSE. Notre étude indique, pour la première fois, que caspase-1alpha est pro-apoptotique dans les cellules de cancer de l'ovaire et soulève la possibilité que sa régulation à la baisse est l'un des mécanismes qui augmentent la résistance à l'apoptose des cellules cancéreuses.

[Traitement Chirurgical D'une Tumeur Métastatique Hépatique De Cancer De L'estomac]

Pour évaluer l'efficacité de long terme du traitement chirurgical des métastases hépatiques d'adénocarcinome gastrique.

Accroître L'efficacité De La Culture Des Hybridomes Par L'utilisation D'intégré Contrôle Métabolique Du Glucose Et De Glutamine à De Faibles Niveaux

Le métabolisme des cellules hybridomes HAb18 a été déplacé pour diminuer l'accumulation de métabolites et d'améliorer l'efficacité de la culture par intégré contrôle métabolique du glucose et de glutamine à de faibles niveaux. Lorsque les niveaux de glucose et de la glutamine ont diminué respectivement de 0,5 et 0,3 mM, production de lactate et d'ammoniac ont été réduites respectivement de 62,6 et 74 %, glucose à cellule rendement est passé de 0.23x10(9) à 0.66x10(9) cells.mmol-1 et glutamine-à-cellule rendement de 0.18x10(9) à 1.95x10(9) cells.mmol-1. Comparativement au glucose de haut niveau et cultures fed-batch de glutamine, glutamine et du glucose bas niveau conduit à densité plus élevée (1.0x10(7) contre 0.3x10(7) cells.ml-1), plus longue durée de culture (14 au lieu de 8 jours) et le rendement plus élevé des anticorps (250 contre 150 mg.l-1). Ces résultats indiquent que l'efficacité de la culture hybridome passerait par le contrôle intégré de glucose et de glutamine à 0.5 et 0.3 mM respectivement. Contrairement aux cultures fed-batch glucose-et/ou-glutamine-purgeurs capacitifs rapportées antérieurement, nous avons démontré une stratégie efficace de sélection des niveaux nutritionnelle et alimentation des acides aminés. Plus important encore, notre précision et bien réparties système de contrôle d'alimentation régulière ouvre une nouvelle voie pour la réduction des métabolites à de faibles concentrations en contrôlant les éléments nutritifs à des niveaux faibles.

Fonction De HAb18G/CD147 Dans L'invasion Des Cellules De L'hôte Par Le Coronavirus Du Syndrome Respiratoire Aigu Sévère

Pour identifier la fonction de HAb18G/CD147 dans l'invasion des cellules de l'hôte par le syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS) coronavirus (CoV), nous avons analysé l'interaction protéine-protéine chez HAb18G/CD147 cyclophiline un (CyPA) et des protéines structurales (SARS-CoV par analyse de résonance plasmon co-immunoprécipitation et surface. Bien qu'aucune des protéines-SRAS s'est avéré être directement lié à la HAb18G/CD147, la protéine de la nucléocapside (N) du CoV-SRAS devait CyPA, qui interagissait avec HAb18G/CD147. D'autres recherches ont montré que HAb18G/CD147, une molécule transmembranaire, a été fortement exprimée sur les 293 cellules et que CyPA a été intégré avec le SRAS. HAb18G/CD147-antagonistes peptidiques (AP) -9, un AP de HAb18G/CD147, avait un taux élevé de se lier à des 293 cellules et un effet inhibiteur sur le SRAS-CoV. Ces résultats montrent que HAb18G/CD147, médiée par CyPA liée à la protéine N-SRAS, joue un rôle fonctionnel pour faciliter l'invasion des cellules de l'hôte par le SARS-CoV. Nos résultats fournissent des preuves pour le mécanisme cytologique d'une invasion par le SARS-CoV et fournissent une base moléculaire pour le dépistage des drogues contre le SRAS.

LT(K63/R72), Un Nouveau Mutant D'entérotoxine Thermolabile De Escherichia Coli, Présente Des Caractéristiques Plus Semblables à LT(K63) Que LT(R72)

LT(K63), un mutant non toxique et LT(R72), un mutant toxique faible d'entérotoxine thermolabile d'e. coli sont des adjuvants mucosal fréquemment utilisés. Dans de nombreux cas, l'adjuvanticity de LT(K63) est inférieur que de LT(R72), mais LT(K63), qui induit une réponse Th1/Th2 mixte, expositions à un niveau supérieur de protection LT(R72) qui induit une réponse de type Th2 polarisée. Pour pouvoir utiliser les avantages des deux adjuvants, un LT(K63/R72) double-mutation a été généré et purifiée. Les résultats de la caractérisation ont montré qu'il y n'avait aucune différence significative dans les taux de production et l'immunogénicité entre le type sauvage LT et de mutants LT. Les résultats ont également montré que la toxicité et la sensibilité de la trypsine du LT(K63/R72) sont LT(K63) et LT(R72). Par CLHP, lorsque les échantillons dans une colonne de OHpak SB-800 sont éluées par denatural tampon (TEAN contenant 10 mg/ml SDS), nous avons constaté que la stabilité du LT(K63/R72) était supérieure à celle des LT(R72) et inférieur à celui des LT(K63). À travers plus de l'analyse, nous avons constaté que LT(K63/R72) présente des caractères plus étroitement associés à la LT(K63) que LT(R72).

La Radio-immunothérapie Du Cancer Du Colon De L'homme Des Xénogreffes à L'aide De 131I-Étiqueté CAB1 F (ab ') 2

Fois l'efficacité thérapeutique, la dose appropriée, et de l'administration de l'131I-CAB1 F (ab ') 2, une thérapeutique de nouveaux anticorps monoclonaux dirigés spécifiquement contre une cellule de surface la glycoprotéine associée à de cancer du côlon, ont été étudiés dans cet article.

[Traitement Chirurgical De La Maladie De La Valve Tricuspide Combinée Avec Le Syndrome De Cachexie Cardiaque]

Pour évaluer le traitement chirurgical de la maladie de la valve tricuspide, combinée à la cachexie cardiaque.

La Glycosylation Est Caractéristique De L'antigène Associé à Hépatome HAb18G/CD147 Dans Les Cellules D'hépatome Humain

HAb18G/CD147 est une hautement glycosylée protéine transmembranaire appartenant à la superfamille des immunoglobulines. Nos études antérieures ont démontré que surexprimant HAb18G/CD147 améliore le potentiel métastatique des cellules d'hépatome humain. Dans la présente étude, afin d'étudier la glycosylation caractéristique de HAb18G/CD147 dans les cellules d'hépatome humain, HAb18G/CD147 était des cellules d'hépatome CCHP-98 d'abord purifiée par chromatographie d'immunoaffinité et puis introduit dans le système de culture de fibroblastes humains pour l'induction de protéinases métalliques de matrice. En conséquence, les taux élevés de métalloprotéases de la matrice sécrétée par les fibroblastes ont été détectés par zymographie de gélatine. Les lysats de cellules d'hépatome humain CCHP-98 a révélé deux formes principales de HAb18G/CD147 (43-66 et 35 kDa) par western blot. Pour élucider si la variation de la taille de la molécule résultaient de glycosylation différente, deux approches différentes ont été utilisées pour atteindre cet objectif : déglycosylation avec la N-glycosylation inhibiteur tunicamycine ou endoglycosidases. Une protéine unique déglycosylée avec poids moléculaire environ 27 kDa a été obtenue entre les deux méthodes. En outre, les résultats du traitement endoglycosidases a également montrent que les deux formes de HAb18G/CD147 contiennent différents types de chaînes oligosaccharidiques, donc sensibles aux différent endoglycosidase. En conclusion, la présente étude a démontré que purifié native HAb18G/CD147 a la bioactivité de stimuler les fibroblastes humains pour produire des niveaux élevés de métalloprotéinases matricielles, et que les deux formes différentes de HAb18G/CD147 sont dérivées de la protéine de capside seul mais se distinguent par leur degré et types de glycosylation.

Ciblage Radio-immunothérapie Du Carcinome Hépatocellulaire à L'Iode Injection Metuximab (131I): Clinique De Phase I / II Des Essais

HAb18G/CD147 est un carcinome hépatocellulaire (CHC)-antigène associé. Nous avons développé l'injection d'iode metuximab (131I) (Licartin), un roman 131I marqué HAb18G/CD147-specific anticorps monoclonal Fab'2 fragment, et évalué l'innocuité, la pharmacocinétique et l'efficacité clinique sur la HCC en phase I / II des essais.

Biodistribution Et La Localisation De L'iode-131-étiquetés Metuximab Chez Les Patients Atteints De Carcinome Hépatocellulaire

La radio-immunothérapie peuvent améliorer l'issue de carcinome hépatocellulaire (CHC) patients en fournissant des radiations ciblées pour les tissus de lésion hépatique tout en épargnant les tissus non ciblés relativement. Cette étude a été conçue pour observer les caractéristiques de biodistribution, de localisation et d'imagerie de Metuximab 131I marqué chez 24 patients atteints de CHC afin de déterminer le potentiel diagnostique et thérapeutique de cet anticorps.

Application De « L'oxygène Absorption Taux-acides Aminés"associés Mode Dans La Culture De Perfusion Contrôlée-nourris

Perfusion contrôlée-nourri, un nouveau mode de fonctionnement, qui combine les avantages de la fed-batch et de perfusion, a été signalée pour améliorer la productivité de l'anticorps monoclonal. La présente étude visait à enrichir davantage ce mode par une stratégie de « oxygène absorption taux-aminoacides (OUR-AA) » dans laquelle l'alimentation des acides aminés a été contrôlée selon la variation de notre durant la perfusion. Et on a évalué les effets de cette stratégie sur bioréacteur productivité et qualité des produits. Résultats expérimentaux indiquent qu'en utilisant cette approche « OUR-AA » en mode de perfusion contrôlée-nourri une densité élevée de cellules viables de plus de 1,9 x 7 cellules/ml a été atteint et la productivité des mAb atteint 325 mg/l/d, qui a augmenté de près de deux fois sur ceux de la perfusion et fed-batch. Les concentrations résiduelles de certains acides aminés ont été contrôlées à un niveau stable relatif par notre au cours de la culture. L'immunoréactivité et la pureté de l'anticorps ont été bien conservés, comme le processus de culture évoluait de fiole sur le mode de perfusion contrôlée-nourris. La première application de l'approche « OUR-AA » en mode perfusion contrôlée-nourris peut-être présenter une stratégie de contrôle novateur pour améliorer la performance de la culture et pour afficher le potentiel de cette approche dans le domaine du contrôle automatique.

Validation De La Stabilité Des Paramètres De Contrôle Des Cellules En Culture Cellulaire à Grande échelle D'hybridome De Semis

Stabilité et la reproductibilité de la performance des cellules en culture cellulaire à grande échelle d'hybridome de semis a été signalé en contrôlant la seule cellule initiale la densité de semis. Le but de cette étude était d'intégrer les multiples paramètres de contrôle de cellules ensemencement afin de maintenir le statut physiologique cellulaire stable et cohérente pour l'expansion des cellules HAb18. Nous avons étudiés trois paramètres et leurs aires de répartition, dont la cellule initiale, ensemencement de densité dans la gamme de 0,075 à 0,5 x 10 6 cellules ml(-1), « timepost » après le passage de la cellule entre 8 et 36 h et la durée de la sous-culture jusqu'à 6 mois après cellulaire revival. Rendement de la pile a été testé à l'échelle 1 L, 5 L et 75 L. Performance souhaitable a été trouvé dans les plages de paramètre suivantes : cellule initiale, l'ensemencement de densité de 0,1 et 0,3 x 10 6 cellules ml(-1), « timepost » après le passage de la cellule entre 14 et 22 h et la durée de la sous-culture dans les 3 mois de reconstitution de la cellule. Nos résultats ont montré que la cellule croissance anticorps et les taux de productivité de trois lots à l'échelle 1 L, 5 L et 75 L ont été trouvés pour être solidement maintenu dans une fourchette de 0,036-0,047 évidence et 0.577-0,747 pg cell(-1) évidence, avec le taux de positivité de l'activité de liaison de l'antigène dans 97-99,75 % et l'intensité de fluorescence autour de 200. Cette étude peut fournir une méthode simple mais efficace pour maintenir les semis état physiologique de la cellule stable et cohérente en combinant les paramètres de contrôle des cellules ensemencement.

L'analyse De La Différenciation De Cellules Souches Embryonnaires Humaines En Hémangioblaste GeneChip : Un Dans La Dissection De Silico Des Phénotypes Mixtes

Puces à ADN sont utilisés pour comprendre la différenciation des cellules de tige embryonnaires humaines (CSEh). La plupart des protocoles de différenciation utilisent une approche multi-étape qui induit l'engagement le long d'une lignée particulière. Par conséquent, chaque étape représente un phénotype plus mature et moins hétérogènes. Caractériser les populations hétérogènes ancêtre à la différenciation sont donc de plus en plus important. Nous décrivons ici une nouvelle méthode d'analyse des données en utilisant un protocole de différenciation récemment développés impliquant la formation de hémangioblaste fonctionnelle de CSEh. Les cellules blastiques sont multipotentes et peuvent se différencier en plusieurs lignées hématopoïétiques (érythroïdes, granulocytes et macrophages), muscle lisse et endothéliales cellules.

Protéines De Fusion Recombinantes HoxB4 Améliorent La Différenciation Hématopoïétique De Cellules Souches Embryonnaires Humaines

L'expression du gène HoxB4 forcée favorise l'expansion des cellules souches hématopoïétiques (CSH) et améliore le développement hématopoïétique de deux cellules souches embryonnaires humaines et murines (ES). HoxB4-CSH élargie ont également montré de conserver leur potentiel normal pour la différenciation et à long terme l'auto-renouvellement in vivo sans l'apparition de la leucémie, ce qui suggère que la manipulation d'expression HoxB4 pourrait constituer un moyen efficace d'étendre autorenouveler fonctionnelle pour une utilisation dans la médecine de transplantation. Toutefois, la modification génétique de cellules pose des préoccupations cliniques, y compris un risque potentiellement accru de meningococcus de tumeur. Expression virale ectopique haut niveau constitutive de HoxB4 peut aussi entraîner des perturbations dans la différenciation de la lignée des CSH, une indication qu'incontrôlée HoxB4 manipulation ne peut pas être une stratégie thérapeutique satisfaisante. Nous démontrons que protéine recombinante HoxB4 fusionné avec un domaine de transduction de la protéine triple (tPTD) favorise le développement hématopoïétique de cellules hES. La protéine HoxB4-tPTD amélioré le développement d'érythroïdes, les progéniteurs myéloïdes et multipotentielle dans les deux corps embryoïdes de stade précoce et tardive (EBs). Cet effet variait considérablement entre les lignées cellulaires différentes hES. Ajout de la protéine HoxB4-tPTD n'a pas modifié le modèle d'expression de gène globine ; les descendances dérivées de CSEh a exprimé des niveaux élevés d'embryonnaire (epsilon) et les gènes de globine foetale (gamma) avec ou sans traitement de tPTD-HoxB4. Cellules CD34 + dérivé de CSEh implanté dans la moelle osseuse lorsque transplantées dans des souris CD1 foetales, bien que la supplémentation du milieu avec la protéine HoxB4 tPTD différenciation n'entraîne pas de capacité accrue de repopulation. Cela suggère que les autres gènes, ainsi que de HoxB4, sont requis pour générer des CSH plus compétitif. En résumé, notre étude montre que la protéine HoxB4-tPTD utilisable avec d'autres protéines recombinantes pour générer efficacement autorenouveler transplantables à partir des cellules ES humaines.

HAb18G/CD147 Fonctions Invasion Et La Métastase Du Carcinome Hépatocellulaire

CD147 molécule est signalé à être en corrélation avec la malignité de certains cancers, mais il reste difficile de savoir si elle est impliquée dans la progression du carcinome hépatocellulaire (CHC). Ici, nous avons étudié la fonction de HAb18G/CD147, un membre de la famille CD147, et ses anticorps, et HAb18 LICARTIN, dans l'invasion et les métastases HCC. Nous avons observé que HAb18G/CD147 silence des gènes dans les cellules HCC diminué de manière significative la sécrétion de métalloprotéinases matricielles (MMP) et le potentiel invasif des cellules de CHC (P <0,001). Le silence MMP dans les cellules HCC a également supprimé de manière significative l'invasion des cellules co-cultivées avec des fibroblastes lors, cependant, son effet inhibiteur était significativement plus faible que celle de la fois le silence dans les cellules HCC HAb18G/CD147 et que de silence MMP dans les fibroblastes (P <0,001). Blocage theHAb18G/CD147 molécule sur les cellules HCC avec HAb18 anticorps monoclonal donné lieu à un effet similaire sur la sécrétion de MMP suppressive et l'invasion des cellules, mais avec aucun effet significatif sur la croissance cellulaire. (131) I-marqué HAb18 F (ab ') (2) (LICARTIN), cependant, ont significativement inhibé la croissance in vitro de cellules de CHC (P <0,001). Dans un modèle orthotopique de carcinome hépatocellulaire chez la souris nude, HAb18 et LICARTIN traitement efficace réduit la croissance tumorale et les métastases, ainsi que l'expression de trois facteurs principaux dans le microenviroment HCC (MMP, vascular endothelial growth factor, et la protéine de surface des fibroblastes) dans le paracancer tissus. Dans l'ensemble, ces résultats suggèrent que HAb18G/CD147 joue un rôle important dans l'invasion et les métastases HCC principalement par les fibroblastes de modulation, ainsi que les cellules HCC se perturbent le microenviroment HCC. LICARTIN peut être utilisé comme un médicament ciblant à HAb18G/CD147 dans antimetastasis et la thérapie récidive du CHC.

Génération De Hémangioblaste Fonctionnelle Des Cellules Souches Embryonnaires Humaines

Récentes suggèrent l'existence de cellules souches dans les tissus adultes capables de faire la différence dans les structures vasculaires ainsi que dans toutes les lignées de cellules hématopoïétiques. Nous décrivons ici une méthode efficace et reproductible permettant de générer un grand nombre de ces bipotential progéniteurs connu comme hémangioblaste-découlent embryonnaires humaines (CSEh) à l'aide d'un système de différenciation in vitro. Les cellules blastiques exprimé caractéristique de signatures du gène de l'hémangioblaste et pourrait développés, cryopréservés et différenciées en plusieurs lignées hématopoïétiques, ainsi que dans les cellules endothéliales. Lorsque nous avons injecté ces cellules à des rats diabétiques ou à des souris avec ischémie-reperfusion de la rétine, ils localisée à l'endroit de la blessure dans les vaisseaux endommagé et semblent participer à la réparation. Injection des cellules a également réduit le taux de mortalité après l'infarctus du myocarde et rétabli la circulation sanguine dans l'ischémie du membre postérieur dans des modèles murins. Nos résultats suggèrent que les hES dérivées des cellules blastiques (hES-BCs) pourraient être importantes dans la réparation vasculaire.

Un Essai Contrôlé Randomisé De Licartin Pour Prévenir Une Récidive Après Transplantation Hépatique Hépatome

La transplantation hépatique orthotopique (BTA) est la seule thérapie curative de CHC avec cirrhose sous-jacente, mais en raison de métastases et de récidive CHC, son bénéfice est limité à une petite population qui répondent aux critères de sélection stricts. Nous avons précédemment rapporté que Licartin ([131I] mAb HAb18G/CD147) était sûr et efficace dans le traitement des patients HCC, et son antigène, HAb18G/CD147, était étroitement liée à l'invasion et les métastases HCC. Ici, nous avons rapporté un essai contrôlé randomisé pour évaluer l'efficacité antirecurrence post-BTA de Licartin chez les patients CHC avancé. Nous randomisés 60 post-BTA patients atteints de CHC, qui étaient au stade de la tumeur 3/4 et en dehors des critères de Milan avant BTA, en 2 groupes. Trois semaines après le BTA, le groupe de traitement a reçu 15,4 MBq / kg de Licartin, tandis que le groupe témoin ont reçu un placebo par voie intraveineuse pendant 3 fois avec un intervalle de 28 jours. À 1 an de suivi, le taux de récidive était significativement diminué de 30,4% (P = 0,0174) et le taux de survie a augmenté de 20,6% (P = 0,0289) dans le groupe de traitement, par rapport à ceux dans le groupe témoin. Pour le groupe témoin par rapport au groupe de traitement, le risque relatif de récidive était de 3,60 (intervalle de confiance 95% [IC], 1,50 à 8,60) et que la mort était 3,87 (IC à 95%, 01.23 à 12.21). Licartin traitement a également donné lieu à un niveau antérieur a diminué l'AFP et un temps plus long de l'AFP niveau normal que le placebo (P = 0,0016). Aucun effet toxique lié Licartin ont été observés. Conclusion: Licartin est un médicament prometteur pour la prévention post-BTA récidive de la tumeur chez les patients CHC avancé exclus par les critères actuellement strictes pour le BTA. HAb18G/CD147 peut être une cible thérapeutique bonne.

[Une Méthode De L'électrophorèse Zone Capillaire Rapide Pour La Détermination Simultanée De Plusieurs Types D'agents Dopants]

Une méthode de détection ultraviolet électrophorèse (CZE-UV) zone capillaire a été établie pour la détermination simultanée de huit agents de dopage qui appartiennent aux diurétiques, anabolisants, bêta-blocs, stupéfiants, bêta2-agonistes et stimulants. Les conditions optimales, avec 50 tampon formiate d'ammonium mmol/L (pH 7,8) comme le tampon en cours d'exécution, injection à une pression de 3 kPa pendant 10 s, la tension appliquée de 20 kV et détection à 214 nm, huit agents de dopage ont été séparés rapidement et complètement au sein de 7 min. Les non-linéarités des huit anents de dopage ont été bonnes dans des gammes de concentrations respectives. Leurs limites de détection étaient de 0,2 à 0,7 microg/mL. C'est une méthode simple et rapide avec la petite taille des échantillons pour la détection de dopage.

Génération Robuste Des Progéniteurs Hemangioblastic De Cellules Souches Embryonnaires Humaines

Les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sont potentiellement inépuisable source de cellules pour le traitement substitutif. Des progrès cliniques et précliniques réussie exige cependant une différenciation efficace et contrôlée vers le sort d'une cellule différenciée spécifique.

Propriétés Biologiques Et énucléation Des Globules Rouges à Partir De Cellules Souches Embryonnaires Humaines

Érythropoïèse humaine est un processus multipas complexe qui implique la différenciation des premiers progéniteurs érythroïdes pour mûrir des érythrocytes. Ici, nous montrons qu'il est possible de différencier et de maturation des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) dans les érythrocytes de transporter l'oxygène fonctionnelles à grande échelle (10(10)-10(11) 6 cellules/puits plaque CSEh). Nous montrons également pour la première fois que les courbes d'équilibre de l'oxygène des cellules dérivées de CSEh sont comparables aux globules rouges normaux et réagissent aux changements de pH et de 2, 3-diphosphoglyerate. Bien que ces cellules expriment principalement globines fœtales et embryonnaires, ils possédaient également la capacité à exprimer la chaîne bêta-globine adulte sur nouvelle maturation in vitro. Polymérase PCR et globine chaîne spécifique par immunofluorescence analyse a montré que les cellules a augmenté l'expression de la béta-globine (de 0 à 16 > %) après culture in vitro. Surtout, les cellules subissent plusieurs événements de maturation, notamment une diminution progressive de la taille, augmenter la glycophorine A expression et de la chromatine et de condensation nucléaire. Ce processus a abouti en extrusion des noyaux pycnotiques dans jusqu'à plus de 60 % des cellules génératrices des globules rouges avec un diamètre d'environ 6 à 8 maman. Les résultats montrent qu'il est possible de différencier et de mûrir CSEh dans les érythrocytes de transporter l'oxygène fonctionnelles à grande échelle.

Séparation Rapide Et Méthode De Détection Sensible Des Bêta-bloquants Par Assisté Par Pression Capillaire électrochromatographie-electrospray Ionization Mass Spectrometry

Une nouvelle méthode de séparation rapide et de la sensibilité de détection des bêta-bloquants par électrochromatographie capillaire assisté par pression (pCEC) avec electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) à l'aide de la colonne monolithique à base de silice a été étudiée dans le présent document. La méthode proposée a été confirmée comme très puissant depuis la propriété de transfert de masse rapide et bonne perméabilité de colonnes monolithiques de silice a été utilisée dans ce système de pCEC-ESI-MS. Dans ce travail, une colonne monolithique de silice a été préparée avec la méthode sol-gel pour une séparation rapide simultanée des bêta-bloquants. En outre, afin d'obtenir le résultat hautement sélectif et sensible du pCEC-ESI-MS, les deux paramètres de détection MS et la séparation de la CEC ont été optimisées en détail. Dans les conditions optimisées, à savoir 80 % d'acétonitrile et 20 % 20 mmol/L acétate d'ammonium (pH 6.0) comme phase mobile, 20 kV et 8 bars comme la tension de la séparation et la pression assistée et l'isopropanol/eau (1:1, v/v) contenant 7,5 mmol/L acide acétique que le liquide de gaine 3 microL/min comme le débit de liquide de gaine, bêta-sept bloquants étaient bien distincts au sein de 11 min avec des limites de détection de l'ordre de 0,15 à 0,80 ng/mL (défini comme S /N = 3). Les récupérations des échantillons d'urine enrichis de ces bêtabloquants ont été entre 86.3 et 103 % avec la RSDs inférieure à 8,0 %. Les échantillons réels de certains volontaires de sexe masculin ont été correctement analysés et confirmés avec la méthode proposée. En comparant avec le GC-MS ou LC-MS, la nouvelle méthode a une supériorité (telles que la capacité d'analyse rapide et simple prétraitement) dans la pratique clinique et de contrôle du dopage.

Assisté Par Pression L'électrochromatographie Capillaire Avec La Spectrométrie De Masse à Ionisation Par électronébulisation Basée Sur La Colonne Monolithique à Base De Silice Prévoyant L'analyse Rapide Des Stupéfiants

Un pression assistée par CEC (pCEC) avec ESI-MS basée sur colonne monolithique à base de silice a été développé pour l'analyse rapide des stupéfiants. Combinant la perméabilité extrêmement élevée et l'efficacité de séparation de colonne monolithique à base de silice haute sélectivité et sensibilité du pCEC-ESI-MS, le système développé expose ses avantages importants dans la séparation et la détection. Une étude systématique des paramètres de détection de ESI-MS et séparation pCEC a été réalisée. Résultats de l'expérience a montré que l'efficacité de séparation optimisée pouvait être obtenue à 8 bar pression assistée avec tension de séparation 25 kV, à l'aide de la solution d'ACN de 65 % v/v et d'acétate d'ammonium 20 mmol/L à pH 6.0 comme tampon. 3 microL/min de liquide de gaine était considéré comme le débit optimisé car elle pourrait fournir l'intensité maximale du signal. Dans les conditions optimales, les cinq stupéfiants testés pouvaient être complètement séparés dans les 10 min avec la limite de détection de la gamme 2.0-80 nmol/L. La méthode proposée a été utilisée avec succès pour la détection de stupéfiants dans les échantillons d'urine réelle.

Préparation Et évaluation De La Colonne Monolithique Hautement Réticulé Poly (1-hexadécane-co-triméthylolpropane Cétylamine) Pour L'électrochromatographie Capillaire

Dans cet article, un roman réticulés hautement poreuse phase stationnaire monolithique ayant un ligand de chaîne alkyle long (C16) ont été présenté et évalué dans le CEC. La phase stationnaire monolithique a été préparée par copolymérisation in situe de 1-hexadècène, se cétylamine et acide 2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic (SAP) en présence de solvant porogenic ternaire (cyclohexanol/1, 4-butanediol/eau). En préparant les monolithes, le ternaire réticulant triméthylolpropane cétylamine a été généralement appliqué à la préparation de polymères ou moléculairement imprimé extraction en phase solide, au lieu de binaire réticulant diméthacrylate d'éthylène. 1-Hexadècène a été introduit pour prévoir les sites non polaires (C16) de rétention chromatographique, tandis que les amplis a été utilisé pour générer les expressions du folklore pour le transport de la phase mobile à travers le capillaire monolithique. Colonnes monolithiques ont été préparés en optimisant la proportion du solvant porogenic et teneur en ampères dans la solution de polymérisation ainsi que les agents. Les phases stationnaires monolithiques pourraient générer une expression du folklore solide et stable dans les différentes valeurs de pH et présentent un comportement RP-chromatographique des composés neutres. Pour les composés chargés, la séparation reposait essentiellement sur l'association de l'interaction hydrophobe, électrostatique et électrophorétique.

Un Fragment De Nouvel Anticorps Ciblant Les HAb18G/CD147 Avec La Cytotoxicité Et Une Diminution D'immunogénicité

[I (131)]Injection de Metuximab (Licartin) était un agent d'IM3251 du foie efficace thérapeutique anti-hépatocellulaire généré par marquage (131) j'ai avec le fragment d'anticorps monoclonal murin HAb18-F(ab')(2) mais la réponse d'anticorps humains anti-souris (HAMA) chez certains patients après que administration a limité son utilisation clinique. Pour réduire l'immunogénicité des anticorps murin, nous avons tenté de humaniser HAb18 par domaine variable resurfaçage basé sur la structure tridimensionnelle du fragment de Fv. Compte tenu de l'accessibilité de surface des non-humains comme résidus de cadre et le potentiel pour former une liaison hydrogène moléculaire dans le cadre de l'homologie modélisé Fv de HAb18, trois résidus dans un fragment de chaîne unique de la région variable de l'anticorps de HAb18 (HAb18scFv) ont été remplacés par leurs homologues humains. Nous avons fabriqué une version humanisée de HAb18scFv, HAb18-huscFv, le fragment de IgG1Fc humain pour former (HAb18-huscFv) 2-Fc. La réactivité de (HAb18-huscFv) 2-Fc pour le sérum de patients avec réponse HAMA a diminué tandis que sa spécificité et l'activité de liaison similaire (K(D) = 1,5 x 10(-9) M) ont été retenus contre son anticorps parental. En outre, cet anticorps est un médiateur efficace de la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) et cytotoxicité dépendante du complément (CDC). Ces résultats suggèrent que (HAb18-huscFv) 2-Fc pourrait être un fragment d'anticorps plus efficace avec moins d'immunogénicité et fonction de cytotoxicité supplémentaires.

Caractérisation Moléculaire Et Fonctionnelle De Deux Gènes Liaison Protéine-6 IGF Distincts Chez Le Poisson Zèbre

Protéines de liaison de l'insuline-like growth factor (IGFBP) sont des partenaires de liaison de haute affinité pour IGFs et jouent un rôle important dans la modulation des activités de l'IGF. Dans cette étude, nous avons identifié et caractérisé les deux gènes fonctionnels d'IGFBP-6 chez le poisson zèbre. Analyses génomiques structurales, phylogénétiques et comparatives indiquent qu'ils sont co-orthologues du gène humain IGFBP-6. Pour mieux comprendre comment les gènes dupliqués peuvent ont évolué à travers le cloisonnement des fonctions ancestrales, l'expression des gènes et des études fonctionnelles ont été effectuées. Chez les poissons adultes, ARNm IGFBP-6 a a été plus abondamment exprimé dans le muscle. Les niveaux d'ARNm IGFBP-6 a dans les tissus musculaires étaient très faible ou à peine détectable. En comparaison, les niveaux d'ARNm IGFBP-6 b ont été élevées dans le cerveau, le coeur et le muscle, mais très faibles ou indétectables dans d'autres tissus adultes. Au cours de l'embryogenèse, les taux d'ARNm IGFBP-6 a étaient relativement faibles. Les taux d'ARNm IGFBP-6 b ont été faibles durant les 48 h. Ils sont devenus sensiblement plus élevés, fécondation h 72 et 96. Surexpression de poisson-zèbre IGFBP-6 a et 6 IGFBP-b a provoqué un degré similaire de réduction dans la taille et la vitesse de développement. Pas d'effets notables ont été observés sur le sort de la cellule ou la structuration de ces poissons transgéniques. Ces données suggèrent que les gènes dupliqués d'igfbp-6 Encoder deux protéines fonctionnellement similaires, mais ils ont évolué des modèles d'expressions distinctes de spatiale et temporelle. Ces résultats concordent avec la notion d'un événement de duplication de gène supplémentaire chez les poissons téléostéens et ont donné un roman aperçu l'évolution structurelle et fonctionnelle de la famille de gènes IGFBP.

Évaluation De L'activité Hypoglycémique Des Polysaccharides Extraits De Lycium Barbarum

Une étude a été entreprise pour évaluer l'activité hypoglycémique d'un polysaccharide extrait de Lycium barbarum (LBP). Les différents paramètres étudiés poids inclus (bw), jeûne de glucose sanguin (FBG), cholestérol total (CT) et triglycérides (TG) chez les souris diabétiques et normales. Traitement de LBP (20, 40 mg/kg de poids corporel) pendant 28 jours a entraîné une diminution significative de la concentration de FBG, TC et TG chez des souris de diabète sucré. En outre, LBP a significativement augmenté du poids corporel. Les données démontrent LBP à la dose de 40 mg/kg p.c. présentait le meilleur effet.

Hémangioblaste De Cellules Souches Embryonnaires Humaines Génère Des Vaisseaux Sanguins Multicouches Avec Cellules Fonctionnelles Musculaires Lisses

La formation et la régénération des vasculatures fonctionnels exigent les cellules endothéliales (CE) et des cellules musculaires lisses vasculaires (CML). Identification et isolement des ancêtres avec possibilité de différenciation de lignée EC et SMC d'une source inépuisable, comme embryonnaires humaines de tige (hES) ou induites par les cellules souches pluripotentes, seront souhaitables pour la thérapie de remplacement cellulaire.

[Analyse Des Diurétiques Par électrochromatographie Capillaire à L'aide De La Colonne Monolithique Poly(1-hexadecene-co-TMPTMA)]

Une nouvelle méthode pour analyser les diurétiques par électrochromatographie capillaire à l'aide de colonnes monolithiques de poly (1-hexadècène-co-TMPTMA) a été créée. Conditions expérimentales dont la phase mobile, la tension de la séparation et condition d'injection ont été optimisées pour l'analyse. Dans des conditions expérimentales optimisées, six diurétiques ont été séparées dans 11.0 min avec les limites de détection (LOD) (S/N = 3) de l'ordre de 0,35 - 0,65 microg/mL. La méthode a montré la bonne linéarité (R2 > ou = 0,990 8) dans la gamme 1,15 et 86,0 microg/mL. Les recouvrements obtenus à partir de l'analyse de l'échantillon d'urine dopés se situaient entre 81,9 % et 105 % avec l'écart types relatifs (SDDR) inférieur à 4,7 %. On peut conclure que cette nouvelle méthode possédait bonne répétabilité et la stabilité dans l'analyse des diurétiques et a été appliquée avec succès à l'analyse des échantillons d'urine réelle par des bénévoles. Donc, cette méthode pourrait être appliquée à l'analyse des diurétiques dans les échantillons d'urine humaine.

Expression Du Gène Globine Alpha-thalassémie-comme Par Les érythrocytes Primitifs Dérivés De Cellules Souches Embryonnaires Humaines

Dans des conditions de culture qui favorisent la différenciation hématopoïétique, les cellules souches embryonnaires humaines (huESC) donnent lieu à des cellules érythroïdes primitives qui ressemblent de près les érythrocytes nucléés de stade précoce des embryons humains. La distribution de chaîne de globine de ces cellules est similaire à celle observée au cours des stades embryonnaires et fœtales du développement. Ici, nous montrons que les cellules érythroïdes dérivé de huESC produisent des quantités importantes de homotétramères l'hémoglobine (Hb), composé exclusivement de sous-unités contenant de la gamma-globine. La synthèse de la globine de ces cellules érythroïdes était également significativement déséquilibrée, avec une diminution substantielle de la synthèse des chaînes comme alpha globine par rapport aux que de leurs globines bêta-like, un modèle associé caractéristiquement alpha-thalassémie (alpha-thal). Ce modèle de synthèse de la globine déséquilibrée semble être une caractéristique inhérente des cellules érythroïdes humaine qui synthétisent les globines principalement stade embryonnaire.

A Ordonné à La Différenciation Des Globules Rouges à Partir De Cellules Souches Embryonnaires Humaines

Les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) représentent une nouvelle source de cellules souches qui peuvent être multipliés et agrandi en vitro indéfiniment, fournissant une source potentiellement inépuisable et donorless des cellules pour la thérapie humaine. La possibilité de créer des banques de lignées de CSEh incompatibilité couplées ou réduite pourrait potentiellement réduire ou éliminer le besoin de médicaments immunosuppresseurs ou immunomodulateurs complètement de protocoles, par exemple, les lignes de type O RhD(-) pour la génération d'universelles des globules rouges (RBC). La différenciation hématopoïétique des CSEh a été intensivement étudiées in vitro et hématopoïétiques précurseurs ainsi que différenciées progéniture représentant érythroïdes, myéloïde, macrophage, megakaryocytic et des lignées lymphoïdes ont été identifiés pour différencier les cultures de CSEh. Des études antérieures a également généré des cellules érythroïdes primitives de CSEh par formation de corps embryoïdes (EB) et coculturing avec les cellules du stroma. Cependant, la différenciation efficace et contrôlée des CSEh en populations homogènes de RBC avec oxyphorique n'a pas été précédemment atteint. Dans ce chapitre, nous décrivons un système robuste qui peut efficacement générer un grand nombre de permis de multiples lignées de CSEh en utilisant des conditions bien définies et produire RBCs homogènes fonctionnelles avec la capacité de transporter l'oxygène à grande échelle. Les cellules érythroïdes homogène peuvent être utilisés pour d'autres études de mécanisme.

Hemangioblastic Dérivés De Cellules Souches Humaines Pluripotentes Induites Pièce Expansion Limitée Et Sénescence Précoce

Les cellules souches humaines pluripotentes induites (hiPSC) a été démontrés à se différencier en divers types de cellules de remplacement. Une évaluation détaillée et comparaison avec leurs homologues les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) est essentielle pour l'évaluation de leur potentiel thérapeutique. À l'aide de méthodes reconnues, nous démontrons ici que les hiPSCs sont capables de générer des cellules hémangioblaste/explosion (BCs), les cellules endothéliales et les cellules hématopoïétiques présentant des caractéristiques morphologiques et phénotypiques similaires à celles dérivées de CSEh, mais avec une efficacité une diminution dramatique. En outre, en contraste avec les dérivés de CSEh, on observe des différences fonctionnelles dans BCs, dérivés de hiPSCs, notamment une augmentation significative de l'apoptose, capacité de croissance et d'expansion sévèrement limitée et une capacité sensiblement diminuée de formant des colonies hématopoïétique. Après plus de différenciation en cellules érythroïdes, > 1000 fois différence de capacité d'extension a été observée chez les hiPSC-BCs versus CSEh-BCs. Bien que les cellules endothéliales, dérivés de hiPSCs étaient capables de reprenant des lipoprotéines de basse densité acétylée et formant des structures de type capillaire-vasculaire sur Matrigel, ces cellules a également démontré la sénescence cellulaire précoce (la plupart de la sénescence des cellules endothéliales après un seul passage). De même, les cellules de l'épithélium pigmenté rétinien dérivés de hiPSCs a commencé sénescents dans le premier passage. Avant une application clinique, il sera nécessaire de déterminer la cause et l'étendue de ces anomalies et qu'on les trouve aussi dans hiPSCs généré à l'aide de différentes méthodes de reprogrammation.

Angiogenèse Thérapeutique Chez Les Souris Diabétiques Apolipoprotéine E Déficients En Utilisant Des Cellules De Moelle Osseuse, Hémangioblaste Fonctionnelle Et Métabolique Intervention

La maladie artérielle périphérique (PAD) est un problème majeur de santé surtout quand associé à l'hypercholestérolémie et le diabète concomitante. Hyperglycémie avec une génération écrasante des radicaux d'oxygène et de la formation de produits terminaux de glycation-exacerbe les mécanismes sensibles à l'oxydation, activées par une ischémie tissulaire. Administration des cellules de moelle autologue (BMC) est une intervention croissante de notable pour induire l'angiogenèse thérapeutique, amélioré par l'intervention métabolique (MT). Récemment, l'hémangioblaste (HS) ayant des propriétés fonctionnelles ont été isolés.

Les Promesses Et Le Potentiel Thérapeutique Des ES Humains Et De Cellules IPS

Expression Peropératoire élevée De La Chaîne Légère De Myosine Ventriculaire Prédit Insuffisance Cardiaque Après Une Chirurgie De Remplacement Valvulaire

Il peut être difficile de prévoir quels patients survivront et récupérer la fonction cardiaque après une chirurgie de remplacement valvulaire. Nous avons émis l'hypothèse que les niveaux d'expression des chaînes légères de myosine ventriculaire (MLCv) pourraient refléter la gravité de la maladie ou l'étendue du dommage myocardique irréversible et pourraient être utiles pour prédire le cours postopératoire. Ainsi, le but de cette étude était d'explorer la relation entre l'expression de MLCv dans les échantillons obtenus au cours de la chirurgie de remplacement valvulaire et la classe postopératoire de la New York Heart Association (NYHA).

Anomalie D'Ebstein Avec Tachycardie Auriculaire Réfractaire

L'incidence des voies accessoires chez les patients atteints d'Ebstein est élevée, allant de 20 % à 30 %, avec le droit et les multiples voies plus communément rencontrés. L'ablation par radiofréquence peut éliminer la voie accessoire, mais le taux de réussite du traitement de l'ablation et les risques de récidive sont généralement moins satisfaisantes par rapport à celles observées lorsque la procédure est exécutée sur les coeurs structurellement normaux. Nous rapportons le cas d'un homme de 56 ans avec anomalie et réfractaires Tachycardie auriculaire maladie d'Ebstein. L'anomalie particulière de la valve tricuspide a conduit à l'échec de préopératoire électrophysiologique traitement ablation par radiofréquence et de cartographie. Enfin, les anomalies observées chez cette patiente ont été corrigées avec chirurgie simultanée et la résection de la voie.

Spectroscopie De Photoélectron De Négatif Ultraviolet Sous Vide Du Chloroforme

Ions négatifs Cl(-), Cl(2)(-), CCl(-), CHCl(-) et CCl(2)(-) sont observées dans l'ultra-violet lointain-paire d'ions photodissociations du chloroforme (CCl(3)H) à l'aide de l'installation de rayonnement synchrotron de Hefei et leurs courbes d'efficacité de production ion sont enregistrés dans la gamme d'énergie de photon de 10.00-21,50 eV. Deux spectres semblables des anions isotopique (35)Cl(-) et (37)Cl(-) indiquent ce qui suit : outre les fortes bandes correspondant aux transitions de l'électron de valence pour les orbitales de Rydberg convergeant vers les États ioniques, certains sommets supplémentaires peuvent être attribués avec la fragmentation multicorps énergétiquement accessible ; un pic distinct à l'énergie des photons 14.55 eV peut résulter d'un processus en cascade (à savoir, la Cl(2) des fragments neutres à l'état excité D'2(3)Π(g) peut se former dans la photodissociation de CCl H (3), puis les anions Cl(-) sont produits dans les dissociations champ pulsé induite par paire d'ions de Cl(2) (D'2(3)Π(g))) ; deux progressions d'excitation vibrationnelle, nν(2)(+) et nν(2)(+) ν(3)(+) et nν(4)(+) et nν(4)(+) + ν(2)(+), sont observées autour de C̃ (2) E et états ioniques E D̃ (2), respectivement. Les enthalpies de la fragmentation multicorps à Cl(2)(-), CCl(-), CHCl(-) et CCl(2)(-) sont calculées avec les données de la thermochimie disponibles dans la littérature, et ces voies de dissociation des paires d'ions multicorps sont attribua provisoirement dans les spectres de production d'anions respectifs.

Les Plaquettes Produits De Cellules Souches Embryonnaires Humaines Sont Fonctionnels in Vitro Et Dans La Microcirculation Des Souris Vivantes

Les plaquettes jouent un rôle essentiel dans l'hémostase et l'athérothrombose. En raison de leurs durées de conservation courte, il y a une demande constante pour ce composant sanguin de sauver des vies. Dans cette étude, les auteurs rapportent qu'il est possible de générer mégacaryocytes fonctionnelles et plaquettes à partir des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur une grande échelle. Analyses contraste et microscopie électronique du différentiel-brouillage a montré que les caractéristiques ultrastructurales et morphologiques des plaquettes dérivées de CSEh étaient identiques à ceux des plaquettes de sang normales. Dans les essais fonctionnels, plaquettes dérivées de CSEh a répondu à la stimulation de la thrombine, forment des micro-agrégats et a facilité la formation de caillot/rétraction in vitro. Vivre microscopie des cellules a démontré que des CSEh-plaquettes forment de lamellipodia et des filopodes en réponse à l'activation de la thrombine et attachés les uns aux autres, comme observé dans le sang normal. À l'aide d'imagerie intravitale en temps réel avec la microscopie vidéo à haute vitesse, nous avons également montré que les plaquettes dérivées de CSEh contribuent au développement des thrombus dans les sites d'induite par laser des lésions vasculaires chez les souris, fournissant la première preuve pour la fonctionnalité in vivo des plaquettes dérivées de CSEh. Ces résultats représentent une étape importante afin de générer une offre illimitée de plaquettes pour transfusion. Puisque les plaquettes ne contiennent aucun matériel génétique, ils sont des candidats idéaux pour la traduction clinique précoce, impliquant des cellules souches pluripotentes humaines.

Réparation Mono-étagé De Coarctation Aortique Avec Une Valve Aortique Bicuspide Concomitante Et Anévrisme De L'aorte Ascendante

La gestion chirurgicale optimale des patients présentant une coarctation aortique, ainsi que d'autres troubles cardiovasculaires n'est pas claire. Dans cette étude, nous rapportons le cas d'un homme adulte avec une coarctation aortique associée à une valve aortique bicuspide et un anévrisme de l'aorte ascendant. Le patient a subi une mono-étagé réparation impliquant le Bentall technique et total arch remplacement combiné avec l'implantation de tronc éléphant extenseur, qui a été réalisée par le biais de sternotomie médiane. Nous considérons que cette procédure était une alternative appropriée pour traiter ces cas complexes.

Myxome De Le Biatrial En Forme D'haltère

Héparine Favorise Le Processus D'adaptation De Suspension De Cellules CHO-TS28 En éliminant L'agrégation Cellulaire

L'héparine a été montré pour éliminer l'agrégation cellulaire dans les adaptations de la suspension de l'insecte et les cellules HEK293 pour cultures cellulaires à base de virus, le rôle de l'héparine dans l'adaptation de la longue période de suspension sans sérum des lignées de cellules ovariennes d'ancrage dépendant de hamster chinois reste peu concluant. Dans cet article, nous explorons l'application éventuelle de l'héparine dans l'adaptation de la suspension de la lignée cellulaire CHO qui produit un cHAb18 anti-anticorps chimérique. L'héparine a montré une inhibition dose-dépendante de l'adhérence cellule-cellule de CHO-TS28, avec un effet inhibiteur significatif qui se produisent lorsque la concentration dépasse 250 μg/ml (P < 0,001). Héparine présentait également un rôle d'élimination agrégation cellulaire à toutes les concentrations (P < 0,001). En outre, l'héparine favorisé la croissance cellulaire et la sécrétion d'anticorps, avec la plus forte densité de cellules ((± 99.83 12.21) × 10 4 cellules/ml, P = 0,034) et un rendement maximal d'anticorps ((9,46 ± 0,94) mg/l, P 0,001 <) les deux survenant à 250 héparine μg/ml. Quand agité, agrégats cellulaires ont été effectivement dispersés par 250 héparine μg/ml et un procédé de culture de suspension monocellulaire est promu. Dans les cellules CHO-TS28 suspension adaptée, les taux de croissance cellulaire et de la productivité de l'anticorps spécifique ont été maintenus ; while activité de liaison de l'antigène s'est légèrement améliorée. Ensemble, nos résultats montrent que héparine peut promouvoir l'adaptation de la suspension d'anchorage-dépendait de cellules CHO par résistance agrégation cellulaire sans pour autant réduire la croissance des cellules, sécrétion d'anticorps et l'activité de liaison de l'antigène.

Chondrosarcome Cardiaque Primaire

Abstrait chondrosarcome cardiaque primaire est extrêmement rare, et ses caractéristiques cliniques et gestion ne sont pas claires. Seulement huit cas de chondrosarcome de cardiaque primaire dans le coeur gauche ont été signalés dans la littérature anglaise. Dans ce rapport, nous décrivons un cas de chondrosarcome primaire de l'oreillette gauche. La gestion de ces tumeurs rares est l'objet du présent rapport. (Carte de J Surg 2012; **: 1-3).

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