60Hz 电磁场暴露的对 APP695 转录水平的神经母细胞瘤细胞分化的影响。

Bioelectrochemistry (Amsterdam, Netherlands). Jul, 2002  |  Pubmed ID: 12049751

流行病学研究表明与主占领有可能造成中度到高度极低频 (ELF) 电磁场 (EMF) 暴露的工人都在阿尔茨海默病 (AD) 发病的风险增加。作为研究细胞水平的极低频电磁场和广告之间的关联的可能性的第一步，我们使用了区分 IMR 32 神经母细胞瘤细胞。在双盲实验中，IMR 32 细胞受到磁场作用强度的 50、 100 和 200 microT 60 Hz 的频率 4 h 的分化 （2、 10、 16 天后孵化分化介质中） 的三个年龄段。我们用从一个函数发生器和内部的内置的功率放大器由 60 Hz 的正弦信号驱动的定制亥姆霍兹线圈安装程序。从暴露的细胞中提取总 RNA 被分隔的琼脂糖凝胶电泳，转往北部的杂交的尼龙膜。Digoxygenin 标记 APP695 RNA 探针被用来检测在极低频电磁场响应 APP695 mRNA 水平的变化。本报告所述的结果提供没有支持 APP695 基因转录和婴儿死亡率 32 分化年龄，以及磁场暴露之间的任何关系。这项研究构成调查极低频电磁场和细胞水平的广告表现之间的关联的可能性的第一步。

生化和电生理分化 (IMR 32) 神经母细胞瘤细胞系的配置文件。

In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. Sep, 2002  |  Pubmed ID: 12605539

神经母细胞瘤细胞系 (IMR 32） 时有区别的, 模仿大预测人类的大脑皮质和在某些组织培养条件下，形式胞内的纤维材料，通常在受感染与老年痴呆症患者的大脑中观察到。我们的目的是向使用有区别的 IMR 32 单元格作为体外磁场暴露研究系统。我们以前研究过体外细胞分化的小鼠神经母细胞瘤 (N1E-115) 在静息膜发展潜力。这项研究的目的是扩大我们的调查 IMR 32 单元格。电生理 (静息膜电位，V(m)) 和生化 （神经元特异性烯醇化酶活性 [NSE]） 测量了每 2 d 16 d 内。Oxonol 电压敏感染料和流式细胞术用来测量 V(m) 的相对变化。要排除机械细胞脱离任何效应，V(m) 间接计量的使用与数字成像焦慢电位染料 (tetramethylrhodamine 甲基酯) 中。神经元特异性烯醇化酶活性衡量之后生产的磷酸烯从甘油 2-磷酸-d-酸在 240 nm。我们的研究结果表明 IMR-32，在体外诱导分化为 NSE 活动特点是增加不伴随静息膜发展潜力。这一发现表明 IMR 32 细胞形态生化和电生理分化途径是相互独立。

纯化和增殖的内皮细胞衍生和扩大从胚胎干细胞体外。

Endothelium : Journal of Endothelial Cell Research. 2003  |  Pubmed ID: 14741848

(ES) 胚胎干细胞作为优秀的体外系统学习分化事件，制订了各种专门的细胞，为未来再生治疗应用程序生成的方法。与使用胚胎干细胞相关的两个障碍包括： (a) 隔离的同质群体分化的细胞和 (b) 获得终末分化能够进一步增殖细胞核的细胞群体。在这里，作者描述了在其中他们克服这两个障碍通过生成高度纯化的人口的方法 (> 96%） 积极增殖细胞核内皮细胞的小鼠胚胎干细胞。简单地说，60,000 ES 细胞进展通过三个不同阶段的细胞感应/扩张和超过 3 亿的内皮细胞生成的两个单元格分离过程。这些 ES-血管内皮细胞显示特征类似于血管内皮细胞在这他们表达几个常见的内皮细胞标记，它们形成二维 (2D) 针织结构复杂微血管的三维 (3D) 胶原类型以及我凝胶，以及他们保留进行重组其骨架的机械部队响应的能力。我们的研究结果表明有可能不必就可以获得均质的内皮细胞的增殖人口从小鼠胚胎干细胞基因操纵 ES 细胞或进纸器细胞共同培养。

胚胎干细胞的基因表达谱导致多潜能和早期发展活动更好地理解。

Biology of Reproduction. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15140800

胚胎干细胞的特点是他们的能力，其无限期地传播文化、 维护正常染色体核型与它们未分化的状态。他们有的分化为任何专门的单元格类型，在正文中的潜力。有关评选和早期发展的转录配置文件的了解是有必要更好地充分发挥其发展潜力，并还保持其未分化的型。目前，几种技术都使用以确定胚胎干细胞的基因表达谱。这一审查汇总生成在干细胞在小鼠和人类细胞中的基因表达分析使用芯片和其他方法的信息。我们还将讨论未来旨在进一步破译人类胚胎干细胞的多能干性质的研究有用的具体办法。

转录分析人类胚胎干细胞初步分化事件。

Biochemical and Biophysical Research Communications. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15369773

目前，有的人类胚胎干细胞 (hESCs） 有效地产生一种特定的单元格类型，可能是由于缺乏理解的控制信号事件之前公开分化的基因没有分化策略。sed HepG2 细胞培养液 (MEDII)，其中诱导小鼠胚胎干细胞中同时保留多能干标记，到 hESCs 查询基因表达的早期分化。治疗粘连 hESCs 50 %medii 介质进行分化到类似于基元条纹阶段细胞的小鼠胚胎的基因表达某一单元格类型。MEDII 治疗-规范 TDGF1 (Cripto) 基因在小鼠胚胎和 TGFB1/NODAL 信号转导通路的关键组成部分的前后轴和中胚层形成的必要条件。LEFTYA，拮抗剂 NODAL/TDGF1 信号表示在前内脏内胚层，是下调 MEDII 治疗，正如挥金如土，抑制剂相关 INHBE1 通道的中胚层诱导。总之，TGFB1/NODAL 通路是重要的基元条纹和中胚层的形成和在使用 MEDII，我们目前用于生成数量的体外细胞调控基因 TGFB1/NODAL 途径，这可能会导致更多均匀平整的中胚层细胞中同时保持胚胎基因表达 NANOG POU5F1） 和 SSEA 4 标记的一种手段。

两种人类胚胎干细胞系的比较转录分析。

Biotechnology and Bioengineering. Nov, 2004  |  Pubmed ID: 15493035

人类胚胎干细胞 (胚胎干细胞） 产生了很大的兴趣，因为 self-renew 和产生许多不同的细胞类型的能力。基因芯片技术的结合，人类胚胎干细胞因雇用破译的分子机制基于系统的方法提供强大的工具，将控制潜能和早期的发展。最近的工作重点是定义"stemness"和基于不同的实验和分析方法，在老鼠和人类胚胎干细胞的多潜能。我们使用混合线性模型的统计方法，在胚胎干细胞中报告严格直接比较两种人类胚胎干细胞 （BG01 和 H1），以获取丰富的基因的列表从获得的数据集。此外，我们使用来自 BG01 胚胎干细胞的另一种多能干人口获得的基因，我们认为重要的对维护多潜能的列表。总共有 133 基因重叠三多能干人口之间。133 基因的多数被归类在细胞周期调控、 信号转导、 转录调节的关键功能类别下。Oct4、 Sox2、 LeftyA、 Fgf2 表达的关键基因。此外发现，在所有三个群体中充实是 FLJ10713，已被证实在早些时候的研究拥有在小鼠胚胎干细胞中的同源，群集紧紧地与人类胚胎干细胞中 Oct4 的未知函数假设蛋白编码基因。虽然有许多基因每多能干人口所特有，但它们共享基于定义多潜能的功能性本体的相似之处。我们研究的意义强调的共享生物相似之处，使用统一的严格分析方法，以便更好地定义多潜能干细胞群体的直接比较。我们的研究结果产生重要影响的多潜能维护和发展中定向分化为各种蓄热式应用程序的战略。

单个磁场暴露顺序调查系统的实时和下游细胞反应。

Bioelectromagnetics. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14696050

为了能够将实时膜电位或离子通量变化与进一步极低频 (ELF) 电磁场 (EMF) 曝露的下游基因转录响应关联起来，我们制订了一对对称的圆形线圈组成的实验系统。(实时信号) 倒置的显微镜舞台上以及内部控制的环境孵化器 （基因转录终点），可以使用此系统。该系统包括切换框致盲实验工作人员和功率放大器的唯一，定制。我们报告本文档的设计和表征参数视为重要在体外的极低频电磁场暴露研究，其中包括线性磁场分布，显微镜的物镜干扰，赔偿有关系统的加热线圈的影响及信号的谐波含量。

维护人类胚胎干细胞的遗传完整性。

Nature Biotechnology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15637610

统一贴壁的神经前体细胞人口从猕猴胚胎干细胞。

Stem Cells and Development. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16646666

恒河猴和人类胚胎干细胞 (胚胎干细胞) 都相似，精制干细胞疗法适当临床前同种异体移植模型制作猕猴胚胎干细胞。如果神经推导过程是可伸缩的和无污染 nonneural 细胞或胚胎干细胞，将加强恒河 ESC 源性神经祖细胞 (NPs) 在临床应用中使用。在此研究中，我们有自己的量化时空基因表达变化的恒河 ESC 到统一 NPs 使用简单无进纸器的遗民文化有区别。NPs 展出神经特异性基因显著上调和下调的潜能基因。此外，胡、 MAP2，和 Tuj1，表达式显示 NPs 可以形成 post-mitotic 神经元。这项研究表示神经基于细胞疗法临床前试验生产粘附灵长类 NPs 的简单且可扩展的方法。

细胞在人类胚胎干细胞的表面标志。

Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 2007  |  Pubmed ID: 18453248

多能干的人类胚胎干细胞 (hESCs) 性质基于他们的潜力，以形成在正文中的每个单元格类型。使用之前在定向诱导分化战略中，这些细胞需要彻底的特点。大量的糖蛋白与细胞表面存在的碳水化合物提供极好的机会，为表征 hESCs 和手段来描绘多能干和有区别的单元格类型。已选择 14 凝集素，基于其特殊性的各种各样的碳水化合物，碳水化合物的联系，以及特定阶段的胚胎抗原-4 （SSEA-4)，一个小组审查 hESCs 其他潜在多能干标记。这些研究取得了具有约束力的定量的遗民殖民地流流式细胞仪和绑定本地化的免疫细胞化学。我们已经表明某些凝集素可用作因为约束力百分比和约束力的本地化这些凝集素是类似于那些 SSEA 4 多能干的 hESCs 状态与相关联的标记。这礼物用于多能干 hESCs 系统分类和识别选项区分 hESC 类型基于伴随分化的糖演示文稿。

人类神经祖细胞来自胚胎干细胞在无进纸器的文化。

Differentiation; Research in Biological Diversity. May, 2008  |  Pubmed ID: 18177420

(上帝) 的人类胚胎干细胞培养人体神经祖细胞 （国家警察） 推导报与培养液或进纸器单元格的使用。这中未定义的组件引入系统，限制能力精确调查控制过程的因素的要求。此外，使用非人类起源的进纸器细胞引入了潜在的人畜共患传染，限制其临床实用性。在这里我们报告无接驳系统，生产从住户开支统计调查单元格国家警察和测试过程中涉及的各种媒体组件的影响。使用的五个协议定义的媒体组件效率的国家警察代作了比较。基于这种分析，我们讨论的基本成纤维细胞生长因子 （FGF2）、 N2 补、 非必需氨基酸 (NEAA) 和敲作用血清更换 （KSR) 国家警察代的过程。所有协议都导致 Oct4/POU5F1 表达下调 (90.5%至 < 3%)，和上调到的神经前体细胞标记的制作与文化显著偏高 (p < 0.05) 武藏 1 (MSI1) 的神经前体细胞标记表达式。 大约 89%的这些细胞是巢蛋白 (NES) + 3 星期后，但不。 相比之下，KSR 和 NEAA，补充的分化媒体产生更少的 NES + （75%） 单元，但这些细胞的增殖，和由五个通道文化组成的 > 97 %nes + 细胞。 不同程度。 媒体与 N2，但不是 KSR 和 NEAA这表明 KSR 和 NEAA 补充剂并没有能够加强早期分化，但未能促进国家警察细胞培养增殖。这导致一个高效、 可靠、 可重复的分化系统适合生成大量人口的国家警察的单元格。这将促进对早期人类神经分化过程中的分子和生化机制的进一步研究和可能产生统一神经元细胞治疗用途而不用顾虑会从饲养层的人畜共患传染。

我异构体调节基因表达的星形胶质细胞对人类神经祖细胞分化过程的核因子。

Stem Cells (Dayton, Ohio). May, 2009  |  Pubmed ID: 19418463

即使星形胶质细胞是正常的脑功能和发展和进展，包括 neuroinflammation 与神经退行性疾病相关的神经病理学国家关键控制在星形胶质细胞分化过程中的基因表达的机制了解得很少。到目前为止，放映了几个信号通路调节星形胶质细胞分化，包括转导、 骨人骨形成蛋白-2/Smads 和凹槽。最近，核因子-1 （NFI-A-B-C，、-X) 的家庭被牵连与 NFI A 椎大脑皮层发展的调控和 B 控制的 gliogenesis 开始。在这里，我们开发了对神经祖细胞 (NP) 和后来星形胶质细胞的干细胞分化的体外模型。从干细胞过渡到祖细胞陪同预期的标记，包括 Sox 2、 武藏-1 和 Oct4 表达配置文件中的更改。随后，生成的星形胶质细胞的特点是由适当的形态、 增加的谷氨酸摄取和标记基因的表达。我们用这种体外分化模型来研究的表达和功能正式在编人员。有趣的是，干细胞表示正式在编人员，只有背景水平定向诱导分化为 NP 激活的 NFI A.表达时更重要的是，几个阶段对星形胶质细胞分化的诱导是 NFI X 表达。此外，NFI-X 和-C 所需的表达式的胶质纤维酸性蛋白和富含半胱氨酸蛋白 1 的酸性分泌的蛋白的标记的星形胶质细胞分化较后阶段。我们得出的结论正式在编人员表达程序执行期间与 NFI-X 和-C 控制分化后期的星形标记表达式的星形胶质细胞的分化。

仿生聚合物在胚胎干细胞命运的测定中的作用。

Regenerative Medicine. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19580405

人类胚胎干细胞，包括胚胎和诱导多能干细胞，有着巨大的潜力，为治疗许多疾病，由于其生成有用的治疗应用的单元格类型的能力。目前，很多干细胞培养、 增殖及分化体系纳入动物源性成分促进自我更新和分化。但是，使用这些组件是劳动密集，进行异种污染的风险和收益率难以复制的受损实验结果。从生物角度来看，动物和无细胞仿生微环境的生成，提供的适当的物理和化学线索干细胞自我更新的或专门的单元格类型分化将是理想。这项检讨介绍支持繁殖的天然和合成聚合物的使用和干细胞分化的企图取得清楚地了解负责干细胞命运的决定因素。

基于干细胞的模型和神经退行性疾病的疗法。

Critical Reviews in Biomedical Engineering. 2009  |  Pubmed ID: 20528730

多个神经退行性疾病通常结果无可挽回的破坏与不当运作的专门的神经元细胞或神经细胞的细胞群体。这些障碍有可能作出贡献已经不堪重负的卫生保健系统，除非可以改变神经变性的研究进展。理解神经退行性细胞生物学进展一直受到缺乏预测和一些会声称，有关的细胞模型。此外，需要开发新的药物并确定方法进行维修或更换受损的神经元的研究受到了严重缺乏足够体外人类神经元细胞基础模式。在这种情况下、 多能干细胞和神经祖细胞和它们的属性，包括无限的扩散，可塑性生成其他的单元格类型和现成的细胞 — — 来源构成优秀的备选方案 ex 体内主要文化或有助于我们理解神经退行性细胞生物学和我们的能力分析治疗性或毒性化学品的影响既定的永生化的细胞系毒品和异。此外在这些疾病中定义基础的 《 创世纪 》 的神经元死亡的许多问题仍然没有答案，证据表明线粒体功能障碍的关键作用。干细胞、 神经祖细胞和成人细胞的评估可以提供有益的见解，纳入发展神经元和神经退行性的进程。最后，还讨论了基于细胞和基因疗法治疗神经退行性疾病的组合的可能性。

人类胚胎干细胞繁殖的人源性碱性成纤维细胞的细胞外基质成分的表征。

Acta Biomaterialia. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 20659593

从我们实验室最近的研究表明成功地从人成纤维细胞生成的脱细胞基质保持人类胚胎干细胞 (hPSCs) 在其未分化的状态长时间。旨在更好地表征，我们进行了蛋白质组学分析，以确定在小鼠胚胎的细胞外基质 (ECM) 蛋白质-和两人源性碱性成纤维细胞的脱细胞基质。我们的研究认定这些基质和免疫细胞化学分析的核心组件，证实乙酰，以及通过蛋白质组学分析确定其他 ECM 蛋白乙酰肝素硫酸多糖 (乙酰)。在我们试图发展表面模仿成纤维细胞沉积 ECM 和其自我更新能力，乙酰和其他核心 ECM 蛋白质组成的基板拟定和评估为 hPSC 的自我更新的功能。保持这些衬底上的 WA09 和 BG01v hPSCs 展示多个特征的潜能，包括 (i) 紧集落形成与典型的干细胞形态 ；(二) 阳性表达的碱性磷酸酶、 SSEA3、 SSEA4 和 Oct4 基于免疫细胞化学分析 ； (iii) 阳性表达(四) POU5F1、 NANOG、 SOX2 基因表达 ；(v) 和体外分化和胚层特定标记的表达式。我们的研究还表明虽然本身没有由乙酰不支持 hPSC 的自我更新，将乙酰和纤维连接蛋白结合在一起的基板是足够 hPSCs 未分化繁殖。这些研究协同促进附着力和负责 hPSC 自我更新的信号通路的激活的基质中形成相应的 ECM 组件的标识的基础。

人类胚胎和诱导多能干干细胞对人类脱细胞基质的稳定传输。

Biotechnology Progress. Jul-Aug, 2010  |  Pubmed ID: 20730767

人类胚胎干细胞 (hPSCs)，其中包括人类胚胎干细胞 (hESCs) 和人类诱导多能干细胞 (hiPSCs) 作为再生的生物医学疗法的潜在来源和模型系统研究早期发展获得了很大的兴趣。传统上，小鼠胚胎成纤维细胞已被用作支持饲养层 hPSCs 的持续传播。然而，非人派生馈线使用 hPSC 文化中的实验结果中带来了对异种污染、 劳动集约和变异的可能性的担忧。对解决这些问题的一些，我们报告传播的三个不同 hPSCs 对进纸器的无细胞外基质 (ECM)-基于源自人成纤维细胞的基底。hPSCs 在此设置中传播是难以区分的按多个条件，包括殖民地形态、 多潜能蛋白标志物表达、 trilineage 在体外分化和基因表达模式，从 hPSCs 直接对成纤维细胞饲养层细胞。此外，hPSCs 保持正常染色体核型分析后 15 通道在此设置时。这基于 ECM 的文化系统的开发是它可以作为发展及其衍生物的研究和治疗应用和生产的稳定 hPSCs 人性化的传播系统中的关键组件 hPSC 传播方法的重大进展。

人类胚胎和诱导多能干细胞间接共育体系中的传播。

Biochemical and Biophysical Research Communications. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20117095

我们已经开发并验证为人类胚胎干细胞 (hPSC) 传播，允许与人成纤维细胞培养基的同时保持完全分离的两个单元格类型的实时调节微孔 poly(ethylene terephthalate) 基于膜的间接共培养系统。人类胚胎干细胞 （hESC） 线和人类诱导的多功能干细胞 (hiPSC) 线的繁殖和多能干的特性进行了研究的长期文化在此系统中。我们报告 hPSCs 间接共培养与成纤维细胞培养膜是难以区分的按多个条件从 hPSCs 直接对成纤维细胞饲养层细胞。因此这共育体系是 hPSC 培养方法，同时防止混合的 hPSCs 和进纸器的单元格的连续介质空调提供简易干细胞扩展系统的重大进展。这种膜文化方法将启用测试的新颖馈线细胞和分化研究与其他单元格的类型，使用联合培养并简化文化条件分阶段的分化协议的逐步变化。

双链断裂 ATR 和 ATM 的动态依赖人类胚胎干细胞和神经的后代中的修复。

PloS One. 2010  |  Pubmed ID: 20368801

DNA 双链断裂 (DSB) 是毒性最强的 DNA 损伤形式。旨在开发过程表征 DNA 修复的研究表明相比要有区别的体细胞中哪个区段结束加入 （NHEJ） 是占主导地位的多能干细胞中的同源重组修复 （HRR） 是更为关键。我们有特点的 DNA 损伤应答 (DDR) 和在人类胚胎干细胞 (hESCs） 和体外神经细胞 DNA 双链断裂 (DSB) 修复质量。电离辐射诱导疫源地 (IRIF) 号决议被用作 DSB 修复代理项。Γ-H2AX 疫源地的决议发生速度慢 hESCs 相比神经祖细胞 (NPs) 中和 hESCs 星形胶质细胞或许反映出更复杂的 DSB 修复。此外，RAD51 灶，指示性的活跃的同源重组修复 （HRR） 的分辨率显示 hESCs 以及 NPs 有种高分辨率、 高容量而星形胶质细胞不这样做。重要的是，ATM 激酶被证明为灶形成星形胶质细胞，但不是在 hESCs，表明在这些单元格中复员方案不同的关键。阻止星形胶质细胞中的 ATM 激酶不仅无法形成也完全拆卸预制的修复疫源地。HESCs 能够形成 IRIF 被正式废止与咖啡因和针对 ATR，牵连这 hESCs siRNAs，依靠 ATR，而不是 ATM，规管 DSB 修复。这种动态更改作为细胞分化的关系。有趣的是，虽然在星形胶质细胞中的 DNA pkcs # 激酶 (和大概非同源 endjoining [NHEJ]) 的抑制作用减缓不在 hESCs 那样的 IRIF 号决议，这表明该修复的 hESCs 不利用 DNA-pkcs #.共，我们的研究结果显示 hESCs 已是很大程度上依赖于 ATR 的 HRR，而星形胶质细胞关键取决于为 NHEJ，其中部分原因是，独立于 DNA 的 pkcs # ATM 的高效 DSB 修复。

不同凝集人类胚胎干细胞和衍生品援助之间的配置文件中的神经祖细胞分离。

PloS One. 2011  |  Pubmed ID: 21850265

人类胚胎干细胞 (hESCs) 和有区别的后代允许正常胚胎发育过程的重要的更改事件的调查。目前大部分的研究重点是的 proteinacous 对细胞表面糖基化格局的变化知之甚少与干细胞分化而发生的变化。聚糖沿袭特定单元格的标识可以帮助人们了解他们在维护、 增殖和分化中的作用。此外，这些糖可以作为标记的细胞同质群体分离。使用面板和八素凝集素，糖表达的 hESCs、 hESCs 派生人类神经祖细胞 （国家警察） 的单元格和 hESCs 源性间充质祖 (发落) 细胞进行了调查。我们的目标是找出糖都是唯一的国家警察细胞和使用相应凝集素的细胞分离。流式细胞术和免疫细胞化学技术被用来确定表达和定位的糖，分别在每个单元格中键入。这些结果表明糖表达式更改后的 hESCs 分化和对于神经和间充质沿袭是不同的。例如，绑定 PHA L 凝集素是低 hESCs (14±4.4%)，但较高的有区别的国家警察 (99±0.4%) 和发落细胞 (90±3%)。三种凝集素： VVA、 DBA 和零担国家警察的单元格中有低绑定 hESCs 和发落的单元格，但明显高于绑定。最后，VVA 凝集用于隔离 hESCs、 国家警察细胞和发落细胞混合人口国家警察细胞。这是首次报告，跨这些人类干细胞谱系的糖表达式进行比较，并确定重大差异。此外，这是为人类神经祖细胞分离使用 VVA 凝集素的第一项研究。