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Articles by Ramona Pop in JoVE
JoVE General
CD71/TER119 흐름 cytometric 어세를 사용하여 마우스 Erythroid Progenitors의 제품 식별 및 분석
직접 갓 수확 마우스 골수, 비장이나 태아의 간장에서 분화 단계 특정 murine erythroid progenitors의과 엽 성의 전구 물질의 식별 및 분자 분석을 위해 흐름 cytometric 방식입니다. 분석은 세포 표면 마커 CD71, Ter119 및 셀 크기에 의존합니다.
Other articles by Ramona Pop on PubMed
관상 동맥 병 변 치료를 위한 Everolimus Eluting 스텐 트와 함께 첫 번째 인간 경험의 Angiographic 결과 (미래 나 재판)
이 연구의 목적은 복잡 하지 않은 관상 동맥 병 변 치료를 위한 everolimus eluting 스텐 (EES)의 첫 번째 인간 평가의 angiographic 결과 보고 하는. 42 명의 드 노 보 관상 동맥 병 변 환자 (2.75 4.00 m m 혈관, 병 변 길이 < 18mm) 수신 중에 스 2:1 비율로 무작위로 prospectively 했다 (n = 27) 또는 금속 스 텐트 (n = 15). 초기 임상 및 angiographic 특성 두 그룹 사이에서 유사 했다. 6 개월 속 행, EES 했다 낮은 텐트에서 늦은 루멘 손실 (0.32 m m, p ± 0.22 vs 0.85 ± 0.10 < 0.0001) 및 세그먼트 직경 stenoses (12.3% 대 37.0 15.8%, p + + 20.7 = 0.002). EES;와 텐트에서 restenosis 아니 했다. 그러나, 1 초점 원심 지 restenosis 제시 했다. 1 텐트 1 세그먼트 (근 위 지) restenosis 금속 스텐 그룹에서 했다. 두 그룹에서 추가 작업에 전혀 스 텐트 혈전 증 이나 동맥 류 형성이 했다.
염색체 17 전 중단점의 정밀한 매핑 > 또는 Sox9의 상류 900 Kb Acampomelic Campomelic 발육 이상 및 가족, 골격 발육 이상에 =
이전에, 우리의 그룹 보고 균형 잡힌된 t(13;17) 전 골격 이상, 로빈 시퀀스, hypoplastic scapulae 갈비뼈의 누락 된 쌍 등의 스펙트럼과 연결 된 5 세대 가족. 염색체 특정 마커 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR)를 사용 하 여 파생 전 좌 염색체를 포함 하는 체세포 잡종에서 DBA를 분석, 우리는 각 염색체에 중단점 좁혀 졌다. 중단점에 걸친 PCR 제품의 후속 연속 휴식을 정확 하 게 식별 합니다. 염색체 17 중단점 약 932 kb 섹스 결정 지역 Y SRY 관련 높은 이동성 그룹 상자 유전자의 (삭스) noncoding 대 본 두 이미지 cDNA 클론으로 표시 내의 상류에 매핑합니다. 보고서의 증가 campomelic 발육 이상 (CD)의 경우에는 sox9에서 최대 1 Mb의 거리에서 염색체 17 중단점 연루 있다. 이 multigeneration 가족은 CD와 함께 몇 가지 기능을 공유 하는 장애, 비록 그들의 표현 형 (nonmosaic) CD의 모든 보고 된 케이스 보다 훨씬 온화한입니다. 따라서,이 경우 etiologically 고유 골격 발육을 나타내는 수 있습니다 또는 날짜에 보고 sox9에서 가장 인접 전 중단점에 기인한 CD의 매우 가벼운 가족 예를 수 있습니다. 또한, 우리는 세련 된 acampomelic CD 케이스를 설명 하는 다른 곳에서 중단점 및 약 900 kb sox9의 상류 거짓말 하는 것을 발견 했다.
지배적인 장애 Campomelic 발육 이상에 SOX9 Homozygous 넌센스 돌연변이: Mitotic 유전자 변환의 경우
Campomelic 발육 이상 (CD; MIM 114290) XY 성 반전 된 상 염색체 지배적인 골격 기형 증후군 17q에 SOX9 유전자 안팎 heterozygous 드 노 보 돌연변이 의해 발생 합니다. 우리는, 의외로, 넌센스 돌연변이 Y440X homozygous CD, 섹스 반전 등의 전형적인 징후와 환자 보고. 어느 부모가 Y440X 돌연변이 실시, 이후 homozygous 상황을 설명 하 고 가능한 메커니즘 뒤에 단 isodisomy, 체세포 크로스 오버 또는 유전자 변환 드 노 보 변이 했다. 환자는 6 microsatellite 마커 SOX9 측면 heterozygous, 단 isodisomy와 체세포 건너 제외 했다. Intragenic 단일 뉴클레오티드 polymorphisms 분석 제안 homozygous 돌연변이 이상 440 뉴클레오티드와 드 노 보 돌연변이 모성 대립 및 야생-타입 아버지의 대립 유전자 사이의 최대 2208 뉴클레오티드 교환 관련 mitotic 유전자 전환 이벤트에 의해 발생 했다. 반면에 약 20%가 heterozygous 돌연변이 세포 복제 된 대립 분석 homozygous 돌연변이 세포는 환자의 백혈구 세포 인구의 약 80% 구성 보였다. 따라서 sox9에 있는 가장 빈번한 재발 돌연변이 구성 7 추가 경우에서 3 CD의 경우 앞에서 설명한 heterozygous Y440X 돌연변이 확인 되었습니다. 이러한 환자 자주 오래 생존 온화한 형, 아마도 sox9에 돌연변이 단백질의 일부 transactivation 활동의 보존 때문에 대상 유전자, 세포 transfection 실험에서와 같이. 3 개월 동안 살아남은 환자 체세포 mosaicism와 함께에서 완전 한 기능 손실 대립 유전자 보다는 hypomorphic homozygosity에 의해 설명 따라서 수 있습니다 사실. 이것은, 우리의 지식, 드 노 보 돌연변이 체 대립 유전자에서 인 간에 의해 야생 형 대립 유전자의 mitotic 유전자 변환의 첫 번째 보고서.
빈혈증에 의해 Fas FasL Coexpression의 생체 조건 Erythropoietic 스트레스 응답 하는 동안 Erythroblast 확장 중재
Erythropoietin (Epo) erythropoietic Epor의 수용 체를 통해 hypoxic 스트레스 반응의 주 레 귤 레이 터 이다. 스트레스 반응을 중재 EpoR 신호 크게 알 수 있으며 progenitors는 스트레스 반응의 스펙트럼을 완전히 정의 되지. 여기, 스트레스 반응 Ter119 + CD71highFSChigh 초기 erythroblast 하위 생체 조건 식별 cytometry 사용. 마우스 비장, erythropoietic 보유 기관에에서 조기 erythroblasts 낮은 주파수에 참석 했다 및 골 수에서 동일한 셀 보다 apoptosis의 높은 속도 겪고 있었다. 비장 초기 erythroblasts의 비율이 높은 죽음 수용 체 Fas, 그리고 그 ligand FasL coexpressed. Fas 양성 초기 erythroblasts 훨씬 더 많은 가능성이 동일, Fas 음수가 셀, Fas vivo에서 초기 erythroblast apoptosis 중재 제안 보다 V annexin coexpress 했다. 우리는 erythropoietic 스트레스, erythrocytosis 및 베타-thalassemia를 포함 하 여 여러 마우스 모델 검사. 우리는 그들의 세포 표면에서 Fas 및 FasL 다운 규제와 상관 비장 초기 erythroblasts의 주파수에 극적인 증가 발견. 또한, Epo의 단일 사출 특히 초기 erythroblast Fas 및 FasL mRNA 및 세포 표면 식 억제. 따라서 Fas 및 FasL 적혈구의 부정적인 레 귤 레이 터는. Erythroblast Fas 및 FasL 억제 Epo 중재 vivo에서 erythroblast 확장을 용이 하 게 하는 소설 스트레스 응답 통로 이다.
FAS에 의해 부정적인 Autoregulation 강력한 태아 적혈구를 중재
조직 개발은 발달 속도 제어 하 고 궁극적인 조직을 결정 하는 신호 네트워크에 의해 규제 대량. 여기에 우리가 현재 소설 계산 알고리즘 규제 피드백 및 개발 erythroid 조직에서 progenitors 사이의 포워드 상호 작용을 식별 하는 데 사용. 알고리즘의 배아 일 12 및 마우스에서 15 사이 레드 셀 progenitors 동적 측정을 사용 합니다. Erythroid 발달 과정을 재현 하 고 외부 물결에 견고성을 부여 하는 세포 상호 작용에 대 한 선택. 이 분석 예측 부정적인 autoregulatory 상호 작용 사이 유사한 성숙 단계의 초기 erythroblasts 발생 합니다. 태아 돌연변이 죽음 수용 체 FAS, 또는 그것의 리간드 FASL, 공부 하 고 in vivo FAS 중재 apoptosis의 비율을 측정 하 여 우리는 FAS 및 FASL 전산 모델에 의해 예측 하는 방식으로 태아 적혈구의 중추적인 네거티브 레 귤 레이 터는 다는 것을 보여줍니다. 좋습니다는 apoptosis erythroid 개발 중재 강력한 항상성 조절 적혈구 성숙에 도달 수 있습니다.
적혈구의 주요 투입 단계 PU.1 및 S 상 진행 간의 상호 억제를 통해 세포 주기 시계와 동기화 합니다
Hematopoietic progenitors 받아야 차별화 여러 세포 분열 주기를 탐색 하는 동안 있지만 그것은 알이 두 프로세스를 결합 하는 여부. 우리는 마우스 태아 간 생체 조건에서 적혈구를 공부 하 여이 질문을 해결. 우리는 세포 표면 CD71 식별 발달의 초기 upregulation S 단계에서 긴밀 하 게 동기화 되는 erythroblasts을 일치 발견. 우리이 내 DNA 복제 하지만 하지 후속 사이클의 정확한 타이밍은 이전에 알려진 빠르고 동시 언 질 전환 구성 된 차별화 스위치에 대 한 필요 하다는 것을 보여줍니다. 빈혈증 의존, erythroid 마스터 transcriptional 귤 GATA-1의 활성화 및 β-globin 로커 스에서 활성 chromatin 구조에 스위치의 발병 포함 됩니다. 특히, S 상 진행은 내가 과민 사이트 DNase 형성에 필요한이 로커 스에서 DNA demethylation에 대 한. Mechanistically, 우리는 S 상 진행이 키 언 질 단계 종속 키 p57(kip2)의 downregulation에 따라 달라 집니다 및 PU.1, 가타-1 함수를 적에 게 downregulation를 발생 보여줍니다. 이러한 연구 결과 따라서 분화, 세포 주기 출구에 알려진된 그들의 기능에 뚜렷한에 종속 kinase 억제제에 대 한 새로운 역할을 강조. PU.1 식과 S 상 진행 간의 상호 억제 "잠금" 중요 한 차별화 이벤트의 정확한 조정 보장 세포 주기 클록 erythroid 차별화 프로그램 "synchromesh" 메커니즘을 제공 합니다 또한, 우리는 소설을 보여.
Immunophilin Aryl 탄 화 수소 수용 체 상호 작용 단백질 (AIP)에 의해 Apoptosis의 발달 제어 Survivin 단백질의 미토 콘 드리 아 수입을 포함 한다
Survivin 다기능 단백질 억제, apoptosis의 세포 분열에 필수적인 역할을 하지만 cytoprotective 속성의 분자 토대는 서 투르 게 이해. 여기에 우리가 그 homozygous aryl 탄 화 수소 수용 체 상호 작용 단백질 (AIP), 삭제 표시 survivin 관련 immunophilin 원인과 배아 치 사 율 쥐에 배아 일별 13.5 14 증가 apoptosis의 초기 erythropoietic progenitors Ter119(-)/CD71(-) cytosolic 및 미토 콘 드리 아 구획의 생체 조건에 식을 survivin의 손실. 재조합 형 단백질을 사용 하 여 가져오기 분석 실험, AIP 직접 하지 미토 콘 드리 아를 가져온 고 apoptosis를 억제 하지 못했습니다 했다는 AIP를 바인딩할 수 없습니다 1-141 돌연변이 survivin의 안티-apoptotic 기능 활성화 미토 콘 드리 아, survivin의 가져오기 중재. Survivin의 미토 콘 드리 아 가져오기 AIP 감독 세포 분열에는 영향을 미치지 않았다 하 트는 막 횡단 잠재력의 독립 하 고 열 충격 단백질 90 (Hsp90) 보호자를 필요로 하지 않았다 cytosolic factor(s) 일반 세포에 존재에 의해 저해 되었다. 반면에 아무런 영향을 미치지 했다 tom70의 입을 shRNA 최저의 미토 콘 드 리아 가져오기 수용 체 tom20의 survivin과 민감하게 종양 세포 apoptosis, 미토 콘 드 리아 가져오기 폐지. 따라서, AIP Tom20 인식 survivin의 미토 콘 드리 아 수입을 중재 하 여 개발 및 암 세포 생존에 기여 한다.
In Vivo 마우스 적혈구 중 글로벌 DNA Demethylation입니다
포유류 게놈에 있는 5'-포장 소비재-3' 그는 자주 갠 transcriptional 입을. 게놈 넓은 demethylation pre-implantation 배아와 원시 생식 세포에서 개발 하는 동안 두 번만 발생 하는 것 생각 된다. 이러한 demethylation 이벤트 뒤에 드 노 보 메 틸 화, 개발을 통해 상속 및 조직 관련 loci에만 수정 패턴을 설정 합니다. 우리는 DNA 메 틸 화를 게놈 규모 감소 표현 황산 시퀀싱 (RRBS)를 사용 하 여 마우스 erythroblasts vivo에서 차별화에 공부 했다. Demethylation erythroid 특정 β globin 로커 스에서 가장 게놈 요소에 글로벌 DNA demethylation와 일치 했다. 글로벌 demethylation는 차별화 하 고 신속 하 게 필요한 DNA 복제를 통해 연속. 따라서, DNA demethylation 세계적으로 체세포 차별화, 개발 및 질병의 연구에 대 한 실험 모델을 제공 하는 동안 발생할 수 있습니다.
