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Articles by Raymond R. Mattingly in JoVE

 JoVE Clinical and Translational Medicine

MAME Modelos de 4D Live de células de imagen de un tumor: Interacciones microambiente que la progresión maligna del impacto


JoVE 3661 2/17/2012

1, 1, 1, 1,2, 1,2, 1,2

1Department of Pharmacology, Wayne State University, 2Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Wayne State University

Hemos desarrollado modelos 3D para el cocultivo de células vivas imágenes en tiempo real de las interacciones entre las células tumorales de mama y otras células en el microambiente que afectan la progresión a un fenotipo invasivo. Estos modelos pueden servir como pantallas preclínicos de los medicamentos que se dirigen a paracrinos inducidos por las vías proteolíticas, quimiocinas / citocinas y la quinasa implicados en la invasión.

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Alta Actividad De RhoA Mantiene El Fenotipo De Células Mesenquimales No Diferenciadas, Mientras Que La Regulación Por Laminina-2 RhoA Induce Miogénesis Del Músculo Liso

The Journal of Cell Biology. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11877460

Ronda de células mesenquimáticas embrionarias tienen el potencial de diferenciarse en células de músculo liso (SM) a separarse/alargamiento (Yang, Y., K.C. Palmer, N. Relan, C. Diglio y L. Schuger. 1998. Desarrollo. 125:2621-2629; Yang, Y., N.K. Relan, D.A. Przywara y L. Schuger. 1999. Desarrollo. 126:3027-3033; Yang, Y., S. Beqaj, P. Kemp, Ariel I. y L. Schuger. 2000. J. Clin. Invertir. 106:1321-1330). En el pulmón en desarrollo, este proceso es estimulada por la acumulación de peribronquial de laminina (LN) -2 (Relan, N.K., Y. Yang, S. Beqaj, J.H. minero y L. Schuger. 1999. J. Cell Biol 147:1341-1350). Aquí mostramos que LN-2 estimula la miogénesis bronquial por abajo-regulación de la actividad de RhoA. Inmunohistoquímica, inmunotransferencia y transcriptasa inversa-PCR indican que RhoA, una pequeña GTPasa señalización proteína, es abundante en las células mesenquimales embrionarias no diferenciadas y que sus niveles disminuyen junto con SM miogénesis. Estudios funcionales con agonistas y antagonistas de RhoA plásmido positivo y negativo de activación y dominante construye demostraron que la alta actividad de RhoA era requerido para el mantenimiento del fenotipo de células mesenquimales indiferenciadas redondas. Esto se logró en parte al restringir la localización del factor de respuesta de suero de factor de transcripción miógeno (SRF) sobre todo en el citoplasma de células mesenquimales. Al separarse en LN-2 pero no en otros componentes principales de la matriz extracelular, la actividad y el nivel de RhoA disminuida rápidamente, provocando desplazamiento de SRF al núcleo. Elongación celular tanto desplazamiento de SRF fueron prevenidos por la sobreexpresión de RhoA positivo dominante. Una vez que las células experimentaron la diferenciación de SM, para arriba-regulación de la actividad de RhoA inducida en lugar de genes inhibidos de SM. Por lo tanto, nuestros estudios sugieren un nuevo mecanismo por el que LN-2 y RhoA modulan SM miogénesis.

Mecanismo De La Activación De Erk1/2 17-beta-estradiol-inducida En Células De Cáncer De Mama. Un Papel Para HER2 Y PKC-delta

The Journal of Biological Chemistry. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 11960991

Activación de la quinasa activada por mitógeno (MAPK/Erk) es un evento de transducción de señal crítica para estrógeno (e (2))-mediada por proliferación celular. Estudios recientes de nuestro grupo y otros han demostrado que la activación persistente de Erk desempeña un papel importante en la célula migración y progresión tumoral. Los mecanismos de señalización responsables de la activación de Erk persistente no están completamente caracterizados, sin embargo. En este estudio, hemos demostrado que e (2) induce una lenta pero persistente activación de Erk en células de carcinoma de mama MCF-7. La E (2)-activación de Erk inducida depende de nueva síntesis de la proteína, lo que sugiere que E (2)-inducida por factores de crecimiento juega un papel importante en la activación de Erk. Cuando las células MCF-7 fueron tratadas con e (2) en presencia de un anticuerpo monoclonal de anti-HER-2 (herceptin), 60-70% de E (2)-activación de Erk inducida se bloquea. Además, cuando las células MCF-7 no tratadas fueron expuestas a medio condicionado de E (2)-Tratado de células, Erk actividad mejoró significativamente. Además la actividad Erk fue bloqueada por un anticuerpo contra el HER-2 o por agotamiento de heregulin (HRG) desde el medio condicionado a través de inmunoprecipitación. Por el contrario, anticuerpo del receptor (Ab528) de factor de crecimiento epidérmico bloqueado sólo 10-20% de E (2)-inducida por la activación de Erk, sugiriendo que E (2) - Erk inducida por activación predominante es mediada a través de la secreción de HRG y activación de ella - 2 por un mecanismo de autoctine/paracrina. Inhibición de la PKC-delta-mediada por señalización por un mutante negativo dominante o el rottlerin relativamente específico de inhibidor de la PKC-delta bloqueado la mayor parte de la E (2)-inducida por la activación de Erk pero no tuvo efecto sobre la activación de Erk alfa inducida por TGF. Por la inhibición de contraste de Ras, por inhibición de la farnesil transferasa (Ftase-1) o negativo dominante (N17)-Ras, inhibieron significativamente la activación de Erk inducida por alfa, e (2) - y TGF. Esta evaluación de señalización posteriores revelaron que la E (2)-activación de Erk inducida es mediada por una vía HRG/HER-2/PKC-delta/Ras que podría ser crucial para efectos de promover el crecimiento E 2-dependientes en las primeras etapas de la progresión tumoral.

Potente Supresión De Proliferación De Células De Músculo Liso Vascular A10 Por Tratamiento Combinado Con Lovastatina Y 3-allylfarnesol, Un Inhibidor De La Proteína Farnesyltransferase

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Oct, 2002  |  Pubmed ID: 12235235

Las estatinas, que inhiben la 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa y por lo tanto la síntesis de colesterol, son notablemente eficaces en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares. Además de su efecto favorable sobre el perfil lipídico, estos fármacos también pueden prevenir la proliferación del músculo liso vascular que es característico de la aterosclerosis. Presumimos que las estatinas prevenir la Prenilación poste-de translación y por ende, impiden la función, de crítica GTPasas pequeñas en células de músculo liso vascular. Por lo tanto nos hemos analizado el efecto de lovastatina sobre el estado de sus proteínas Ras y RhoB tanto el crecimiento de células de músculo liso vascular A10. Encontramos que < o = 1 microM lovastatina potentemente inhibe la proliferación de culturas A10 y concentraciones más altas (> = 3 microM) induce la apoptosis. También hemos probado el efecto de 3-allylfarnesol (3-alFOH), un inhibidor de la farnesil transferasa (FTI). Los datos muestran que aunque > = 10 microM 3-alFOH se requiere para un efecto citostático, la acción de 3 microM 3-alFOH puede ser enormemente potenciada por incluso nanomolar niveles de lovastatina. También encontramos que la lovastatina y 3-alFOH exhiben sinergismo para causar la para arriba-regulación y relocalización de RhoB de la membrana a compartimentos citosólicas. Esta relocalización de RhoB, que se presume que reflejan una inhibición de su Prenilación, se relaciona con las actividades de proapoptóticas de combinado 3-alFOH y tratamiento de lovastatina. Estos datos sugieren que RhoB puede ser un valioso objetivo farmacológico en las enfermedades cardiovasculares, y que combinaciones de estatinas y ciertos FTIs pueden ser útil en el tratamiento de los trastornos que se caracterizan por proliferación celular excesiva.

Fosforilación Del Factor De Intercambio De Ras-GRF1 En Ser916/898 Revela La Activación De Ras De Señalización En La Corteza Cerebral

The Journal of Biological Chemistry. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12538592

El factor de intercambio de Ras-GRF1, que está reglamentado por el aumento de calcio intracelular y la liberación de subunidades beta gamma de G de proteínas heterotriméricas G, juega un papel fundamental en la activación de Ras neuronal. Activación de receptores acoplados a proteína G estimula un aumento en la fosforilación de Ras-GRF1 en ciertos residuos de serina. El primero de estos sitios para identificarse, Ser(916) en la secuencia de ratón (equivalente a Ser(898) en la secuencia de la rata), se requiere para la activación completa de la actividad del factor de cambio de Ras de Ras-GRF1 por los receptores muscarínicos. Aquí demostramos que Ras-GRF1 altamente se expresa en el cerebro de la rata en comparación con el factor de intercambio de Sos y que hay un aumento en la incorporación de (32) P Ser(898) del cerebro Ras-GRF1 tras activación de proteína quinasa A. fosforilación de Ras-GRF1 en Ser(916) también se requiere para inducir la máxima consecuencia de neurita Ras-dependiente en células PC12. Un anticuerpo nuevo (llamado 2152) que reconoce selectivamente Ras-GRF1 cuando se es fosforilado en Ser(916/898) confirmó la fosforilación regulada de Ras-GRF1 por Western Blot en ambos sistemas modelo de células COS-7 y PC12 transfected y también de la proteína endógena en rebanadas del cerebro anterior de rata. Inmunofluorescencia indirecta confocal de células PC12 transfected utilizando anticuerpos 2152 demostrada reactividad solamente bajo condiciones en que se fosforila Ras-GRF1 en Ser(916/898). Inmunofluorescencia confocal de rebanadas corticales del cerebro de la rata revelaron fosforilación generalizada y selectiva de Ras-GRF1 en Ser(898). En la corteza prefrontal, hubo llamativa fosforilación de Ras-GRF1 en el árbol dendrítico, apoyando un papel para la transducción de señal y activación de Ras en la neurotransmisión en esta área.

PROTEINA QUINASA Mitógeno Activada De Señalización En Las Células Del Neuroblastoma Resistente a Los Medicamentos

Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 2003  |  Pubmed ID: 12616713

Resistencia generalizada inherente o adquirida a las drogas citotóxicas es una limitación importante a la quimioterapia. Hay muchos mecanismos que contribuyen a esa resistencia. En neuroblastomas hay evidencia que la resistencia adquirida a las drogas puede estar asociada con respuesta a las señales del factor de crecimiento alterada. La cascada de quinasa (MAPk) proteína activada por mitógeno ubicua, que transmite señales de factor de crecimiento de la membrana celular al núcleo, proporciona un mecanismo principal para la regulación de la progresión del ciclo celular y la proliferación. Hemos demostrado que existe una relación entre la resistencia adquirida a las drogas en células de neuroblastoma humano doxorrubicina, un inhibidor de la topoisomerasa-2 y MDL-28842, un inhibidor de la hidrolasa de S-adenosylhomocysteine y reducciones en la activación y translocación nuclear de MAPk.

Receptores De Superficie Celular Activan Quinasa Activada Por P21 1 Mediante Múltiples Vías Ras Y PI3-quinasa Dependiente

Cellular Signalling. Dec, 2003  |  Pubmed ID: 14575865

quinasas activadas p21 (PAKs) fueron los primeros miembros mamíferos identificados de una creciente familia de quinasas de proteínas de Ste20-como serina-treonina. En este estudio, mostramos que PAK1 pueden ser estimulados por carbacol, ácido lisofosfatídico (LPA), factor de crecimiento epidérmico (EGF) y forbol miristato-12 13-acetato (PMA) por múltiples independientes y superposición de vías. Dominante-negativo Ras, Rac y Cdc42 inhibición PAK1 activación por todos estos agonistas, mientras activa Rac1 y Cdc42 eran suficientes para activar máximo PAK1 en ausencia de cualquier tratamiento. Ras activa había inducida sólo una débil activación de PAK1 que podría ser potenciada por el estímulo del receptor muscarínico. Estudios con inhibidores de la tirosincinasa del receptor de EGF, fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3) y proteína quinasa C (PKC) reveló que todos los agonistas superficial de la célula podrían activar PAK1 a través de rutas independientes de la PKC, que EGF estimulado una vía dependiente de PI3-quinasa para estimular PAK1, y que el estímulo del receptor muscarínico de PAK1 predominante fue mediado a través de este mecanismo de EGF-R-dependiente. Activación de PAK1 por LPA era independiente de PI3-quinasa y el receptor de EGF, pero fue inhibida por RhoA dominante negativo. Estos resultados identifican múltiples vías de Ras-dependiente a la activación de PAK1.

Gbetagamma Subunidades Estimulan Activado P21 Quinasa 1 (PAK1) a Través De La Activación De La Cinasa PI3 Y Akt Pero Ley Independientemente De Rac1/Cdc42

FEBS Letters. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14706848

La familia de la cinasa activada por p21 (PAK) es homóloga a la levadura 20 estéril (Ste20) y regula una amplia variedad de respuestas celulares, incluyendo la supervivencia, proliferación y morfología de la célula. En este estudio examinamos la activación de PAK1 por subunidades Gbetagamma. Co-transfection de las células COS7 con Gbeta1gamma2 o Gbeta1gamma5 fue suficiente para inducir la activación agonista-independiente de PAK1. Expresión de Rac, Cdc42 o Ras dominante/negativa no inhibir esta activación de Gbetagamma-dependiente. Wortmannin, que inhibe la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3-quinasa) y la expresión de una forma dominante/negativa de Akt fueron suficientes para derogar la activación de PAK1 que fue inducida por Gbetagamma. Estos resultados revelan que la estimulación de PAK1 por Gbetagamma puede ocurrir vía una cinasa PI3 y vía Akt que no requiere de Rac1 ni Cdc42.

Apoptosis Mediada Por TNF-alfa En Las Células Epiteliales Próstata Humanas Normales Y Líneas Celulares Tumorales

Cancer Letters. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14732222

En este estudio se comparó el papel de TNF-alfa en la regulación del crecimiento y de la apoptosis en las células epiteliales prostáticas humanas normales (NP) y líneas de células de tumor de próstata PC3 y LNCap. Las células NP y PC3 eran resistentes, mientras que las células LNCap era muy sensible a la detención del crecimiento de TNF-alfa inducida y apoptosis. La resistencia de las células NP y PC3 fue mediada a través de una vía de supervivencia de NF-kB como tratamiento de las células resistentes con TNF-alfa estuvo acompañado por fosforilación de kBalpha y translocación de NF-kB en el núcleo. TNF-alfa no indujo la fosforilación de kB en las células LNCap sensibles. La sensibilidad de las células LNCap implicó una cascada de proteasa de cisteína como Z-VAD-CH2 F había invertida la sensibilidad de las células LNCap y resistencia inducida a TNF-alfa. Las diferencias en susceptibilidad a TNF-alfa induce apoptosis de NP y ciertas células tumorales de próstata ofrecen interesantes posibilidades para el tratamiento del cáncer de próstata sin afectar el tejido normal de próstata.

Directamente, La Angiotensina II Estimula La Actividad Y Altera La Fosforilación De La Na-K-ATPasa En El Túbulo Proximal De La Rata Con Un Curso Rápido Tiempo De Respuesta

American Journal of Physiology. Renal Physiology. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15161602

Presentamos evidencia que Na-K-ATPasa en el túbulo proximal de la rata es activada directamente por ANG II mucho más rápido de lo observado previamente. Específicamente, se muestra que una exposición de 2 min a 0,1 y 1 nM ANG II se redujo la tasa de acumulación intracelular de sodio en respuesta a un aumento de sodio extracelular añadido en presencia de gramicidina D. De estos datos, mostramos que ANG II estimula directamente la actividad de la Na-K-ATPasa en tarifa-limitando las concentraciones de sodio intracelular. En estas mismas condiciones, exponiendo los túbulos proximales a ANG II alterada la cantidad de 32 P incorporado en múltiples fosfotoproteida generado a partir de una digestión tríptica de la subunidad alfa de la Na-K-ATPasa. Na-K-ATPasa fue aislada de células enteras lisados por medio de una columna de afinidad ouabain y luego se separa en sus subunidades individuales por SDS-PAGE. Na-K-ATPasa enlazado a la columna en su conformación de E2 y eluyó alterando su conformación a E1 utilizando Na + ATP. Na-K-ATPasa aislada de las células tratadas con ANG II eluida más fácilmente de la columna de afinidad ouabain que Na-K-ATPasa aislada de las células control, sugiriendo que ANG II disminuyó la afinidad de la Na-K-ATPasa para ouabain. Así ANG II rápidamente estimula la actividad de la Na-K-ATPasa en 2 min o menos por un mecanismo que podría implicar cambios en la fosforilación y la conformación de la Na-K-ATPasa. Sugerimos que el papel fisiológico para la rápida activación directa de la Na-K-ATPasa es un mayor control de sodio intracelular durante la reabsorción de sodio.

Fosforilación De Quinasa Dependiente A Endógena De La Expresión Y Proteína Del Nucleótido De Guanina Intercambiar Factor Ras-GRF1 En Células De Riñón Embrionario Humano 293

The FEBS Journal. May, 2005  |  Pubmed ID: 15853814

Hemos divulgado previamente la activación de Ras-dependiente de la p44 de quinasas activadas por mitógenos proteína y p42, también llamados quinasas de regulada por señal extracelulares (ERK) 1 y 2 (ERK1/2), mediada por receptores de serotonina Gs-juntado expresados transitoriamente en 293 células de riñón embrionario humano (HEK). Mientras que los receptores acoplados a Gi y Gq han demostrado activar Ras a través del factor de intercambio de guanina nucleótido (GEF) llamado Ras-GRF1 (CDC25Mm) por la Unión de Ca2 + / calmodulina su dominio N-terminal IQ, el mecanismo de activación de Ras a través de receptores acoplados a Gs no se entiende completamente. Divulgamos la expresión endógena de Ras-GRF1 en células HEK293. Estimulación de la serotonina de HEK293 células expresando transitoriamente Gs-juntado 5-HT7 receptores inducida por proteína quinasa dependiente de A fosforilación de la Ras-GRF1 humano endógeno en Ser927 y del ratón transfected Ras-GRF1 en Ser916. Sobreexpresión de Ras-GRF1 mayor fosforilación de ERK1/2 basal y estimulada por la serotonina. Las mutaciones de Ser916 (Ser916Ala) la inhibición o mímica fosforilación (Ser916Asp/Glu) no alteró estos efectos. Sin embargo, la eliminación de los aminoácidos 1-225, incluyendo el Ca2 + / dominio de unión a la calmodulina IQ, de Ras-GRF1 reducido fosforilación de ERK1/2 basal y estimulada por la serotonina. Además, aumentó el tratamiento de la serotonina de las células HEK293 estable que expresan los receptores 5-HT7 [Ca2 +] i y la fosforilación de ERK1/2 serotonina-inducida fue Ca2 +-dependiente. Por lo tanto, el campamento y Ca2 + pueden contribuir a la activación de Ras-dependiente ERK1/2 después de la estimulación del receptor 5-HT7, a través de la activación de un factor de intercambio de guanina nucleótido con actividad hacia Ras.

Activo Quinasa Activada Por P21 1 Rescata a Células Epiteliales De Mama MCF10A De Sufrir Anoikis

Neoplasia (New York, N.Y.). Jul, 2005  |  Pubmed ID: 16026643

El kinase de proteína, PAK1, se sobreexpresa en cáncer de mama humano y puede contribuir a la malignidad mediante la inducción de la proliferación y la invasión. En este estudio, se examinó el papel de PAK1 en la supervivencia de independientes MCF10A células epiteliales de mama para probar si se pueden regular también las primeras etapas de la neoplasia. MCF10A células experimentan anoikis, medida por el clivaje de la caspasa 3 y ribosa polimerasa (PARP), después de más de 8 horas de separación. Akt endógeno, PAK1 y lo malo es fosforilada en células de MCF10A adjuntas, pero estos eventos de fosforilación se pierden todo durante las primeras 8 horas de separación. Expresión de PAK1 o Akt constitutivamente activa suprime el escote de la caspasa 3 y PARP en celdas separadas de MCF10A. Co-sobreexpresión de PAK1 activo con Akt dominante negativo, o de Akt activa con dominante-negativo PAK1, suprime todavía anoikis. Así, Akt y PAK1 mejoran la supervivencia a través de vías que son al menos parcialmente independiente. Reglamento de PAK1-dependiente de la anoikis es probable que ocurra a principios de la cascada apoptótica como expresión de PAK1 dominante negativo aumentó el escote de la caspasa aguas arriba 9, mientras que la activación de caspasa 9 PAK1 inhibido constitutivamente activa. Estos resultados apoyan un papel para PAK1 activado en la supresión de la anoikis en células epiteliales MCF10A.

El Mitógeno Activada De La Proteína Cinasa/extracelulares Quinasa Regulada Por Señal Inhibidor De La Cinasa PD184352 (CI-1040) Selectivamente Induce Apoptosis En Líneas Celulares De Schwanoma Maligno

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16239399

Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es un desorden dominante de un autosoma común que ocasiona tumores neuroectodérmicos. El gen supresor tumoral de NF1 codifica la neurofibromina, que incluye un dominio GTPasa activadora para inactivación de Ras. Purificación de afinidad demostrada N-Ras que la isoforma activada predominante de Ras en dos líneas celulares de neurofibrosarcoma independiente de NF1 pacientes (líneas ST88-14 y NF90-8). Estos NF1 también células kinases de proteína (mapa) de demostraron mayor actividad constitutiva de las quinasas regulada por señal extracelulares 1 y 2 (ERK1, 2) activada por mitógeno en comparación con una línea celular de schwanoma maligno esporádicos que mantiene neurofibromin expresión (STS-26T). Así, mapa quinasa quinasa (MEK) inhibidores pueden ser un enfoque racional para terapia de NF1. Los inhibidores MEK PD98059 [2'-amino-3'-methoxyflavone], PD184352 (también se llama CI-1040) [2-(2-chloro-4-iodo-phenylamino)-N-cyclopropylmethoxy-3,4-difluoro-benzamide] y U0126 [butadieno 1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis (2-aminophenylthio)] todas producen supresión dependiente de la concentración de la proliferación de las líneas celulares de tres. Inhibidores MEK individuales tuvieron efectos similares en todas las líneas de tres células. Sin embargo, sólo los efectos antiproliferativos de PD184352 estrechamente correlacionan con la eliminación de ERK1, 2 actividades de cinasa de mapa. PD98059 era principalmente citostáticos, mientras que U0126 y PD184352 eran citotóxicos. Sólo PD184352 induce apoptosis en las tres líneas, como indicado por la morfología, la activación de DEVDase, escote de componentes-3 y la aparición de poblaciones tener contenidos de ADN sub-G(0)/G(1). Los efectos diferenciales de los inhibidores MEK en supervivencia celular no eran dependientes en estado de p53 o efectos en la vía de ERK5. PD184352 fue también proapoptóticas a rata primario de que células de Schwann. Por lo tanto, aunque PD184352 había matado efectivamente células neurofibrosarcoma, sus efectos sobre las células de Schwann normales pueden limitar su utilidad en la clínica.

Mercurio Inorgánico Inhibe La Activación De LAT En La Transducción De La Señal Mediada Por Receptor De Células T

Toxicological Sciences : an Official Journal of the Society of Toxicology. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16251484

Poco se sabe sobre los mecanismos moleculares implicados con la intoxicación de mercurio en niveles muy bajos. Aunque se desconoce el mecanismo, los estudios en animales han demostrado sin embargo que bajos niveles de mercurio pueden atacar el sistema inmunológico. Mercurio inorgánico (Hg2 +) a niveles muy bajos (pero no tóxico) puede alterar la homeostasis del sistema inmune, en eso roedores genéticamente susceptibles de desarrollar idiosincrásica enfermedad autoinmune, que se asocia con la función defectuosa del T-cell. La función del linfocito t se une íntimamente al receptor de células T. Hemos divulgado previamente que a nivel molecular, bajas concentraciones de Hg2 + interrumpen la señalización del receptor de células T al interferir con la activación de Ras y ERK MAP quinasa. En este informe nos ampliar esos resultados, mostrando en los linfocitos T expuestos a concentración baja de Hg2 +, Ras no se activan correctamente porque aguas arriba del Ras en la vía de transducción de señal celular T, el elemento importante andamios vinculador para activación de células T (LAT) no se fosforila correctamente. Hypo-fosforilación de LAT ocurre, porque aguas arriba del LAT, la tirosincinasa reactiva de la LAT ZAP-70 se activa también no correctamente en las células tratadas Hg2 +.

El Factor De Intercambio De Ras-GRF1 Coordina La Activación De La H-Ras Y Rac1 Controlar Morfología Neuronal

Molecular Biology of the Cell. May, 2006  |  Pubmed ID: 16481401

El factor de intercambio de Ras-GRF1 ha regulado la actividad de factor (GEF) de intercambio de guanina nucleótido para H-Ras y Rac1 a través de dominios separados. H-Ras tanto Rac1 activación se han relacionado con la plasticidad sináptica y podrían contribuir a la función de Ras-GRF1 en vías de transducción de la señal neuronal que subyacen al aprendizaje y memoria. Definimos los efectos de los mutantes Ras-GRF1 y truncamiento que incluyen sólo una de sus actividades del FMAM en la morfología de las células de phaeochromocytoma PC12. Ras-GRF1 necesaria coexpresión de H-Ras para inducir efectos morfológicos. H-Ras además de Ras-GRF1 inducida por una morfología novela, ampliada en células PC12, que se caracterizó por un aumento de 10 veces en tamaño de soma y por extensión de neurita. Un mutante de truncamiento de Ras-GRF1 que incluía el dominio de Ras GEF, GRFdeltaN, además de H-Ras había producido neurita extensiones, pero no ampliar el soma. Esta extensión de neurita fue bloqueada por la inhibición de la activación de la cinasa del mapa, pero era independiente de Rac1 o RhoA dominante negativo. Un mutante de truncamiento de Ras-GRF1 que incluía los dominios de la Rac GEF, GRFdeltaC, produce el fenotipo ampliado en cotransfections con H-Ras. Expansión celular fue inhibida por wortmannin o formas dominantes negativos de Rac1 o Akt. GRFdeltaC ATA H-Ras.GTP en ambos ensayos de telecine de lisados bacterianos y por coimmunoprecipitation de las células HEK293. Estos resultados sugieren que la activación coordinada de H-Ras y Rac1 por Ras-GRF1 puede ser un importante controlador de tamaño de células neuronales.

Dianas Moleculares De Terapias Antitumorales Emergentes Neurofibromatosis Tipo 1

Biochemical Pharmacology. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 16797490

Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es el síndrome más común de la predisposición del cáncer. Los pacientes de NF1 presentan una constelación de manifestaciones clínicas y tienen un mayor riesgo de desarrollar ciertos tumores benignos y malignos. Esta enfermedad resulta de la mutación en el gen que codifica la neurofibromina, una GTPasa proteína (GAP) activadora de Ras. Pérdida funcional de esta proteína compromete inactivación de Ras, que conduce al crecimiento aberrante y proliferación de células derivados de la cresta neural y, en definitiva, la formación del tumor. La gerencia actual de malignidad NF1-associated implica radiación, supresión quirúrgica y las drogas citotóxicas. El éxito limitado de estas estrategias ha impulsado a los investigadores para aclarar más lejos los cambios moleculares que impulsan la formación de tumores y progresión. Esta discusión destacará cómo moléculas, receptores de superficie celular y el microambiente tumoral constituyen potenciales dianas terapéuticas de señalización intracelular, que puede ser relevante no sólo para malignidad relacionados con NF1, sino también a otros tipos de cáncer humanos.

Fosforilación De EPAC-Rap-independiente Y ERK1/2 Inducida Por La Estimulación Del Receptor Acoplado a Gs En Células HEK293

FEBS Letters. Jan, 2007  |  Pubmed ID: 17174312

Serotonina activa Ras y fosforilación de Ras-dependiente ERK1/2 en HEK293 células expresando su g-junto a los receptores de serotonina 5-HT(4) o 5-HT(7) a través de mecanismos desconocidos. Se han sugerido tanto Epac/Rap-dependiente - independientes vías y para la activación de ERK1/2 de Ras-dependiente. EPAC sobreexpresión o 8-CPT-2'-O-Me-cAMP de Epac específicos no causó la fosforilación de ERK1/2, a pesar de la activación de Rap. Los datos no apoyó un papel para PLCepsilon o GEFs de Ras DAG-dependiente de la familia de Ras-GRP en fosforilación dependiente Ras ERK1/2. Sin embargo, serotonina estimula la fosforilación de endógeno y recombinante Ras-GRF1, aumentado [Ca(2+)](i) y causado fosforilación dependientes de CA y calmodulina ERK1/2. Diferentes señalización vías parecen ser utilizados por g-junto a los receptores en diferentes cepas de células HEK293.

Síntesis, Bioquímico Y Celular Evaluación De Farnesil Monofosfato Prodrogas Como Inhibidores De La Farnesyltransferase

Journal of Medicinal Chemistry. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 17555307

Algunos análogos de farnesil difosfato (FPP) son inhibidores potentes de la droga anticáncer potencial objetivo proteína farnesyltransferase (FTase), pero estos compuestos no son convenientes como fármacos candidatos. Así, se han sintetizado derivados de Profármaco de phosphoramidate de los precursores del monofosfato de inhibidores de la FTase basadas en la FPP. La Unión se fueron significativamente más potentes inhibidores de la FTase que los correspondientes análogos FPP. Los efectos de la prodroga 5b (un derivado de monofosfato de 3-allylfarnesyl) han sido evaluadas en la Prenilación de RhoB y en el ciclo celular en una línea de células humanas schwanoma maligno (STS-26T). En los tratamientos combinados, 1-3 microM 5b plus 1 microM lovastatina induce una inhibición significativa de Prenilación RhoB, y una combinación de estos fármacos en 1 microM cada también resultó en la detención de importante ciclo celular en G1. De hecho, combinaciones tan bajos como 50 nM lovastatina lovastatina de 1 microM 5 c o 250 nM + 50 nM 5C fueron altamente citostáticos en cultivo celular de STS-26T.

Las Cargas De Baja Y No Tóxico Mercurio Inorgánico Atenúan La Transducción De Señales Mediada Por El BCR

Toxicological Sciences : an Official Journal of the Society of Toxicology. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17656488

El contaminante ambiental ubicuo heavy metal el mercurio (Hg) es un potente inmunomodulador que se ha implicado como un factor que contribuye a la enfermedad autoinmune. Sin embargo, el mecanismo por el que Hg inicia o perpetúa las respuestas autoinmunes, especialmente a nivel bioquímico molecular, siendo mal entendida. Trabajo reciente ha establecido una relación entre la fuerza de señal de receptor (BCR) de células B deteriorada y enfermedad autoinmune. En estudios previos, hemos demostrado que en ratón WEHI-231 B células, fotoefecto concentraciones de mercurio inorgánico (Hg(+2)) interfirió con el control del crecimiento de BCR-mediada, sugiriendo que la intensidad de la señal BCR fue deteriorada por Hg(+2). Quinasa regulada por señales extracelulares (ERK) 1,2-PROTEINA QUINASA mitógeno activada (MAPK) es responsable de la activación de varios factores de transcripción en células B. Fosforilación de ERK sirve como un nodo fundamental de la integración de la señal por el BCR. Así, la magnitud de la activación de ERK sirve como una métrica operacional para la intensidad de la señal BCR. Mediante Western Blot y citometría de flujo phospho-específica, ahora mostramos que la cinética y la magnitud de BCR mediada por la activación de ERK-MAPK se atenúan notablemente en las células WEHI-231 y células de B esplénicas que han estado expuestas a cargas bajas y no tóxicas de Hg(+2). Sin embargo, Hg(+2) no parece actuar directamente en ERK-MAPK sino en un elemento ascendente o elementos de la vía de transducción de señal BCR, por encima del nivel de la clave de la proteína tirosina quinasa Syk. Nuestros datos sugieren que muy bien puede localizar el sitio de acción de Hg(+2) en la membrana plasmática. Estos resultados apoyan una conexión entre Hg(+2) y la fuerza de señal BCR atenuada en la etiología de la enfermedad autoinmune.

Angiotensina II Estimula La Elución De La Na-K-ATPasa De Una Columna De Afinidad De La Digoxina Aumentando La Respuesta Cinética a Ligandos Que Desencadenan El Decaimiento De E2-P

American Journal of Physiology. Renal Physiology. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18272598

Observamos antes que tratar de túbulos proximales de rata con concentraciones de angiotensina II (ANG II) que estimulan directamente la actividad de la Na-K-ATPasa cambiado cómo Na-K-ATPasa eluida posteriormente de una columna de afinidad ouabain. En este estudio que probamos si ANG II aumenta la velocidad de elución en respuesta a ligandos que desencadenan el decaimiento de E 2-P, que implica un cambio en las propiedades funcionales de la Na-K-ATPasa, o disminuyendo la cantidad posteriormente eluida con SDS, que sugiere un cambio en cómo Na-K-ATPasa interactúa con otras proteínas. Utilizamos una nueva columna de afinidad de la digoxina y nuevas líneas de células de riñón (OK) de oposum que coexpresan receptor AT(1a) de la rata y la rata de tipo alfa 1-isoforma de la Na-K-ATPasa o un mutante de truncamiento que faltan los primeros 32 aminoácidos de su terminal NH(2). Caracterizamos como riñón de rata microsomas enlazar a responsables de la columna de afinidad de la digoxina y demostraron que son heterogéneos en la tasa en que lanzan digoxina en respuesta a ligandos que desencadenan el decaimiento de E 2-P. incubación OK células con ANG II estimulado la elución subsiguiente de rata salvaje-tipo 1-subunidad alfa incrementando la respuesta cinética a ligandos que provocan un decaimiento de E 2-P sin afectar a la cantidad que más tarde se eluyó con SDS. Por el contrario, ANG II no tuvo efecto sobre la respuesta cinética del mutante truncamiento pero redujeron la cantidad eluida con SDS. Estos datos sugieren que ANG II regula tanto las propiedades cinéticas de Na-K-ATPasa y su interacción con otras proteínas mediante un mecanismo que implica su terminal NH(2).

Inducción De La Apoptosis En Líneas De Células De Tumor Neurofibromatosis Tipo 1 Nervio Periférico Maligno De Vaina Por Una Combinación De Inhibidores De La Farnesil Novela Y Lovastatina

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Jul, 2008  |  Pubmed ID: 18367665

Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es un trastorno genético que es impulsado por la pérdida de función de la proteína neurofibromina (Nf). NF contiene un dominio Ras GTPasa-activación de la proteína, que regula directamente señalización Ras. Numerosas manifestaciones clínicas están asociadas con la pérdida de Nf y mayor actividad de Ras. Proteínas Ras debe Calcona a tráfico y localizar funcionalmente con membranas de destino. Por lo tanto, Ras es una potencial diana terapéutica para el tratamiento de NF1. Hemos probado la eficacia de dos inhibidores de la farnesil novela (FTIs), 1 y 2, solo o en combinación con lovastatina, sobre dos NF1 tumor maligno del nervio periférico la envoltura (MPNST) líneas celulares, NF90-8 y ST88-14. Tratamientos individuales de 1, 2 o lovastatina no influyó en Ras Prenilación o la proliferación de células MPNST. Sin embargo, bajas micromolar combinaciones de 1 o 2 con lovastatina (FTI/lovastatin) reducen Prenilación Ras en ambas líneas celulares MPNST. Además, este tratamiento de combinación de FTI/lovastatina reduce la proliferación celular e indujo una respuesta apoptótica como se muestra por el análisis morfológico, activación de componentes-3 /-7, pérdida del potencial de membrana mitocondrial y la acumulación de células con ADN de sub-G(1) contenido. Poca o ninguna toxicidad detectable se observó en la rata normal después del tratamiento de combinación de FTI/lovastatina las células de Schwann. Estos datos apoyan la hipótesis que FTI y lovastatina politerapia puede ser un tratamiento potencial para NF1 MPNSTs.

P21-quinasa Activada Por Un Coordina La Supervivencia Celular Aberrante Y La Proteolisis Pericelular En Un Modelo De Cultivo Tridimensional De La Progresión Del Premalignas Del Cáncer De Mama Humano

Neoplasia (New York, N.Y.). Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18392133

La sobreexpresión de p21 cinasa activada 1 (PAK1) se produce durante la progresión del cáncer de mama humano. Hemos investigado el papel de PAK1 en la progresión de lesiones premalignas de la serie MCF10 de las líneas humanas de células epiteliales de mama. Los niveles de PAK1 expresión y la activación aumenta con la progresión de lesiones premalignas, y la expresión de dominante negativo de la proliferación (DN) PAK1 redujo celular y la migración / invasión. En las culturas superpuestas en tres dimensiones (3D) en la membrana basal reconstituida, la serie MCF10 producido un modelo in vitro para la progresión de lesiones premalignas. Células MCF10AneoT formó una morfología hiperplásica en la que algunos esferoides desarrollado lúmenes anormales. La línea MCF10.AT1 exhibió una morfología atípica hiperplasia anormal de grupos esferoidales que no formaban lúmenes. Las células MCF10.DCIS mostraron un crecimiento displásico. Expresión de la DN-PAK1 promovió la formación del lumen en 3D-culta MCF10A, Neot, y las estructuras de los receptores AT1, lo que sugiere reversión parcial del fenotipo premaligna, pero no afectó la brotación anormal de los receptores AT1 de estructuras o el crecimiento displásicas del carcinoma ductal in situ las estructuras. Proteolisis aberrante es otra característica importante de la progresión del cáncer de mama y la invasión. DN-PAK1 o tumbar de PAK1 reduce la proteolisis pericelular de DQ-colágeno IV en las culturas 3D. El tratamiento de células con un inhibidor de Rac1 también se reduce la proteolisis pericelular, y esta reducción se invirtió mediante la expresión de PAK1 activado. Nuestra conclusión es que PAK1 sobreexpresada y activo puede ser un coordinador clave de la supervivencia celular aberrante y la proteolisis en la progresión del cáncer de mama.

Supresión De La Proliferación De Dos Independientes NF1 Maligno Nervio Periférico Vaina Líneas Celulares Tumorales Por El Inhibidor De Pan-ErbB CI-1033

Cancer Biology & Therapy. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18927496

Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) se caracteriza por la proliferación anormal de tejidos neuroectodermal y el desarrollo de ciertos tumores, particularmente los neurofibromas, que pueden progresar en tumores de la vaina del nervio periférico malo (MPNSTs). Tratamiento farmacológico eficaz para el tratamiento de tumores de NF1 no está actualmente disponible y el pronóstico para los pacientes con MPNSTs es pobre. Pérdida de neurofibromina se correlaciona con el aumento de la expresión del receptor del factor de crecimiento epidérmico (RFCE) y ErbB2 tirosina quinasas y estas kinasas han demostrado promover NF1 patologías asociadas a tumor in vivo. Aquí mostramos que, mientras que las células MPNST NF1 tienen mayores niveles de expresión de EGFR y son más sensibles a EGF en comparación con una línea de células no - NF1 MPNST, la capacidad del gefitinib inhibidor EGFR para inhibir selectivamente la proliferación celular MPNST NF1 es marginal. También demostramos que la proliferación de NF1 MPNST se correlaciona con ErbB2 activado y puede suprimirse por nanomolar concentraciones del inhibidor de la pan-ErbB CI-1033 (llama). En consecuencia, tanto EGFR y ErbB2 puede resultar una estrategia efectiva para suprimir el crecimiento del tumor NF1 MPNST in vivo.

Restauración De Uniones Célula-célula De E-cadherin Requiere Tanto La Expresión De E-cadherina Y Supresión De La Activación De La Cinasa De Mapa De ERK En Células Epiteliales De Mama Transformadas Ras

Neoplasia (New York, N.Y.). Dec, 2008  |  Pubmed ID: 19048123

E-cadherina es un componente principal de las uniones de adhesión célula-célula que desempeñan un papel principal en el mantenimiento de la morfología de células epiteliales de mama normal. Mama y otros tipos de cáncer que tienen actividad regulada por arriba de Ras suelen tener la expresión de E-cadherin regula o mislocalized. Interrupción de las ensambladuras de la E-cadherina y consecuente aumento de la motilidad celular contribuir al proceso conocido como transición epitelial-a-mesenquimal (EMT). La expresión forzada de la E-cadherina o inhibición de la vía de transducción de señal Ras ha demostrado ser eficaz como causa de la reversión de la EMT en varias líneas de celulares oncogén-transformado y derivados del cáncer. En este estudio, investigamos MCF10A las células epiteliales de mama humana y derivados que se transformaron con activado H-Ras o N-ras para probar para la reversión de la EMT por la inhibición de vías de señalización Ras-conducido. Nuestros resultados demostraron que la inhibición de-proteina quinasa mitógeno activada quinasa (MAPK), pero no PI3-quinasa, Rac o quinasa de cadena ligera de miosina, era capaz de restaurar completamente uniones célula-célula de E-cadherina y morfología epitelial en líneas celulares con expresión moderada de H-Ras. En MCF10A las células transformadas por una expresión de alto nivel de H-Ras o N-ras, restauración de ensambladura de E-cadherin necesaria tanto la reexpresión forzada de E-cadherina y supresión de la quinasa MAPK. La expresión forzada de E-cadherin solo no indujo la reversión del fenotipo mesenquimal. Nuestros resultados sugieren que la transformación de Ras tiene por lo menos dos acciones independientes para interrumpir a las ensambladuras de la E-cadherina, con efectos para causar tanto mislocalization de E-cadherin lejos la célula superficial y profunda disminución en la expresión de E-cadherina.

Trabajando Juntos: Inhibidores De La Farnesil Y Estatinas Bloquean Prenilación De Proteína

Molecular and Cellular Pharmacology. Jan, 2009  |  Pubmed ID: 20419048

Inhibidores de la farnesil (FTIs) han demostrado hasta ahora han limitado valor como agentes únicos en ensayos clínicos. Este PharmSight se centrará en el uso de un nuevo grupo de FTIs que son más eficaces in vitro cuando se usa en combinación con la clase "estatina" de agentes anti-hypercholesterolemic, que también bloquean la Prenilación de proteína. Recientemente mostramos que estas novela FTIs en combinación con lovastatina reducir Prenilación de Ras e inducir una respuesta apoptótica en células de la vaina del maligno del nervio periférico. La combinación de estatinas con estos nuevos FTIs puede producir profundos efectos sinérgicos de citostáticos y citotóxicos contra una variedad de tumores y otros desordenes proliferativos. Puesto que las estatinas son bien toleradas en la clínica, sugerimos que este enfoque de combinación debe analizarse en modelos in vivo.

El Papel De La Neurofibromina En N-ras Mediada Por Reglamento De La AP-1 En Los Tumores De La Vaina Del Nervio Periférico Maligno

Molecular and Cellular Biochemistry. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20680410

Los neurofibromas plexiformes se encuentran comúnmente en pacientes con Neurofibromatosis tipo que i (NF1) tienen un riesgo de 5% de transformarse en tumores de la vaina del nervio periférico maligno (MPNST). Mutaciones germinales en el gen NF1 que codifica neurofibromina, que es una proteína activadora de Ras GTPase (RasGAP) y un regulador negativo de Ras, dar lugar a una regulación al alza de la vía Ras. Establecimos una conexión directa entre la deficiencia de neurofibromin y aguas abajo efectores de Ras en líneas celulares de pacientes MPNST demostrando caída de NF1 expresión usando siRNA en una línea celular MPNST NF1 tipo salvaje, STS-26T, activa el Ras/ERK1, 2 vía y aumenta la actividad y Unión AP-1. Creemos que esta es la primera vez que la transactivación de AP-1 se ha vinculado directamente a la deficiencia de la neurofibromina en una línea de células MPNST relevante de la enfermedad. Previamente, hemos demostrado que N-ras constitutivamente activa en líneas celulares derivadas de MPNSTs independientes de pacientes de NF1. Por lo tanto intentamos analizar el papel de la vía N-Ras en la desregulación de la actividad transcripcional de AP-1. Mostramos que STS-26T clones expresando condicional oncogénico N-ras Mostrar mayor fosforila ERK1, 2 y fosforilada expresión de JNK concomitante con una mayor actividad de AP-1. MAPA quinasa vías (ERK1, 2 y JNK) fueron examinadas más en ST88-14, una línea de células MPNST neurofibromin deficientes. La actividad basal de ERK1, 2 pero no JNK fue encontrado para aumentar la actividad AP-1. Estos experimentos confirman aún más el vínculo entre la pérdida de neurofibromin y aumento de la actividad de las vías de Ras/MAP quinasa y la activación de mecanismos transcripcionales aguas abajo en MPNSTs de pacientes de NF1.

Modelos De Cultura Superposición Tridimensional Del Cáncer De Mama Humano Revelan Una Sensibilidad Crítica a Inhibidores De La Cinasa Activada Por Mitógeno De La Proteína Cinasa

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 19952304

Las células tumorales que crecen en cultivo tridimensional (3D) celular exhiben resistencia relativa a las drogas citotóxicas en comparación con su respuesta en cultura (2D) bidimensional convencional. Se estudiaron los efectos de los agentes dirigidos y doxorrubicina en culturas 2D y 3D de líneas de células de mama humano que representan la progresión del epitelio normal (modelado por las células MCF10A) a través de variantes hiperplásicas a un fenotipo displástico/carcinoma (MCF10.Las células de CDIS), transformadas por la expresión de las variantes activación Ras, y también un carcinoma de mama subtipo basal células (MDA-MB-231). Los resultados mostraron la resistencia relativa esperada la quimioterapia con doxorrubicina como agente citotóxico en culturas 3D, con mayor resistencia en las células normales e hiperplásicas que en modelos de carcinoma. Sin embargo, la respuesta a los inhibidores específicos era más compleja. Inhibición de la proteína activada por mitógeno quinasa quinasa (MEK) butadieno 1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis (methylthio) (U0126) o 2-(2-chloro-4-iodo-phenylamino)-N-cyclopropylmethoxy-3,4-difluoro-benzamide (CI-1040, PD184352) produce una inhibición similar del crecimiento de todas las líneas celulares de MCF10 en 2D. En cultura 3D, los modelos normales y hyperplastic exhiben cierta resistencia, mientras que los modelos de carcinoma se convirtió en mucho más sensibles a la inhibición de MEK. También se observó aumento de la sensibilidad a la inhibición de MEK en las células MDA-MB-231 cultivadas en 3D con 2D. Por el contrario, inhibición de fosfatidilinositol 3'-quinasa por wortmannin no tuvo efectos significativos sobre el crecimiento de cualquiera de las células en 2D o 3D. Nuestra conclusión es que los modelos 3D de la cultura pueden no sólo modelo la resistencia relativa de las células del tumor a la terapia citotóxica sino también que el enfoque 3D puede identificar mejor la conducción vías oncogénicas y críticos inhibidores específicos que pueden ser los enfoques de tratamiento eficaz.

Un Inhibidor De La Transferasa De Geranilgeranil Novela En Combinación Con Lovastatina Inhibe La Proliferación E Induce La Autofagia En Las Células De La STS-26T MPNST

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Apr, 2010  |  Pubmed ID: 20086055

Inhibidores de la Prenilación han ganado cada vez más atención como posibles terapias para el cáncer. Trabajo inicial se centró en inhibidores de farnesylation, pero más recientemente inhibidores de la geranilgeranil (GGTIs) han comenzado a ser evaluados para su posible actividad antitumoral in vitro e in vivo. En este estudio, hemos desarrollado un nonpeptidomimetic GGTI, denominado GGTI-2Z [(4-clorobutilo 5-nitrofuran-2-yl)methyl-(2Z,6E,10E)-3,7,11,15-tetramethylhexadeca-2,6,10,14-tetraenyl (metil) phosphoramidate], que en combinación con lovastatina inhibe geranilgeranil transferasa me (GGTase I) y II GGTase/RabGGTase, sin afectar la farnesylation. Los resultados del tratamiento de combinación en una detención G(0)/G(1) y sinérgica inhibición de la proliferación de células STS-26T cultivadas del tumor vaina maligno del nervio periférico. También demostramos que la actividad antiproliferativa de fármacos en combinación se produce en el contexto de la autofagia. El tratamiento combinado también induce la autofagia en la MCF10.Modelo de CDIS de carcinoma ductal de mama in situ y en células de hepatoma murino de 1c1c7, donde también reduce la proliferación. Al mismo tiempo, no hay ninguna toxicidad detectable en las células de Schwann inmortalizadas normales. Estos estudios establecen GGTI-2Z como un derivado de novela geranilgeranil pirofosfato que puede funcionar a través de un nuevo mecanismo que implica la inducción de la autofagia y, en combinación con lovastatina, puede constituir un paradigma valioso para el desarrollo de estrategias más eficaces en esta clase de terapias antitumorales.

La Autofagia Anuladas Y La Muerte Inducida Por Nonapoptotic Inhibidor De La Farnesil Transferasa Y Lovastatina

The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. Apr, 2011  |  Pubmed ID: 21228063

La exposición de los humanos malignos líneas vaina del nervio periférico de células tumorales de la misión STS-26T, ST88-14, y NF90 de 8 a concentraciones nanomolares de tanto lovastatina y el inhibidor de la farnesil transferasa (FTI) -1, pero no a cualquier fármaco solo indujo la muerte celular. Células ST88-14 y NF90 8-sufrió la apoptosis, sin embargo, morir la misión STS-26T células no lo hizo. FTI-1 induce una respuesta cotratamiento autofagia fuerte y sostenido como lo indica el análisis de asociada a los microtúbulos de la cadena ligera de proteína-1 3 (LC3)-II acumulación en la misión STS-26T culturas. Colocalización extensa de LC3-positivos manchas puntiformes se observó tanto con proteína de membrana asociada a lisosomas (LAMP) -1 y Lamp-2 (marcadores de endosomas tardíos o lisosomas) en disolvente o IVR 1-o lovastatina tratados con STS-26T culturas, pero muy colocalización poco en las culturas lovastatin/FTI-1-cotreated. La ausencia de colocalización en el protocolo de cotratamiento correlaciona con la pérdida de LAMP-2 expresión. Estudios autofágicas flujo indicó que lovastatin/FTI-1 cotratamiento inhibió la finalización del programa autofágica. En contraste, la rapamicina induce una respuesta autofágica que se asoció con citostasis pero el mantenimiento de la viabilidad. Estos estudios indican que el tratamiento concomitante de la misión STS-26T células con la lovastatina y la FTI-1 induce un programa fallido y la muerte celular por autofagia nonapoptotic.

Angiotensina II-dependiente Fosforilación En Ser-11/Ser-18 Y Ser-938 Cambiar Las Conformaciones E2 De Rata Riñón Na, K-ATPasa

The Biochemical Journal. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22145807

Las membranas de plasma de riñón, que contienen una sola a-1 isoforma de Na, K-ATPasa, contienen simultáneamente dos sub-conformations de EP2, difieren en su tasa de liberación de digoxina en respuesta a Na y ATP. Tratar las células con la angiotensina II (Ang II) de alguna manera cambia la conformación de ambas, porque diferencialmente inhibe la tasa de liberación de la digoxina. Probamos si Ang II regula la liberación mediante el aumento de la fosforilación en Ser-11/Ser-18 y Ser-938. Células del riñón del oposum co-expressing el receptor de AT1a y cualquier alfa-1.wild-tipo, alfa-1.S11A/S18A o alfa-1.S938A fueron tratados ± 10 nM Ang II durante 5 minutos, aumentando la fosforilación en los tres sitios. Na, K-ATPasa estuvo limitado a las columnas de la afinidad de la digoxina en presencia de Mg, Na y ATP. Una solución que contiene 30 mM NaCl y 3 mM ATP eluidos ~ 20% de encuadernado sin tratar Na, K-ATPasa (población #1). Eliminar las células con Ang II, redujo la elución de población #1 de tipo alfa-1.wild y alfa-1.S938A, pero no de alfa-1.Células de S11A/S18A. Otro 50% del limite Na, K-ATPasa (población #2) eluyó posteriormente en dos fases por una solución que contiene 150 mM NaCl y 3 mM de la ATP. Ang II incrementó la tasa inicial y se redujo la segunda fase de alfa-1.wild-tipo, pero no a-1.Células de S938A. Así, Ang II cambia la conformación de dos formas de EP2 mediante fosforilación diferencial.

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