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Articles by Rebecca W. Scott in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
モデリングとイメージング、3次元の集団細胞浸潤
1Strathclyde Institute for Pharmacy and Biomedical Sciences, University of Strathclyde, 2The Beatson Institute for Cancer Research
三次元細胞外マトリックスへの腫瘍細胞の浸潤のモデルより反映
Other articles by Rebecca W. Scott on PubMed
LIMキナーゼ：ヒトの疾患と機能、規制と協会
LIMキナーゼ1（LIMK1）とLIMキナーゼ2（LIMK2）：LIMキナーゼファミリーは、たった2人のメンバーで構成されています。ユニークな組織シグナリングドメインでは、LIMキナーゼは、主にRhoの下流で作用し、いくつかの上流のシグナル伝達経路によって調節されるコフィリンファミリータンパク質cofilin1、cofilin2とdestrinの活性を調節することにより、アクチン細胞骨格の構造に影響を与えることがGTPアーゼ。 LIMキナーゼキナーゼドメインを比較する場合は特に、非常に相同であるが、各々が異なる調節経路の対象となる可能性があり、はっきりと重なり、両方の細胞の発達機能に寄与することを新たな証拠がある。正常な中枢神経系の開発は、LIMK1の存在に依存していて、その欠失は、ヒトの遺伝性疾患ウィリアムズ症候群の発症に関与している。正常な精巣の開発は、一方で、LIMK2の欠失によって中断されます。さらに、各心血管系疾患におけるキナーゼと同様に癌の関与の可能性は、最近浮上している。微調整するリン酸化および非リン酸化コフィリンのバランスが腫瘍細胞の転移能の重要な決定要因であるかもしれません。LIMキナーゼは腫瘍細胞の浸潤や転移に重要な役割を果たすことが提案されている。このレビューでは、LIMキナーゼとその機能、携帯電話や生物体レベルで、同様にヒトの疾患への可能な貢献の構造、規制と機能を概説しています。
LIMキナーゼは腫瘍および腫瘍関連間質細胞による侵襲経路生成に必要な
LIMキナーゼ1および2（LIMK1 / 2）アクチン細胞骨格ダイナミクスの中央に配置レギュレータです。 siRNAによるノックダウン、または新規の小分子阻害剤を使用して、我々はLIMKが集団腫瘍細胞の浸潤の間に主要な腫瘍細胞と非腫瘍ストローマ細胞で、パスの生成に必要であることを示す。 LIMK阻害は、コフィリンのリン酸化、F-アクチンのレベル、血清応答因子の転写活性とコラーゲンの収縮を低下させ、3次元浸潤アッセイに侵入を低減します。運動は影響を受けたものの、LIMK阻害は基質タンパク質の分解と減少し、F-アクチンの安定性を示すFRAPアッセイで大幅に高速なリカバリ時間に関連付けられているinvadopodiaの形成を損なう。 LIMKはMDA-MB-231細胞内でノックダウンされている場合、それらは総称して細胞に侵入するのストランドをリードする能力を失う。同様に、LIMK活性は癌関連線維芽細胞でブロックされている場合、それらは器官の皮膚モデルでは扁平上皮癌細胞の集団の侵略を導くことができません。これらの結果はLIMKが集団侵略の主要細胞による経路生成のためのマトリックスの再構築活動に必要とされることを示している。
ATP消費のルシフェラーゼベースのアッセイを用いたLIMキナーゼ1のハイスループットスクリーニング法の開発
キナーゼがそれらがシグナル伝達経路とヒト疾患に果たす中心的な役割の魅力的な創薬ターゲットである。彼らの整形アデノシン三リン酸（ATP）結合ポケットは、小分子阻害剤の理想的な目標を作る。創薬を目的として、多くのペプチドベースのキナーゼアッセイは蛍光ベースの読み出しを使用して、その測定基質のリン酸化を開発されている。しかし、いくつかのキナーゼは、これらのアッセイは、適切でないかもしれません。 LIMキナーゼ（LIMK）の場合には、ペプチド基質をリン酸化することができない、読み出し組換えコフィリン蛋白質の放射性標識を使用して、以前のハイスループットスクリーニング（HTS）となりました。我々はLIMK活性の関数としてルシフェラーゼが生成した発光を用いた相対的ATPレベルを測定するHTS-互換性のあるアッセイの開発について説明します。アッセイは、実行するために安価であり、キナーゼ阻害剤の証明の原理スクリーニングLIMKに対する化合物の効力を決定することができることを実証し、最終的に、アッセイは、自動化されたHTSの成功した検察側のために使用されていました。 HTSに続いて、二次アッセイ形式は、より複雑な（そして高価な）アッセイを使用して、アクションの効力とメカニズムのより正確な措置を得るために変更されました。ルシフェラーゼアッセイは、それにもかかわらず、ヒトの疾患の最終的な治療のための発見·プログラムを開始するLIMK阻害剤の識別のために許可されてHTSのための安価で信頼性の高い主要なアッセイを提供する。
