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Articles by Reeder Robinson in JoVE
JoVE Bioengineering
监视依赖黄素单加氧酶和氧化还原半反应，用停流分光光度法
Department of Biochemistry, Virginia Polytechnic Institute and State University
我们描述了一停流仪器的使用调查还原和氧化半反应
Other articles by Reeder Robinson on PubMed
基板绑定调节的耻垢分枝杆菌 G、 黄素依赖单所涉及的生物合成肟含铁载体的活动。
耻垢分枝杆菌 G (MbsG) 是催化 NAD (P) H 和氧依赖羟基化终端氨基侧链上的 l-赖氨酸的生物合成途径的嗜铁素 mycobactin 的黄素依赖单。Mycobactins 是必要条件下铁限制的结核分枝杆菌生长在哺乳动物中的感染过程中遇到的条件。因此，参与生物合成的 mycobactin 酶代表潜在药物靶点。MbsG 在大肠杆菌中表达和纯化使用金属亲和和离子交换的产物。重组 MbsG 表示此类的活动形式，紧密绑定在一起的时尚辅酶与酶法的第一个成员。羟基化 l-赖氨酸在稳态条件下形成的 k(cat) 值是 5.0 版的 min(-1)，和 0.21 毫米的 l-赖氨酸，NADH，为 1.1 m m 和 NADPH 为 2.4 毫米的 K(m) 值计算。这种酶充当氧化酶活性的 MbsG 通过监测没有氧化 NADH 和 NADPH 分别与 59 和 49 min(-1) 的 k(cat) 值，l-赖氨酸的耗氧量测量时。在这些情况下，MbsG 产生过氧化氢和超氧。相比之下，本 l-赖氨酸时，反应变得更耦合，生产 l-赖氨酸羟基化和降低氧化酶活性。这些结果表明基材的粘合调节 MbsG 从氧化酶对单加氧酶的作用。
荧光偏振结合分析法来标识的黄素依赖 Monooxygenases 抑制剂。
N hydroxylating monooxygenases (NMOs) 真菌和分支杆菌发病中的作用至关重要。NMOs 催化羟基化赖氨酸和鸟氨酸肟含铁载体的生物合成。犬尿氨酸单 (KMO) 催化 L-犬尿氨酸转为 3 hydroxykynurenine，抑制缓解脑感染寄生虫种锥体的疾病阿尔茨海默氏症和亨廷顿等神经退行性疾病。这些酶是 monooxygenases 的依赖黄素，这是 monooxygenases 的经过验证的药物靶点的例子。在这里，我们描述的荧光偏振测定，以确定潜在的抑制剂黄素 monooxygenases 优化与发展。遗传物质标有 ADP 分子被合成并进行测试。ADP-塔姆拉发色团绑定到 KMO K(d) 值为 0.60 ± 0.05 μ m 和 NMOs 曲霉和耻垢分枝以 K(d) 值 2.1 ± 0.2 微米和 4.0 ± 0.2 微米，分别。测定与基板和 KMO 和 NMO 产品竞争结合实验中进行了测试。此外，我们表明这种测定方法可用于确定 NMOs 的抑制剂。A Z'-0.77 因子的计算和我们显示测定展品对温度、 孵化时间和二甲基亚砜浓度耐受性良好。
