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Articles by Robert D. Gilmore Jr. in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis
1Microbiology and Pathogenesis Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, 2Tick-Borne Diseases Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention
La raccolta di emolinfa zecca infetta, ghiandole salivari, e la saliva รจ importante studiare come zecche patogeni causare la malattia. In questo protocollo si dimostra come raccogliere emolinfa ghiandole salivari e di nutrirsi
Other articles by Robert D. Gilmore Jr. on PubMed
Borrelia Burgdorferi-specifici Anticorpi Monoclonali Derivati Da Topi Con La Malattia Di Lyme Spirochete-infettati Ixodes Scapularis Zecche
Noi abbiamo generato un pannello di anticorpi monoclonali (MAbs) diretto contro gli antigeni di Borrelia burgdorferi strain B31, utilizzando un metodo per cui topi erano innescati con organismi inoculati naturalmente da Ixodes scapularis ninfale zecche. Analisi Western blot ha mostrato che questi MAbs riconosciuti diversi antigeni di b. burgdorferi B31, compreso il complemento inibitore fattore H-binding proteins ErpA/ho/N ed ErpC. Due altri MAbs erano specifici per la proteina di RevA e hanno consentito la caratterizzazione di tale proteina precedentemente sconosciuta. I dati qui presentati suggeriscono che la produzione di MAbs da animali infettati da morso di zecca è uno strumento potenzialmente utile per l'identificazione di proteine romanzo sintetizzato da b. burgdorferi durante l'infezione dei mammiferi.
Bartonella Ceppi Da Scoiattoli Di Terra Sono Identici Per Bartonella Washoensis Isolato Da Un Paziente Umano
La più probabile fonte animale di un caso umano di malattia cardiaca nella Contea di Washoe, Nevada, è stata identificata dal confronto delle sequenze di DNA di tre geni (citrato sintasi gltA, 60-kDa heat shock protein gene groEL e gene 16S rRNA) di Bartonella washoensis coltivate dal paziente umano in questione e di Bartonella isolati ottenuti dai seguenti roditori Nevada: Peromyscus maniculatus (17 isolati)Tamias minimus (11 isolati), Spermophilus lateralis (3 isolati) e Spermophilus beecheyi (7 isolati). Analisi di sequenza delle sequenze amplificate gltA ottenuti da Bartonella dall'eterogeneità considerevole dimostrata roditori e ha portato all'individuazione di 16 varianti genetiche che erano raggruppati in tre gruppi in analisi filogenetica. Ciascuno dei tre gruppi è stato associato con un genere di roditori, Peromyscus, Tonet o marmotta: il gltA, gene 16S rRNA e groEL sequenze di un isolato del Bartonella ottenuta da uno scoiattolo di terra in California (S. beecheyi) erano completamente identici a sequenze omologhe di b. washoensis, fortemente suggerisce che questi animali erano la fonte di infezione nel caso umano.
Test Della Malattia Di Lyme Da Cinetico Enzyme-linked Immunosorbent Assay Utilizzando Antigeni Ricombinanti Di VlsE1 O Del Peptide Della Borrelia Burgdorferi Confrontato Con 2 Livelli Test Utilizzando Lisati Di Cellule Intere
In uno studio di US pazienti con la malattia di Lyme, immunoglobuline (Ig) G e IgM anticorpi responses to recombinant antigeni di Borrelia burgdorferi VlsE1 (rVlsE1), IgG responses to un peptide sintetico omologo ad una sequenza interna conservata di VlsE (C6) e IgM responses to un peptide sintetico che comprende i residui dell'amminoacido 10 C-terminale di una proteina di superficie esterna di b. burgdorferi C (pepC10) sono stati valutati da cinetico enzima-collegato di immunoassay. Al 99% specificità, la sensibilità globale per la rilevazione di anticorpi IgG anti rVlsE1 o C6 in campioni provenienti da pazienti con diverse manifestazioni della malattia di Lyme sono stati equivalente a quella dei test a 2 livelli. Quando i dati sono stati considerati in parallelo, 2 combinazioni (IgG responses to o rVlsE1 o C6 in parallelo con IgM responses to pepC10) mantenuta alta specificità (98%) e sono stati significativamente più sensibile rispetto a 2 livelli di analisi nella rilevazione di anticorpi anti-b. burgdorferi in pazienti con acuta eritema migrante. Nelle fasi successive della malattia di Lyme, la sensibilità del parallelo in prove e test di 2 livelli sono stati elevati e statisticamente equivalente.
Incapacità Della Superficie Esterna Della Proteina C (OspC)-innescato Topi Per Suscitare Una Risposta Immunitaria Anamnestici Protettiva Per Una Sfida Di Borrelia Burgdorferi Trasmessa Da Zecche
Un regime di one-inoculazione della proteina ricombinante di superficie esterna C (OspC), che ha dimostrato di suscitare immunità protettiva contro una sfida da zecche della Borrelia burgdorferi, è stato somministrato a topi outbred. A seguito di sieroconversione, il titolo di anticorpi sierici contro OspC è stato permesso a scemare con il tempo fino a quando c'era poca o nessuna rilevazione degli anticorpi anti-OspC da immunoblot. I topi sono stati poi sfidati con una dose infettiva di b. burgdorferi da trasmissione tick. Undici dei 12 topi OspC-verniciato successivamente è stata contagiata da b. burgdorferi, dimostrando che una risposta protettiva anamnestici non è stata generata in questi topi dopo l'introduzione del infettive Spirochaeta esprimendo OspC.
Caratterizzazione Molecolare Del Gene SucB Che Codifica Immunogenico Diidrolipoamide Succiniltransferasi Proteina Di Bartonella Vinsonii Subsp. Berkhoffii E Bartonella Quintana
Membri del genere Bartonella storicamente sono stati collegati con malattie umane, come la malattia da graffio di gatto, febbre di trincea e malattia di Carrion e recentemente sono stati riconosciuti come agenti patogeni emergenti causando altre manifestazioni cliniche nell'uomo. Tuttavia, perché poco si sa circa gli antigeni che provocano la produzione di anticorpi in risposta alle infezioni da Bartonella, questo progetto è stato intrapreso per identificare e caratterizzare molecolarmente questi immunogeni. Screening immunologico di una libreria Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii espressione genomica con anticorpi anti-Bartonella ha portato all'identificazione del gene sucB, che codifica per l'enzima Diidrolipoamide succiniltransferasi. Antisiero da un mouse infettato sperimentalmente con live Bartonella è stato reattivo contro ricombinante SucB, che indica il montaggio di una risposta anti-SucB seguito di infezione. Cross-reattività antigenica è stata osservata con antisiero contro altri Bartonella spp. anticorpi contro Coxiella burnetii, Francisella tularensis e Rickettsia typhi inoltre hanno reagito con nostro ricombinante Bartonella SucB. Potenziale reattività crociata antigenica di SucB presenta una sfida per lo sviluppo di test serodiagnostic per altri patogeni intracellulari che causano malattie come la febbre Q, rickettsioses, brucelloses, tularemia e altri bartonelloses.
Prova Del DNA Di Borrelia Lonestari in Amblyomma Americanum (Acari: Ixodidae) Del Missouri
Amblyomma americanum raccolti vicino lago Wappapello, Missouri, è risultato positivo per Borrelia lonestari mediante reazione a catena della polimerasi e analisi delle sequenze di b. lonestari 16S rRNA e flagellina (ciccia) geni. Dodici piscine contenenti un totale di 214 ninfa o adulte zecche contenevano evidenza di infezione con b. lonestari (prevalenza minima 5,6%). Questi dati suggeriscono che le persone del Missouri sono a rischio per l'esposizione di b. lonestari dopo puntura di zecca a. americanum, una possibile causa di eritema migrans-come rash malattia in questa regione. Derivazione della sequenza codifica completa per la b. lonestari ciccia è anche segnalato.
Identificazione Di Francisella Tularensis Geni Codifica Esportati Membrana-associated Proteins Mediante Mutagenesi TnphoA Di Una Libreria Genomica
Francisella tularensis, l'agente eziologico della tularemia, è un agente patogeno altamente infettivo degli esseri umani e animali, ancora poco si sa circa le proteine della superficie di questo organismo che mediano i meccanismi di patogenicità. lambdaTnphoA è stato utilizzato per generare fusioni del gene fosfatasi alcalina casuale in un F. tularensis subsp. tularensis (strain Schu S4) genomic library per identificare i geni che codificano le proteine extracytoplasmic esportate. Undici geni che codificano per le proteine di membrana associate sono stati identificati da questo metodo e peptidi loro rispettivo segnale sono stati caratterizzati. Tre dei geni codificati conservata 'pulizia' enzimi, mentre gli altri otto geni erano uniche a F. tularensis, codificano per proteine con masse molecolari che vanno da 11 a 78kDa come dedotto dalle sequenze dell'amminoacido. Due geni codificati stercore lipoproteine basate sulla presenza di siti di clivaggio caratteristico segnale peptidase II. Quattro proteine selezionate sono state trovate associati outer membrane da ceppi Schu S4 e LVS da macchiarsi occidentale. Immunofluorescenza indiretta delle cellule strain Schu S4 ha anche mostrato evidenze di localizzazione della proteina di membrana esterna. Proteina database ricerche prodotto significativi allineamenti con proteine da altri batteri coinvolti nel trasporto dei carboidrati, metabolismo lipidico e biogenesi di busta delle cellule, fornendo indizi per presunte funzioni. Questi risultati hanno dimostrato che la mutagenesi TnphoA può essere utilizzata in congiunzione con dati di sequenza del genoma F. tularensis per fornire le basi per gli studi per identificare e definire i fattori di virulenza di proteina di superficie cellulare di questo agente patogeno.
Il Bartonella Vinsonii Subsp. Arupensis Immunodominanti Antigene Di Superficie Del BrpA Gene, Che Codifica Una Proteina 382-kilodalton Composta Da Sequenze Ripetute, è Un Membro Di Una Famiglia Di Multigene Conservato Tra Le Specie Di Bartonella
Bartonella proteine che suscitano una risposta anticorpale durante un'infezione mal definite; Pertanto, per caratterizzare gli antigeni riconosciuti dall'host, una libreria di espressione genomica di Bartonella è stata proiettata con il siero di un topo infetto. Questo processo ha portato alla scoperta di una Bartonella vinsonii subsp. arupensis gene che codifica una proteina 382-kDa, parte di una famiglia di geni codificanti proteine di grandi dimensioni, contenenti ciascuno più regioni di segmenti ripetitivi. I geni erano chiamati brpA a - C (bartonella ripetizione della proteina) e portava la notevole somiglianza con i geni che codificano le proteine adhesin BadA e membri della famiglia della proteina variabilmente espressi membrana esterna delle proteine da Bartonella henselae e Bartonella quintana, rispettivamente.
Analisi Sierologica Proteome Delle Proteine Di Membrana-associato Borrelia Burgdorferi
La malattia di Lyme, una preoccupazione per la salute globale, è causata da un'infezione da Borrelia burgdorferi, b. afzelii o b. garinii. La spirocheta responsabile della malattia negli Stati Uniti è infetto e si diffonde attraverso il morso di una zecca infetta Ixodes. Abbiamo utilizzato tecniche gel bidimensionali multiple combinate con proteomica per rivelare la risposta immunitaria umorale pieno di topi e i pazienti di Lyme a membrana-associated proteins isolato da Borrelia burgdorferi. I nostri studi ha indicato che un sottoinsieme delle proteine di membrana associate immunogene (alcuni nuovi e alcuni precedentemente identificati) è stato riconosciuto dai topi infettati sperimentalmente con Borrelia burgdorferi mediante inoculazione di basso-dose ago o infestazione di zecche. Inoltre, la maggior parte di queste proteine di membrana associate immunogene sono stata riconosciuta dai sieri di pazienti con diagnosticati di malattia di Lyme precoce disseminata. Queste includevano RevA, ErpA, ErpP, DbpA, bmpUna, FtsZ, ErpB, LA7, OppA I, II OppA OppA IV, FlhF, BBA64, BBA66 e BB0323. Alcuni immunogeni (cioè, BBI36/38) sono stati più reattivi con i sieri da topi di Lyme pazienti, mentre le proteine di membrana supplementari (cioè, ciccia, P66, LA7 e Hsp90) sono stati riconosciuti più fortemente con sieri di pazienti con diagnosi precoce localizzata, diffuse presto o tardi (cronico)-fase malattia di Lyme. Siamo stati in grado di esaminare la risposta umorale nei pazienti di Lyme in maniera temporale e di identificare la maggior parte delle proteine immunoreattive come la malattia progredisce dalle fasi iniziali di ritardo. Questa analisi sierologica proteome ha permesso l'identificazione di proteine associate a membrana romanzo che può servire come nuovi marcatori diagnostici e, cosa ancora più importante, come candidati vaccini di seconda generazione per la protezione contro la malattia di Lyme.
Invasione Di Cellule Gliale E Neuronali Umane Da Un Ceppo Infettivo Della Borrelia Burgdorferi
L'infezione umana da Borrelia burgdorferi, l'agente eziologico per la malattia di Lyme, può provocare gravi disturbi acuti e tardo-termine compreso neuroborreliosi, una condizione degenerativa del sistema nervoso centrale e periferico. Per esaminare i meccanismi coinvolti nella patogenesi cellulare di neuroborreliosi, abbiamo studiato la possibilità di b. burgdorferi per collegare a e/o invadere un pannello di cellule neuronali corticali e neuroglial. In tutte le cellule neurali testate, abbiamo osservato b. burgdorferi in associazione con la cella di microscopia confocale. Un'ulteriore analisi di colorazione di immunofluorescenza differenziale degli organismi interni ed esterni e un saggio di protezione di gentamicina ha dimostrato una localizzazione intracellulare di b. burgdorferi. Un ceppo non infettivo di b. burgdorferi è stato attenuato nella sua capacità di associare queste cellule neurali, suggerendo che un fattore borrelial specifico correlato all'infettività cellulare era responsabile per l'associazione. Effetti citopatici non sono stati osservati a seguito di infezione di queste linee cellulari con b. burgdorferi e interiorizzate spirochete sono state trovate per essere praticabile. Invasione delle cellule neurali da b. burgdorferi fornisce un meccanismo putativo per l'organismo evitare la risposta immunitaria dell'ospite mentre potenzialmente causando danni funzionali alle cellule neurali durante l'infezione del sistema nervoso centrale.
Analisi Di Espressione Temporale Di Borrelia Burgdorferi Paralogous Gene Famiglia 54 Geni BBA64, BBA65 E BBA66 Durante L'infezione Persistente Nei Topi
Borrelia burgdorferi paralogous gene familiari 54 (pgf 54) sono regolati dalle condizioni simulando infezione dei mammiferi e sono pensati per essere strumentale nella patogenesi e sopravvivenza borrelial host. Per esplorare l'attività di questi geni in vivo, è stata eseguita un'analisi completa delle pgf 54 geni BBA64, BBA65 e BBA66 per valutare la stabilità genetica, risposte anticorpali host e cinetica di espressione genica nel modello murino di infezione persistente. Sequenziamento del DNA di pgf 54 geni ottenuti da re-isolates 1 anno postinfection ha dimostrato che tutti i geni di questa famiglia sono stabili e non subiscono ricombinazione per generare gli antigeni varianti durante l'infezione persistente. Anticorpi contro BBA64 e BBA66 è comparso presto dopo l'infezione ed erano rilevabili durante l'infezione, suggerendo che c'era l'espressione di gene durante l'infezione. Tuttavia, trascrizione inversa-PCR quantitativa ha rivelato che BBA64 espressione genica era notevolmente diminuita nella Borrelia che risiedono nel tessuto dell'orecchio del mouse rispetto all'espressione in cultured spirochete di postinfection di 20 giorni e che i livelli di espressione è rimasto bassi durante l'infezione. Al contrario, è stata aumentata la trascrizione dei geni BBA65 e BBA66, ed entrambi questi geni erano espressi continuamente fino al postinfection di 100 giorni; seguirono periodi di espressione differenziale nel tardo infezione. Il profilo di espressione del gene BBA64 suggerisce che questo gene ha un ruolo importante durante la trasmissione di tick-to-host e infezione iniziale, considerando che il profilo di espressione dei geni BBA65 e BBA66 suggerisce che questi geni hanno un ruolo nell'infezione persistente. Regolazione differenziale della pgf 54 geni osservati durante l'infezione può contribuire a conferire un vantaggio di sopravvivenza durante l'infezione persistente, che influenzano i meccanismi per la diffusione di b. burgdorferi, trofismo tissutale o evasione della risposta immunitaria adattativa.
Global Transcriptome Analisi Di Borrelia Burgdorferi Durante L'associazione Con Le Cellule Umane Neuroglial
Come aderenza e l'ingresso di un agente patogeno in una cellula ospite sono componenti chiave per un'infezione, identificando i meccanismi molecolari responsabili di associazione cellulare fornirà una migliore comprensione della patogenesi di un microbo. Abbiamo stabilito precedentemente un modello in vitro per l'infezione da Borrelia burgdorferi di cellule umane neuroglial. Per espandere il nostro studio precedente, abbiamo eseguito analisi di espressione intero genoma di b. burgdorferi seguendo un'infezione 20 ore di cellule umane neuroglial per identificare borrelial geni differenzialmente sono state disciplinate durante l'associazione di cellula ospite confrontato con Borrelia colta in mezzo senza cellula. Questo studio identifica diversi geni, i cui prodotti possono essere importanti mediatori della patogenesi cellulare.
Borrelia Burgdorferi Localizzato Superficie Proteine Espresse Durante L'infezione Persistente Murino Sono Conservate Tra Diversi Borrelia Spp
Borrelia burgdorferi, l'agente eziologico della malattia di Lyme negli Stati Uniti, regola numerosi geni che codificano lipoproteine su plasmide lineare 54 in risposta a stimoli ambientali. Abbiamo analizzato un sottoinsieme di questi geni/proteine che sono state storicamente classificato come famiglia paralogous gene 54 (BBA64, BBA65, BBA66, BBA68, BBA69, BBA70, BBA71 e BBA73) ed ha trovato che l'espressione di diversi geni è stato influenzato da sigma (N)-cascata di regolamentazione sigma (S) a livello della trascrizione e la sintesi proteica. Inoltre, abbiamo istituito in questo e in un precedente studio che BBA65, BBA66, BBA69, BBA71 e BBA73 sono espressi temporaneamente durante l'infezione persistente di topi immunitarie, come determinato da real time-PCR quantitativa del tessuto dell'orecchio, da analisi enzima-collegata dell'immunosorbente e di immunoblotting. Corrispondentemente, BBA65, BBA66, BBA71 e BBA73 le proteine erano rilevabili in infettive b. burgdorferi che B31 isolati ma non rilevabili negli isolati non infettive. Le proteine BBA65, BBA66, BBA71 e BBA73 sono state trovate anche alla partizione in fase detergente Triton X-114 ed erano sensibili al trattamento di proteasi di cellule intatte, che indica che essi sono membrana associati e superficie localizzata. Infine, Southern blotting e PCR con primer specifico gene/sonde per BBA64, BBA65, BBA66, BBA71 e BBA73 suggeriscono che molti di questi geni sono conservati tra gli isolati di b. burgdorferi sensu lato e le specie di Borrelia febbre recidivante. Insieme, i dati presentati suggeriscono che questi geni possono svolgere un ruolo nell'infezione da Borrelia e/o patogenicità che potrebbe estendere di là del gruppo di lato sensu.
Borrelia Burgdorferi Espressione Dei Geni Bba64, Bba65, Bba66 E Bba73 Nei Tessuti Durante L'infezione Persistente Nei Topi
Borrelia burgdorferi, l'agente eziologico della malattia di Lyme negli esseri umani, è vectored tra gli host dei mammiferi in natura da zecche Ixodes. L'organismo si adatta ai diversi ambienti incontrati durante tutto il ciclo di leucosi esprimendo differenzialmente prodotti del gene essenziale per sopravvivere alle condizioni specializzate, in segni di graduazione o calcolatori. Tuttavia, poco è noto riguardo l'identità e/o funzione di b. burgdorferi geni espressi durante la colonizzazione dei tessuti durante l'infezione dei mammiferi. Prove sperimentali hanno dimostrato che un gruppo di geni (precedentemente classificato come famiglia paralogous gene 54) contiguo localizzato sul plasmide lineare 54-kilobase di b. burgdorferi, sono tra i più altamente regolati dalle condizioni in vitro simile a infezione dei mammiferi. In questo studio, abbiamo impiegato inversa trascrizione-PCR quantitativa per misurare l'espressione del gene temporale di un sottoinsieme di questa famiglia del gene b. burgdorferi (bba64, bba65, bba66 e bba73) nei tessuti durante l'infezione cronica murino. L'obiettivo era quello di ottenere insight nel ruolo di questi geni in infettività e patogenesi di identificazione quando i geni sono indotti e se essi sono espressi nei tessuti bersaglio specifico. Espressione di bba64, bba65, bba66 e bba73 di b. burgdorferi è stata misurata dai tessuti infetti del mouse relativa espressione in condizioni di coltura in vitro a post-infection orari specifici. bba64 espressione era altamente sovraregolati nei tessuti della vescica, cuore e milza per tutto il periodo di infezione, in contrasto con il downregulation affilata precedentemente osservata nei tessuti dell'orecchio. bba65, bba66 e bba73 hanno dimostrato sovraregolati espressione differenziale nei vari tessuti sopra post-infection di 1 anno. Questi risultati suggeriscono un ruolo essenziale per questi geni in sopravvivenza borrelial, persistenza e patogenesi.
Il Gene Bba64 Di Borrelia Burgdorferi, L'agente Della Malattia Di Lyme, è Critico Per L'infezione Dei Mammiferi Tramite Trasmissione Di Morso Di Zecca
L'agente della malattia di Lyme, Borrelia burgdorferi, spirochete è trasmessa da punture di zecche Ixodes ospita mammiferi serbatoio e gli esseri umani. I meccanismi comprendono che l'organismo è trafficato dal vettore all'host sono scarsamente compreso. In questo studio dimostriamo che un ceppo mutante di b. burgdorferi carente nella sintesi del prodotto del gene di bba64 era incapace di infettare i topi tramite puntura di zecca anche se il mutante era (i) infettive nei topi quando introdotto da inoculazione di ago, (ii) acquisita da larvale zecche nutrendosi di topi infetti e (iii) in grado di persistere attraverso fasi muta tick. Questa scoperta di un gene di b. burgdorferi richiesto per il trasferimento di patogeni e/o sopravvivenza dal segno di spunta per l'ospite suscettibile rappresenta un importante passo avanti verso la comprensione dei meccanismi di trasmissione coinvolti per l'agente della malattia di Lyme.
Rilevamento Di Borrelia Burgdorferi DNA Nelle Feci Tick Fornisce Prove Organismo Spargimento Durante L'alimentazione Del Vettore
Borrelia burgdorferi, il batterio che causa la malattia di Lyme, viene trasmessa ad un ospite suscettibile da punture di zecche Ixodes spp. Tuttavia, vi è incertezza se b. burgdorferi cadono da zecche per via fecale. In questo studio, b. burgdorferi-infettati zecche sono state alimentate su topi mentre confinato in una certa zona della pelle da una capsula. Durante e dopo l'allattamento, le feci tick sono stati raccolti e collocate in Barbour-Stoenner-Kelley (BSK)-media II per la coltivazione e in acqua sterile per analisi di polymerase chain reaction (PCR). Anche se nessuno dei campioni testati erano positivo per b. burgdorferi cultura, tutti tranne uno dei campioni del DNA fecali da zecche infette erano PCR positiva. Questi risultati indicato quello infetto sono stati tettoia da zecche di alimentazione durante la defecazione e suggeriscono che le spirochete non rimase valide una volta esposti all'ambiente esterno. Questa scoperta ha importanti ramificazioni per investigatori interpretazione b. burgdorferi specifico PCR risultati quando conducendo esperimenti di trasmissione tick.
Analisi Funzionale Del Prodotto Borrelia Burgdorferi Bba64 Gene Murino Infezione Tramite Infestazione Di Zecche
Borrelia burgdorferi, l'agente eziologico della borreliosi di Lyme, è trasmessa all'uomo dal morso di zecche di Ixodes spp. Durante il ciclo di vita di tick-a-mammifero borrelial, b. burgdorferi deve adattarsi ai molti cambiamenti ambientali regolando i diversi geni, tra cui bba64. Il nostro laboratorio ha recentemente dimostrato che il prodotto del gene bba64 è necessario per infettività del mouse quando il b. burgdorferi è trasmesso da un morso di zecca infetta, ma non tramite inoculazione dell'ago. In questo studio abbiamo valutato la proprietà fenotipiche di un ceppo mutante di bba64, tra cui 1) replica durante l'ingorgo di tick, 2) migrazione nelle ghiandole salivari ninfale trasmissione 3) host e 4) suscettibilità alla risposta immunitaria innata MyD88-dipendente. Risultati hanno rivelato che infettività attenuato del mutante bba64 da morso di zecca non era dovuta a un difetto di crescita all'interno di un tick ninfale attivamente alimentazione, o il fallimento di invadere le ghiandole salivari. Queste scoperte ha suggerito che c'era una mancanza di trasmissione della spirocheta al derma host o aumento della suscettibilità alla risposta immunitaria innata dell'host. Ulteriori esperimenti hanno mostrato il mutante bba64 non coltivabili dalla pelle del mouse presa presso il sito di puntura ninfale e fu in grado di stabilire l'infezione nei topi deficienti MyD88 via infestazione di zecche. Collettivamente, i risultati di questo studio indicano che BBA64 le funzioni dell'interfaccia di consegna delle ghiandole salivari-to-host di trasmissione vettoriale e non è coinvolta nella resistenza di MyD88 immunità innata.
Analisi Di Borrelia Burgdorferi Proteine Di Superficie Come Determinanti Nel Stabilire Interazioni Cellula Ospitante
Infezione da Borrelia burgdorferi provoca la borreliosi di Lyme in esseri umani, una condizione che può comportare una diffusione sistemica dell'organismo a colonizzare i vari organi e tessuti. Se l'infezione è lasciata non trattata con antibiotici, può portare a manifestazioni tra cui, artrite, cardite, e/o problemi neurologici. Identificazione e caratterizzazione delle proteine della membrana esterna b. burgdorferi che facilitano l'accessorio cellulare e invasione di stabilire infezione continuano ad essere studiati. In questo studio, abbiamo cercato di definire ulteriormente le proprietà Associazione putativo cellulare delle proteine di superficie esposta b. burgdorferi osservando se adesione cellulare potrebbe essere bloccato da anticorpi. B. burgdorferi mescolati separatamente con anticorpi monoclonali (mAbs) contro la proteina di superficie esterna (Osp) A, OspC, decorin-binding protein (Dbp) A, BBA64, e RevA antigeni sono stati incubati con cellule endoteliali di vena ombelicale umano (HUVEC) e cellule umane neuroglial (H4). B. burgdorferi trattati con anti-OspA, - DbpA, e - BBA64 mAbs ha mostrato una diminuzione significativa nell'associazione cellulare rispetto ai controlli, mentre b. burgdorferi trattati con anti-OspC e anti-RevA ha mostrato alcuna riduzione in allegato cellulare. Inoltre, analisi temporale transcriptional rivelato sovraregolati espressione di bba64, ospA e dbpA durante coincubation con cellule. Insieme, i dati forniscono prove che funzione OspA, DbpA e BBA64 nei meccanismi di aderenza e infezione delle cellule ospite.
